ส่วนที่ 1 Echinacoside กระตุ้น Rat Pulmonary Artery Vasorelaxation โดยการเปิดช่อง NO-cGMP-PKG-BKCa และลดระดับ Ca2 plus ภายในเซลล์

echinacoside กระตุ้นการผ่อนคลายของหลอดเลือดดำอย่างไร?

Xiang-Yun GAI1, 2, 3, Yu-hai WEI4, Wei ZHANG2, Ta-na WUREN2, Ya-ping WANG2, Zhan-Qiang LI2, Shou LIU2, Lan MA2, Dian-Xiang LU2, Yi ZHOU1, 2, Ri- li GE1, 2, * 1 ภาควิชาเภสัชวิทยา, School of Life Science and Biopharmaceutics, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China; 2 ศูนย์วิจัยการแพทย์ระดับสูง วิทยาลัยการแพทย์มหาวิทยาลัยชิงไห่ ซีหนิง 810001 ประเทศจีน; 3 School of Pharmacy, Qinghai University for Nationalities, ซีหนิง 810007, จีน; 4 Qinghai Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Xining 810001, China

จุดมุ่งหมาย:การหดตัวของหลอดเลือดในปอดอย่างต่อเนื่องตามประสบการณ์ที่ระดับความสูงสามารถนำไปสู่ความดันโลหิตสูงในปอด (PH) จุดประสงค์หลักของการศึกษานี้คือการศึกษาผลของยา vasorelaxant ของเอ็กไคนาโคไซด์(ECH) ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์จากสมุนไพรทิเบต Lagotis brevituba Maxim และCistanche tubulosaบนหลอดเลือดแดงปอดและกลไกที่เป็นไปได้

วิธีการ:วงแหวนหลอดเลือดแดงในปอดที่ได้จากหนู Wistar เพศผู้ถูกแขวนไว้ในห้องอวัยวะที่เต็มไปด้วยสารละลาย Krebs-Henseleit และวัดความตึงแบบมีมิติเท่ากันโดยใช้ตัวแปลงสัญญาณแรง ระดับ Ca2 plus ภายในเซลล์ถูกวัดในเซลล์กล้ามเนื้อเรียบของหลอดเลือดแดงในปอดของหนูที่เพาะเลี้ยง (PASMC) โดยใช้ Fluo 4-AM

ผลลัพธ์: ECH(30–300 ไมโครโมล/ลิตร) หลอดเลือดแดงในปอดของหนูที่คลายตัวก่อนการหดตัวโดย noradrenaline (NE) ในลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้น และผลกระทบนี้สามารถสังเกตได้ทั้งใน endothelium ที่ไม่บุบสลายและ endothelium-denuded แต่มีการตอบสนองสูงสุดที่ต่ำกว่าอย่างมีนัยสำคัญและ EC50 ที่สูงขึ้นในวงแหวน endothelium-denuded ผลกระทบนี้ถูกบล็อกโดย L-NAME, TEA และ BaCl2 อย่างมีนัยสำคัญ อย่างไรก็ตาม IMT, 4-AP และ Gli ไม่ได้ยับยั้งECH- ทำให้เกิดการผ่อนคลาย ภายใต้สภาวะที่ไม่มี Ca2 plus นอกเซลล์ การหดตัวสูงสุดลดลงเหลือ 24.54 เปอร์เซ็นต์ ±2.97 เปอร์เซ็นต์ และ 10.60 เปอร์เซ็นต์ ±2.07 เปอร์เซ็นต์ในวงแหวนที่บำบัดด้วย ECH 100 และ 300 ไมโครโมล/ลิตร ตามลำดับ ภายใต้สภาวะการไหลเข้าของแคลเซียมนอกเซลล์ การหดตัวสูงสุดลดลงเหลือ 112.42 เปอร์เซ็นต์ ±7.30 เปอร์เซ็นต์ , 100.29 เปอร์เซ็นต์ ±8.66 เปอร์เซ็นต์ และ 74.74 เปอร์เซ็นต์ ±4.95 เปอร์เซ็นต์ ในวงแหวนที่บำบัดด้วย ECH 30, 100 และ 300 ไมโครโมล/ลิตรตามลำดับ หลังจากที่เซลล์ถูกโหลดด้วย Fluo 4-AM ความเข้มของการเรืองแสงเฉลี่ยจะลดลงในเซลล์ที่บำบัดด้วยECH(100 ไมโครโมล/ลิตร) มากกว่า NE

บทสรุป: ECHยับยั้งการหดตัวของหลอดเลือดแดงปอดของหนูที่เกิดจาก NE โดยการลดระดับ Ca2 plus ภายในเซลล์ และกระตุ้นการผ่อนคลายผ่านวิถี NO-cGMP และการเปิดช่อง K plus (BKCa และ KIR)

คำสำคัญ:สมุนไพรทิเบตเอ็กไคนาโคไซด์; ความดันโลหิตสูงในปอด; ระดับความสูง การคลายตัวของหลอดเลือด; ไม่; บีเคซีเอ; คีร์; แหวนหลอดเลือดแดง; เซลล์กล้ามเนื้อเรียบของหลอดเลือดแดงปอด

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติมกรุณาติดต่อ:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola มีเอฟเฟกต์มากมาย คลิกที่นี่เพื่อทราบข้อมูลเพิ่มเติม

บทนำ

การหดตัวของหลอดเลือดในปอดอย่างต่อเนื่องตามประสบการณ์ที่ระดับความสูงสูงสามารถนำไปสู่ความดันโลหิตสูงในปอด (PH) และการเจริญเติบโตมากเกินไปที่อยู่ตรงกลาง[1] ซึ่งได้รับการระบุว่าเป็นสาเหตุหลักของการโตเกินของหัวใจห้องล่างขวาและภาวะหัวใจล้มเหลว[2] บุคคลที่อาศัยอยู่ที่ระดับความสูงไม่ว่าจะชั่วคราวหรือถาวร อาจมีความดันโลหิตสูงในปอดเล็กน้อยถึงปานกลาง และผู้ที่มีความไวต่อภาวะขาดออกซิเจนมากขึ้นอาจมีภาวะหลอดเลือดตีบในปอดเกินจริง นำไปสู่โรคในระดับความสูงต่างๆ ที่เกี่ยวข้องกับการเจ็บป่วยและการตายที่สำคัญ เช่น ปอดบวมน้ำและโรคหัวใจจากที่สูง[3]เอ็กไคนาโคไซด์(ECH) (รูปที่ 1) คือ aฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์พบในสมุนไพรจีนหลายชนิด เช่น สมุนไพรทิเบต Lagotis brevituba Maxim andCistanche tubulosa[4, 5]. Lagos brevituba Maxim เป็นสายพันธุ์ของ Lagotis spp ที่อยู่ใน Scrophulariaceae และเติบโตอย่างกว้างขวางที่ระดับความสูงมากกว่า 3000 เมตรในที่ราบสูงชิงไห่ - ทิเบตECHมีคุณสมบัติทางเภสัชวิทยาที่ต้องการหลากหลาย เช่น ต้านอนุมูลอิสระ ต้านการอักเสบ ปกป้องระบบประสาท ตับ และไนตริกออกไซด์ (NO) คุณสมบัติในการขจัดอนุมูลอิสระ[6] นอกจากนี้ยังสามารถกระตุ้นการคลายตัวของเอ็นโดทีเลียมในวงแหวนเอออร์ติกของทรวงอกของหนู และรักษาโรคหัวใจและหลอดเลือด[7] อย่างไรก็ตาม เท่าที่ทราบ ยังไม่มีการศึกษาใดที่ตรวจสอบผลกระทบต่อเสียงของหลอดเลือดในหลอดเลือดแดงในปอด วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้มีดังต่อไปนี้: (1) เพื่อสำรวจว่า ECH กระตุ้น vasorelaxation ในหลอดทดลอง ในหลอดเลือดแดงในปอดของหนูที่ทำสัญญาล่วงหน้ากับ noradrenaline (NE) หรือไม่ และผลกระทบนี้หรือไม่ ถ้ามี ขึ้นอยู่กับ endothelium หรือมีผลโดยตรงต่อกล้ามเนื้อเรียบของหลอดเลือด ; (2) เพื่อตรวจสอบผลของ ECH ต่อการไหลเข้าของแคลเซียมนอกเซลล์และการปล่อยแคลเซียมภายในเซลล์ในเซลล์กล้ามเนื้อเรียบของหลอดเลือดแดงในปอดของหนู (PASMCs) และ (3) เพื่อระบุเส้นทางที่เป็นไปได้และช่องสัญญาณ K plus ที่เกี่ยวข้องกับการผ่อนคลายที่เกิดจาก ECH

วัสดุและวิธีการ

รีเอเจนต์

ECH ได้รับความกรุณาจาก Dr. Peng-fei TU จาก Peking University (ปักกิ่ง ประเทศจีน) โดยมีความบริสุทธิ์มากกว่า 98 เปอร์เซ็นต์ตามที่กำหนดโดยโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง ซื้อไดเมทิลซัลฟอกไซด์ (DMSO) จาก Solar Science & Technology Co, Ltd (ปักกิ่ง ประเทศจีน); NE, acetylcholine (ACh, มากกว่าหรือเท่ากับ 99 เปอร์เซ็นต์ ), indomethacin (IMT), Nω -Nitro-L-arginine methyl ester hydrochloride (L-NAME), tetraethylammonium chloride (TEA), barium chloride (BaCl2), {{ 9}}aminopyridine ({{10}}AP) และ glibenclamide (Gli) จาก Sigma Chemical Co (St Louis, MO, USA); กลูโคสสูง Dulbecco's modified Eagle (DMEM), fetal bovine serum (FBS) และ trypsin จาก Gibco BRL Co, Ltd (Gaithersburg, MD, USA); แอนติบอดีต่อหนูเมาส์แอกตินของกล้ามเนื้อเรียบหลัก ( -SMA) และแอนติบอดีทุติยภูมิต่อต้านเมาส์จากแพะจาก Boshide Biotech Co, Ltd (หวู่ฮั่นประเทศจีน); Fluo Calcium Indicators (Fluo 4-AM) จาก Invitrogen Corp (Carlsbad, CA, USA); และเกลืออนินทรีย์ทั้งหมดจาก Beijing Chemical Reagent Co, Ltd (ปักกิ่ง ประเทศจีน) IMT ถูกละลายใน DMSO และ 5 เปอร์เซ็นต์ของ NaH2PO4, Gli, Fluo 4-AM และ ECH ถูกละลายใน DMSO และรีเอเจนต์อื่นๆ ทั้งหมดถูกละลายในสารละลาย Krebs-Henseleit (KH) หรือ PBS การทดลองเบื้องต้นพบว่า DMSO ที่น้อยกว่า 0.1 เปอร์เซ็นต์ (v/v) ไม่มีผลต่อการพัฒนาความตึงเครียดของวงแหวนหลอดเลือดแดงในปอดที่แยกได้

สัตว์ทดลอง

ขั้นตอนและโปรโตคอลทั้งหมดได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ของวิทยาลัยการแพทย์มหาวิทยาลัยชิงไห่ หนู Wistar เพศผู้อายุ 6-8 สัปดาห์ น้ำหนักตัว 250–300 กรัม ถูกซื้อจากศูนย์สัตว์แห่งมหาวิทยาลัยหลานโจว (หลานโจว ประเทศจีน) และเลี้ยงด้วยอาหารในห้องปฏิบัติการมาตรฐานและน้ำประปาที่อุณหภูมิแวดล้อม 22 ± 2 องศาและความชื้นสัมพัทธ์ 45 เปอร์เซ็นต์ –55 เปอร์เซ็นต์ตลอดการทดลอง

หลอดเลือดแดงปอดในหลอดทดลอง

การเตรียมวงแหวนหลอดเลือดแดงปอดหนู

หนูที่มีน้ำหนัก 250–300 กรัมได้รับการดมยาสลบโดยการฉีดโซเดียมเพนโทบาร์บิทัลเข้าช่องท้อง (40 มก./กก.) จากนั้นจึงนำหัวใจและปอดของพวกมันออกและนำไปแช่ในสารละลาย KH เย็นจัดทันทีที่มี (เป็นมิลลิโมล/ลิตร) : 118 NaCl, 4.7 KCl, 2.5 CaCl2, 1.2 MgSO4·7H2O, 1.2 KH2PO4, 25 NaHCO3 และ 11.1 กลูโคส (pH 7.4) หลอดเลือดแดงในปอด (เส้นผ่านศูนย์กลาง 0.7–1.5 มม.) ถูกผ่าโดยปราศจากเนื้อเยื่อเกี่ยวพันและ adventitia โดยรอบ จากนั้นจึงตัดเป็นวงแหวนที่มีความยาวประมาณ 2-3 มม. วงแหวนถูกแขวนไว้ในห้องอวัยวะที่เต็มไปด้วยสารละลาย KH 10 มล. ที่ 37 องศา และเติมแก๊สด้วยคาร์บอนไดออกไซด์ 95 เปอร์เซ็นต์ O2–5 เปอร์เซ็นต์ [8] และวัดความตึงแบบมีมิติเท่ากันโดยใช้ตัวแปลงสัญญาณแรง (JH-2, Space Medico -สถาบันวิศวกรรม ปักกิ่ง ประเทศจีน)

การประเมินกิจกรรมแหวนเรือและการประเมินการทำงานของบุผนังหลอดเลือด

วงแหวนของเรือได้รับอนุญาตให้ปรับสมดุลเป็นเวลา 2 ชั่วโมงภายใต้ความตึงพื้นฐานที่ 400 มก. ในช่วงเวลานั้นสารละลาย KH ถูกเปลี่ยนทุก 15 นาที จากนั้นจึงเติม NE 1 ไมโครโมล/ลิตรเข้าไปในห้องเพื่อประเมินกิจกรรมของแต่ละวงแหวนโดยการตรวจจับเปอร์เซ็นต์การหดตัว ก่อนและหลังโปรโตคอลการทดลอง วัดเปอร์เซ็นต์การหดตัว (รูปที่ 2A และ 2B) Endothelium ถูกเอาออกในวงแหวนบางวงโดย gen tly ถูพื้นผิว intimal ด้วยลวดเหล็กละเอียด และความสมบูรณ์ได้รับการประเมินคุณภาพโดยระดับของการคลายตัวที่เกิดจาก ACh (10 ไมโครโมล/ลิตร) ในเปอร์เซ็นต์ของโทนการหดตัวที่เกิดจาก NE (1 ไมโครโมล/ลิตร) หากการผ่อนคลายด้วย ACh มากกว่า 80 เปอร์เซ็นต์ เอ็นโดทีเลียมยังคงอยู่ในสภาพดี หากการคลายตัวน้อยกว่า 30 เปอร์เซ็นต์ เอ็นโดทีเลียมจะถูกทำลาย (รูปที่ 2A และ 2B)[9]

การแยกตัวและการเพาะเลี้ยงหนู PASMCs

หลอดเลือดแดงส่วนปลายของปอดถูกแยกออกจากปอดของหนู และ endothelium และ adventitia ถูกกำจัดอย่างระมัดระวัง หลังจากที่เนื้อเยื่อถูกสับเป็นชิ้น {0}} มม. พวกเขาถูกเติมลงในขวดทันที รักษาไว้ที่ 37 องศาและ 5 เปอร์เซ็นต์ CO2 ในตู้อบที่มีความชื้นเป็นเวลาประมาณสี่ชั่วโมง จากนั้นจึงเพาะเลี้ยงด้วย DMEM ที่มีกลูโคสสูง เสริมด้วย FBS 20 เปอร์เซ็นต์ เพนิซิลลิน 100 U/mL และสเตรปโตมัยซิน 100 U/mL เป็นเวลาประมาณห้าวัน ครึ่งหนึ่งของอาหารเลี้ยงเชื้อถูกแทนที่ด้วยอาหารสดเมื่อเซลล์เกิดขึ้น เมื่อเซลล์ถึงจุดบรรจบกัน 80 เปอร์เซ็นต์ พวกมันถูกเก็บเกี่ยวด้วยทริปซิน 0.125 เปอร์เซ็นต์และเพาะเมล็ดในขวด (อัตราส่วน 1:2) ที่มี DMEM กลูโคสสูงเสริมด้วย FBS 10 เปอร์เซ็นต์, 100 U/mL ของเพนิซิลลิน และ 100 U/mL ของสเตรปโตมัยซิน . เซลล์ที่มีข้อความสามถึงแปดตอนถูกใช้สำหรับการทดลองทั้งหมด

การระบุ PASMC โดยอิมมูโนฮิสโตเคมี

PASMC มีผลบวกสำหรับการย้อมสีอิมมูโนเคมีเมื่อสังเกตลักษณะทั่วไปของ "เนินเขาและหุบเขา" เซลล์ถูกเพาะในจานหลุม 6-หลุมที่มีแผ่นปิดกระจก เมื่อเซลล์ถึงจุดบรรจบกัน 80 เปอร์เซ็นต์ พวกมันจะถูกตรึงในพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4% ที่ถูกบล็อกด้วยไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 3 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 15 นาที จากนั้นจึงฟักตัวด้วยแอนติบอดี -SMA หลักในการต่อต้านหนูหนูในชั่วข้ามคืนที่ 4 องศา หลังจากถูกล้างสามครั้งใน PBS เป็นเวลา 10 นาที เซลล์ถูกบ่มด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิต้านเมาส์ของแพะที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 45 นาที ล้างอีกครั้งสามครั้งใน PBS เป็นเวลา 10 นาที และแสดงภาพด้วยไดอะมิโนเบนซิดีน

การตรวจหาความเข้มข้นของแคลเซียมภายในเซลล์ในหนู PASMCs

PASMC ถูกเพาะในจานหลุม {0}} หลุมที่มีแผ่นปิดแก้ว เมื่อเซลล์ถึงจุดบรรจบกัน 80 เปอร์เซ็นต์ อาหารเลี้ยงเชื้อถูกแทนที่ด้วย DMEM ที่ปราศจากซีรัม ยี่สิบสี่ชั่วโมงต่อมา เซลล์ถูกบรรจุด้วย Fluo 7 ไมโครโมล/ลิตร 4-AM ที่ 37 องศาเป็นเวลา 30 นาทีในบรรยากาศที่ทำให้ชื้นเป็น CO2 5 เปอร์เซ็นต์ สีย้อมตกค้างถูกล้างด้วยสารละลายเกลือบาลานซ์ (HBSS) ของแฮงค์ที่มีสารต่อไปนี้ (เป็นมิลลิโมล/ลิตร): 1.26 CaCl2, 0.49 MgCl2·6H2O, 0.41 MgSO4·7H2O, 5.33 KCl, 0.44 KH2PO4, 4.17 NaHCO3, 137.93 NaCl, 0.34 Na2HPO4 และ 5.56 D-Glucose ที่ไม่มีฟีนอลเรด เซลล์ที่บรรจุ Fluo 4-AM สัมผัสกับหนึ่งในสามเงื่อนไขการรักษา: (1) กลุ่มควบคุม (กลุ่มต่อต้าน) ซึ่งเซลล์ถูกบ่มด้วย DMEM ที่ปราศจากซีรัม; (2) กลุ่ม NE ซึ่งเซลล์ถูกบ่มด้วย DMEM ที่ปราศจากซีรัมเสริมด้วย 1 ไมโครโมล/ลิตรของ NE เป็นเวลา 10 นาที และ (3) กลุ่ม NE บวก ECH (100 ไมโครโมล/ลิตร) (กลุ่ม NE บวก ECH100) ซึ่งเซลล์ถูกบ่มด้วย DMEM ที่ปราศจากซีรัมเสริมด้วย NE 1 ไมโครโมล/ลิตร เป็นเวลา 10 นาที และ 100 ไมโครโมล/ลิตรของ ECH เป็นเวลา 20 นาที สังเกตและถ่ายภาพความเข้มของการเรืองแสงโดยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง (IX71, Olympus, Tokyo, Japan)[11] รวบรวมวิสัยทัศน์หกด้าน (200 ×) สำหรับแต่ละตัวอย่าง ความเข้มข้นของแคลเซียมภายในเซลล์ถูกหาปริมาณโดยการวัดความเข้มของการเรืองแสงเฉลี่ยโดยใช้ซอฟต์แวร์ Image Pro-Plus 6.0

การวิเคราะห์ทางสถิติ

ข้อมูลแสดงเป็นค่าเฉลี่ย±SD เมื่อความเหมาะสมและความแตกต่างที่มีนัยสำคัญได้รับการประเมินโดยการทดสอบของ Dunnett หรือการทดสอบ Student-Newman-Keuls สำหรับการเปรียบเทียบหลายรายการหลังจากการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) ระดับความน่าจะเป็นของ P<0.05 was="" considered="">

ผลลัพธ์ ผลของ Vasorelaxant ของ ECH ต่อหลอดเลือดแดงในปอดที่แยกได้

ในช่วงเริ่มต้นของการทดลอง การเติม ECH สะสมตั้งแต่ 30 ถึง 300 ไมโครโมล/ลิตรไม่มีผลอย่างมีนัยสำคัญต่อความตึงพื้นฐานของหลอดเลือดแดงในปอด หลังจากการหดตัวของหลอดเลือดที่เกิดจาก NE ถึงจุดที่ราบสูง ECH ถูกเติมแบบสะสม (30–300 ไมโครโมล/ลิตร) ให้กับ endothelium ที่ไม่บุบสลาย (E บวก รูปที่ 2C) หรือวงแหวน endothelium-denuded (E– รูปที่ 2C) ในวงแหวน endothelium ที่ไม่บุบสลาย การเติม ECH สะสมขยายหลอดเลือดในลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้นด้วยค่าสูงสุด

เปอร์เซ็นต์การคลายตัวของมัมที่ 89.22 เปอร์เซ็นต์ ±0.32 เปอร์เซ็นต์ ที่ 300 ไมโครโมล/ลิตร และ EC50 ที่ 51.60±0.57 ไมโครโมล/ลิตร (รูปที่ 2A และ 2C) ในทำนองเดียวกัน ในวงแหวนเคลือบเอนโดทีเลียม ECH ยังขยายหลอดเลือดในลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้น แต่ด้วยการตอบสนองสูงสุดที่ต่ำกว่าอย่างมีนัยสำคัญที่ 67.72 เปอร์เซ็นต์ ±1.69 เปอร์เซ็นต์ (P<0.01 vs="" intact="" endothelium="" rings)="" and="" a="" higher="" ec50="" of="" 108.51±2.8="" μmol/l=""><0.01 vs="" intact="" endothelium="" rings,="" figure="" 2b="" and="" 2c).="" the="" sustained="" plateau="" of="" the="" high-contraction="" percentage="" induced="" by="" ne="" (1="" μmol/l)="" after="" the="" experimental="" protocol="" indicated="" that="" the="" rings="" pretreated="" with="" ech="" (30–300="" μmol/l)="" had="" good="" activity="" (figure="" 2a="" and="">

ผลของ ECH ต่อการปล่อยแคลเซียมภายในเซลล์และการไหลเข้าของแคลเซียมภายนอกเซลล์

วงแหวนที่เคลือบเอนโดทีเลียมถูกเผยสัมผัสกับ 1 ไมโครโมล/ลิตรของ NE จนกระทั่งเกิดการหดตัวสูงสุด ภายใต้สภาวะที่ปราศจาก Ca2 plus นอกเซลล์ วงแหวนถูกปรับสมดุลในสารละลาย KH ที่ปราศจาก Ca2 plus ที่มี 0.2 มิลลิโมล/ลิตรของ EGTA ก่อนการเริ่มต้นการทดลอง หลังจากล้างสามครั้งด้วยสารละลาย KH ที่ปราศจาก Ca2 plus และ EGTA วงแหวนถูกบ่มล่วงหน้าด้วย ECH (30, 100 และ 300 ไมโครโมล/ลิตร) เป็นเวลา 20 นาที และจากนั้นเผยให้ปรากฏอีกครั้งเป็น 1 ไมโครโมล/ลิตรของ NE ผลิตแหวน

การหดตัวที่ไม่ต่อเนื่องซึ่งกลับสู่การตรวจวัดพื้นฐานอย่างรวดเร็ว เมื่อเทียบกับการหดตัวเริ่มต้นที่เกิดจาก NE ซึ่งใช้เป็นข้อมูลอ้างอิง การหดตัวสูงสุดของกลุ่มควบคุมคือ 33.27 เปอร์เซ็นต์ ±2.94 เปอร์เซ็นต์ (รูปที่ 3A และ 3E) แต่ลดลงอย่างมีนัยสำคัญเป็น 24.54 เปอร์เซ็นต์ ±2.97 เปอร์เซ็นต์ และ 10.60 เปอร์เซ็นต์ ±2.07 เปอร์เซ็นต์ ในวงแหวนที่ปรับสภาพด้วย ECH 100 และ 300 ไมโครโมล/ลิตร ตามลำดับ (P<0.01 vs="" control="" group;="" figure="" 3c–3e).="" under="" extracellular="" calcium="" influx="" conditions,="" 2.5="" mmol/l="" cacl2="" was="" added="" to="" the="" chamber="" when="" the="" curve="" reached="" a="" plateau.="" the="" control="" group="" produced="" sustained="" contractions,="" with="" a="" maximum="" contraction="" of="" 139.89%±7.38%="" (figure="" 3a="" and="" 3e);="" but="" the="" maximum="" contraction="" was="" significantly="" reduced="" to="" 112.42%±7.30%,="" 100.29%±8.66%,="" and="" 74.74%±4.95%="" in="" rings="" pretreated="" with="" 30,="" 100,="" and="" 300="" μmol/l="" of="" ech,="" respectively=""><0.01 vs="" control="" group;="" figure="" 3b–3e).="" under="" these="" conditions,="" the="" maximal="" effect="" caused="" by="" ech="" was="" more="" pronounced="" with="" 300="" μmol/l="" than="" with="" 100="" or="" 30="" μmol/l=""><0.01 vs="" 30="" or="" 100="" μmol/l="" ech="" group).="" different="" concentrations="" of="" ech="" all="" shortened="" the="" platform="" of="" sustained="" contraction,="" which="" was="" induced="" by="" extracellular="" calcium="" influx="" at="" different="" levels="" (figure="">

บทบาทของสารยับยั้งต่างๆ ใน ​​vasorelaxation หลอดเลือดแดงปอดที่เกิดจาก ECH

vasorelaxation หลอดเลือดแดงปอดของหนูที่เกิดจาก ECH ได้รับการตรวจสอบเมื่อมีหรือไม่มีตัวยับยั้งต่อไปนี้: L-NAME (ตัวยับยั้ง eNOS), IMT (ตัวยับยั้งไซโคลออกซีเจเนส), TEA (ตัวนำขนาดใหญ่ Ca2 บวก - ตัวยับยั้ง K plus channel ที่เปิดใช้งาน), BaCl2 ( ตัวปรับกระแสภายใน K plus channel inhibitor), 4-AP (ตัวยับยั้ง K plus channel ที่ขึ้นกับแรงดันไฟฟ้า) และ Gli (ตัวยับยั้ง K plus channel ที่ไวต่อ ATP) วงแหวนถูกหดตัวสูงสุดด้วย 1 ไมโครโมล/ลิตรของ NE และจากนั้น L-NAME (100 ไมโครโมล/ลิตร), IMT (10 ไมโครโมล/ลิตร), TEA (1 มิลลิโมล/ลิตร) , BaCl2 (1 มิลลิโมล/ลิตร), 4-AP (1 มิลลิโมล/ลิตร) หรือ Gli (10 ไมโครโมล/ลิตร) ถูกเติมตามลำดับ เมื่อถึงที่ราบสูงใหม่ ECH ถูกเพิ่มในลักษณะสะสมตั้งแต่ 30 ถึง 300 ไมโครโมล/ลิตร กราฟแสดงการตอบสนองความเข้มข้นเมื่อมีสารยับยั้งต่างๆ แสดงไว้ในรูปที่ 4 ผลของ vasorelaxant ของ ECH ต่อวงแหวนหลอดเลือดแดงในปอดที่หดตัว 1 ไมโครโมล/ลิตรของ NE ถูกบล็อกโดย L-NAME (100 ไมโครโมล/ลิตร) อย่างมีนัยสำคัญ 1 มิลลิโมล/ลิตร) และ BaCl2 (1 มิลลิโมล/ลิตร) โดยมีการคลายตัวสูงสุด 64.41 เปอร์เซ็นต์ ±3.20 เปอร์เซ็นต์ , 84.38 เปอร์เซ็นต์ ±0.70 เปอร์เซ็นต์ และ 75.27 เปอร์เซ็นต์ ±0.93 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ (P<0.01 vs="" the="" control="" group="" of="" 89.22%±0.32%),="" and="" the="" values="" of="" ec50="" were="" increased="" to="" 197.32±2.75="" μmol/l,="" 91.42±2.11="" μmol/l,="" and="" 115.49±1.75="" μmol/l,="" respectively=""><0.01 vs="" the="" control="" group="" of="" 51.60±0.57="" μmol/l)="" (table="" 1).="" however,="" imt="" (10="" μmol/l),="" 4-ap="" (1="" mmol/l),="" and="" gli="" (10="" μmol/l)="" did="" not="" inhibit="" the="" ech-induced="" relaxation="" (figure="" 4="" and="" table="" 1).="" to="" validate="" the="" effects="" of="" these="" inhibitors="" on="" ech-induced="" relaxation,="" the="" rings="" precontracted="" with="" 1="" μmol/l="" of="" ne="" were="" treated="" with="" l-name="" (100="" μmol/l),="" imt="" (10="" μmol/l),="" tea="" (1="" mmol/l),="" bacl2="" (1="" mmol/l),="" 4-ap="" (1="" mmol/l),="" and="" gli="" (10="" μmol/l).="" after="" a="" new="" plateau="" was="" reached,="" ech="" was="" added="" to="" the="" chamber="" at="" a="" single="" concentration="" of="" 300="" μmol/l="" rather="" than="" in="" a="" cumulative="" manner.="" the="" maximum="" relaxation="" was="" reduced="" to="" 56.33%±0.90%,="" 82.21%±0.92%,="" and="" 72.16%±0.76%="" following="" the="" addition="" of="" l-name,="" tea,="" and="" bacl2,="">

การระบุ PASMC ของหนู

At low magnification, spindle cells were densely packed, and almost all the cells were stained positively for PASMCs (the PASMC purity was >95 เปอร์เซ็นต์ ) (รูปที่ 6A) ไมโอฟิลาเมนต์ที่มีคราบสีน้ำตาลสังเกตเห็นได้ชัดเจนในไซโทพลาสซึมที่กำลังขยายสูง (รูปที่ 6B)

Cistancheเอ็กไคนาโคไซด์ต้านทานได้อะพอพโทซิส

ผลของ ECH ต่อความเข้มข้นของแคลเซียมภายในเซลล์ใน PASMC ของหนูแรท

NE (1 ไมโครโมล/ลิตร) เพิ่มความเข้มข้นของแคลเซียมภายในเซลล์อย่างมีนัยสำคัญ (n=6, P<0.01 vs="" the="" control="" group)="" in="" rat="" pasmcs,="" and="" ech="" could="" decrease="" the="" mean="" fluorescence="" intensity="" (n="6,"><0.01 vs="" the="" ne="" group)="" (figure="">