การบริโภคคอลลาเจนเปปไทด์กระดูกไก่ในช่องปาก การต่อต้านริ้วรอยของผิวหนังในหนู โดยควบคุมการย่อยสลายและการสังเคราะห์คอลลาเจน ยับยั้งการอักเสบและกระตุ้นไลโซโซม ส่วนที่ 1

โปรดติดต่อoscar.xiao@wecistanche.comสำหรับข้อมูลเพิ่มเติม

เชิงนามธรรม:ผลของอาหารที่มีต่อความชราของผิวได้กลายเป็นหัวข้อวิจัยที่น่าสนใจ การศึกษาก่อนหน้านี้ส่วนใหญ่มุ่งเน้นไปที่ผลประโยชน์ของคอลลาเจนเปปไทด์ที่ได้จากสิ่งมีชีวิตในทะเลต่อผิวหนังที่เสื่อมสภาพเมื่อรับประทานทางปาก ในขณะที่ผลประโยชน์ของคอลลาเจนเปปไทด์ที่ได้จากสัตว์ปีกที่มีต่อผิวหนังที่เสื่อมสภาพนั้นมักไม่ค่อยรายงาน ในการศึกษานี้ คอลลาเจนเปปไทด์ถูกเตรียมจากกระดูกไก่โดยการไฮโดรไลซิสด้วยเอนไซม์ และศึกษาผลและกลไกการออกฤทธิ์ของคอลลาเจนเปปไทด์ที่รับประทานในการบรรเทาความชราของผิวหนังที่เกิดจากรังสียูวีร่วมกับดี-กาแลคโตส ผลการวิจัยพบว่าคอลลาเจนจากกระดูกไก่มีลักษณะทั่วไปของคอลลาเจน และคอลลาเจนเปปไทด์จากกระดูกไก่ (CPs) ส่วนใหญ่เป็นเปปไทด์โมเลกุลขนาดเล็กที่มีน้ำหนักโมเลกุลเท่ากับ<3000 da.="">cistanche การยืดอายุการทดลองในร่างกายแสดงให้เห็นว่า CPs มีผลในการบรรเทาผิวที่เสื่อมสภาพอย่างมีนัยสำคัญ โดยบ่งชี้จากการเปลี่ยนแปลงองค์ประกอบและโครงสร้างของผิวที่แก่ก่อนวัย การปรับปรุงระดับสารต้านอนุมูลอิสระของผิวหนัง และการยับยั้งการอักเสบ ผลการบรรเทามีความสัมพันธ์เชิงบวกกับปริมาณของ CPs การตรวจสอบเพิ่มเติมพบว่า CPs ลดระดับการเกิดออกซิเดชันของผิวหนังก่อน ยับยั้งการแสดงออกของปัจจัยการถอดรหัสที่สำคัญ AP-1 (c-Jun และ c-Fos) จากนั้นเปิดใช้งานเส้นทางการส่งสัญญาณ TGF- /Smad เพื่อส่งเสริมการสังเคราะห์คอลลาเจน ยับยั้งการแสดงออกของ MMP-1/3 เพื่อยับยั้งการเสื่อมสภาพของคอลลาเจน และยับยั้งการอักเสบของผิวหนังเพื่อบรรเทาความชราของผิวในหนูทดลอง นอกจากนี้ ทรานสคริปโทมของผิวหนังพบว่าไลโซโซมที่กระตุ้นหลังจากให้ CPs ในช่องปากอาจเป็นหนทางที่สำคัญสำหรับซีพีในการต่อต้านริ้วรอยแห่งวัย และควรค่าแก่การวิจัยเพิ่มเติม ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าซีพีอาจถูกใช้เป็นส่วนประกอบทางโภชนาการที่ต่อต้านวัย

กรุณาคลิกที่นี่เพื่อทราบข้อมูลเพิ่มเติม

คำสำคัญ:คอลลาเจนเปปไทด์; ต่อต้านริ้วรอย; ทรานสคริปโทมผิวหนัง; การสังเคราะห์คอลลาเจน ไลโซโซม

1. บทนำ

ยุคแห่งสุขภาพ การรับประทานอาหารเพื่อสุขภาพอย่างถูกต้องแม่นยำ การกำหนดบทบาทของโภชนาการในการชะลอวัยของผิว และการตัดสินใจว่าจะกินอะไรเพื่อรักษาผิวที่อ่อนเยาว์และมีสุขภาพดีนั้นเป็นปัญหาที่ยาก ผิวหนังเป็นอวัยวะที่ใหญ่ที่สุดของร่างกาย ประกอบด้วยชั้นหนังกำพร้า หนังแท้ และชั้นใต้ผิวหนัง ทำหน้าที่เป็นเกราะปกป้องร่างกายจากปัจจัยภายนอกและยังมีบทบาทด้านสุขภาพและความงามอีกด้วย[1] ริ้วรอยแห่งวัยของผิวเป็นกระบวนการที่ซับซ้อน ซึ่งแบ่งออกเป็นการแก่ก่อนวัยตามลำดับเวลาและการเสื่อมสภาพของผิวด้วยภาพถ่าย โดยได้รับผลกระทบจากปัจจัยทั้งภายในและภายนอก ลักษณะสำคัญ ได้แก่ การสะสมของความเสียหายของโมเลกุลขนาดใหญ่ในเซลล์ การลดลงของการทำงานของเซลล์ต้นกำเนิด (ส่งเสริมการต่ออายุเนื้อเยื่อ) และการสูญเสียความสมบูรณ์ทางกายภาพของผิวหนังทีละน้อย [2] กลไกระดับโมเลกุลหลักที่ทำให้ผิวหนังแก่ก่อนวัย ได้แก่ ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน เทโลเมียร์สั้นลง ความเสียหายของดีเอ็นเอ การกลายพันธุ์ทางพันธุกรรม การควบคุมไมโครอาร์เอ็นเอ การสะสมผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้ายด้วยไกลเคชัน และริ้วรอยแห่งวัย [3] Photo-aging คือการเกิด hyperplasia ของผิวหนัง การแห้ง และการเสื่อมสภาพของเมทริกซ์นอกเซลล์ที่เกิดจากรังสีอัลตราไวโอเลตซิสแทนเช่สาเหตุหลักของการเกิด photo-aging คือ reactive oxygen species (ROS) ที่เกิดจากรังสีอัลตราไวโอเลตที่เป็นสื่อกลางในการแสดงออกของ matrix metalloproteinases (MMPs) และ type-I pro-collagen ผ่านเส้นทางสัญญาณ เช่น mitogen-activated protein kinase (MAPK) ทางเดินจึงนำไปสู่การเสื่อมโทรมของ extracellular matrix (ECM) ในผิวหนังและการตายของเซลล์ไฟโบรบลาสต์ [4] ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา การรักษาสุขภาพผิวและการชะลอวัยได้กลายเป็นที่นิยม และการค้นหาส่วนผสมจากธรรมชาติ เช่น เปปไทด์ที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพและโพลีฟีนอลที่มีสารต้านอนุมูลอิสระและฟังก์ชันต่อต้านริ้วรอยได้กลายเป็นจุดสนใจในการวิจัย [5]

อย่างไรก็ตาม คอลลาเจนมีน้ำหนักโมเลกุลขนาดใหญ่และยากต่อการดูดซึมและนำไปใช้โดยตรง ในขณะที่คอลลาเจนเปปไทด์โมเลกุลขนาดเล็กหลังจากการไฮโดรไลซิสของคอลลาเจนจะมีฤทธิ์ทางชีวภาพที่แข็งแกร่งกว่าและมีอัตราการดูดซึมสูง [6] ในขณะเดียวกัน การประยุกต์ใช้คอลลาเจนในวงกว้างในอาหาร ยา วิศวกรรมเนื้อเยื่อ เครื่องสำอาง และสาขาอื่นๆ ทำให้คอลลาเจนเปปไทด์ที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำลง ประสิทธิภาพการดูดซึมที่สูงขึ้น และกิจกรรมทางชีวภาพที่แข็งแกร่งขึ้นเป็นที่ชื่นชอบในการวิจัยทางการแพทย์และอาหารที่ใช้งานได้จริง[{{1 }}]. คอลลาเจนเปปไทด์มีขนาดเล็ก ประกอบด้วย 2-20 กรดอะมิโนตกค้างที่ได้รับหลังจากการไฮโดรไลซิสของคอลลาเจน พวกมันถูกใช้เป็นอาหารเสริมสำหรับการรักษาความชราของผิวเนื่องจากการทำงานของสารต้านการอักเสบและสารต้านอนุมูลอิสระที่อาจเกิดขึ้น และการควบคุมภูมิคุ้มกัน และผลของการต้านอนุมูลอิสระและการเพิ่มจำนวนบนไฟโบรบลาสต์ของผิวหนัง [10]

Cistanche สามารถต่อต้านริ้วรอย

หลังจากการบริหารช่องปาก คอลลาเจนเปปไทด์จะถูกดูดซึมในรูปของเปปไทด์ขนาดเล็กและถูกส่งไปยังเลือดอย่างรวดเร็ว และสุดท้ายไปยังไต ผิวหนัง ข้อต่อ และเนื้อเยื่ออื่นๆ เพื่อจัดเก็บและใช้งาน หลังจากผ่านไป 14 วัน ระดับกัมมันตภาพรังสียังคงสูงในผิวหนังของหนูที่ได้รับการดูแลด้วยคอลลาเจนเปปไทด์ที่ติดฉลาก C14- คอลลาเจนเปปไทด์สามารถดูดซึมและนำไปใช้โดยร่างกายได้เกือบสมบูรณ์ ในขณะที่อัตราการดูดซึมและการใช้คอลลาเจนเพียง 50-60 เปอร์เซ็นต์ [6,11-13] ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา คอลลาเจนไฮโดรไลเสตจากหนังปลา เกล็ดปลา กระดูกวัว หนังวัว และหนังหมู ได้รับรายงานอย่างกว้างขวางว่ามีผลดีต่อการบรรเทาความชราของผิวหนัง และได้รับความสนใจอย่างมากจากนักวิจัย ตัวอย่างเช่น คอลลาเจนเปปไทด์ที่แยกได้จากหนังปลาคาร์พสีเงินส่งเสริมการสังเคราะห์โปรคอลลาเจนและยับยั้งการแสดงออกของโปรตีน AP-1, MMP-1 และ MMP-3 โดยการเปิดใช้งานเส้นทาง TGF- /Smad เพื่อป้องกัน การเสื่อมสภาพของคอลลาเจนและซ่อมแซมเซลล์ผิวที่ถูกถ่ายภาพ [14]. การบริหารช่องปากของคอลลาเจนเปปไทด์จากวัวสามารถปรับปรุงการผ่อนคลายของผิว เพิ่มปริมาณคอลลาเจนและการทำงานของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระ ซ่อมแซมเส้นใยคอลลาเจน และทำให้อัตราส่วนคอลลาเจนของผิวหนังเป็นปกติในหนูที่มีอายุมากขึ้น [15] อย่างไรก็ตาม คอลลาเจนเปปไทด์จากแหล่งต่างๆ มีผลต่างกัน ปริมาณและโครงสร้างของเปปไทด์ที่มีฤทธิ์สูงในเลือดหลังการให้คอลลาเจนเปปไทด์ในช่องปากขึ้นอยู่กับแหล่งที่มาของคอลลาเจน[10] ผลการป้องกันของคอลลาเจนเปปไทด์ที่สกัดจากผิวหนังของไก่ต่อการบาดเจ็บของไฟโบรบลาสต์ที่เกิดจากรังสี UVA นั้นเหนือกว่าคอลลาเจนเปปไทด์ที่สกัดจากผิวหนังหมู วัว หรือปลานิล และผลของมันก็เทียบเท่ากับไตรเปปไทด์ที่ได้จากคอลลาเจน (Gly-Pro -Hyp)[16]. ความเชื่อทางศาสนาและความกังวลเรื่องโรค (เช่น โรควัวบ้า) ได้ชักนำผู้คนให้ค่อยๆ เปลี่ยนทิศทางของการพัฒนาคอลลาเจนและผลิตภัณฑ์จากสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมบนบกเป็นสัตว์ปีกและสิ่งมีชีวิตในทะเล [17] เนื่องจากเป็นผลพลอยได้หลักของการแปรรูปสัตว์ปีก กระดูกไก่เป็นแหล่งผลิตภัณฑ์คอลลาเจนที่มีแนวโน้มสูง ไม่เพียงแต่ช่วยลดการสูญเสียทรัพยากรและมลภาวะต่อสิ่งแวดล้อมเท่านั้น แต่ยังช่วยให้การนำผลพลอยได้ไปใช้อย่างมีประสิทธิภาพอีกด้วย ดังนั้นในการศึกษานี้ เราใช้เปปไทด์คอลลาเจนจากกระดูกไก่เป็นวัตถุดิบ โดยหนูนู้ดรับการรักษาด้วย D-galactose และ UV เพื่อกระตุ้นให้เกิดริ้วรอยของผิว เพื่อเป็นแบบจำลองในการประเมินผลของการให้คอลลาเจนเปปไทด์ในช่องปากต่อการบรรเทาความชราของผิวใน หนูและกำหนดกลไกที่เกี่ยวข้อง

2. วัสดุและวิธีการ

2.1. วัสดุ เคมีภัณฑ์ และสัตว์

ฟาร์มไก่ของมหาวิทยาลัยเกษตรกรรมยูนนาน (คุนหมิง ประเทศจีน) ได้จัดเตรียมไก่ที่ใช้แล้วซึ่งถูกแยก ตากแห้ง และบดเพื่อให้ได้กระดูกไก่ป่น ซื้อชุด Su-peroxide dismutase (SOD), catalase (CAT) และ glutathione peroxidase (GSH-PX) จาก Soleibao Biotechnology Co., Ltd. (ปักกิ่ง ประเทศจีน) Hydroxyproline (HYP), interleukin-1 (IL-1 ), matrix metalloproteinase-1/3 (MMP-1/3), type I pro-collagen และกรดไฮยาลูโรนิก ( ชุดตรวจอิมมูโนแอสเซย์ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ HA (ELISA) ถูกซื้อจากสถาบัน Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (หนานจิง ประเทศจีน) หนูที่ไม่มีขน BALB/C เพศเมียที่แข็งแรง (18± 2 ก. อายุหกสัปดาห์) ถูกซื้อจาก Nanjing Junke Bioengineering Corporation, Ltd. (หนานจิง ประเทศจีน) ด้วยหมายเลขใบอนุญาต: SCXK(SU)2016-0010 Pepsin และ papain ถูกซื้อจาก Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd. (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) และสารเคมีอื่นๆ เป็นเกรดวิเคราะห์ หนูทั้งหมดได้รับการจัดการตามข้อบังคับของห้องปฏิบัติการดูแลสัตว์ในมณฑลยูนนานและได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ของมหาวิทยาลัยเกษตรยูนนาน (รหัสการอนุมัติ: YAUACUC01)

2.2. การเตรียมคอลลาเจนและองค์ประกอบของกรดอะมิโน

การสกัดและองค์ประกอบกรดอะมิโนของคอลลาเจนจากกระดูกไก่เป็นไปตามวิธีการที่บรรยายโดย Lieut al [18] มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ผงกระดูกไก่กวนและแช่ใน 0.05 M NaOH,10 เปอร์เซ็นต์ n-เฮกเซนและ 0.25 สารละลาย MEDTA (pH 7.5) ที่ อัตราส่วน 1/10(m/o) ในแต่ละขั้นตอน ตัวอย่างจะได้รับการบำบัดเป็นเวลา 36 ชั่วโมง และสารละลายแช่ถูกเปลี่ยนทุกๆ 6 ชั่วโมงเพื่อให้ผงกระดูกพองตัวและขจัดโปรตีน ไขมัน และแร่ธาตุที่ไม่ใช่คอลลาเจนออกจากผงกระดูก ตัวอย่างถูกล้างด้วยน้ำบริสุทธิ์เพื่อให้เป็นกลางหลังจากแต่ละขั้นตอน กากกระดูกไก่ที่ผ่านการบำบัดแล้วผสมกับกรดอะซิติกน้ำแข็ง 0.5 โมลาร์ที่มีเปปซิน 0.1 เปอร์เซ็นต์ (w/v) ที่อัตราส่วนของแข็งต่อของเหลว 1:10 (wo/v) และคนอย่างต่อเนื่องและสกัดที่ 4 องศาสำหรับ 48 ชม. จากนั้นกรอง จากนั้นกรองและหมุนเหวี่ยงที่ 15000×g เป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 องศาขนาดองคชาต cistancheส่วนลอยเหนือตะกอนถูกปรับเป็น 7.5-7.8 ด้วยสารละลาย NaOH และเติม NaCl ไปที่ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 1.5 โมลาร์ หลังจากที่ส่วนผสมถูกเก็บให้ไม่ถูกรบกวนเป็นเวลา 12 ชั่วโมงที่ 4ซ เพื่อทำให้เป็นเกลือ ตะกอนคอลลาเจนถูกปั่นเหวี่ยง ที่อุณหภูมิ 15,000×g เป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 องศา จากนั้นละลายด้วยกรดอะซิติก 0.5 โมลาร์ ฟอกในน้ำบริสุทธิ์ แช่แข็ง และผลิตภัณฑ์สำเร็จรูปคือคอลลาเจนจากกระดูกไก่

องค์ประกอบกรดอะมิโนของคอลลาเจนจากกระดูกไก่ถูกกำหนดโดยเครื่องวิเคราะห์กรดอะมิโนอัตโนมัติ Sykam S433D (มิวนิก ประเทศเยอรมนี) ตัวอย่างคอลลาเจนจำนวนหนึ่งที่จะทดสอบถูกนำไปในหลอดที่ปิดสนิท เติมด้วย 10mL6 M HCl และไฮโดรไลซ์ที่ 110 องศาเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ไฮโดรไลเสตถูกทำให้เข้มข้นโดยการเป่าด้วยไนโตรเจนและละลายอีกครั้งในบัฟเฟอร์กรดซิตริก 20 มล. หลังจากการกรองแบบไมโครด้วยเมมเบรนพรุนขนาด 0.22 ไมโครเมตร ไฮโดรไลเสต 20 ไมโครลิตรถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์สเปกตรัมของกรดอะมิโน ปริมาณกรดอะมิโนในตัวอย่างแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์

2.3. การเตรียมและการกระจายน้ำหนักโมเลกุลของคอลลาเจนเปปไทด์ (CPs)

จากผลของกระบวนการปรับให้เหมาะสมก่อนหน้านี้ของเรา CPs ถูกเตรียมโดยใช้ปาเปนที่อัตราส่วนของเอนไซม์ต่อสารตั้งต้นที่ 1:40(อัตราส่วนมวล) หลังจากปรับ pH เป็น 7 และเอนไซม์ไฮโดรไลซิสที่ 63 องศาเป็นเวลา 5 ชั่วโมง เอนไซม์จะหยุดทำงานในอ่างน้ำเดือดเป็นเวลา 15 นาที เอนไซม์ไฮโดรไลเสตถูกขจัดเกลือและไลโอฟิไลซ์ ละลายอีกครั้งในสารละลายกรดฟอร์มิก 0.1 เปอร์เซ็นต์ และปั่นเหวี่ยงเพื่อให้ได้ส่วนลอยเหนือตะกอน AQ Exactive HF Orbitrap High-Resolution Mass Spectrometer-OE-HF (Thermo Fisher, Waltham, MA, USA) ที่ติดตั้งอิเล็กโตรสเปรย์ไอออไนซ์ (ESI) ใช้ในการวิเคราะห์คอลลาเจนไฮโดรไลเสตในโหมดการสแกนแบบเต็มของ 350-1800 m/z และดึงผลลัพธ์และวิเคราะห์โดยใช้ Proteome Discoverer

2.1 ซอฟต์แวร์

2.4.การทดสอบสัตว์

BALB/หนูที่ไม่มีเก้าอี้ตัวเมีย (n {{0}}) ถูกเก็บไว้ในห้องภายใต้สภาวะควบคุมของอุณหภูมิ (24±1 องศา ) ความชื้น (60± 5 เปอร์เซ็นต์ ) และ 12 h รอบกลางวันและกลางคืนเป็นเวลาหนึ่งสัปดาห์ พวกเขาได้รับการเข้าถึงอาหารและน้ำโดยอิสระ หลังจากปรับตัวได้หนึ่งสัปดาห์ หนูถูกสุ่มแบ่งออกเป็นห้ากลุ่มต่อไปนี้ (n =11 ต่อกลุ่ม):(i) กลุ่มปกติ (N): UV unexposed; การบริหารช่องปากของ 0.4 มล. น้ำเกลือทุกวัน (ii). กลุ่มแบบจำลอง(M):รังสี UVexposed บวก D-กาแลคโตส (0.2 มล.); การบริหารช่องปากของน้ำเกลือ 0.4 มล. ทุกวัน (ผม). กลุ่มคอลลาเจนเปปไทด์ขนาดต่ำ (LCPs):UVexposed plus D-galactose(0.2mL);ทางปาก

การบริหารให้ CPs 0.4 มล. (ขนาดยา:200 มก. กก.-1 น้ำหนักตัว) ทุกวัน (iv). กลุ่มคอลลาเจนเปปไทด์ขนาดปานกลาง (MCPs): รังสียูวีที่สัมผัสบวกกับ D-galactose; ทางปาก

การบริหารให้ CPs 0.4 มล. (ขนาดยา:500 มก.:กก.-1 น้ำหนักตัว) ทุกวัน

(v). กลุ่มคอลลาเจนเปปไทด์ปริมาณสูง (HCPs): รังสียูวีที่สัมผัสบวกกับ D-galactose; การให้ CPs 0.4 มล. (ขนาดยา: 1000 มก.·กก.-1 ของน้ำหนักตัว) ทุกวัน

การบำบัด D-galactose ดำเนินการโดยการฉีดใต้ผิวหนังของ 0.2 มล. ของ 10 เปอร์เซ็นต์ของสารละลาย D-galactose ที่ด้านหลังคอของหนูเมาส์(ขนาดยา: 1.0g/ กก-1น้ำหนักตัว) ทุกวัน ฉายรังสี UV ด้วยหลอด UVA-340 40W (แผง O, คลีฟแลนด์, สหรัฐอเมริกา, ความยาวคลื่นสูงสุด: 340 นาโนเมตร) ระยะห่างระหว่างหลอดไฟกับด้านหลังของหนูคือ 30 ซม. (230 ม. J/ cm-) และการฉายรังสีกินเวลา 30 นาทีทุกวันเป็นเวลาเจ็ดสัปดาห์(49 วัน) ความเข้มของรังสีวัดโดยเครื่องวัดรังสี UVA365- (Xinbao Keyi Electronic Technology Co., Ltd., ซีอาน, ประเทศจีน) หนึ่งชั่วโมงหลังจากการรักษาด้วย D-galactose และ UV หนูได้รับ CPs 0.4 มล. ทางปากทุกวัน หลังจากการฉายรังสีครั้งสุดท้าย หนูทดลองได้รับการดมยาสลบ ชั่งน้ำหนัก และเนื้อเยื่อถูกสุ่มตัวอย่างเพื่อการวิเคราะห์ในภายหลัง

2.5.ความชื้นของผิวหนัง ดัชนีอวัยวะภายใน และการเพิ่มน้ำหนักตัว

ความชื้นของผิวหนังถูกกำหนดโดย ISO 1442 และคำนวณดัชนีอวัยวะภายในโดยใช้สมการต่อไปนี้: ดัชนีอวัยวะภายใน(กรัม/กก.)=น้ำหนักอวัยวะภายใน/น้ำหนักตัว

2.6.เนื้อหาความเครียด HA และ HYP ของผิวหนัง

ตัวอย่างผิวหนังถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันด้วยปริมาณน้ำเกลือปกติ (w/w) ถึงเก้าเท่าในอ่างน้ำแข็งด้วยเครื่องทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน (TGrinder OSE-Y30, Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd., ปักกิ่ง, จีน) แล้วปั่นแยกที่ 2000 ×g และ 4 องศา เป็นเวลา 10 นาที กิจกรรมของซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเตส (SOD), คาตาเลส (CAT), กลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส (GSH-PX) และเนื้อหาของกรดไฮยาลูโรนิก (HA) และไฮดรอกซีโพรลีน (HYP) ใน supernatant ที่เก็บรวบรวมถูกกำหนดตามวิธีการที่อธิบายไว้ในคำแนะนำ สอดคล้องกับชุดที่เกี่ยวข้อง

2.7. เนื้อเยื่อวิทยาผิวหนัง

ตัวอย่างผิวหนังของหนูเมาส์ถูกตรึงในสารละลายพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 24 ชั่วโมง อบแห้ง ฝังในพาราฟิน และหั่นเป็นชิ้น ส่วนของผิวหนังถูกย้อมด้วย hematoxylin และ eosin (HE) และสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสงไปข้างหน้า ECLIPSE CI-E (Nikon, Japan) ประเมินความหนาของผิวหนังชั้นหนังกำพร้าและหนังแท้โดยใช้ซอฟต์แวร์ Halcon 130.1.1 (MVTec มิวนิก เยอรมนี)

2.8.Skin Transcriptome Sequencing

2.8.1. การแยก RNA การสร้างห้องสมุด และการจัดลำดับการถอดเสียง

Total RNA ถูกสกัดจากผิวหนังของหนูโดยใช้ RNeasy Mini Kit (Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd., Beijing, China) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ความบริสุทธิ์และความเข้มข้นของ RNA ได้รับการตรวจสอบโดยใช้ kaiaoK5500Spectrophoto-meter (Kaiao, Beijing, China); ความสมบูรณ์ของ RNA ได้รับการประเมินโดยใช้ RNA Nano 6000 Assay Kit และระบบ Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) การวิเคราะห์ลำดับการถอดรหัสของแต่ละตัวอย่างดำเนินการโดย Biolinker Technology Company Limited (คุนหมิง ประเทศจีน)ผงซิสแทนเช่โดยสังเขป การจัดกลุ่มของตัวอย่างที่มีรหัสดัชนีถูกดำเนินการบนระบบการสร้างคลัสเตอร์ cBot โดยใช้ HiSeq PE Cluster Kit v4-cBot-HS (Illumina) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต หลังจากการสร้างคลัสเตอร์ ไลบรารีจะถูกจัดลำดับบนแพลตฟอร์ม Illumina และสร้างการอ่านแบบคู่ขนาน 150 bp

2.8.2. การวิเคราะห์ชีวสารสนเทศของข้อมูลการจัดลำดับ RNA

Gene Ontology(GO) และ Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) การวิเคราะห์การเสริมสมรรถนะของยีนที่แสดงออกถึงความแตกต่าง (DEG) ดำเนินการโดยใช้แพ็คเกจตัววิเคราะห์คลัสเตอร์ภาษา R เมื่อค่า p น้อยกว่า 0.05 ไอเท็มและเส้นทางที่ GO และ KEGG เสริมประสิทธิภาพจะถือว่ามีนัยสำคัญ

2.8.3. ปฏิกิริยาลูกโซ่ Transcriptase-Polymerase ย้อนกลับ (qRT-PCR)

QRT-PCR ถูกดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [19]

2.9.Wester1 Blot

ตามวิธีการอธิบายโดย Park et al. [20] วิเคราะห์ Western blot (WB) เพื่อหาปริมาณการแสดงออกของโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับการเสื่อมสภาพของผิวหนังในหนูเมาส์ ความเข้มข้นของโปรตีนของไลเสตผิวหนังในแต่ละกลุ่มการรักษาถูกหาปริมาณโดยใช้ชุด BCA แยกจากกันโดย SDS-PAGE (เจลอะคริลาไมด์ 10 เปอร์เซ็นต์) ถ่ายโอนไปยังเมมเบรน PVDF บล็อกด้วยนมพร่องมันเนย 5 เปอร์เซ็นต์ และบ่มด้วยปริมาณที่เหมาะสมของหลัก แอนติบอดี (TGF-b1,c-Fos, c-Jun, Samd2/3 และ -actin) ที่ 4 องศาในชั่วข้ามคืน หลังจากล้างด้วย TBST ตัวอย่างจะถูกผสมกับแอนติบอดีทุติยภูมิและฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ChemiDoc XRS plus chemiluminescence gel imager (BioRAD, Hercules, CA, USA) ถูกใช้เพื่อตรวจหาโปรตีนจำเพาะ รูปภาพ ]ซอฟต์แวร์ถูกใช้เพื่อหาปริมาณการแสดงออกของโปรตีนเป้าหมายในแต่ละกลุ่มการรักษา และผลลัพธ์ถูกแทนด้วยค่าความหนาแน่นที่ถูกทำให้เป็นมาตรฐานของโปรตีน -แอคติน

2.10.ELISA

ระดับการแสดงออกของ MMP-1, MMP-3, โปรคอลลาเจนชนิดที่ 1 และ IL-1 ในน้ำไหลสำหรับการสลายผิวหนังถูกกำหนดหาโดยการทดสอบอิมมูโนที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ การทดสอบดำเนินการตามคำแนะนำที่ให้มาพร้อมกับชุดอุปกรณ์

2.11. การวิเคราะห์ทางสถิติ

ผลลัพธ์ทั้งหมดได้รับการวิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์ SPSS 21 (IBM Inc., Armonk, NY, USA) ผ่านการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) และการทดสอบหลายช่วงของ Duncan โดยตั้งค่าระดับนัยสำคัญเป็น p<0.05. originpro="" 2017="" (originlab,="" northampton,="" ma,="" usa)was="" used="" to="" plot="" the="" data.="" all="" data="" were="" expressed="" as="" the="" mean="" ±standard="" deviation="">

3. ผลลัพธ์และการอภิปราย

3.1.องค์ประกอบของกรดอะมิโนของคอลลาเจน

องค์ประกอบกรดอะมิโนของคอลลาเจนจากกระดูกไก่แสดงในตารางที่ 1 Gly เป็นกรดอะมิโนหลักในตัวอย่าง โดยคิดเป็นเกือบหนึ่งในสาม (27.86 เปอร์เซ็นต์) ของกรดอะมิโนทั้งหมด และ Hyp เป็น กรดอะมิโนพิเศษในคอลลาเจนคิดเป็นร้อยละ 9.83 ลักษณะสำคัญของโมเลกุลคอลลาเจนคือลำดับ Gly-XY ที่ทำซ้ำๆ และโครงสร้างสามเกลียวที่เป็นเอกลักษณ์ซึ่งประกอบด้วยสายโซ่ c สามสาย Gly คิดเป็นประมาณหนึ่งในสามของกรดอะมิโนทั้งหมด X และ Y มักเป็นโพรลีนและไฮดรอกซีโพรลีน หรืออาจเป็นสารตกค้างใดๆ [21] องค์ประกอบของกรดอะมิโนในกลุ่มตัวอย่างมีความคล้ายคลึงกับคอลลาเจนของกระดูกไก่ที่รายงานในการศึกษาก่อนหน้านี้และมีลักษณะเฉพาะของคอลลาเจน [22]

3.2. การกระจายน้ำหนักโมเลกุลของ CPs

Molecular weight distribution reflects the degree of collagen hydrolysis. The molecular weight of the CPs was mainly below 3000 Da(Figure 1), accounting for about 87.61%of all collagen hydrolysates, indicating that almost all of the CPs were small peptides. Many studies claim that collagen peptides with a lower molecular weight have better biological activity [23]. For example, Song et al. [24]. reported that lower molecular weight (200-1000 Da,65%)silver carp skin collagen peptides repaired UV-induced aging skin in mice more effectively than similar peptides with a higher molecular weight(>1,000 ดา,72 เปอร์เซ็นต์ ). อย่างไรก็ตาม บริษัท Gelita ของเยอรมันแสดงให้เห็นจากการศึกษาทางคลินิกหลายครั้งว่าผลของคอลลาเจนเปปไทด์นั้นส่วนใหญ่ถูกกำหนดโดยระดับการจับคู่กับคุณสมบัติของคอลลาเจนเปปไทด์หลังจากการย่อยสลายคอลลาเจนของมนุษย์ มากกว่าน้ำหนักโมเลกุลของคอลลาเจนเปปไทด์ พวกเขาพบว่าผลิตภัณฑ์ VERISOL⑧ ที่มีน้ำหนักโมเลกุลเฉลี่ย 2000 Da มีผลกระตุ้นมากที่สุดต่อไฟโบรบลาสต์ของผิวหนัง ในขณะที่ผลิตภัณฑ์ FortigelTM ที่มีน้ำหนักโมเลกุลเฉลี่ย 3000 Da มีผลพิเศษในการซ่อมแซมกระดูกอ่อน [25-27]

3.3. ผลของ CPs ในช่องปากต่อการบรรเทาความชราของผิวหนัง

3.3.1. น้ำหนักตัวและดัชนีอวัยวะ

ดัชนีน้ำหนักตัวและดัชนีอวัยวะมีความสำคัญและสะท้อนถึงสถานะสุขภาพของหนู น้ำหนักของหนูในแต่ละกลุ่มเพิ่มขึ้นตามปกติในช่วงทดสอบ (ตารางที่ 2) น้ำหนักที่เพิ่มขึ้นโดยเฉลี่ยของกลุ่ม M นั้นต่ำกว่ากลุ่ม N และกลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย CP นั้นสูงกว่ากลุ่ม M ซึ่งบ่งชี้ว่า CPs ไม่มีผลข้างเคียงกับหนู ในรายงานก่อนหน้านี้ ปริมาณของหนูที่ได้รับการรักษาด้วยคอลลาเจนเปปไทด์ส่วนใหญ่อยู่ระหว่าง 100-1000 มก./กก.bw·d และขนาดที่ปลอดภัยของเปปไทด์คอลลาเจนจากปลานิลอยู่ที่ 4.07 ก./กก.bw·d [{{6} }].ซิสแทนเช่ ซัลซ่าสกัด Similarly, the growth of skin-aged mice after gavage with tilapia scale collagen peptides (dose: 500 and 1000 mg/kg.bw·d)was also similar to our results [29]. The spleen plays an important role in humoral and cellular immunity, thus, the spleen index is often used to evaluate immune system function. The liver index was used to evaluate the toxicity of the tested sample. In these tests, the liver and spleen indices in the M group were lower than those in the N group, and both recovered after treatment with CPs, but there was no significant difference across the treatment groups(p>0.05) ผลลัพธ์มีความคล้ายคลึงกับการศึกษาก่อนหน้านี้ [30] ซึ่งบ่งชี้ว่า CPs ปลอดภัยและอาจช่วยเพิ่มภูมิคุ้มกันของหนูได้เล็กน้อย

3.3.2. องค์ประกอบผิว

การรักษาด้วย UV และ D-galactose (กลุ่ม M) ลดความชื้น HA และ Hyp ในผิวหนังลงอย่างมีนัยสำคัญ เมื่อเทียบกับกลุ่มที่ได้รับ ร้อยละ 13.36 ร้อยละ 24.08 และร้อยละ 15.83 ตามลำดับ (p<0.05)(table 2).the="" contents="" of="" moisture,="" ha,="" and="" hyp="" in="" the="" skin="" were="" significantly="" higher="" in="" mice="" after="" the="" oral="" administration="" of="" cps="" compared="" to="" the="" contents="" of="" those="" in="" the="" mice="" of="" the="" m="" group=""><0.05). among="" the="" dose="" groups,="" the="" contents="" of="" the="" three="" skin="" components="" were="" significantly="" different="" between="" the="" lcp="" and="" hcp="" groups="" and="" were="" dependent="" on="" the="" dose="" of="" intake="" of="" cps.="" the="" hcp="" group="" had="" even="" higher="" contents="" than="" the="" n="" group,="" and="" ha="" and="" hyp="" were="" significantly="" different="" between="" the="" two="" groups="" (p=""><>

การเปลี่ยนแปลงของความชื้นในผิวหนังทำให้เกิดริ้วรอยและความหย่อนคล้อยของผิวหนัง และได้รับผลกระทบจากส่วนประกอบของเมทริกซ์ เช่น คอลลาเจนของผิวหนังและ HA[31] ไฮดรอกซีโพรลีนเป็นกรดอะมิโนชนิดพิเศษที่เสถียร เข้มข้น และพิเศษในคอลลาเจน และเนื้อหาของมันสามารถสะท้อนเนื้อหาของคอลลาเจนในผิวหนังได้ทางอ้อม เช่นเดียวกับการเสื่อมสภาพของผิว นอกจากนี้ HA ซึ่งแสดงออกอย่างมากใน ECM ของผิวหนัง มีบทบาทสำคัญในการควบคุมสมดุลของน้ำในผิวหนัง แรงดันออสโมติก การกักเก็บความชื้น และความยืดหยุ่นในฐานะระบบกักเก็บน้ำและส่วนประกอบโครงสร้างของผิวหนัง [32] ในการศึกษานี้ ปริมาณความชื้น HYP และ HA ในผิวหนังเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญหลังการบริโภค CP ซึ่งอาจเกี่ยวข้องกับการส่งเสริมการสังเคราะห์คอลลาเจนและ HA โดย CPs นอกจากนี้ การเพิ่มขึ้นของ HYP และ HA ทำให้ความชื้นเพิ่มขึ้น

3.3.3. การเปลี่ยนแปลงทางเนื้อเยื่อผิวหนัง

การเปลี่ยนแปลงทางเนื้อเยื่อวิทยาในผิวหนังหลังของหนูหลังการรักษาอย่างต่อเนื่องเจ็ดสัปดาห์แสดงไว้ในรูปที่ 2 ผิวที่เสื่อมสภาพของกลุ่ม M แสดงให้เห็นลักษณะของผิวที่หยาบกร้าน ผิวหนังชั้นนอกหนาขึ้น ผิวหนังชั้นในที่บาง และเซลล์ที่กระจัดกระจาย เมื่อเปรียบเทียบกับผิวของกลุ่ม N อย่างไรก็ตาม สภาพผิวที่แก่ชราในหนูทดลองดีขึ้นหลังจากให้ CPs ทางปาก โดยคงไว้ซึ่งโครงสร้างที่ราบรื่น เป็นระเบียบ และสมบูรณ์คล้ายกับในหนูในกลุ่ม N ดังนั้น ผิวหนังชั้นหนังแท้จึงบางลงอย่างเห็นได้ชัด และชั้นหนังกำพร้าในกลุ่ม M นั้นหนากว่าในกลุ่ม N อย่างมีนัยสำคัญ (p<0.05). the="" change="" in="" skin="" dermis="" and="" epidermal="" thickness="" was="" significantly="" better="" after="" treatment="" with=""><0.05), and="" the="" effect="" was="" more="" obvious="" with="" the="" increase="" in="" the="" dose="" of="" cps="" (figure="" 2).="" the="" effect="" of="" oral="" cps="" on="" the="" histological="" structure="" of="" aging="" skin="" was="" similar="" to="" that="" reported="" previously[4,28,31].="" the="" increase="" in="" the="" thickness="" of="" the="" epidermis="" might="" be="" an="" adaptive="" change="" to="" protect="" the="" skin="" from="" external="" stimuli,="" loss="" of="" skin="" moisture,="" and="" uv="" damage,="" possibly="" due="" to="" the="" increase="" in="" uv-activated="" epidermal="" growth="" factor="" receptor="" (egfr)="" that="" induces="" keratinocyte="" proliferation="" and="" epidermal="" hyperplasia[4].="" however,="" the="" mechanism="" by="" which="" oral="" cps="" alleviate="" the="" increase="" in="" epidermal="" thickness="" remains="" unclear.="" the="" dermis="" imparts="" elasticity="" and="" strength="" to="" the="" skin,="" and="" the="" degradation="" of="" ecm="" and="" the="" reduction="" in="" the="" ability="" to="" repair="" fibroblasts="" are="" the="" main="" causes="" of="" dermal="" thinning="" in="" aging="" skin.="" dermal="" thickness="" increased="" after="" the="" treatment="" with="" cps,="" which="" might="" be="" due="" to="" the="" removal="" of="" ros="" from="" the="" skin="" and="" inhibition="" of="" the="" increase="" of="" mmps="" by="" cps.="" this,="" in="" turn,="" inhibited="" the="" degradation="" of="" skin="" collagen="" and="" elastin="" (figure="" 3),="" the="" entry="" of="" cps="" into="" the="" skin,="" and="" their="" participation="" in="" the="" synthesis="" of="" collagen="" and="" ha="" [6],="" which="" was="" confirmed="" by="" the="" increase="" in="" the="" content="" of="" hyp="" and="" ha="" in="" the="" skin="" (table="">

3.3.4.ระดับสารต้านอนุมูลอิสระและการอักเสบของผิวหนัง

การกำหนดกิจกรรมของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระเป็นวิธีที่ใช้กันมากที่สุดในการประเมินระดับสารต้านอนุมูลอิสระในร่างกาย [28] ดังแสดงในรูปที่ 3 กิจกรรมของเนื้อหา CAT, SOD, GSH-Px และ MDA ในกลุ่ม M ต่ำกว่ากลุ่ม N อย่างมีนัยสำคัญ (p<0.05). administering="" cps="" effectively="" inhibited="" the="" decrease="" of="" cat,="" sod,="" gsh-px="" activities,="" and="" the="" mda="" content="" in="" the="" skin="" of="" mice,="" compared="" to="" those="" in="" the="" mice="" skin="" of="" the="" m="" group,and="" was="" positively="" correlated="" with="" the="" dose="" of="" cps;="" there="" were="" significant="" differences="" among="" the="" different="" dose="" groups=""><0.05). when="" ros,="" accumulated="" by="" skin="" oxidative="" stress,="" exceed="" the="" antioxidant="" defense="" ability="" of="" the="" body,="" they="" destroy="" the="" ecm,="" which="" is="" the="" key="" cause="" of="" skin="" aging.="" ros="" can="" cause="" the="" oxidation="" of="" lipids="" and="" proteins="" in="" the="" skin,="" resulting="" in="" fibroblast="" degeneration="" and="" changes="" in="" the="" skin.="" ros="" activates="" the="" mapk="" signaling="" pathway="" and="" the="" ap-1="" protein="" to="" upregulate="" the="" expression="" of="" mmps="" and="" promote="" the="" degradation="" of="" matrix="" collagen="" [21].="" although="" the="" antioxidant="" enzymes="" and="" antioxidants="" in="" the="" body="" can="" remove="" ros="" to="" protect="" the="" skin="" from="" damage,="" when="" the="" content="" of="" rosexceeds="" the="" defense="" (antioxidant)="" ability="" of="" the="" body="" or="" the="" body's="" defense="" ability="" declines,="" it="" causes="" oxidative="" stress="" and="" skin="">

นอกจากนี้ การตอบสนองต่อการอักเสบของเซลล์ที่เกิดจาก ROS ยังก่อให้เกิดริ้วรอยของผิวอีกด้วย หลังการรักษาด้วยรังสี UV และ D-galactose (กลุ่ม M) ปริมาณ IL-1 ในผิวหนังของหนูเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับในกลุ่ม N (ภาพที่ 3D) ซึ่งบ่งชี้ว่าผิวหนังมีการตอบสนองต่อการอักเสบอย่างมีนัยสำคัญ (ป<0.05). the="" cps="" significantly="" reduced="" the="" content="" of="" il-1α="" in="" the="" skin="" in="" a="" dose-dependent="" manner,="" compared="" to="" that="" in="" the="" skin="" of="" mice="" in="" the="" m="" group.="" there="" was="" a="" significant="" difference="" between="" hcps="" and="" lcps=""><0.05), indicating="" that="" cps="" alleviated="" skin="" inflammation.="" the="" o2="" produced="" by="" ultraviolet="" irradiation="" stimulated="" the="" expression="" of="" mmp-1="" in="" dermal="" fibroblasts="" through="" the="" secretion="" of="" il-1α="" and="" il-6,="" thereby="" disrupting="" the="" ecm="" [33].="" therefore,="" this="" study="" suggested="" that="" cps="" significantly="" increased="" the="" activity="" of="" skin="" antioxidant="" enzymes="" and="" inhibited="" inflammatory="" responses,="" which="" might="" be="" important="" in="" delaying="" skin="" aging="" in="">

3.4.กลไกการออกฤทธิ์ของซีพีอาหารในการบรรเทาความชราของผิวหนัง

3.4.1.การวิเคราะห์และการตรวจสอบความถูกต้องของข้อมูล RNA-Seq

Analysis techniques, such as PCA, HCA, gene GO enrichment, and KEGG pathway enrichment were used to analyze the transcriptome data. Based on the PCA analysis (Figure 4A)and hierarchical clustering analysis (heat map)of 4303 differential genes with average channel strength greater than 100, the relative expression levels of total DEGs between the two treatment groups are shown to provide an overview of the changes in gene expression(Figure 4B).The M group and the HCP group were significantly separated, and the expression patterns of most DEGs in the M and HCP groups were opposite, indicating that there were significant differences between the mouse skin after HCP treatment and the M group(Figure 4A,B).Pairwise comparisons showed that after feeding HCPs, 4303 genes were significantly expressed in the mice's skin, including 1790 upregulated genes and 2513 downregulated genes(Foldchange>2,p<0.05)(figure 4c).among="" the="" six="" genes="" associated="" with="" skin="" aging="" quantified="" by="" qrt-pcr,="" five="" genes(including="" fos,="" jun,="" cxcl1,="" and="" egr1)were="" downregulated,="" and="" one="" gene="" was="" upregulated(figure="" 4d),="" which="" was="" consistent="" with="" the="" overall="" trend="" of="" transcriptomic="" data.="" the="" rna="" expression="" levels="" of="" fos,="" jun,="" and="" cxcll="" were="" significantly="" upregulated="" in="" damaged="" skin="" compared="" to="" that="" in="" intact="" skin="" [34],="" and="" inhibition="" of="" egr1="" expression="" alleviated="" skin="" inflammation="" [35].="" these="" results="" reflected="" the="" reliability="" of="" transcriptome="" sequencing="" data,="" and="" oral="" cps="" effectively="" alleviated="" skin="">

การวิเคราะห์การเสริมสมรรถนะและการวิเคราะห์การเพิ่มประสิทธิภาพของฐานข้อมูล KEGG ให้การสนับสนุนสำหรับการตรวจสอบการทำงานทางชีววิทยาของ DEG เพิ่มเติม การวิเคราะห์ GO แสดงให้เห็นว่า DEG ได้รับการเสริมสมรรถนะอย่างมีนัยสำคัญในกระบวนการทางชีววิทยา เช่น การจำลองดีเอ็นเอ การควบคุมการสร้างเม็ดเลือด การควบคุมกิจกรรมไฮโดรเลส และการผลิตไซโตไคน์ ในส่วนประกอบของเซลล์ ซึ่งรวมถึง lytic vacuole และ lysosome ที่ประกอบด้วยคอลลาเจนและยีนที่เกี่ยวข้องอื่นๆ ได้รับการเสริมสมรรถนะอย่างมีนัยสำคัญ ในแง่ของหน้าที่ระดับโมเลกุล การทำงานของรีเซพเตอร์-ลิแกนด์ แอคทิวิตี้ของไซโทไคน์ และยีนที่เกี่ยวข้องอื่นๆ ถูกทำให้สมบูรณ์ยิ่งขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 5) การวิเคราะห์การเสริมสมรรถนะ KEGG ของเส้นทางสัญญาณ 20 ทางแรกที่เปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญโดย DEG แสดงไว้ในรูปที่ 5 อันตรกิริยาระหว่างไซโตไคน์กับรีเซพเตอร์, ไลโซโซม, อันตรกิริยาของลิแกนด์-รีเซพเตอร์ที่ออกฤทธิ์ทางประสาท, วัฏจักรของเซลล์, โรคลูปัสระบบ และวิถี TGF (p<0.05)were closely="" related="" to="" aging,="" especially="" cytokine-receptor="" interactions,="" lysosomes,="" and="" tgf-βsignaling.="" an="" important="" feature="" of="" cellular="" senescence="" is="" the="" accumulation="" of="" damaged="" organelles="" and="" protein="" aggregates.="" lysosomes="" play="" an="" important="" role="" in="" degrading="" damaged="" organelles="" and="" protein="" aggregates="" in="" senescent="" cells="" [36].="" cytokine-receptor="" interaction="" is="" the="" main="" pathway="" of="" enrichment="" in="" the="" skin="" after="" being="" affected="" by="" various="" factors="" such="" as="" inflammation="" [37],="" sulfur="" mustard="" exposure="" [38],="" and="" terahertz="" pulse="" [39].="" cytokines,="" as="" small="" molecular="" proteins="" synthesized="" and="" secreted="" by="" various="" tissue="" cells,="" maintain="" skin="" homeostasis="" by="" controlling="" the="" balance="" between="" keratinocyte="" proliferation,="" differentiation,="" and="" apoptosis="" through="" complex="" interactions="" with="" growth="" factors="" [40].="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" is="" also="" important="" for="" regulating="" skin="" aging="" [14].="" gene="" functional="" enrichment="" analysis="" showed="" that="" tgf-β="" was="" highly="" expressed="" during="" cytokine-receptor="" interaction="" and="" in="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway.="" tgf-β="" is="" a="" major="" pro-fibrotic="" cytokine="" that="" regulates="" cell="" differentiation="" and="" proliferation="" while="" inducing="" extracellular="" matrix="" protein="" synthesis="" [41.="" therefore,="" we="" verified="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" and="" some="">

3.4.2. การตรวจสอบกลไกการออกฤทธิ์ของซีพีในการบรรเทาความชราของผิวหนัง

เพื่อตรวจสอบบทบาทของเส้นทางการส่งสัญญาณ TGF และปฏิกิริยาระหว่างตัวรับไซโตไคน์ในการบรรเทาความชราของผิวด้วย CPs ในช่องปาก การวิเคราะห์ WB ได้ดำเนินการเพื่อตรวจสอบปัจจัย TGF- และปัจจัยการถอดรหัส Smad2/3 ในเส้นทางการส่งสัญญาณ TGF- เช่นเดียวกับกุญแจ ปัจจัยการถอดรหัส AP-1(c-Fos และ c-Jun) ที่ควบคุมไซโตไคน์ เนื้อหาของ MMP-1, MMP-3, Type I pro-collagen และ I-1 ถูกกำหนดโดย ELISA ผลการวิเคราะห์ WB พบว่าการแสดงออกของ TGF- , Smad2 และ Smad3 ในกลุ่ม M นั้นต่ำกว่าในกลุ่ม N อย่างมีนัยสำคัญ (p<0.05). the="" expression="" levels="" of="" tgf-β="" and="" smad3="" were="" significantly="" higher="" in="" mice="" after="" the="" oral="" administration="" of="" cps="" compared="" to="" their="" levels="" in="" group="" m="" mice;="" additionally,="" smad2="" also="" increased="" significantly=""><0.05), except="" for="" in="" the="" lcps="" in="" a="" dose-dependent="" manner="" (figure="" 6).="" on="" the="" contrary,="" the="" expression="" of="" c-fos="" and="" c-jun="" in="" the="" m="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" in="" the="" n="" group.="" the="" expression="" of="" c-fos="" and="" c-jun="" in="" the="" cp="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" m="" group,="" except="" for="" the="" expression="" of="" c-jun="" in="" the="" lcp=""><0.05), and="" the="" change="" was="" dose-dependent.="" these="" results="" indicated="" that="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" was="" activated="" and="" ap-1="" was="" inhibited="" after="" feeding="">

โปรตีน AP-1 เป็นคอมเพล็กซ์ไดเมอร์ของโปรตีนในตระกูล Jun และ Fos และเป็นตัวควบคุมที่สำคัญของการอักเสบของผิวหนังและการแสดงออกของไซโตไคน์ โดยทั่วไป คอมเพล็กซ์ที่ประกอบด้วย c-Jun และ c-Fos จะแสดงกิจกรรมการถอดรหัสสูงสุดในผิวหนัง [41, A42] ROS ที่ผลิตขึ้นในเซลล์ผิวที่แก่ก่อนวัยจะกระตุ้นโปรตีน AP-1 ก่อนแล้วจึงควบคุมไซโตไคน์ที่ปลายน้ำ (เช่น IL-1 ), MMP และเส้นทางการส่งสัญญาณ TGF- ผ่านการถอดรหัสและการแปล จึงช่วยอำนวยความสะดวกในการแก่ของผิว [43 ,44]. ปฏิกิริยาการส่งสัญญาณ TGF- /Smad เป็นวิถีการสังเคราะห์คอลลาเจนแบบดั้งเดิม และปัจจัยการถอดรหัส Smad อยู่ที่แกนหลักของเส้นทางการส่งสัญญาณนี้ TGF- กระตุ้นฟอสโฟรีเลชั่นและกระตุ้นการทำงานของ Smad2 และ Smad3 ที่ปลายน้ำโดยการจับกับตัวรับ ซึ่งจะทำให้การสังเคราะห์ COLI เพิ่มขึ้น [14]

นอกจากนี้ ผลลัพธ์ของ ELISA ยังพบว่าเนื้อหาของ MMP-1, MMP-3 และ IL-l ในผิวหนังของกลุ่ม M นั้นสูงกว่าในกลุ่ม N และเนื้อหาของ Type อย่างมีนัยสำคัญ ฉันโปรคอลลาเจนลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.05). however,="" the="" contents="" of="" mmp-1,="" mmp-3,="" and="" il-1α(figure="" 3d)in="" the="" skin="" after="" oral="" administration="" of="" cps="" were="" significantly="" lower="" than="" those="" in="" the="" m="" group="" (p=""><0.05); type="" i="" pro-collagen="" increased="" significantly,="" and="" all="" the="" changes="" were="" dose-dependent="" with="" cps="" (figure="" 7).="" mmps="" are="" involved="" in="" the="" decomposition="" of="" skin="" collagen,="" il-1α="" shows="" the="" level="" of="" inflammation="" of="" the="" skin,="" and="" type="" i="" pro-collagen="" reflects="" the="" synthesis="" of="" skin="" collagen.="" accumulating="" evidence="" suggests="" that="" the="" role="" of="" the="" jun/ap-1="" protein="" pathway="" has="" also="" been="" proposed="" to="" regulate="" skin="" inflammation="" [40].="" the="" elisa="" results="" showed="" that="" the="" combined="" treatment="" of="" uv="" and="" d-galactose="" caused="" skin="" collagen="" degradation,="" decreased="" collagen="" synthesis,="" and="" caused="" skin="" inflammation,="" leading="" to="" skin="" aging.="" however,="" these="" changes="" were="" reversed="" after="" the="" oral="" administration="" of="">

นอกเหนือจากวิถีทางข้างต้น ในการศึกษานี้ ยีนที่ได้รับการควบคุมหลังจากการรักษาด้วยซีพีได้รับการเสริมสมรรถนะอย่างมีนัยสำคัญในวิถีทางไลโซโซม ซึ่งบ่งชี้ว่าการรักษาด้วยซีพีกระตุ้นไลโซโซมในผิวหนัง (รูปที่ 5) การศึกษาก่อนหน้านี้ระบุว่าไลโซโซมที่ถูกกระตุ้นจะทำให้เกิดการรวมตัวที่ชัดเจนและยกระดับการกระตุ้นเซลล์ต้นกำเนิดประสาทในวัยชราในช่วงอายุมากขึ้น [45] นอกจากนี้ หน้าที่ที่เพิ่มขึ้นของไลโซโซมยังช่วยลดความเข้มข้นของ ROS ภายในเซลล์เพื่อป้องกันการพักตัวของเซลล์ ในทำนองเดียวกัน การลดลงของฟังก์ชันไลโซโซมสามารถเพิ่มความเข้มข้นของ ROS ภายในเซลล์ที่ส่งเสริมการพักตัวของเซลล์ในที่สุด [46] แม้ว่าเราจะยังไม่ได้ตรวจสอบอย่างเป็นระบบในบทความนี้ ผลลัพธ์เหล่านี้และรายงานก่อนหน้านี้บ่งชี้ว่าการเปิดใช้งานฟังก์ชัน lysosomal อาจเป็นวิธีหลักสำหรับ CP ในการบรรเทาความชราของผิว และเราจะยังคงตั้งเป้าที่จะตรวจสอบต่อไป

ดังนั้น การศึกษานี้จึงแสดงให้เห็นว่า CPs ในอาหารสามารถบรรเทาความชราของผิวที่เกิดจากรังสี UV และ D-galactose ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา CPs บรรเทาความชราของผิวโดยลดระดับการเกิดออกซิเดชันของผิวหนัง ยับยั้งการแสดงออกของปัจจัยการถอดรหัสที่สำคัญ AP-1(c-Jun และ c-Fos) กระตุ้นเส้นทางการส่งสัญญาณ TGF- /Smad เพื่อส่งเสริมการสังเคราะห์คอลลาเจน ยับยั้งการแสดงออกของ MMP-1 และ MMP-3(ที่ยับยั้งการเสื่อมสภาพของคอลลาเจน) และยับยั้งการอักเสบของผิวหนังเพื่อบรรเทาความชราของผิว (รูปที่ 8) นอกจากนี้การค้นพบของเราในปัจจุบัน

4. บทสรุป

โดยสรุป การศึกษานี้ยืนยันว่าการเสริมอาหารของเปปไทด์คอลลาเจนจากกระดูกไก่สามารถบรรเทาความชราของผิวที่เกิดจากรังสีอัลตราไวโอเลตและ D-galactose ได้อย่างมีนัยสำคัญผ่านหลายเส้นทาง ซึ่งรวมถึงการส่งเสริมการสังเคราะห์โปรคอลลาเจน ยับยั้งการเสื่อมของคอลลาเจน ปรับปรุงระดับสารต้านอนุมูลอิสระของผิวหนัง และการยับยั้ง การอักเสบ; การบรรเทาขึ้นอยู่กับขนาดยากับ CPs การตรวจสอบอย่างละเอียดพบว่า CPs ลดระดับของการเกิดออกซิเดชันของผิวหนังก่อน ยับยั้งการแสดงออกของปัจจัยการถอดรหัสที่สำคัญ AP-1(c-Jun และ c-Fos) จากนั้นเปิดใช้งานเส้นทางการส่งสัญญาณ TGF- /Smad เพื่อส่งเสริม การสังเคราะห์คอลลาเจน ยับยั้งการแสดงออกของ MMP-1 และ MMP-3 เพื่อยับยั้งการเสื่อมสภาพของคอลลาเจน และยับยั้งการอักเสบของผิวหนังเพื่อบรรเทาความชราของผิวในหนูทดลอง นอกจากนี้ การกระตุ้นไลโซโซมอาจเป็นหนทางหลักสำหรับซีพีในการบรรเทาความชราของผิว ซึ่งควรค่าแก่การติดตามผลการวิจัยและตรวจสอบ ผลลัพธ์เหล่านี้เป็นพื้นฐานทางทฤษฎีสำหรับการใช้คอลลาเจนเปปไทด์เพื่อบรรเทาความชราของผิวหนังและขยายขอบเขตสำหรับการใช้ประโยชน์อย่างครอบคลุมของผลพลอยได้จากสัตว์ในอาหารเพื่อสุขภาพ

ผู้เขียน ผลงาน: CCออกแบบ วัด และเขียนต้นฉบับ; ZXand HT ออกแบบและแก้ไขต้นฉบับ YLให้แนวทางระเบียบวิธี; CGand YWตรวจสอบต้นฉบับ ผู้เขียนทุกคนได้อ่านและตกลงที่จะตีพิมพ์ต้นฉบับแล้ว

บทความนี้คัดมาจาก Nutrients 2022, 14, 1622 https://doi.org/10.3390/nu14081622 https://www.mdpi.com/journal/nutrients