ตอนที่ 1 สารสกัดที่เป็นน้ำของ Herba Cistanche ส่งเสริมการเคลื่อนไหวของลำไส้ในหนูที่มีอาการท้องผูกที่เกิดจาก Loperamide โดยการแก้ไขเซลล์คั่นระหว่างหน้าของ Cajal

Shuai Yan,1,2 Yin-zi Yue,1 Xiao-peng Wang,1 Hong-li Dong,1 Shu-guang Zhen,1 Ben-sheng Wu,1 และ Hai-hua Qian3

1 โรงพยาบาลซูโจวแห่งแพทย์แผนจีน,ซูโจว มณฑลเจียงซู 215009 ประเทศจีน

2มหาวิทยาลัยหนานจิงแห่งการแพทย์แผนจีน, Nanjing, Jiangsu 210023, China

3กรมศัลยศาสตร์ทวารหนัการแพทย์แผนจีน, Nanjing, Jiangsu 210029, China

Correspondence should be addressed to Hai-Hua Qian; haihuaqian@126.com

ได้รับ 24 พฤษภาคม 2017; แก้ไขเมื่อ 5 ตุลาคม 2560; ยอมรับ 25 ตุลาคม 2017; เผยแพร่ 28 ธันวาคม 2017

บรรณาธิการวิชาการ: Samra Bashir

ลิขสิทธิ์ © 2017 Shuai Yan et al. นี่เป็นบทความที่เข้าถึงได้ซึ่งเผยแพร่ภายใต้ Creative Commons Attribution License ซึ่งอนุญาตให้ใช้ แจกจ่าย และทำซ้ำได้ไม่จำกัดในสื่อใดๆ โดยต้องอ้างอิงงานต้นฉบับอย่างเหมาะสม

ยาจีนโบราณมีรายงานว่ามีผลดีในการรักษาอาการท้องผูก งานนี้พยายามที่จะพิสูจน์ผลของสารสกัดจาก Herba Cistanche (AEHC) ในน้ำต่อการรักษา STC และเพื่อตรวจสอบกลไกที่เป็นไปได้โดยแบบจำลองอาการท้องผูกการขนส่งช้า (STC) ที่เกิดจาก loperamide HPLC ถูกดำเนินการเพื่อระบุและยืนยันส่วนประกอบที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพใน AEHC พบว่า AEHC ลดการตอบสนองของ STC โดยพิจารณาจากปริมาณอุจจาระที่เพิ่มขึ้น ปริมาณความชื้น และอัตราการขนส่งในลำไส้ ตลอดจนระดับ GAS, MTL, SS และ CGRP ในซีรัม ระดับโปรตีนและ mRNA ของ c-kit การติดฉลากของเซลล์คั่นระหว่างหน้าของ Cajal (ICC) ก็เพิ่มขึ้นเช่นกัน ในขณะเดียวกัน เฉพาะระดับโปรตีนของ SCF ซึ่งเป็นลิแกนด์ของชุดคิท เพิ่มขึ้น การวิเคราะห์ข้อมูลของเราชี้ให้เห็นว่า AEHC สามารถปรับปรุงการทำงานของ ICC ได้อย่างชัดเจนผ่านเส้นทางการส่งสัญญาณที่เกี่ยวข้องกับ PI3K, SCF และ c-kit และปรับปรุงดัชนีการเคลื่อนที่ของลำไส้ เช่น GAS, MTL, SS และ CGRP เป็นที่น่าสนใจที่จะสังเกตว่า AEHC ดูเหมือนจะมีผลกับอาการท้องผูก ดังนั้นจึงจำเป็นต้องมีการทดลองเพิ่มเติมเพื่อทำให้กลไกที่เกี่ยวข้องชัดเจนขึ้น

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติมกรุณาติดต่อ:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche deserticola มีเอฟเฟกต์มากมาย คลิกที่นี่เพื่อทราบข้อมูลเพิ่มเติม

1. บทนำ

อาการท้องผูกเป็นโรคเกี่ยวกับระบบทางเดินอาหารที่พบได้บ่อยและมีปัญหาด้านสาธารณสุข โดยมีอาการถ่ายอุจจาระยากอย่างต่อเนื่อง ไม่บ่อย หรือไม่สมบูรณ์ [1] ความชุกของอาการท้องผูกแตกต่างกันไปตั้งแต่ 0.7 เปอร์เซ็นต์ ถึง 81 เปอร์เซ็นต์ทั่วโลก โดยเฉพาะในผู้สูงอายุ [2, 3] ท้องผูกขนส่งช้า (STC) เป็นปัญหาทางเดินอาหารที่พบบ่อยในผู้ป่วย 13–37 เปอร์เซ็นต์ที่มีอาการท้องผูกที่ดื้อต่อการรักษาเรื้อรัง [4, 5] ข้อมูลทางระบาดวิทยาบ่งชี้อุบัติการณ์ที่สูงขึ้นของSTCในหมู่หญิงสาวมากกว่าผู้ชาย [6]STCทำให้เกิดอาการท้องผูกที่รักษายาก แสดงการตอบสนองเพียงเล็กน้อยต่อการรักษาแบบอนุรักษ์นิยมและแนวโน้มของความผิดปกติของระบบประสาท ไม่ง่ายเหมือนโรคที่ใช้งานได้ แต่เรียกร้องให้มีการรักษาที่รุกรานและก้าวร้าว [7]

ยาเคมีในปัจจุบันจำนวนหนึ่ง เช่น ยาระบาย ยาระบายและสารคัดหลั่ง ถูกนำมาใช้อย่างทั่วถึง

รักษาอาการท้องผูก [8] แม้ว่าการใช้ยาจะถูกจำกัดเนื่องจากมีค่าใช้จ่ายสูงและผลข้างเคียงของช่องท้อง เช่น ปวด ตะคริว และท้องอืด [9] ในปัจจุบัน การควบคุมระบบทางเดินอาหารเป็นจุดสนใจหลักของการรักษาอาการท้องผูก Cisapride ถูกสร้างขึ้นครั้งแรกในฐานะสารส่งเสริมในการรักษาโรคกระเพาะ แต่ถูกถอนออกในภายหลังเนื่องจากความเสี่ยงของภาวะหัวใจเต้นผิดจังหวะ [10]

Tegaserod เป็น 5-hydroxytryptamine receptor antagonist แบบเลือกเฟ้นที่สามารถกระตุ้นการบีบตัวของลำไส้และการคัดหลั่ง [11, 12] Prucalopride เป็นอนุพันธ์ของ dihydro benzofuran carboxamide และ 5-HT receptor agonist ที่มีความเฉพาะเจาะจงและความจำเพาะสูง ซึ่งสามารถปรับปรุงกระเพาะอาหาร ลำไส้เล็ก และการเคลื่อนไหวของลำไส้ และทำงานได้เร็วขึ้นในการเปลี่ยนแปลง [13–15] ในฐานะที่เป็นอนุพันธ์ของ prostaglandin E1 lubiprostone สามารถเลือกเปิดใช้งานช่อง CIC เพื่อส่งเสริมการหลั่งในทางเดินอาหารและเพิ่มผลกระทบของการส่งผ่านลำไส้ [16]

Cistancheมีผลในการปรับสีให้ไตและยังรักษาได้ท้องผูก

การเคลื่อนไหวของอาการท้องผูกเป็นปัญหาที่แพร่หลาย แต่สาเหตุของอาการท้องผูกยังไม่ชัดเจน อย่างไรก็ตาม หลักฐานที่น่าเชื่อถือได้แสดงให้เห็นการมีส่วนร่วมของเซลล์คั่นระหว่างหน้าของ Cajal (ICC) ต่อการเกิดโรคของอาการท้องผูก [17] พบ ICC ระหว่างปลายประสาทและเซลล์กล้ามเนื้อเรียบในทางเดินอาหาร โดยทั่วไปแล้ว ICC ได้รับการยอมรับว่าเป็นเซลล์เครื่องกระตุ้นหัวใจสำหรับการทำงานของระบบทางเดินอาหารและเป็นตัวกลางในการส่งผ่านประสาทและกล้ามเนื้อ [18] จากการศึกษาพบว่าความหนาแน่นของ ICC ในลำไส้ใหญ่ของผู้ป่วยที่มีอาการท้องผูกในการขนส่งช้านั้นต่ำกว่ามากเมื่อเทียบกับผู้ป่วยปกติ [19] ดังนั้น จำนวน ICC ที่ลดลงอาจนำไปสู่การขาดแคลนกิจกรรมคลื่นช้า ซึ่งส่งผลต่อการตอบสนองต่อการหดตัวและกระตุ้นการขนส่งที่ล่าช้าในผู้ป่วยที่มีอาการท้องผูกที่เดินทางช้า สำหรับประเด็นนี้ การรักษา ICC โดยใช้ยาอาจมีความสำคัญต่อการรักษาอาการท้องผูกในการขนส่งช้า

ยาสมุนไพรหลายชนิดและยาจีนโบราณ Mula เพิ่งได้รับความสนใจในฐานะยารักษาโรคแบบใหม่สำหรับการรักษาอาการท้องผูกเรื้อรังอันเป็นผลมาจากการผลิตอุจจาระที่ดีขึ้น [20, 21] Herba Cistanche เป็นยาสมุนไพรแผนโบราณที่ใช้รักษาโรคไตเรื้อรัง ภาวะมีบุตรยากในสตรี ภาวะมีประจำเดือนจำนวนมาก และความอ่อนแอ [22, 23] Herba Cistanche ป้องกันการตายของเซลล์ประสาทในสมองด้วยการแสดงปัจจัยที่เกี่ยวข้องกับการตายของเซลล์และปัจจัยเกี่ยวกับระบบประสาทในเซลล์ MES23.5 [24] Herba Cistanche ยังได้แสดงให้เห็นถึงศักยภาพทางเภสัชกรรมในการรักษาโรคไต Yang-Qi Kidney-Yang Deficiency Syndrome การศึกษาเมื่อเร็ว ๆ นี้แสดงให้เห็นว่า Herba Cistanche เพิ่มระดับการหายใจของไมโตคอนเดรียและสถานะสารต้านอนุมูลอิสระของกลูตาไธโอนในคาร์ดิโอไมโอไซต์ H9c2 [25]

TCM เชื่อว่าอาการท้องผูกมีความสัมพันธ์ใกล้ชิดกับไต เปิดที่อวัยวะเพศภายนอกและทวารหนัก ไตควบคุมการถ่ายปัสสาวะและการถ่ายอุจจาระ การขนส่งของเสียขึ้นอยู่กับการส่งเสริมพลังชี่ของไตและการบำรุงของหยินไต ถ้าไตหยางขาดหรือไฟประตูแห่งชีวิตดับลง ความแออัดของลำไส้ใหญ่ที่เย็นจัดจะส่งผลให้เกิดการชะงักงันของของเสีย อาการท้องผูกยังเกิดจากการเคลื่อนไหวของลำไส้แห้งเนื่องจากการขาดสาระสำคัญของไตไม่สามารถสร้างของเหลวได้เพียงพอ [26]

เฮอร์บาCistancheเป็นสมุนไพรรวมที่มีรสหวานและเค็มและอบอุ่นในธรรมชาติ เนื่องมาจากลำไส้ใหญ่และเส้นเมอริเดียนของไต มันสามารถบำรุงไตหยางและทำให้ลำไส้ชุ่มชื้นเพื่อบรรเทาอาการท้องผูก สมุนไพรเดี่ยวนี้และของมันชาวจีนการเตรียมยาถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการรักษาอาการท้องผูกด้วยประสิทธิภาพที่โดดเด่น [27]

ในประเทศจีน ผลกระทบของ HerbaCistancheรากของอาการท้องผูกได้รับการบันทึกไว้ [28, 29] และอ้างถึงใน Materia Medica ของจีนของ Shen Nong ว่าเป็น "ลำต้นแห้งฉ่ำของสายพันธุ์ Cistanche" [30]; อย่างไรก็ตาม ยังไม่มีหลักฐานทางวิทยาศาสตร์เกี่ยวกับผลของรากสมุนไพร Herba Cistanche ต่ออาการท้องผูก โดยขนาดยาที่มีประสิทธิภาพทางคลินิกคือ 20 กรัมต่อวันตำรับยาจีนและผลทางคลินิกไม่เพิ่มขึ้นอีกกับขนาดยา

เนื่องจาก Herba Cistanche หายากมาก [31] การกำหนดขนาดยาทางคลินิกสำหรับการรักษาSTCโดยการศึกษาทดลองไม่เพียงแต่ป้องกันการรักษาที่ล้มเหลวเนื่องจากปริมาณยาที่ไม่เพียงพอ แต่ยังช่วยให้ผู้ป่วยไม่สูญเสียทางเศรษฐกิจและแม้กระทั่งการใช้ยาเกินขนาด เราหวังว่า

ผลลัพธ์สามารถวางรากฐานทางวิทยาศาสตร์สำหรับยาใหม่สำหรับอาการท้องผูก ดังนั้นจึงเป็นเรื่องสำคัญที่จะต้องตรวจสอบการทำงานของ Herba Cistanche ที่เป็นน้ำในการส่งเสริมลำไส้และการทำงานของ ICC ในการศึกษานี้

Cistancheรักษาได้ท้องผูก

2. วัสดุและวิธีการ

2.1. การเตรียมสารสกัดน้ำของ Herba Cistanche

Herba Cistanche ทั้งหมดซื้อมาจาก Nanjing Haichang Chinese Medicine Group Co., Ltd. (หนานจิง ประเทศจีน) ซึ่งเก็บเกี่ยว รวบรวม และแปรรูปตามหลักปฏิบัติทางชาติพันธุ์วิทยามาตรฐานจากสวนในพื้นที่ Sinkiang ของจีน ศาสตราจารย์ทู หลิน ลู่ จากมหาวิทยาลัยการแพทย์จีนนานกิง เมืองหนานจิง ประเทศจีน ยืนยันถึงเอกลักษณ์ของพืชได้ทางสัณฐานวิทยา ตัวอย่างใบสำคัญ (NUCMCHS-2015628) ถูกฝากไว้ที่วิทยาลัยวิทยาศาสตร์สุขภาพ มหาวิทยาลัยการแพทย์จีนนานกิง เมืองหนานจิง ประเทศจีน

Herba Cistanche ชิ้นที่มีน้ำหนัก 500 กรัมถูกบดให้เป็นผงโดยใช้เครื่องปั่นไฟฟ้าและสกัดในน้ำกลั่น 5,000 มล. หลังจากนั้นสารสกัดที่เป็นน้ำจะถูกทำให้บริสุทธิ์ที่ 100 C เป็นเวลา 2 ชั่วโมงโดยใช้อุปกรณ์สกัดแบบหมุนเวียน

รูขุมขนเมมเบรน (Millipore, Billerica, MA, USA) และสารตกค้างที่ได้จากสารสกัดถูกละลายในน้ำ 4000 มล. หลังจากการสกัดกรดไหลย้อน สารสกัดจะถูกรวบรวมและระเหยเพื่อให้ได้ผลิตภัณฑ์ตัวอย่างสุดท้าย สารสกัดที่เป็นน้ำถูกทำให้เข้มข้นจนเป็นเม็ดแห้ง (1 กรัม/มล.) โดยใช้a

สำหรับการใช้งานในภายหลัง ตัวอย่างที่เป็นของแข็งถูกสร้างใหม่ในน้ำกลั่นเพื่อให้ปริมาณที่ต้องการคือ 10, 20 และ 40 มก./กก. ของน้ำหนักตัวสำหรับการทดลอง

2.2. สัตว์.

โปรโตคอลการทดลองที่ใช้ในการศึกษานี้ได้รับการทบทวนและอนุมัติตามขั้นตอนทางจริยธรรมและการดูแลทางวิทยาศาสตร์โดยโรงพยาบาลซูโจวแห่งการแพทย์แผนจีน-คณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ประจำสถาบัน เมืองซูโจว ประเทศจีน (SHTCM-IACUC; หมายเลขอนุมัติ: PNU- 2016-0003) หนูทุกตัว (สายพันธุ์ Sprague Dawley) ที่มี ag ถูกซื้อมาจากศูนย์วิจัยสัตว์ทดลองแห่งเซี่ยงไฮ้ตามแนวทางของสถาบันสุขภาพแห่งชาติ สัตว์เหล่านี้เข้าถึงอาหารมาตรฐานได้ฟรี (AIN-93 M) และน้ำประปาโดยอิสระ และถูกเลี้ยงแยกกันในความชื้นสัมพัทธ์ที่เป็นเปอร์เซ็นต์ของเหล็กกล้าไร้สนิม และสัมผัสกับแสงธรรมชาติ 12 ชั่วโมงและความมืด 12 ชั่วโมงทุกวัน

2.3 การออกแบบทดลอง

loperamide ถูกใช้เพื่อทำให้เกิดอาการท้องผูกในหนูตามการศึกษาก่อนหน้านี้ [32, 33] สุ่มหนูทั้งหมด 60 ตัว แบ่งเป็น 5 กลุ่ม (ต่อกลุ่ม): A: กลุ่มปกติ (NG), B: กลุ่มรุ่น (Lop plus กลุ่มที่บำบัดด้วยกระสายยา), C: กลุ่มหนูท้องผูกที่บำบัดด้วยสารสกัดน้ำต่ำของ Herba Cistanche (กลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย Lop plus LAEHC), D: กลุ่มของหนูที่ท้องผูกที่รักษาด้วยสารสกัดที่มีน้ำปานกลางของ Herba Cistanche (กลุ่มที่รักษาด้วย Lop plus MAEHC) และ E: กลุ่มของหนูที่ท้องผูกที่รักษาด้วยสารสกัดที่มีน้ำสูงของ Herba Cistanche (กลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย Lop plus HAEHC) กลุ่ม A ถูกบำบัดด้วยน้ำเกลือปกติ (10 มล./กก.); กลุ่ม B ได้รับการรักษาด้วยโลเพอราไมด์

(4 มก./กก.); กลุ่ม C ถูกบำบัดด้วยโลเพอราไมด์ (4 มก./กก.) และสารสกัดที่มีน้ำต่ำของ Herba Cistanche (1 ก./กก.); กลุ่ม D ถูกบำบัดด้วยโลเพอราไมด์ (4 มก./กก.) และสารสกัดน้ำปานกลางของ Herba Cistanche (2 ก./กก.) และกลุ่ม E ถูกบำบัดด้วยโลเพอราไมด์ (4 มก./กก.) และสารสกัดที่เป็นน้ำสูงของ Herba Cistanche (4 ก./กก.) กิโลกรัม). หนูทั้งหมดจากกลุ่มปกติถูกฉีดด้วยโซเดียมคลอไรด์ 0.9 เปอร์เซ็นต์ ในขณะที่หนูตัวอื่นๆ ถูกฉีดด้วยโลเพอราไมด์ในโซเดียมคลอไรด์ 0.9 เปอร์เซ็นต์ วันละสองครั้งเป็นเวลา 3 วันติดต่อกันเพื่อทำให้เกิดอาการท้องผูก สารสกัดที่เป็นน้ำของ Herba Cistanche ถูกระงับในน้ำและถูกบริหารให้รับประทานวันละครั้งตั้งแต่วันที่ 4 ถึงวันที่ 18 ในกลุ่ม C, กลุ่ม D และกลุ่ม E ในขณะที่กลุ่ม A และ B ได้รับปริมาณน้ำที่สม่ำเสมอผ่านทางสายน้ำ

2.4. สภาพโครมาโตกราฟี

การทำโปรไฟล์ HPLC ดำเนินการในระบบ Shimadzu Liquid Chromatographic System (โตเกียว ประเทศญี่ปุ่น) ซึ่งประกอบด้วยปั๊ม LC-20AT และ

ถูกเฝ้าติดตามที่ 330 นาโนเมตร ที่ 30 C. เฟสเคลื่อนที่แบบไอโซเครติกประกอบด้วยเมทานอล 0.1 เปอร์เซ็นต์ กรดฟอร์มิก (80 : 20, v/v) และวิ่งที่อัตราการไหล 1.0 มล./นาที . การแยกโครมาโตกราฟีคือ

ขนาดอนุภาค 5 ม., Beijing Dikma Science and Technology Co., Ltd., ปักกิ่ง, จีน)

2.5. การวิเคราะห์การออกกำลังกาย การรับประทานอาหาร การดื่มน้ำ ร่างกาย

กัมที่เหมาะแก่การเพาะปลูก (สารแขวนลอยในน้ำของถ่าน 20 เปอร์เซ็นต์และกัม 10 เปอร์เซ็นต์ที่เหมาะแก่การเพาะปลูก) ถูกบริหารให้ทางปากที่ปริมาตร 25 มล./กก. ของสัตว์แต่ละตัว หลังจากผ่านไป 30 นาที สัตว์เหล่านี้ได้รับการสังเวยอย่างมนุษย์โดยการเคลื่อนของปากมดลูกและผ่าออก ลำไส้เล็กจากไพโลเรอสไปยังลำไส้ใหญ่ส่วนต้นถูกสำรวจและวัดระยะทางที่ปกคลุมด้วยถ่านป่นและความยาวรวมของลำไส้เล็ก สำหรับหนูแต่ละตัว เปอร์เซ็นต์ของการขนส่งในลำไส้คำนวณเป็นเปอร์เซ็นต์ของระยะทางที่อาหารถ่านเดินทางสัมพันธ์กับความยาวทั้งหมดของลำไส้เล็ก สมการต่อไปนี้คำนวณอัตราการขนส่งของลำไส้ (เปอร์เซ็นต์): ระยะทางที่ถ่านเคลื่อนที่/ระยะทางจากไพโลรัสไปยังลำไส้ใหญ่ส่วนต้น 100 เปอร์เซ็นต์

2.6. ตัวอย่างเลือดและการเก็บเนื้อเยื่อ เมื่อสิ้นสุดระยะเวลาทดลอง หนูต้องอดอาหารเป็นเวลา 12 ชั่วโมง แต่ได้รับอนุญาตให้เข้าถึงน้ำได้ฟรี จากนั้นหนูทุกตัวได้รับการดมยาสลบ 30 นาทีต่อมาโดยการฉีดโซเดียม เพนโทบาร์บิทัล (50 มก./กก.) เข้าช่องท้อง และวางไว้บนโต๊ะที่มีการควบคุมอุณหภูมิ ตัวอย่างเลือดถูกรวบรวมและหมุนเหวี่ยงที่ 3500 รอบต่อนาที เป็นเวลา 15 นาทีเพื่อให้ได้ซีรัม ลำไส้ใหญ่ถูกแยกออกทันทีและล้างด้วยน้ำเกลือปกติที่ 4 C แล้วแบ่งออกเป็นสองส่วน ชิ้นส่วนหนึ่งได้รับการแก้ไขในฟอร์มาลิน 10 เปอร์เซ็นต์และแปรรูปในพาราฟินแยกส่วนสำหรับการวิเคราะห์อิมมูโนฮิสโตเคมี (IHC) ที่ตามมา ในขณะที่อีกชิ้นคือน้ำหนักและผม การเปลี่ยนแปลงในการออกกำลังกาย การรับประทานอาหาร การดื่มน้ำ

เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 80 องศาเซลเซียส จนกว่าจะได้รับการทดสอบ มีการสังเกตการบริโภค น้ำหนักตัว และเส้นผมทุกวันตลอดช่วงการทดลอง เราสังเกตเห็น "การเปลี่ยนแปลงในการออกกำลังกาย" โดยทำตามขั้นตอนเฉพาะ: กล่องทำเอง (สูง 60 ซม. ยาว 50 ซม. และกว้าง 80 ซม. พร้อมผนังสีเข้ม) ใช้สำหรับการทดสอบภาคสนาม พื้นสีขาวแบ่งออกเป็นเพชร (12 ซม.) โดยเส้นสีดำในห้องมืดและเงียบสงบ หลอดไฟ 100 W แขวนอยู่เหนือกึ่งกลางกล่อง 1 ม. หนูถูกวางไว้ตรงกลางกล่องในวันที่ 4, 6, 12 และ 18 ของการสร้างแบบจำลอง จำนวนช่องสี่เหลี่ยมที่หนูผ่านภายใน 5 นาทีใช้เป็นคะแนนการเคลื่อนที่ในแนวนอน และเวลาตั้งตรงของหนูภายใน 5 นาทีใช้เป็นคะแนนการเคลื่อนที่ในแนวดิ่ง คะแนนแนวนอนและการเคลื่อนไหวบวกคะแนนการเคลื่อนไหวในแนวตั้งระบุจำนวนการออกกำลังกายของหนู หนูแต่ละตัวถูกวัดครั้งเดียว [34, 35]

Cistancheบรรเทาได้ท้องผูก

2.7. การวัดพารามิเตอร์อุจจาระ

ในวันสุดท้ายของการบริหารช่องปาก อุจจาระสดจากหนูแรท SD แต่ละตัวถูกเก็บในหลอดที่มีก้นกลมเป็นเวลา 6 ชั่วโมง และบันทึกน้ำหนักรวมจากแต่ละกลุ่ม ในการกำหนดปริมาณความชื้นในอุจจาระ เราใช้เครื่องชั่งไฟฟ้าเพื่อทำให้อุจจาระแห้งจนได้น้ำหนักคงที่และวัดน้ำหนักแห้ง ปริมาณความชื้น

2.8. การประเมิน GAS, MTL, SS และ CGRP

ความเข้มข้นของ gastrin (GAS), motilin (MTL), somatostatin (SS) และ calcitonin gene-related peptide (CGRP) ในซีรัมประเมินโดย ELISA โดยใช้ชุดเครื่องมือที่มีจำหน่ายทั่วไป

2.9. การวิเคราะห์ทางเนื้อเยื่อวิทยา.

ทวิภาคตามขวางที่เก็บจากหนูแรท SD ถูกตรึงด้วยฟอร์มาลิน 10 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 12 ชั่วโมงฝังตัว

m ชิ้นหนาที่ย้อมด้วย hematoxylin และ eosin (H&E, Sigma- Aldrich, MO, USA) ลักษณะทางสัณฐานวิทยาของส่วนเหล่านี้ถูกสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง หลังจากนั้นจึงวัดความยาววิลลัส ความหนาของคริสตัล และความหนาของกล้ามเนื้อโดยใช้ Leica Application Suite (Leica Microsystems, ประเทศสวิสเซอร์แลนด์)

2.10. การวิเคราะห์อิมมูโนฮิสโตเคมี.

เราปฏิบัติตามวิธีการของ Zhu et al (2016) [36]; ส่วนที่ไม่ย้อมสี 5 ม. คือ

ย้อมด้วย anti-c-kit ของกระต่าย (1: 100) ที่ 4 C ค้างคืน ใช้แอนติบอดีทุติยภูมิและวิธีการที่ซับซ้อนของ avidin-biotin-peroxidase ตามคำแนะนำของผู้ผลิต กลุ่มควบคุมเชิงลบของอิมมูโนโกลบุลินถูกใช้เพื่อกำจัดการจับที่ไม่จำเพาะ ระดับการแสดงออกของ c-kit

2.11. การวิเคราะห์อัตราการขนส่งในลำไส้.

อัตราส่วนการขนส่งลำไส้ดำเนินการตามโปรโตคอลที่รายงานไว้ก่อนหน้านี้ [36]; ในช่วงสั้น ๆ หลังจากการรักษา 14 วัน หนู SD ทั้งหมดต้องอดอาหาร 12 ชั่วโมง แต่ได้รับอนุญาตให้เข้าถึงน้ำได้ฟรี

ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสแบบเรียลไทม์ ระดับการแสดงออกของยีนของ c-kit, SCF และ PI3K mRNAs ในลำไส้ใหญ่ถูกกำหนดโดยใช้ชุดการสกัด RNA ทั้งหมด (TIANGEN Biotech,

ปักกิ่ง ประเทศจีน) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต PCR แบบเรียลไทม์ดำเนินการด้วย ABI StepOnePlus Real-Time PCR System (ABI) SYBR Green I Real-Time PCR Master Mix (QPK201, Toyobo, Japan) ถูกใช้เพื่อตรวจจับผลิตภัณฑ์ PCR ปฏิกิริยาถูกดำเนินการในการดำเนินการสามเท่า ต่อมาเนื้อเยื่อลำไส้ใหญ่ของหนูสดน้ำหนัก 0.5 กรัมถูกโฮโมล็อก-

l) สกัดตามคำแนะนำของผู้ผลิตโดยใช้ TRIzol Reagent (Invitrogen, USA) ชุด Reverse transcription-PCR (Takara Biotechnology Co., Inc.) ถูกใช้เพื่อสังเคราะห์สาย cDNA สายแรกตามโปรโตคอลของผู้ผลิต พารามิเตอร์เป้าหมายทั้งหมดแสดงในตารางที่ 1 โปรโตคอลการปั่นจักรยานอยู่ภายใต้เงื่อนไขต่อไปนี้: 95 C เป็นเวลา 5 นาที (DNA denaturation) ตามด้วย 40 รอบของ 95 C เป็นเวลา 15 วินาที, 60 C เป็นเวลา 20 วินาที และ 72 C สำหรับ 40 วิ การวิเคราะห์เส้นโค้งหลอมเหลวถูกดำเนินการที่จุดสิ้นสุดของรอบการขยายกำลัง

2.12. การวิเคราะห์ Western Blot

ปริมาณโปรตีนของ c-kit และ SCF ในตัวอย่างลำไส้ใหญ่ที่เป็นเนื้อเดียวกันถูกประเมินโดย Western blot โดยสังเขป โปรตีนทั้งหมดของโฮโมจีเนตถูกกำหนดโดยใช้การทดสอบกรดบิซินโชนินิก (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA) เจลโซเดียม dodecyl sulfate-polyacrylamide (SDS-PAGE) ใช้เพื่อแยกตัวอ่อนออกจากระบบอิเล็กโตรโฟรีซิสของ BioRad (BioRad Laboratories, Hercules, CA, USA) จากนั้น โปรตีนถูกถ่ายโอนไปยังเมมเบรนโพลีไวนิลลิดีน ไดฟลูออไรด์ (PVDF) หลังจากการบำบัด 2 ชั่วโมงด้วยบัฟเฟอร์การบล็อกใน TBS ที่มีนมไขมันไม่อิ่มตัวร้อยละ 5 ที่อุณหภูมิห้อง เยื่อ PVDF ถูกฟักในชั่วข้ามคืนด้วย 1 : 1,000 สารต้าน c-kit เจือจาง (ซานตาครูซ แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา), 1 : 500 สารต่อต้านซีเจือจางเจือจาง SCF (ซิกมา, มิสซูรี,

สหรัฐอเมริกา) และแอนติบอดีต่อต้านแอกตินเจือจาง 1: 8000 (คังเฉิน เซี่ยงไฮ้ จีน) ตามลำดับ ตรวจพบการจับของแอนติบอดีปฐมภูมิโดยใช้แอนติบอดีรอง HRP- conjugated ที่สอดคล้องกัน (Beyotime, Jiangsu, China) ชุดเคมีเรืองแสงที่ได้รับการปรับปรุง (Pierce Biotechnology Inc., Rockford, IL, USA) และ Odyssey Infrared Imaging System (Gene Company Ltd., Hong Kong) ถูกนำมาใช้ในการตรวจจับสารเคมี ใช้โปรแลคตินในการดูแลทำความสะอาดเป็นตัวควบคุมการโหลด ปริมาณของการแสดงออกของโปรตีนแสดงโดยสัมพันธ์กับระดับของแอคติน

2.13. การวิเคราะห์ทางสถิติ.

ข้อมูลการวัดถูกรายงานเป็นค่าความคลาดเคลื่อนมาตรฐานเฉลี่ยของค่าเฉลี่ย (SEM) และวิเคราะห์โดยSPSS

16.0 ซอฟต์แวร์ (SPSS, ชิคาโก, อิลลินอยส์, สหรัฐอเมริกา) การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) ตามด้วยการทดสอบหลายช่วงของ Duncan ใช้เพื่อกำหนดความแตกต่างที่มีนัยสำคัญในพารามิเตอร์ทั้งหมด ค่ามีนัยสำคัญทางสถิติที่

Cistancheยาต้มเป็นยารักษาโรคได้ดีท้องผูก

3. ผลลัพธ์

3.1. องค์ประกอบและส่วนประกอบเชิงหน้าที่ของ Herba Cistanche

ดังแสดงในรูปที่ 1 รากของ Herba Cistanche มีความเข้มข้นสูงของส่วนประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพหลายอย่างที่เกี่ยวข้องกับฤทธิ์เป็นยาระบาย ความเข้มข้นของอิไคนาโคไซด์รวมและเวอร์บาสโคไซด์ทั้งหมดเท่ากับ 0.64 มก./กรัม และ 0.16 มก./กรัม ตามลำดับ พีคสองพีคซึ่งบ่งชี้ระดับเอไคนาโคไซด์และเวอร์บาสโคไซด์ที่สูงถูกตรวจพบใน LP ที่เวลาการคงอยู่ที่เหมาะสมโดยโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง (HPLC)

3.2. การสังเกตทั่วไป

หนู SP ไม่ตายตลอดการทดลอง แสดงถึงความปลอดภัยและการทำงานของแบบจำลองสัตว์ที่ดีขึ้น เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม A หนูในกลุ่มตัวอย่างมีขนฟู อ่อนแรง อุจจาระแห้ง และ

แย่ลงด้วยการขยายเวลาการสร้างแบบจำลอง

3.3. ผลของ AEHC ต่อจำนวนอุจจาระและปริมาณความชื้นในหนูที่มีอาการท้องผูกที่เกิดจากโลเพอราไมด์

เมื่อเทียบกับอุจจาระปกติ อุจจาระในกลุ่ม B, C, D และ E แห้ง ขนาดเล็ก และแข็ง และไม่มีการปั่นป่วนก่อนการรักษา

หลังจากที่ทุกหนูถูกฉีดด้วย loperamide (การรักษาด้วยยาจะบรรเทาอาการของร่างกายและ 3 (b))

น้ำหนักไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญในทุกกลุ่มทดลอง แม้ว่ากลุ่ม E จะมีน้ำหนักตัวที่ต่ำกว่ากลุ่มทดลองอื่นๆ เล็กน้อย (รูปที่ 2(a)) นอกจากนี้ หนูแรท SD ที่มีอาการท้องผูกกินอาหารน้อยกว่ากลุ่ม A ( ) อย่างมีนัยสำคัญ ในขณะที่ความแตกต่างระหว่างกลุ่ม B, C, D และ E (รูปที่ 2(b)) ไม่มีนัยสำคัญ ปริมาณการใช้น้ำยังไม่เปลี่ยนแปลงระหว่างกลุ่ม A และกลุ่ม B นอกจากนี้ ยังไม่พบการใช้น้ำเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญใน

ว่าการรักษาด้วย AEHC ไม่ได้ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงใดๆ. แม้ว่าอัตราการถ่ายเทของลำไส้ในกลุ่ม C, D และสูงกว่าอย่างมีนัยสำคัญกลุ่ม C, D และ E มีอัตราส่วนต่ำกว่ากลุ่ม A อย่างมีนัยสำคัญ

3.4. ผลของ AEHC ต่ออัตราการส่งผ่านลำไส้เล็กในหนูที่มีอาการท้องผูกที่เกิดจากโลเพอราไมด์

ดังที่เห็นจากรูปที่ 4 ไม่พบความแตกต่างในช่วงเวลาการขนส่งของลำไส้เล็กที่เส้นฐานในห้ากลุ่ม กลุ่ม B มีอัตราส่วนการขับเคลื่อนของผงถ่านที่ต่ำกว่าอย่างเห็นได้ชัดเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม A (𝑃 < 0.01)="" แม้ว่าอัตราการเคลื่อนย้ายของลำไส้ในกลุ่ม="" c,="" d="" และ="" e="" จะสูงกว่าในกลุ่ม="" b="" อย่างมีนัยสำคัญ="" (𝑃="">< 0.05)="" กลุ่ม="" c,="" d="" และ="" e="" มีอัตราส่วนที่ต่ำกว่ากลุ่ม="" a="">

3.5. การแทรกแซงด้วย AEHC ช่วยเพิ่มฟังก์ชันดัชนีการเคลื่อนไหวของลำไส้ใหญ่บางส่วน

ระดับ GAS และ MTL ในซีรัมที่ได้จากหนูกลุ่ม B ลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่ม A (𝑃 < {{0}}.01,="" resp.)="" ในทางกลับกัน="" กลุ่ม="" c,="" d="" และ="" e="" (𝑃="">< 0.05,="" resp.)="" มีระดับ="" gas="" และ="" mtl="" ที่สูงกว่าอย่างมีประสิทธิภาพจากการบริหารสารสกัด="" herba="" cistanche="" เมื่อเทียบกับกลุ่ม="" b="" .="" ค่า="" ss="" ในหนูกลุ่ม="" b="" สูงกว่าเมื่อเทียบกับกลุ่ม="" a="" (𝑃="">< 0.01);="" กลุ่ม="" c,="" d="" และ="" e="" มีระดับ="" ss="" อ่อนลง="" (𝑃="">< 0.05)="" (รูปที่="" 5)="" เมื่อเปรียบเทียบกับหนูที่ท้องผูก="" ระดับ="" cgrp="" ในหนูปกติกลุ่ม="" a="" (𝑃="">< 0.01)="" และในกลุ่มที่บริหารโดย="" herba="" cistanche="" c,="" d="" และ="" e="" มีค่าคงที่="" (𝑃=""> 0.05)

3.6. การเปลี่ยนแปลงทางเนื้อเยื่อวิทยาของโคลอน

เพื่อตรวจสอบว่าการรักษาด้วย AEHC สามารถกระตุ้นการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างของเนื้อเยื่อลำไส้ใหญ่ได้หรือไม่ วัดความยาวของวิลลัส ความหนาของชั้นใต้ดิน และความหนาของกล้ามเนื้อในทวิภาคตามขวางของหนูในห้ากลุ่มหลังการย้อมสี H&E เมื่อเปรียบเทียบพยาธิสภาพของลำไส้ใหญ่ของหนูในทุกกลุ่ม เยื่อบุลำไส้จะเรียบและมีหลอดเลือดแดงขนาดเล็กและหลอดเลือดดำขนาดเล็กใน submucosa และเซลล์ไขมันจำนวนมาก นอกจากนี้ ชั้นกล้ามเนื้อยังประกอบด้วยเซลล์กล้ามเนื้อเรียบ และชั้นใต้ผิวหนังก็สมบูรณ์ ความยาวเฉลี่ยของวิลลัสสั้นกว่าในกลุ่ม A อย่างมีนัยสำคัญ (𝑃 < {0}}.01)="" อย่างไรก็ตาม="" ความยาวเฉลี่ยของวิลลัสในกลุ่ม="" c="" เพิ่มขึ้นมากกว่า="" 30="" เปอร์เซ็นต์อย่างมากเมื่อเทียบกับกลุ่ม="" b="" (รูปที่="" 6="" และ="" 7)="" (𝑃="">< 0.05)="" ในขณะเดียวกัน="" ความยาวเฉลี่ยของวิลลัสจะเพิ่มขึ้นอย่างมากในกลุ่ม="" d="" และ="" e="" เมื่อเทียบกับกลุ่ม="" b="" (รูปที่="" 6(a)="" และ="" 6(b))="" (𝑃="">< 0.01)="" นอกจากนี้="" การเปลี่ยนแปลงความหนาของกล้ามเนื้อมีความคล้ายคลึงกับความยาวของวิลลัสมาก="" ในกลุ่ม="" b="">

มีความบางลงอย่างมากเมื่อเทียบกับกลุ่ม A อย่างไรก็ตาม ระดับความหนาของกล้ามเนื้อในกลุ่ม C, D และ E เพิ่มขึ้น 30–35 เปอร์เซ็นต์เมื่อเทียบกับกลุ่ม B (รูปที่ 6 และ 7) โดยรวมแล้ว การค้นพบนี้บ่งชี้ว่า AEHC อาจเพิ่มความยาวของวิลลัสและความหนาของกล้ามเนื้อในลำไส้ใหญ่ของหนูที่ท้องผูก

3.7. การบริหารการรักษา AHEC เพิ่มการแสดงออกของโปรตีนของ c-Kit และ SCF

ตรวจพบอิมมูโนรีแอคทีฟในลำไส้ใหญ่เนื่องจากเซลล์ในทุกกลุ่มทดสอบเป็นบวกสำหรับ c-kit ดังแสดงในรูปที่ 8 ระดับการแสดงออกของ c-kit ในกลุ่ม B ต่ำกว่าระดับในกลุ่ม A (𝑃 < 0.05)="" ระดับการแสดงออกของ="" c-kit="" ในกลุ่ม="" c="" นั้นสูงกว่าในกลุ่ม="" b="" (𝑃="">< 0.{{20}}5)="" ในขณะที่="" c-kit="" มีมากขึ้นในกลุ่ม="" d="" และ="" e="" มากกว่าในกลุ่ม="" b="" (𝑃="">< 0.05)="" หลังจากการรักษาด้วยสารสกัด="" herba="" cistanche="" ในน้ำที่มีความเข้มข้นต่างกันเป็นเวลา="" 2="" สัปดาห์="" ระดับการแสดงออกของโปรตีนของ="" c-kit="" และ="" scf="" จะถูกตรวจพบโดย="" western="" blot="" analysis="" การวิเคราะห์="" western="" blot="" แสดงให้เห็นว่าระดับการแสดงออกของ="" c-kit="" และ="" scf="" ลดลงอย่างน่าทึ่งหลังการรักษาด้วยโลเพอราไมด์ในโคลอนของหนูแรท="" (รูปที่="" 9)="" รูปที่="" 8(e)="" แสดงให้เห็นว่า="" c-kit="" ที่ลดลงในหนูที่ท้องผูกเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ="" 31.2="" เปอร์เซ็นต์หลังจากรักษาหนูด้วย="" aehc="" 500="" ไมโครกรัม/มิลลิลิตร="" (𝑃="">< 0.05)="" นอกจากนี้="" การบำบัดด้วย="" aehc="" 100="" และ="" 200="" กรัม/มล.="" เพิ่มระดับการแสดงออกของโปรตีน="" c-kit="" การแสดงออกของโปรตีน="" scf="" เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ="" 20.1,="" 24.7="" และ="" 8.4="" เปอร์เซ็นต์ที่การบำบัดด้วย="" aehc="" 100,="" 200="" และ="" 500="" ไมโครกรัม/มิลลิลิตร="" ตามลำดับ="" (รูปที่="" 9)="" 3.8.="" ผลของ="" aehc="" ต่อการแสดงออกของ="" mrna="" ของ="" c-kit,="" scf="" และ="" pi3k="" เพื่อตรวจสอบว่าการรักษาด้วย="" aehc="" สามารถส่งผลต่อการควบคุมของ="" mrna="" ที่เกี่ยวข้องกับการหดตัวของกล้ามเนื้อหรือไม่="" การเปลี่ยนแปลงในระดับการแสดงออกของ="" c-kit,="" scf="" และ="" pi3k="" ถูกสังเกตพบในทวิภาคของหนูท้องผูกโดยใช้ไพรเมอร์จำเพาะ="" ผลการศึกษาพบว่าระดับ="" mrna="" ของ="" c-kit="" ในกลุ่ม="" b="" ต่ำกว่าอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่ม="" a="" (𝑃="">< 0.05)="" ในขณะที่ระดับ="" mrna="" ในกลุ่ม="" c,="" d="" และ="" e="" สูงกว่ากลุ่ม="" b="" (𝑃="">< 0.05)="" (รูปที่="" 10).="" นอกจากนี้เรายังตรวจสอบ="">

การแสดงออกของ SCF ลิแกนด์ของคิท การแสดงออก mRNA ของ SCF ในหนูแรทกลุ่ม B ต่ำกว่าในกลุ่ม A อย่างมีนัยสำคัญ ในขณะที่การบำบัดด้วย AEHC ในกลุ่ม C, D และ E เพิ่มการแสดงออกของ SCF mRNA (รูปที่ 10) นอกจากนี้เรายังตรวจสอบผลกระทบของ AEHC ต่อการแสดงออกของยีน PI3K ในวันที่ 14 ระดับการแสดงออกของยีน PI3K สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม C, D และ E มากกว่าในกลุ่ม B (𝑃 <>