ภาพรวมขององค์ประกอบของ Phlorotannins ใน Fucales ตอนที่ 3

Glycoside ของ cistanche ยังสามารถเพิ่มกิจกรรมของ SOD ในเนื้อเยื่อหัวใจและตับ และลดปริมาณของ lipofuscin และ MDA ในแต่ละเนื้อเยื่อได้อย่างมีประสิทธิภาพ กำจัดอนุมูลออกซิเจนที่ทำปฏิกิริยาต่างๆ (OH-, H₂O₂ ฯลฯ) ได้อย่างมีประสิทธิภาพ และป้องกันความเสียหายของ DNA ที่เกิดขึ้น โดย OH-อนุมูล Cistanche phenylethanoid glycosides มีความสามารถในการกำจัดอนุมูลอิสระที่แข็งแกร่ง ความสามารถในการลดที่สูงกว่าวิตามินซี ปรับปรุงกิจกรรมของ SOD ในการระงับสเปิร์ม ลดปริมาณของ MDA และมีผลป้องกันบางอย่างต่อการทำงานของเยื่อหุ้มสเปิร์ม โพลีแซคคาไรด์ของ Cistanche สามารถเสริมการทำงานของ SOD และ GSH-Px ในเม็ดเลือดแดงและเนื้อเยื่อปอดของหนูทดลองที่ชราภาพซึ่งเกิดจาก D-galactose รวมทั้งลดปริมาณ MDA และคอลลาเจนในปอดและพลาสมา และเพิ่มเนื้อหาของอีลาสติน ส่งผลดีต่อ DPPH, ยืดเวลาการขาดออกซิเจนในหนูชรา, ปรับปรุงกิจกรรมของ SOD ในซีรั่ม, และชะลอการเสื่อมทางสรีรวิทยาของปอดในหนูชราทดลองที่มีความเสื่อมทางสัณฐานวิทยาของเซลล์, การทดลองแสดงให้เห็นว่า Cistanche มีความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระที่ดี และมีศักยภาพในการเป็นยาป้องกันและรักษาโรคชราทางผิวหนัง ในขณะเดียวกัน echinacoside ใน Cistanche มีความสามารถที่สำคัญในการกำจัดอนุมูลอิสระ DPPH และสามารถกำจัดสายพันธุ์ออกซิเจนที่เกิดปฏิกิริยาและป้องกันการเสื่อมสลายของคอลลาเจนที่เกิดจากอนุมูลอิสระ และยังมีผลการซ่อมแซมที่ดีต่อความเสียหายของแอนไอออนจากอนุมูลอิสระของไทมีน

คลิกที่ ฉันจะซื้อ Cistanche ได้ที่ไหน

【สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

สำหรับ Eckols เนื่องจากการมีอยู่ของโครงสร้างไดเบนโซไดออกซิน สิ่งเหล่านี้สามารถแยกความแตกต่างจากกลุ่มอื่นๆ โดยพิจารณาจากไอออนโมเลกุลที่แยกตัวออก ซึ่งโดยปกติจะมีค่าต่ำกว่า PT อื่นๆ ที่มี DP เท่ากัน 2 Da สำหรับแต่ละโมทีฟของไดเบนโซไดออกซินที่มีอยู่ในโครงสร้าง (รูปที่ 5D). ตัวอย่างเช่น eckol แสดง [MH]− ที่ m/z 371 ในขณะที่ trifocal, triphlorethol และ fucophlorethol ล้วนแสดง [MH]− ที่ m/z 373 ในทางกลับกัน เรียกซึ่งมีโครงสร้างไดเบนโซไดออกซินสองตัวในกระดูกสันหลัง แสดง [MH]− ที่ m/z 741 ในขณะที่ hexamer สมมูลของพวกมันแสดง [MH]− ที่ m/z 745 เช่นเดียวกับคาร์มาลอล ซึ่งเป็นห้องโถงที่มีโครงสร้างไดเบนโซไดออกซินเป็นหลัก [120] ในที่สุด PTs บางชนิดที่มีวงแหวนฟิวแรน เช่น ฟูโคฟูโรเอคคอลและฟลอโรฟูโรเอคคอล มีลักษณะเฉพาะของไอออนโมเลกุลที่มีโปรตอนที่ถูกทำให้ขาดน้ำ เช่น [MH]− ที่ต่ำกว่า 18 ดาต้า เมื่อเปรียบเทียบกับสารที่เทียบเท่าที่ไม่มีฟิวแรนซึ่งมี DP เท่ากัน (เช่น โครงสร้างฟูโคฟูโรเอคคอลเทียบกับฟลอโรเอคคอลต่างกันเพียงการมี/ไม่มีวงแหวนฟูแรน และแสดง [MH]− ที่ m/z 496 และ 478 ตามลำดับ) [120] ตารางที่ 3 แสดงข้อมูล MS ที่รวบรวมจากการศึกษาต่างๆ ที่เน้นการระบุ PTs ใน Fucales

แม้ว่าพื้นฐานเหล่านี้อาจมีประโยชน์ในการระบุโครงสร้างที่เหมาะสมของ PT ที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำ แต่ปัญหาใหญ่เกิดขึ้นเมื่อพูดถึงโอลิโกเมอร์และโพลิเมอร์ที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูง เนื่องจากการไอโซเมอไรเซชันของพวกมันเพิ่มขึ้นแบบทวีคูณ และความเป็นไปได้หลายประการสำหรับการจัดเรียงและการผสมของฟลอโรกลูซินอลแทบจะเป็นไปไม่ได้เลย อธิบายโดย MS หรือ MS/MS อย่างไรก็ตาม ในกรณีเช่นนี้ MS ยังสามารถให้ข้อมูลที่มีค่าเกี่ยวกับ DP ของสารประกอบที่มีอยู่ในส่วนผสมของฟลอโรแทนนิน ในเรื่องนี้ เลเซอร์ช่วยเมทริกซ์/เวลาไอออไนเซชันของเที่ยวบิน MS (MALDI-TOF-MS) ถือเป็นแนวทางที่เหมาะสมกว่าสำหรับการวิเคราะห์โอลิโกเมอร์ขนาดใหญ่ เนื่องจากสามารถตรวจจับโมเลกุลที่มี m/z เหนือขีดจำกัดบนของ ESI- นางสาว. เทคนิคนี้ถูกนำมาใช้เพื่อศึกษาส่วนของ phlorotannin ของ Sargassum wightii ทำให้สามารถยืนยันการมีอยู่ของ phloroglucinol ไดเมอร์ ไตรเมอร์ และเฮกซาเมอร์ [125] MS ความละเอียดสูง (HRMS) เป็นวิธีทางเลือกที่สามารถใช้สำหรับการวิเคราะห์ PT ที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูง โดยอาศัยไอออนที่มีประจุหลายตัว และการเปลี่ยนแปลงในรูปแบบไอโซโทปบวก 1 13C กล่าวอีกนัยหนึ่ง เมื่อสารประกอบมีประจุสองเท่าหรือสามเท่า จะแสดงรูปแบบไอโซโทป 1 13C บวกที่มีความแตกต่าง m/z เป็น 0.5 และ 0.33 ตามลำดับ . ตามหลักการนี้ Steevensz และคณะ [78] สามารถวิเคราะห์องค์ประกอบ PT ของ P. canaliculata, F. spiralis, F. vesiculosus และ A. nodosum ในรูปของ DP ตรวจจับสารประกอบที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูงถึง 6,000 Da ซึ่งมิฉะนั้นจะเกินช่วงมวล ของ ESI-MS.

โดยรวมแล้ว แม้ว่าแมสสเปกโตรเมทรีอาจเป็นเทคนิคที่ชาญฉลาดสำหรับการวิเคราะห์เชิงคุณภาพของ PTs และมีพลังมากพอที่จะบรรลุคุณลักษณะที่ดีพอสมควรของสารประกอบที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำ แต่ก็ไม่สามารถดึงรายละเอียดที่เพียงพอเกี่ยวกับประเภทและตำแหน่งการเชื่อมโยงของสารประกอบรูปแบบไอโซเมอริก ด้วย DPS ที่สูงขึ้น ดังนั้น เมื่อเป้าหมายคือการอธิบายคุณสมบัติของโครงสร้าง PTs อย่างครบถ้วน NMR จึงเป็นวิธีเดียวที่มีประสิทธิภาพที่สามารถให้ความละเอียดเพียงพอสำหรับการวิเคราะห์เชิงลึกดังกล่าว

5.2.3. เอ็นเอ็มอาร์

NMR สเปกโทรสโกปีประกอบด้วยการวิเคราะห์โดยตรงและไม่ทำลาย ซึ่งจะมีประโยชน์ไม่เพียงแต่ในการเข้าถึงเนื้อหาของ PTs เท่านั้น แต่ยังเพื่ออธิบายคุณลักษณะเชิงโครงสร้างของ PTs อย่างครบถ้วน เมื่อต้องการข้อมูลเชิงปริมาณ สัญญาณเรโซแนนซ์ 1H NMR ของสารประกอบฟีนอลทั้งหมดที่มีอยู่ในสารสกัดจากสาหร่ายจะถูกรวมเข้าด้วยกันและเปรียบเทียบกับมาตรฐานภายในที่เหมาะสม สารประกอบเหล่านี้ต้องมีความเสถียร เฉื่อยทางเคมี มีอยู่ในรูปแบบที่บริสุทธิ์สูง และละลายได้อย่างสมบูรณ์ในตัวทำละลายที่เจือจางเช่นเดียวกับตัวอย่าง โดยรวมแล้ว ผู้เขียนได้ใช้วิธีการและวิธีการที่แตกต่างกันในการหาปริมาณสารประกอบฟีนอลและ/หรือ PTs ผ่านเทคนิคนี้ รวมถึงตัวอย่างที่ได้จาก Fucale

ใน 2009, Parys และคณะ เป็นครั้งแรกที่อธิบายถึงการใช้เชิงปริมาณ 1H NMR (NMR) เพื่อกำหนดความแปรปรวนของปริมาณคลอโรแทนนินของ A. nodosum ในระหว่างปี ในการทำงานของพวกเขา กรด trimesic ถูกใช้เป็นมาตรฐานภายใน (2.0 mg ของกรด trimesic ใน 0.8 mL ของ deuterated methanol และ 0.2 mL ของ deuterium oxide) และกราฟการปรับเทียบถูกสร้างขึ้นโดยใช้ phloroglucinol แม้จะตรวจพบเนื้อหา PTs ที่สูงขึ้นโดย qHNMR เมื่อเปรียบเทียบกับวิธีที่ได้รับโดยใช้วิธี FC colorimetric ทั้งสองวิธีตามแนวโน้มการเปลี่ยนแปลงตามฤดูกาลเดียวกัน [126] สิ่งสำคัญคือต้องสังเกตว่า ตรงกันข้ามกับการทดสอบสีซึ่งไม่เฉพาะเจาะจงสำหรับ PTs หรือแม้แต่สำหรับสารประกอบฟีนอลิก การรวมสัญญาณเรโซแนนซ์ของสเปกตรัม 1H NMR ใน qHNMR จะถูกเปรียบเทียบกับมาตรฐานภายใน เนื่องจากความแตกต่างที่สำคัญเหล่านี้ จึงไม่สามารถทำการเปรียบเทียบโดยตรงระหว่างทั้งสองวิธีได้อย่างแม่นยำ [127,128]

Stiger-Pouvreau และเพื่อนร่วมงานใช้วิธีการที่แตกต่างกันโดยใช้การปั่นมุมด้วยมายากลที่มีความละเอียดสูง (HR-MAS) เพื่อหาปริมาณ PTs ในสาหร่ายสีน้ำตาล Cystoseira tamariscifolia ในการศึกษานี้ ใช้ NMR สถานะของแข็งเพื่อตรวจหา phloroglucinol (มอนอเมอร์) ในร่างกาย และใช้ 1H qNMR เพื่อประเมินปริมาณโมโนเมอร์ (โดยใช้ trimethylsilylpropionate –d4 (TSP) เป็นมาตรฐานภายใน) phloroglucinol singlet ที่ δ 6.02 ppm ซึ่งรวมอยู่ในโปรตอน 3 ตัว ยืนยันว่ามีอยู่ในตัวอย่าง ความถูกต้องของวิธีนี้ได้รับการประเมินโดยใช้สารละลายมาตรฐานของ phloroglucinol และตรวจสอบผลลัพธ์โดยเปรียบเทียบกับการทดสอบ FC ในท้ายที่สุด ผู้เขียนอ้างว่าวิธีการที่นำเสนอประกอบด้วยวิธีการที่เป็นนวัตกรรมและรวดเร็วในการหาปริมาณ phloroglucinol ซึ่งสามารถนำไปใช้กับสาหร่ายทุกชนิด ข้อจำกัดเพียงอย่างเดียวของวิธี qNMR อยู่ที่ความจำเป็นของสัญญาณสเปกตรัมอย่างน้อยหนึ่งสัญญาณ (singlet, doublet, ฯลฯ.) ที่ต้องระบุอย่างชัดเจนว่ามาจากสารประกอบเพียงหนึ่งเดียว [129]

ก่อนหน้านี้ในปี 2010 ผู้เขียนคนเดียวกันได้แสดงให้เห็นถึงศักยภาพของ 1H HR-MAS NMR ในร่างกายที่เกี่ยวข้องกับ Mass Spectrometry (LC/ESI–MSn) ในการสังเกตโปรไฟล์ทางเคมีทั่วโลกของสกุล Cystoseira 5 สายพันธุ์ที่มีอยู่ตามชายฝั่ง ของบริตตานีในฝรั่งเศส: C. baccata, C. foeniculacea, C. humilis, C. nodi caulis และ C. tamariscifolia [130] เดอะ

วัตถุประสงค์หลักของงานคือการระบุตัวอย่าง Cystoseira และหารือเกี่ยวกับอนุกรมวิธานของพวกมัน ผลลัพธ์ที่ได้พิสูจน์ให้เห็นถึงประสิทธิภาพของวิธีการที่นำเสนอเพื่อแยกความแตกต่างของ C. nodicaulis และ C. tamariscifolia ส่วนใหญ่เนื่องจากสเปกตรัมของพวกมันแสดงหลักฐานการมีอยู่ของสัญญาณที่มีลักษณะเฉพาะ ทำให้สามารถระบุตัวตนได้อย่างชัดเจน ในกรณีของ singlet ที่ 2.91 ppm สำหรับครั้งแรกและครั้งหลัง ค่าสูงสุดที่แม่นยำที่ 6.00 ppm แสดงลักษณะของสปีชีส์และบ่งชี้ถึงการเกิด phlorotannin อย่างง่ายที่เป็นไปได้ โดยทั่วไปแล้ว Foeniculacea และ C. humilis มีลักษณะเฉพาะโดยการเกิดสองเท่าของความเข้มเท่ากันที่ 7.90 และ 7.36 ppm อย่างไรก็ตาม การเลือกปฏิบัติอย่างสมบูรณ์ระหว่างสัญญาณทั้งสองยังคงเป็นไปไม่ได้ ความคล้ายคลึงกันของสัญญาณ NMR ในร่างกาย ควบคู่กับความหลากหลายทางเคมีที่จำเพาะเจาะจงเล็กน้อยของทั้งสองสปีชีส์ พิสูจน์ผลลัพธ์เหล่านี้ ประการสุดท้าย ในกรณีของ C. baccata แม้จะแสดงความหลากหลายทางเคมีที่สำคัญที่สุด แต่สัญญาณหลายอย่างก็อนุญาตให้มีการเลือกปฏิบัติอย่างต่อเนื่องจากสายพันธุ์อื่น

ในปี 2020 Walsh และผู้ร่วมงาน [131] ได้สาธิตศักยภาพในการต้านจุลชีพของสารสกัด phlorotannin บริสุทธิ์ 2 ชนิดจาก A. nodosum และ F. serratus สาหร่ายทะเลสีน้ำตาล 2 ชนิดที่ขึ้นน้ำลง ในงานดังกล่าว การวิเคราะห์ 1H และ 13C NMR ไม่เพียงแต่ทำให้สามารถประเมินเชิงปริมาณและคุณภาพของสารประกอบฟีนอลทั้งหมด แต่ยังสามารถเข้าถึงความแตกต่างในโปรไฟล์การเชื่อมโยงระหว่างสารสกัดฟีนอลบริสุทธิ์ของทั้งสองสายพันธุ์ สำหรับการทดสอบ FC พบว่าระดับของสารประกอบฟีนอลทั้งหมดใน A. nodosum สูงกว่าใน F. serratus อย่างมีนัยสำคัญ และผลลัพธ์ได้รับการตรวจสอบความถูกต้องโดยการทดสอบ FC ยิ่งไปกว่านั้น ผลสำเร็จโดยใช้ทั้งการทดสอบ qNMR และ FC แสดงให้เห็นถึงความแปรผันระหว่างตัวอย่างที่เก็บในแต่ละเดือนและระหว่างทั้งสองวิธี

เพื่ออธิบายโครงสร้าง PTs การวิเคราะห์ 1H และ 13C NMR ถูกนำมาใช้ครั้งแรกโดย Glombitza และกลุ่มของเขาในช่วงทศวรรษที่ 70 เมื่อพวกเขาระบุ phloroglucinol ในสาหร่ายสีน้ำตาลสายพันธุ์ต่างๆ ความซับซ้อนของสเปกตรัมที่เกี่ยวข้องกับอนุพันธ์เหล่านี้อนุญาตให้ระบุโครงสร้างโพลีฟีนอลที่เล็กกว่าเท่านั้น ดังนั้น ในปี พ.ศ. 2517 จึงเป็นครั้งแรกที่มีการอธิบายโครงสร้างทางเคมีของไบฟูฮาลอลและไดฟลอเรทอลจากสารสกัดเอธานอล 80 เปอร์เซ็นต์ของ C. tamariscifolia [132]

อย่างไรก็ตาม ตั้งแต่นั้นเป็นต้นมา โครงสร้าง PT มากกว่าหนึ่งร้อยรายการได้รับการอธิบายโดยใช้ NMR [133] สำหรับสิ่งนั้น สารสกัดมักจะถูกส่งไปยังขั้นตอนก่อนการบำบัดด้วยเฮกเซนหรือปิโตรเลียมอีเทอร์เพื่อตกตะกอน PTs ขนาดใหญ่ นอกจากนี้ เพื่อป้องกันความไม่เสถียรของ PTs ช่วยอำนวยความสะดวกในการวิเคราะห์ NMR และเปลี่ยนขั้วของสารประกอบเหล่านี้ สารเหล่านี้มักถูกอะซิติเลตโดยใช้อะซิติกแอนไฮไดรด์และไพริดีน ดังนั้น จึงช่วยให้การทำให้บริสุทธิ์ด้วยโครมาโตกราฟีแบบซิลิกาในเฟสปกติ [119] ในสเปกตรัม NMR 1H ของสารประกอบประเภทนี้ ต้องสังเกตสองด้าน: การสั่นพ้องของโปรตอนอะโรมาติกปรากฏระหว่าง δ 60 ถึง 7.5 ppm และหมู่อะเซทิลปรากฏเป็น singlet peak ระหว่าง δ 2 และ 3 ppm . นี่เป็นเครื่องมือที่มีประโยชน์ในการสร้างจำนวนของกลุ่มไฮดรอกซีอิสระในฟีนอลที่ไม่มีการป้องกันดั้งเดิม ระบบวงแหวนอะโรมาติกสองประเภทที่อาจเกิดขึ้นแสดงในรูปที่ 6 สภาพแวดล้อมทางเคมีที่โดดเด่นของโปรตอนทั้งสองประเภท (Ha และ Hb) เปลี่ยนแปลงหลายหลากของสัญญาณที่สังเกตได้ใน 1H NMR ตลอดจนการรวมเข้าด้วยกัน

ร่วมกับ 1H NMR spectroscopy, 13C และ HSQC และ HMBC NMR spectra ได้ถูกนำมาใช้เพื่อชี้แจงโครงสร้างของ PTs บริสุทธิ์ รวมถึงใน Fucales แนวทางสหสัมพันธ์เฮเทอโรนิวเคลียร์-NMR-สเปกโทรสโกปีมีประโยชน์ในการระบุคลาสของ PT จากเมทริกซ์ตัวอย่าง (มอนอเมอร์ เชื้อเพลิง คลอโรเอทิล ฟูโคฟลูโรเอทอล ฯลฯ) [134] สัญญาณลักษณะเฉพาะของ 13C-NMR ของ PTs สรุปไว้ในตารางที่ 4 ปรากฏที่การเปลี่ยนแปลงทางเคมีลักษณะเฉพาะ คาร์บอนเรโซแนนซ์ของคาร์บอนประเภทต่างๆ ที่แตกต่างกันพร้อมกับความเข้มของพวกมันทำให้สามารถแสดงที่มาของสัญญาณบางอย่างไปยังคลาสเฉพาะของ PTs โดยเฉพาะอย่างยิ่ง phlorethols e halls .

ในปี 1997 Glombitza และคณะ [135] อธิบายการแยกและลักษณะของ 33 PTs จากสาหร่ายสีน้ำตาล Cystophora torulosa มีการระบุคลาส PT ที่แตกต่างกัน ได้แก่ ฟลอเรทอลและฮอล และฟูโคฟลอเรทอลและไฮดรอกซีฟูโคฟลอเรทอล (ตัวอย่างในรูปที่ 7) ยิ่งไปกว่านั้น ในส่วนหลัง ไฮดรอกซีฟูโคฟลอเรทอลใหม่เจ็ดกลุ่มที่มีหมู่ไฮดรอกซิลเพิ่มเติมถูกระบุและแสดงคุณลักษณะ (NMR และ MS) ตามที่อ้างถึงก่อนหน้านี้ เพื่อป้องกันการเกิดออกซิเดชันและเพิ่ม lipophilicity ของอนุพันธ์ PT ที่แยกได้ ผู้เขียนอธิบายการแยกของพวกมันว่าเป็น acetates [82]

Koch และคณะ ยังได้สาธิตการประยุกต์ใช้ 1H และ 13C NMR เพื่อกำหนดลักษณะของฟูฮาโลอะซีเตตที่ใหญ่ขึ้นใน B. bifurcate [136] Cérantola และคณะใช้เทคนิคสเปกโทรสโกปี HSQC และ HMBC (2D) NMR เพื่อแสดงการมีอยู่ของโครงสร้างฟูโคลและฟูโคฟลอเรทอลในสารสกัดฟูคัส สไปราลิส [137] วิธีการเดียวกันนี้ใช้กับ Halidrys siliquosa ซึ่งมีมากในบริตตานี การใช้ 1D และ 2D NMR และการวิเคราะห์ MS ทำให้สามารถระบุอนุพันธ์ฟีนอลสี่ชนิด ได้แก่ ไตรฟูฮาลอลและเตตระฟูฮาลอล และเป็นครั้งแรกที่ไดฟลอเรทอลและไตรฟลอเรทอล [125] ตารางที่ 5 สรุปการศึกษาที่กล่าวถึงข้างต้นซึ่ง 1H และ 13C NMR มีส่วนในการอธิบายโครงสร้างของ PTs ที่สกัดจากสาหร่ายที่เป็นของ Fucales

【สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】