N-(4-เมทอกซีฟีนิล) กลไกการยับยั้งเมลาโนเจเนซิสที่เกิดจากคาเฟอีน

พื้นหลัง:

อนุพันธ์ของคาเฟอีนแสดงฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระและแอนติไทโรซิเนส มีการศึกษากิจกรรมและกลไกของ N-(4-เมทอกซีฟีนิล) คาเฟอีน (K36E) ต่อการสร้างเมลาโนเจเนซิส

วิธีการ:

เซลล์ B16F0 ถูกบำบัดด้วยความเข้มข้นต่างๆ ของ K36E; ศึกษาปริมาณเมลานินและการส่งสัญญาณที่เกี่ยวข้อง การทดสอบการซับแบบตะวันตกถูกนำมาใช้เพื่อกำหนดการแสดงออกของโปรตีนและทำการตรวจด้วยสเปกโตรโฟโตเมทรีเพื่อระบุกิจกรรมของไทโรซิเนสและปริมาณเมลานิน

ผลลัพธ์:

ผลลัพธ์ของเราระบุว่า K36E ลดปริมาณเมลานินที่กระตุ้นการสร้างฮอร์โมนเมลาโนไซต์ ( -MSH) และกิจกรรมไทโรซิเนสในเซลล์ B16F0 นอกจากนี้ K36E ยังยับยั้งการแสดงออกของโปรตีนที่จับกับองค์ประกอบที่ตอบสนองของฟอสโฟ-ไซคลิกอะดีโนซีนอะดีโนซีนโมโนฟอสเฟต (cAMP) แฟกเตอร์การถอดรหัสที่เกี่ยวข้องกับไมโครพาธาลเมีย (MITF) ไทโรซิเนส และโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับไทโรซิเนส-1 (TRP{{14} }). K36E เปิดใช้งานฟอสโฟรีเลชั่นของโปรตีนไคเนส B (AKT) และไกลโคเจนซินเทสไคเนส 3 เบต้า (GSK3) ซึ่งนำไปสู่การยับยั้งกิจกรรมการถอดรหัส MITF K36E ลดทอน - ทางเดินของแคมป์ที่เหนี่ยวนำโดย MSH ซึ่งมีส่วนทำให้เกิดรอยดำ

ในขณะเดียวกัน ในการวิจัย เรายังพบการประยุกต์ใช้ใหม่ของ glycosides ทั้งหมดของ Cistanche Deserticola หรือสารสกัดที่มี phenylethanoid glycosides ของ Cistanche Deserticola และสังเกตผลการยับยั้งของ glycosides ทั้งหมดของ Cistanche Deserticola ต่อ tyrosinase โดยใช้อัตรา tyrosinase dopa วิธีการออกซิเดชั่น ไทโรซิเนสเป็นเอนไซม์หลักที่จำกัดอัตราในการสังเคราะห์เมลานินของผิวหนัง และเป็นสารประกอบเชิงซ้อนของทองแดงและโปรตีน มันสามารถไฮดรอกซีเลตไทโรซีนซึ่งเป็นวัตถุดิบหลักในการผลิตเมลานินในร่างกาย เพื่อผลิต L-dopa แล้วออกซิไดซ์ dopa เป็น dopaquinone โดปาควิโนนผ่านกระบวนการเมตาบอลิซึมหลายชุด จัดเรียงตัวใหม่และพอลิเมอไรซ์ และสุดท้ายรวมตัวกับการรวมกันของโปรตีนเพื่อผลิตชุดของเมลานินที่เป็นสาเหตุของการเกิดสีน้ำตาล ดังนั้นเราจึงพบว่า Cistanche Deserticola มีผลลดการควบคุมไทโรซิเนสอย่างมีนัยสำคัญ

คลิกประโยชน์ต่อสุขภาพของผลิตภัณฑ์ cistanche

สรุป:

K36E ควบคุมการสังเคราะห์เมลานินโดยลดการแสดงออกของโปรตีนปลายน้ำ ได้แก่ p-CREB, p-AKT, p-GSK3 , tyrosinase และ TRP-1 และเปิดใช้งานปัจจัยการถอดรหัส MITF K36E อาจมีศักยภาพในการพัฒนาเป็นสารทำให้ผิวขาว

คำสำคัญ:

N-(4-เมทอกซีฟีนิล) คาเฟอีน, เมลาโนเจเนซิส, โพรโพลิส, ปัจจัยการถอดความที่เกี่ยวข้องกับไมโครธาลเมีย, โปรตีนที่จับองค์ประกอบการตอบสนองของแคมป์, ไกลโคเจนซินเทสไคเนส 3 เบต้า

พื้นหลัง

เมลานินมีบทบาทสำคัญในการป้องกันความเสียหายจากแสงและการเกิดมะเร็งด้วยแสงของผิวหนัง อย่างไรก็ตาม การสะสมของเมลานินที่ผิดปกติทำให้เกิดความผิดปกติของเม็ดสีมากเกินไป เช่น จุดด่างอายุและฝ้า [1, 2] Melanogenesis เป็นชุดของกระบวนการที่ซับซ้อนซึ่งมีปัจจัยที่เกี่ยวข้องมากมาย พื้นหลังทางพันธุกรรมเป็นปัจจัยที่สำคัญที่สุดสำหรับการสร้างเม็ดสีผิว มีการค้นพบยีนมากกว่า 150 ยีนที่ควบคุมการสังเคราะห์เม็ดสีเมลานิน [3–5]

นอกจากนี้ ปัจจัยที่ไม่ใช่พันธุกรรม เช่น ยา การเปลี่ยนแปลงของฮอร์โมน การอักเสบ อายุ และการได้รับรังสีอัลตราไวโอเลต (UV) ส่งผลต่อการสร้างเม็ดสีผิว [4, 5] การสร้างเมลาโนเจเนซิสถูกควบคุมโดยโปรตีนและเอนไซม์ต่างๆ รวมถึงไทโรซิเนส, ปัจจัยการถอดรหัสที่เกี่ยวข้องกับไมโครพาทาลเมีย (MITF), โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับไทโรซิเนส-1 (TRP-1) และโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับไทโรซิเนส-2 (TRP -2) ​​[4, 6–8]. การฉายรังสี UV จะกระตุ้นการหลั่งของ -melanocyte-stimulating hormone ( -MSH) ในเซลล์เคราติโนไซต์ ซึ่งจับกับ melanocortin 1 receptor (MC1R) และกระตุ้นการเปลี่ยน adenosine triphosphate เป็น cyclic adenosine monophosphate (cAMP) [9] แคมป์กระตุ้นโปรตีนไคเนส A (PKA) และ PKA จะย้ายเข้าสู่นิวเคลียสและกระตุ้นโปรตีนที่จับกับองค์ประกอบที่ตอบสนองต่อแคมป์ (CREB) [10, 11] โปรตีนจับองค์ประกอบที่ตอบสนองต่อฟอสโฟแคมป์ (p-CREB) เพิ่มการแสดงออกของ MITF เพื่อกระตุ้นการแสดงออกของไทโรซิเนส, TRP-1 และ TRP-2 ไทโรซิเนสผ่านการเจริญเติบโตและการกระตุ้นผ่านกลไกหลายอย่าง รวมทั้งการจับกับทองแดง ไกลโคซิเลชั่น และฟอสโฟรีเลชั่น ส่งผลให้มีการสังเคราะห์เมลานิน [12]

การวิจัยจำนวนมากได้ศึกษาการควบคุมการสังเคราะห์เมลานินสำหรับการพัฒนาสารลดเม็ดสี เพื่อยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ไทโรซิเนสและลดการสังเคราะห์เมลานิน สารยับยั้งไทโรซิเนสหลายชนิดที่ป้องกันการเกิดเม็ดสีมากเกินไปได้รับการพัฒนาผ่านการสังเคราะห์หรือแยกจากแหล่งธรรมชาติ [1, 2, 7, 13] N-(4-เมทอกซีฟีนิล) คาเฟอีน (K36E; รูปที่ 1) เป็นสารแอนะล็อกของกรดคาเฟอิกฟีเนทิลเอสเทอร์ ซึ่งเป็นส่วนประกอบที่ออกฤทธิ์ของโพลิส ในการศึกษาก่อนหน้านี้ อนุพันธ์ของคาเฟอีนแสดงคุณสมบัติในการต้านอนุมูลอิสระ ป้องกันการเสื่อมสลายของคอลลาเจนในผิวหนังหลังจากได้รับรังสี UVB และกระตุ้นการสังเคราะห์คอลลาเจนในไฟโบรบลาสต์ของผิวหนังมนุษย์และหนูที่ไม่มีขน [14, 15] อนุพันธ์ของคาเฟอีนอีกชนิดหนึ่งแสดงฤทธิ์ต่อต้านการสร้างเม็ดสีโดยการยับยั้งกิจกรรมและการแสดงออกของเอนไซม์ไทโรซิเนส [16]

นอกจากนี้ อนุพันธ์ของกรดคาเฟอีน เช่น trans-N-caffeoyl tyramine และ trans-N-dihydro-p-hydroxycinnamoyltyramine ยังยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ไทโรซิเนสในเซลล์เมลาโนไซต์ [17] ดังนั้นเราจึงสันนิษฐานว่า K36E ยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิส ในการศึกษาปัจจุบัน เราตรวจสอบผลของกิจกรรม K36E ต่อการสังเคราะห์เมลานินในเซลล์ B16F0 ซึ่งเป็นแบบจำลองที่ได้รับการยอมรับอย่างดีสำหรับการตรวจสอบสารที่ทำให้ผิวขาว [18–20] นอกจากนี้ เราตรวจสอบว่าฤทธิ์ต้านการสร้างเม็ดสีผิวของ K36E ขึ้นอยู่กับการควบคุมของ TRP1, AKT/glycogen synthase kinase 3 beta (GSK3 )/CREB และ MITF หรือไม่

วิธีการ

วัสดุและเคมีภัณฑ์

K36E ถูกสังเคราะห์และระบุโดยศาสตราจารย์ YuehHsiung Kuo ด้วยความบริสุทธิ์ 99.9 เปอร์เซ็นต์ [21] -MSH ซื้อมาจาก Merck (เมืองดาร์มสตัดท์ ประเทศเยอรมนี) อาร์บูติน, 3,4-ไดไฮดรอกซี-แอล-ฟีนิลอะลานีน (L-DOPA), DL-ไดไทโอทรีทอล, H-89 ไดไฮโดรคลอไรด์ไฮเดรต, ฟีนิลมีเทนซัลโฟนิลฟลูออไรด์ และแอล-ไทโรซีน ถูกซื้อจาก Sigma-Aldrich Chemical Co. ( เซนต์หลุยส์ มิสซูรี สหรัฐอเมริกา) Fetal bovine serum (FBS), อาหารเลี้ยงเชื้อ Eagle's ดัดแปลง (DMEM) ของ Dulbecco และ trypsin- ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) ซื้อจาก GIBCO Invitrogen Corporation (NY, USA) แอนติบอดีที่รู้จัก MITF ได้มาจาก Abcam (Cambridge, MA, USA) แอนติบอดีที่จดจำ p-CREB และ CREB ถูกซื้อจาก Cell Signaling Technology, Inc. (Danvers, MA, USA) แอนติบอดีที่จดจำ phospho-AKT, AKT และ phospho-glycogen synthase kinase 3 beta (p-GSK3) ได้มาจาก GeneTex, Inc. (CA, USA) แอนติบอดีที่จดจำแอกติน, GSK3, TRP-1 และไทโรซิเนสได้มาจาก Santa Cruz Biotechnology, Inc. (ซานตาครูซ แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา)

ผลของ K36E ต่อการยับยั้งไทโรซิเนสของเห็ด

กิจกรรมของเห็ดไทโรซิเนสถูกกำหนดโดยสเปกโตรโฟโตเมตริกด้วยการปรับเปลี่ยนขั้นตอนที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้เล็กน้อย [7, 21–23] อาร์บูติน (2 มิลลิโมลาร์) เป็นตัวควบคุมเชิงบวก ตัวอย่างทดสอบและ L-tyrosine ในน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (PBS) ถูกเติมลงใน 96-หลุมไมโครเพลท (Nunc เดนมาร์ก) และเติมเห็ดไทโรซิเนส หลังจากการบ่ม ปริมาณของโดปาโครมที่ผลิตในส่วนผสมของปฏิกิริยาถูกกำหนดที่ความหนาแน่นเชิงแสงที่ 492 นาโนเมตร โดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท (Tecan, Grodig, ออสเตรีย)

การเพาะเลี้ยงเซลล์

เซลล์ B16F0 ถูกซื้อมาจาก Bioresource Collection and Research Center ในไต้หวัน และเพาะเลี้ยงใน DMEM ที่เสริมด้วย FBS 10 เปอร์เซ็นต์ และเพนิซิลลินและสเตรปโตมัยซิน 100 หน่วย/มล. ที่ 37 องศาใน CO2 5 เปอร์เซ็นต์

การทดสอบความมีชีวิตของเซลล์

การทดลองการเติบโตของเซลล์ดำเนินการโดยใช้ 3-(4, 5- dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay โดยมีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยใน ขั้นตอนที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [7, 8, 24, 25] ใช้ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์เป็นตัวควบคุมเชิงบวก เพาะเลี้ยงเซลล์ข้ามคืนและบำบัดด้วย K36E ที่มีความเข้มข้นต่างๆ กันเป็นเวลา 48 ชั่วโมง จากนั้นจึงเติมสารละลาย MTT ลงในแต่ละหลุม หลังจากการบ่ม จะมีการเติมสารละลายโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต (SDS) เพื่อละลายผลึกฟอร์มาซานที่ผลิตในเซลล์ วัดความหนาแน่นของแสงที่ 570 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท (Tecan, Grodig, ออสเตรีย)

ปริมาณเมลานินระดับเซลล์

ปริมาณเมลานินในเซลล์ B16F0 ถูกวัดโดยใช้วิธีการที่ดัดแปลงจากการศึกษาก่อนหน้า [7, 8, 23] เซลล์ B16F0 ถูกเพาะในเพลต 6-หลุมที่ความหนาแน่น 7 × 104 เซลล์ต่อหลุม และบ่มในชั่วข้ามคืน เซลล์สัมผัสกับตัวกลางที่มี -MSH และ K36E เป็นเวลา 48 ชั่วโมง อาร์บูติน (1 มิลลิโมลาร์) เป็นตัวควบคุมเชิงบวก NaOH (2 N) ถูกเติมลงในแต่ละหลุมเพื่อแยกเซลล์ ซึ่งจากนั้นถูกปั่นแยก ปริมาณเมลานินในส่วนเหนือตะกอนถูกวัดที่ 405 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่าน ELISA (Tecan, Grodig, ออสเตรีย)

การทดสอบกิจกรรมของเซลล์ไทโรซิเนส

กิจกรรมของเอนไซม์ไทโรซิเนสของเซลล์ B16F0 หลังการรักษาด้วย K36E ถูกวัดโดยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยกับวิธีการที่อธิบายไว้ในการศึกษาก่อนหน้า [7, 26, 27] เซลล์ B16F0 ถูกชุบใน 24-จานหลายใบและบ่มในชั่วข้ามคืน เซลล์ได้รับการบำบัดด้วยความเข้มข้นต่างๆ ของ K36E และถูกบ่มต่อไปอีก 48 ชั่วโมง พวกมันถูกล้างด้วย PBS และแยกด้วย Triton X 1 เปอร์เซ็นต์-100 ผสมใน 100 mM PBS (pH 6.8); ส่วนผสมที่เป็นผลลัพธ์ถูกแช่แข็งระหว่างการบ่มที่ −80 องศาเป็นเวลา 15 นาที และละลายที่อุณหภูมิห้อง ต่อจากนั้น ตัวอย่างถูกปั่นแยก สารตั้งต้นที่เตรียมขึ้นใหม่ (L-DOPA 15 มิลลิโมลาร์ในบัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟต pH 7.1 48 มิลลิโมลาร์) ถูกเติมลงในสารแขวนลอยและบ่ม จากนั้นวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 405 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท (Tecan, Grodig, ออสเตรีย)

อัตราของกิจกรรมไทโรซิเนสคำนวณโดยใช้สมการต่อไปนี้:

การวิเคราะห์แบบตะวันตก

การวิเคราะห์ Western blot ใช้เพื่อแสดงผลของ K36E ต่อการแสดงออกของโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับการสร้างเมลาโนเจเนซิสในเซลล์ B16F0 ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [7, 8, 22, 28, 29] B16F{{10}} เซลล์ถูกเพาะในจาน 10-ซม. เป็นเวลา 24 ชั่วโมงและบำบัดด้วย -MSH เพียงอย่างเดียว (กลุ่มควบคุม) หรือด้วย -MSH บวกกับความเข้มข้นต่างๆ ของ K36E เป็นเวลา 48 ชั่วโมง ไลเซทถูกปั่นแยกและปริมาณโปรตีนถูกกำหนดโดยใช้แบรดฟอร์ดรีเอเจนต์ (ไบโอ-ราด, เฮอร์คิวลีส, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) โปรตีน 20 ไมโครกรัมถูกแยกออกจากเจลโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต-โพลีอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโตรโฟรีซิส (SDS-PAGE) และซับออกโดยใช้เมมเบรนโพลีไวนิลิดีนไดฟลูออไรด์ (PVDF) (Hybond ECL, Amersham Pharmacia Biotech Inc., Piscataway, NJ, USA) บล็อกรอยเปื้อนด้วยนมไขมันต่ำ 5 เปอร์เซ็นต์ (w/v) ในน้ำเกลือ Tris-buffered ที่มี Tween 20 0.05 เปอร์เซ็นต์ และด้วยแอนติบอดีจำเพาะ: แอกติน (1:1000), AKT (1:5000), p-AKT (1:5000) ), CREB (1:1000), p-CREB (1:1000), GSK3 (1:500), p-GSK3 (1:500), MITF (1:1000), TRP-1 (1: 500) และไทโรซิเนส (1:200) เยื่อ PVDF ถูกบ่มด้วยคอนจูเกตที่ต่อต้านอิมมูโนโกลบูลิน G ฮอร์สแรดิชเปอร์ออกซิเดส (Santa Cruz Biotechnology, Inc.) ตรวจพบโปรตีนภูมิคุ้มกันโดยใช้ชุด Enhanced Chemiluminescence Plus (Fujifilm, LAS4000) และวัดความแรงของสัญญาณโดยใช้โปรแกรม densitometric (MultiGauge V2.2) ผลลัพธ์ของการทดสอบแบบ Western blot แสดงการทดลองอย่างน้อยสามครั้ง

การวิเคราะห์ทางสถิติ

ค่าแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานจากผลการทดลองอย่างน้อยสามครั้ง เปรียบเทียบความแตกต่างของผลลัพธ์ของการรักษาต่างๆ โดยใช้การทดสอบ t-test หรือ ANOVA ของนักเรียน รวมถึงการทดสอบของ Scheffe ผ่านซอฟต์แวร์ SPSS (เวอร์ชัน 12.0) ค่าพี<0.05 indicated significance. 

ผลลัพธ์

การยับยั้งกิจกรรมไทโรซิเนสของเห็ดโดย K36E

K36E ที่ 1000 ไมโครโมลาร์ ลดกิจกรรมไทโรซิเนสของเห็ดลงอย่างมาก ผลการยับยั้งเอนไซม์ไทโรซิเนสของเห็ดที่ 500, 750 และ 1,000 ไมโครโมลาร์ คือ 6.8 เปอร์เซ็นต์ ± 1.6 เปอร์เซ็นต์ , 14.0 เปอร์เซ็นต์ ± 7.1 เปอร์เซ็นต์ และ 36.8 เปอร์เซ็นต์ ± 1.1 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ นอกจากนี้ อัตราการยับยั้งอาร์บูติน 2 มิลลิโมลาร์ต่อกิจกรรมไทโรซิเนสของเห็ดเท่ากับ 65.3 เปอร์เซ็นต์ ± 2.5 เปอร์เซ็นต์

ผลของ K36E ต่อความมีชีวิตของเซลล์ B16F0

ความมีชีวิตของเซลล์หลังการบำบัดด้วย 1, 1.5, 2, 2.5, 4, 5, 10, 25 และ 50 μM K36E คือ 92.7 เปอร์เซ็นต์ ± 2.0 เปอร์เซ็นต์ , 91.7 เปอร์เซ็นต์ ± 2.1 เปอร์เซ็นต์ , 90.9 เปอร์เซ็นต์ ± 2.2 เปอร์เซ็นต์ , 87.8 เปอร์เซ็นต์ ± 4.2 เปอร์เซ็นต์ , 72.8 เปอร์เซ็นต์ ± 1.0 เปอร์เซ็นต์ , 68.5 เปอร์เซ็นต์ ± 2.4 เปอร์เซ็นต์ , 54.6 เปอร์เซ็นต์ ± 1.6 เปอร์เซ็นต์ , 38.3 เปอร์เซ็นต์ ± 0.8 เปอร์เซ็นต์ และ 28.4 เปอร์เซ็นต์ ± 2.3 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์เป็นตัวควบคุมเชิงบวก และความมีชีวิตของเซลล์ที่ 0.1 μM H2O2 เท่ากับ 48.9 เปอร์เซ็นต์ ± 7.5 เปอร์เซ็นต์ หลังการรักษา 48 ชั่วโมง ความมีชีวิตของเซลล์เป็นที่ยอมรับในการพัฒนาวัสดุสำหรับเครื่องสำอาง ตามข้อกำหนดของ International Organization for Standardization (ISO) 10993– 5:2009 (Biological Evaluation of Medical Devices) ความมีชีวิตของเซลล์ที่สูงกว่าร้อยละ 80 ถือเป็นความไม่เป็นพิษต่อเซลล์ ผลลัพธ์บ่งชี้ว่าการรักษาด้วย 0.5 ถึง 2.5 ไมโครโมลาร์ K36E เป็นเวลา 48 ชั่วโมงไม่มีผลกระทบต่อเซลล์ B16F0

การยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินโดย K36E ในเซลล์ B16F0

รูปที่ 2a แสดงผลของ K36E ต่อการสังเคราะห์เมลานินหลังจากกระตุ้นโดย 0.5 μM -MSH ในเซลล์ B16F0 ปริมาณเมลานินภายในเซลล์เพิ่มขึ้นเป็น 124.6 เปอร์เซ็นต์ ± 13.{{10}} เปอร์เซ็นต์หลังการรักษาด้วย -MSH K36E ที่ปริมาณที่สูงกว่า 1.0 μM ลดปริมาณเมลานินอย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งลดลงถึง 97.5 เปอร์เซ็นต์ ± 1.9 เปอร์เซ็นต์ , 96.6 เปอร์เซ็นต์ ± 3.3 เปอร์เซ็นต์ , 94.4 เปอร์เซ็นต์ ± 2.8 เปอร์เซ็นต์ และ 90.8 เปอร์เซ็นต์ ± 1.4 เปอร์เซ็นต์ (รูปที่ 2a) ผลของ K36E ต่อการสังเคราะห์เม็ดสีเมลานินนั้นใกล้เคียงกับอาร์บูติน 1 มิลลิโมลาร์

การยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ไทโรซิเนสโดย K36E ในเซลล์ B16F0

K36E ยับยั้งการทำงานของไทโรซิเนสอย่างมีนัยสำคัญในเซลล์ B16F0 หลังการรักษาเป็นเวลา 48 ชั่วโมง (รูปที่ 2b) ระดับของกิจกรรมไทโรซิเนสอยู่ที่ 83.2 เปอร์เซ็นต์ ± 2.1 เปอร์เซ็นต์ , 76.3 เปอร์เซ็นต์ ± 2.9 เปอร์เซ็นต์ , 72.0 เปอร์เซ็นต์ ± 5.0 เปอร์เซ็นต์ และ 67.2 เปอร์เซ็นต์ ± 4.4 เปอร์เซ็นต์ หลังการรักษาด้วย 1, 1.5, 2 , และ 2.5 μM K36E ตามลำดับ เป็นเวลา 48 ชั่วโมง ผลลัพธ์ระบุว่า K36E ยับยั้งปริมาณเมลานินของเซลล์ B16F0 ผ่านการยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ไทโรซิเนส

ผลของ K36E ต่อโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับการสร้างเมลาโนเจเนซิส

K36E ลดการแสดงออกของไทโรซิเนสและ TRP-1

เพื่อตรวจสอบว่าการยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสโดย K36E เกี่ยวข้องกับระดับการแสดงออกของโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับเมลาโนเจเนซิสหรือไม่ รวมถึงไทโรซิเนสและ TRP-1 เซลล์ B16F0 ถูกบ่มด้วย -MSH (0 5 ไมโครโมลาร์) และความเข้มข้นต่างๆ ของ K36E (1–2.5 ไมโครโมลาร์) เป็นเวลา 48 ชั่วโมง แม้ว่าการแสดงออกของไทโรซิเนสแสดงการเพิ่มขึ้น 27-เท่า เมื่อเทียบกับการควบคุมหลังการรักษาด้วย -MSH แต่ K36E ยับยั้งการแสดงออกของไทโรซิเนสอย่างมีนัยสำคัญในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา (รูปที่ 3) นอกจากนี้ K36E ลดการแสดงออกของ -MSH-stimulated TRP-1 อย่างมีนัยสำคัญที่ขนาดยาที่สูงกว่า 1.5 μM (รูปที่ 3)

K36E ลดการแสดงออกของ MITF

การแสดงออกของ MITF ในเซลล์ B16F0 แสดงการเพิ่มขึ้น 1.5- เท่าเมื่อเทียบกับในกลุ่มควบคุมหลังการรักษาด้วย -MSH (รูปที่ 4) K36E ได้รับการรักษาเป็นเวลา 4 ชั่วโมงที่ยับยั้งการแสดงออกของ MITF ขึ้นกับขนาดยาและการแสดงออกของ MITF ที่ควบคุมลงอย่างมีนัยสำคัญในเซลล์ B16F0 ที่ความเข้มข้น 1 μM (รูปที่ 4)

K36E ลดการแสดงออกของ p-CREB

การแสดงออกของ p-CREB ในเซลล์ B16F0 แสดงการเพิ่มขึ้น 1.4- เท่าเมื่อเทียบกับในกลุ่มควบคุมหลังการรักษา -MSH (รูปที่ 5) K36E ยับยั้งการแสดงออกของ p-CREB อย่างมีนัยสำคัญที่ความเข้มข้นสูงกว่า 1.5 ไมโครโมลาร์ และต่อมาลดการแสดงออกของ MITF ในเซลล์ B16F0

ผลของ K36E ต่อเส้นทางการส่งสัญญาณเมลาโนเจเนซิส

การสร้างเมลาโนเจเนซิสที่ยับยั้ง K36E นั้นสัมพันธ์กับการควบคุมของ PKA

เพื่อตรวจสอบว่าเมลาโนเจเนซิสที่ยับยั้ง K36E นั้นสัมพันธ์กับ PKA หรือไม่ เซลล์ B16F0 ถูกบ่มด้วย 10 μM H-89 ตัวยับยั้ง PKA [30] และ 2.5 μM K36E เป็นเวลา 48 ชั่วโมง . การบำบัดด้วย K36E และ H-89 ทำให้การแสดงออกของไทโรซิเนสที่เหนี่ยวนำโดย MSH ลดลง 1.{14}} และ 1.{16}} เท่า ตามลำดับ เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม (รูปที่ 6 ). นอกจากนี้ การบำบัดด้วย K36E และ H-89 ทำให้การแสดงออกของไทโรซิเนสลดลง 0.{23}} เท่าเมื่อเทียบกับในกลุ่มควบคุม นอกจากนี้ การแสดงออกของไทโรซิเนสหลังการบำบัดยังต่ำกว่าการบำบัดด้วย K36E หรือ H-89 แยกกันอย่างมีนัยสำคัญ ผลลัพธ์บ่งชี้ว่าวิถี PKA อาจเกี่ยวข้องกับผลต้านการสร้างเม็ดสีของ K36E

K36E ยับยั้งการสร้างเม็ดสีโดยควบคุมการแสดงออกของ p-AKT และ p-GSK3

ดังที่แสดงในรูปที่ 7 การรักษาด้วย 2.5 μM K36E เป็นเวลา 1 ชั่วโมง เพิ่มการแสดงออกของ p-AKT และ p-GSK3 อย่างเห็นได้ชัด ระดับของ p-AKT ถึงจุดสูงสุด (เพิ่มขึ้น 1.{{10}}เท่าเมื่อเทียบกับในกลุ่มควบคุม) หลังจากผ่านไป 1 ชั่วโมงและเพิ่มขึ้น 1.5-เท่าหลังจาก 2 ชั่วโมง ระดับของ p-GSK3 ยังแสดงเพิ่มขึ้น 1.2-เท่าหลังจาก 1 ชั่วโมงเมื่อเทียบกับในกลุ่มควบคุม ซึ่งบ่งชี้ว่า K36E ยับยั้งการสร้างเม็ดสีในเซลล์ B16F0 โดยการกระตุ้นเส้นทางการส่งสัญญาณ AKT และ GSK3 ส่งผลให้ยับยั้ง กิจกรรมการแสดงออกและการถอดรหัสของ MITF และยับยั้งการแสดงออกของยีนไทโรซิเนส

การอภิปราย

ไทโรซิเนสและกิจกรรมของมันมีบทบาทสำคัญในการควบคุมการสร้างเมลาโนเจเนซิส [31–33] สารหรือผลิตภัณฑ์ที่ยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ไทโรซิเนสถูกนำมาใช้ในเครื่องสำอางและเวชสำอางที่ทำให้ผิวขาว [1, 2, 34] เควอซิทินและกรดวานิลลิกยับยั้ง -MSH กระตุ้นการแสดงออกของ MITF, ไทโรซิเนส, TRP-1 และ TRP-2 ทำให้เกิดการยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิส [35, 36] อนุพันธ์ของ Resveratrol ยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินผ่านการยับยั้งการแสดงออกของเอนไซม์ที่สร้างเม็ดสี เช่น tyrosinase และ TRP-1 [37] ผลลัพธ์ของเราระบุว่า K36E ยับยั้งกิจกรรมของเอนไซม์ไทโรซิเนสและการแสดงออกของโปรตีนที่เกิดจาก -MSH จึงยับยั้งการสังเคราะห์เมลานิน นอกจากนี้ K36E ยังยับยั้งโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับการสร้างเมลาโนเจเนซิส เช่น TRP-1 TRP-1 ถือว่ามีบทบาทสำคัญทั้งในฐานะโปรตีนโครงสร้างและเอนไซม์เร่งปฏิกิริยาในวิถียูเมลานิกของเมลาโนโซม [38, 39] ผลลัพธ์ที่กล่าวถึงข้างต้นชี้ให้เห็นว่าการลดลงของการสร้างเมลาโนเจเนซิสของ K36E สามารถทำได้โดยการยับยั้งเส้นทางการส่งสัญญาณที่ควบคุมการแสดงออกและกิจกรรมของไทโรซิเนส

MITF เป็นปัจจัยการถอดรหัสที่สำคัญที่สุดที่ควบคุมการสร้างเมลาโนเจเนซิสโดยกระตุ้นการแสดงออกของยีนเมลาโนจีนิก [5, 40] การเปิดใช้งาน MITF ควบคุมการแสดงออกของไทโรซิเนสและ TRP-1 และเป็นผลให้เพิ่มการสังเคราะห์เมลานิน ในการศึกษานี้ K36E ยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสโดยการยับยั้งการแสดงออกของ MITF ที่เกิดจาก -MSH ทางเดินของค่ายมีบทบาทสำคัญในการสร้างเมลาโนเจเนซิสที่เกิดจาก MSH

ในการศึกษาก่อนหน้านี้ สารยกระดับแคมป์ยับยั้ง PI3K/AKT GSK3 อาจกระตุ้นการจับ MITF กับลำดับเป้าหมายเพื่อกระตุ้นการแสดงออกของเอนไซม์สร้างเม็ดสีและอำนวยความสะดวกในการผลิตเมลานิน [41] cAMP ยับยั้ง PI3K และ AKT phosphorylation และกิจกรรม และลด GSK3 phosphorylation เพื่อกระตุ้นการทำงานของมัน การเปิดใช้งานการถ่ายโอนสัญญาณ cAMP ทำให้เกิดการจับกันของ MITF กับโปรโมเตอร์ไทโรซิเนส ซึ่งนำไปสู่การกระตุ้นการสร้างเมลาโนเจเนซิส [41, 42] การเปิดใช้งานเส้นทาง AKT ยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินโดยการลดเอนไซม์สร้างเม็ดสี [41] มีรายงานว่า Cordycepin ยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินที่เกิดจาก -MSH และ IBMX โดยการยับยั้งเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับการสังเคราะห์เมลานิน เช่น tyrosinase, TRP-1 และ TRP-2 ยับยั้งกิจกรรมของ CREB และ MITF และเปิดใช้งาน PI3K /เส้นทาง AKT ในเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F10 [43] ในผลลัพธ์ของเรา K36E ยับยั้ง CREB phosphorylation K36E ยกระดับการแสดงออกของ p-AKT และ p-GSK3 ซึ่งอาจลดการถอดรหัส MITF เพื่อยับยั้งการแสดงออกของยีนไทโรซิเนส การศึกษาก่อนหน้านี้รายงานว่าการกระตุ้น AKT ยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสในเมลาโนไซต์ [33, 44] ดังนั้น K36E จึงยับยั้ง -MSH ที่ทำให้เกิดรอยดำที่เกิดจากการกระตุ้น AKT และ GSK3 และลดการควบคุมการผลิต MITF, CREB, tyrosinase และ TRP-1 ในเวลาต่อมา (รูปที่ 8)

การได้รับรังสียูวีจะกระตุ้นการหลั่งของ -MSH ในเซลล์เคราติโนไซต์ -MSH จับกับ MC1R ในเซลล์เมลาโนไซต์ ส่งผลให้เกิดการผลิตแคมป์และการกระตุ้น PKA [10] การถ่ายโอนสัญญาณที่เกี่ยวข้องกับทางเดินของค่ายรวมถึงการเปิดใช้งานปัจจัยการถอดรหัส PKA และ CREB นำไปสู่การควบคุม MITF [45] PKA ภายหลัง phosphorylates CREB เพื่อกระตุ้นการแสดงออกของยีน MITF [46, 47] กรดนิโคตินิกไฮดรอกซาเมตยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินผ่านการกระตุ้นเส้นทางการส่งสัญญาณ MEK/ERK และ AKT/GSK3 ในเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16F10 [48] ผงความเข้มข้นของทับทิมแห้งให้ผลไวท์เทนนิ่งโดยการลดกิจกรรมของเอนไซม์ไทโรซิเนสและการผลิตเมลานินในเซลล์ B16F10 อย่างมีประสิทธิภาพผ่านการหยุดการทำงานของเส้นทางการส่งสัญญาณ p38 และ PKA/ CREB ในเซลล์ B16F10 [49] การยับยั้ง PI3K ที่เกิดจากแคมป์จะลด AKT phosphorylation และการเปิดใช้งาน ในการศึกษาปัจจุบัน การแสดงออกของ MITF ที่เกิดจาก -MSH ถูกยับยั้งโดย K36E และ H-89 ซึ่งเป็นตัวยับยั้ง PKA นอกจากนี้ การรักษาด้วย K36E และ H-89 ยังลดทอนการลดลงของการสังเคราะห์เมลานินที่เกิดจาก K36E อย่างมีนัยสำคัญ ผลลัพธ์ของเราชี้ให้เห็นว่ากิจกรรมต่อต้านการสร้างเม็ดสีผิวของ K36E นั้นเกี่ยวข้องกับเส้นทาง PKA และนำไปสู่การลดลงของ MITF (รูปที่ 8)

บทสรุป

K36E ลดการแสดงออกของ MITF โดยยับยั้ง CREB phosphorylation นอกจากนี้ K36E ยับยั้งการแสดงออกของ MITF โดยควบคุมระดับฟอสโฟรีเลชั่นของ AKT และ GSK3 ซึ่งต่อมายับยั้งการแสดงออกของไทโรซิเนสและ TRP-1 และด้วยเหตุนี้จึงลดการสังเคราะห์เมลานินทางชีวภาพ อาจใช้เมลาโนไซต์ปกติและการศึกษาในร่างกายสำหรับการตรวจสอบเพิ่มเติมเกี่ยวกับผลกระทบของ K36E ต่อการสร้างเมลาโนเจเนซิส โดยสรุป K36E อาจเป็นตัวเลือกสำหรับการควบคุมการสร้างเมลาโนเจเนซิส และมีแนวโน้มว่าจะมีการใช้งานที่หลากหลายในผลิตภัณฑ์ปรับผิวขาวในอนาคต

กิตติกรรมประกาศ

งานวิจัยนี้ได้รับการสนับสนุนทุนจากกระทรวงวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยี (วช.100-2320-บ-039-002-MY3; MOST104-2320-B-039-006) มช. ภายใต้แผนมุ่งสู่มหาวิทยาลัยชั้นนำ ของกระทรวงศึกษาธิการ ไต้หวัน และ Taiwan Ministry of Health and Welfare Clinical Trial and Research Center of Excellence (MOHW105-TDU-B-212-133019) และ China Medical University (CMU102- เอเชีย-18)

ความพร้อมใช้งานของข้อมูลและวัสดุ

ชุดข้อมูลที่สนับสนุนข้อสรุปของบทความนี้รวมอยู่ในบทความ

ผลงานของผู้เขียน

YHK, CYL และ HMC รับผิดชอบในการออกแบบการศึกษาและจัดหาทุนวิจัย PYW, CSW และ PJS ออกแบบการทดลองและให้คำแนะนำทางเทคนิค CCC และ HMC ทำการทดลอง YHK, YHK, CYL และ HMC เขียนบทความนี้ ผู้เขียนทั้งหมดอ่านและได้รับการอนุมัติขั้นสุดท้ายที่เขียนด้วยลายมือ.

การแข่งขันความสนใจ

ผู้เขียนประกาศว่าพวกเขาไม่มีผลประโยชน์ที่แข่งขันกัน

ยินยอมให้ตีพิมพ์

ไม่สามารถใช้ได้.

การอนุมัติด้านจริยธรรมและยินยอมให้เข้าร่วม

การศึกษานี้ใช้เซลล์ที่มีขายทั่วไป ดังนั้นจึงไม่จำเป็นต้องได้รับการอนุมัติทางจริยธรรม

รายละเอียดผู้แต่ง

1Department of Chinese Pharmaceutical Sciences and Chinese Medicine Resources, China Medical University, Taichung 404, Taiwan 2 Department of Biotechnology, Asia University, Taichung 413, Taiwan. 3 Department of Cosmeceutics, China Medical University, Taichung 404, Taiwan 4 แผนกโรคผิวหนัง โรงพยาบาล China Medical University, Taichung 404, Taiwan 5 School of Medicine, China Medical University, Taichung 404, ไต้หวัน 6 พิพิธภัณฑ์แห่งชาติด้านชีววิทยาทางทะเลและพิพิธภัณฑ์สัตว์น้ำ ผิงตง 944 ไต้หวัน

อ้างอิง

1. Solano F, Briganti S, Picardo M, Ghanem G. Hypopigmenting agents: การทบทวนล่าสุดเกี่ยวกับแง่มุมทางชีววิทยา เคมี และทางคลินิก เม็ดสีเซลล์ Res. 2549;19(6):550–71.

2. เชียง HM, Chen HW, Huang YH, Chan SY, Chen CC, Wu WC, Wen KC Melanogenesis และตัวแทน hypopigmentation ตามธรรมชาติ 2555.

3. Costin GE, ได้ยิน VJ การสร้างเม็ดสีผิวของมนุษย์: เมลาโนไซต์ปรับสีผิวเพื่อตอบสนองต่อความเครียด FASEB J. 2007;21(4):976–94.

4. Kondo T วีเจผู้ได้ยิน ข้อมูลอัปเดตเกี่ยวกับการควบคุมการทำงานของเมลาโนไซต์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมและการสร้างเม็ดสีผิว ผู้เชี่ยวชาญ Rev Dermatol 2554;6(1):97–108.

5. Yamaguchi Y วีเจผู้ได้ยิน ปัจจัยทางสรีรวิทยาที่ควบคุมการสร้างเม็ดสีผิว ไบโอแฟคเตอร์ 2552;35(2):193–9.

6. ฟังวีเจ. เหตุการณ์สำคัญในเมลาโนไซต์/เมลาโนเจเนซิส เจ อินเวส เดอร์มาทอล 2011;131(E1):E1.

7. เชียง HM, Chien YC, Wu CH, Kuo YH, Wu WC, Pan YY, Su YH, Wen KC. สารสกัดแอลกอฮอล์ในน้ำของ Rhodiola rosea L. (Crassulaceae) และไฮโดรไลเสตยับยั้งการสร้างเม็ดสีเมลาโนเจเนซิสในเซลล์ B16F0 โดยการควบคุมเส้นทาง CREB/MITF/tyrosinase สารเคมีในอาหารเป็นพิษ 2014;65:129–39.

8. Wen KC, Chang CS, Chien YC, Wang HW, Wu WC, Wu CS, เชียง HM ไทโรซอลและอะนาล็อกของมันยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสที่เกิดจากฮอร์โมนที่กระตุ้นอัลฟ่าเมลาโนไซต์ Int J Mol วิทย์ 2556;14(12):23420–40.

9. Cui R, Widlund HR, Feige E, Lin JY, Wilensky DL, Igras VE, D'Orazio J, Fung CY, Schanbacher CF, Granter SR และอื่นๆ บทบาทสำคัญของ p53 ในการตอบสนองของผิวเกรียมเพราะถูกแดดและรอยดำทางพยาธิวิทยา เซลล์ 2550;128(5):853–64.

10. Hocker TL, Singh MK, Tsao H. Melanoma พันธุศาสตร์และแนวทางการรักษาในศตวรรษที่ 21: ย้ายจากริมชายหาดไปข้างเตียง เจ อินเวส เดอร์มาทอล 2551;128(11):2575–95.

11. Drira R, Sakamoto K. Isosakuranetin, ฟลาโวนอยด์ 4′-O-methylated กระตุ้นการสร้างเมลาโนเจเนซิสในเซลล์เมลาโนมาของหนู B16BL6 วิทยาศาสตร์ชีวิต 2558;143:43–9.

12. Chou TH, Ding HY, Lin RJ, Liang JY, Liang CH. การยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสและการเกิดออกซิเดชันโดยกรดโปรโตคาเตชูอิกจาก Origanum vulgare (ออริกาโน) เจ ณัฐ โปรดัก. 2010;73(11):1767–74.

13. Yeom GG, Min S, Kim SY 2,3,5,6-Tetramethylpyrazine ของ Ephedra sinica ควบคุมการสร้างเมลาโนเจเนซิสและการอักเสบในระบบการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อเมลาโนมา/เคอราติโนไซต์ที่เกิดจากรังสี UVA Int อิมมูโนฟาร์มาคอล 2014;18(2):262–9.

14. เชียง HM, Chen CW, Lin TY, Kuo YH. N-phenethyl คาเฟอีนและ photodamage: ปกป้องผิวโดยการยับยั้งการย่อยสลายของ procollagen ประเภท I และกระตุ้นการสังเคราะห์คอลลาเจน สารเคมีในอาหารเป็นพิษ 2014;72C:154–61.

15. Kuo YH, Chen CW, Chu Y, Lin P, Chiang HM การศึกษาในหลอดทดลองและในร่างกายเกี่ยวกับการดำเนินการป้องกันของ N-Phenethyl Caffeamide ต่อความเสียหายจากแสงของผิวหนัง กรุณาหนึ่ง 2558;10(9):e0136777.

16. Shimoda H, Shan SJ, Tanaka J, Maoka T. beta-Cryptoxanthin ยับยั้งการสร้างเม็ดสีเมลาโนเจเนซิสที่เกิดจากรังสี UVB ในหนู: การมีส่วนร่วมของการยับยั้ง prostaglandin E2 และทางเดินของฮอร์โมนกระตุ้น melanocyte เจฟาร์มาคอล. 2555;64(8):1165–76.

17. Okombi S, Rival D, Bonnet S, Mariotte AM, Perrier E, Boumendjel A. ความคล้ายคลึงกันของ N-hydroxycinnamoylphenalkylamides เป็นตัวยับยั้ง melanocyte-tyrosinase ของมนุษย์ Bioorg Med Chem Lett. 2549;16(8):2252–5.

18. Bellei B, Pitisci A, Izzo E, Picardo M. การยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสโดยสารประกอบประเภท pyridinyl imidazole: การมีส่วนร่วมที่เป็นไปได้ของเส้นทางการส่งสัญญาณ Wnt/ beta-catenin กรุณาหนึ่ง 2555;7(3):e33021.

19. Wang L, Lu AP, Yu ZL, Wong RN, Bian ZX, Kwok HH, Yue PY, Zhou LM, Chen H, Xu M และอื่นๆ ผลการยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสและการกำหนดผ่านผิวหนังของ ginsenoside Rb1 AAPS PharmSciTech. 2014;15(5):1252–62.

20. สุวรรณเลิศ P, Kariya R, Suzu I, Okada S. ผลของ Salacia reticulata ต่อสารต่อต้านอนุมูลอิสระต่อเซลล์และการยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสในเซลล์เมลาโนมา B16 ที่กระตุ้นด้วย alpha-MSH และรังสี UV แนท โปรดัก คอมมูนิตี้. 2014;9(4):551–4.

21. Chou YC, Sheu JR, Chung CL, Chen CY, Lin FL, Hsu MJ, Kuo YH, Hsiao G. การยับยั้งเป้าหมายนิวเคลียร์ของ NF-kappaB ในการผลิต MMP-9 โดย N-2- ( 4-โบรโมฟีนิล) เอทิลคาเฟอีนในเซลล์โมโนไซติกของมนุษย์ Chem Biol โต้ตอบ 2010;184(3):403–12.

22. Chiang HM, Lin JW, Hsiao PL, Tsai SY, Wen KC. ไฮโดรไลเสตของพืชตระกูลส้มจะกระตุ้นการสร้างเมลาโนเจเนซิสเพื่อป้องกันความเสียหายทางผิวหนังที่เกิดจากรังสียูวี ไฟโตเทอร์เรส 2554;25(4):569–76.

23. Chiang HM, Ko Y, Shih I, Wen K. การพัฒนา Wine Cake ในฐานะตัวแทนปรับผิวขาวและ Humectant เจ อาหาร ยา ก้น. 2554;19(2):223–9.

24. Chiang HM, Chen HC, Lin TJ, Shih IC, เหวิน เคซี สารสกัดจาก Michelia alba ลดการแสดงออกของเมทริกซ์เมทัลโลโปรตีนเนสที่เกิดจากรังสี UVB ผ่านทาง MAP kinase pathway ในไฟโบรบลาสต์ผิวหนังของมนุษย์ สารเคมีในอาหารเป็นพิษ 2555;50(12):4260–9.

25. Salucci S, Burattini S, Battistelli M, Buontempo F, Canonico B, Martelli AM, Papa S, Falcieri E. Tyrosol ป้องกัน apoptosis ใน keratinocytes ฉายรังสี เจ เดอร์มาทอล วิทย์ 2558;80(1):61–8.

26 Zhang Y, Helke KL, Coelho SG, Valencia JC, Hearing VJ, Sun S, Liu B, Li Z บทบาทที่สำคัญของโมเลกุล chaperone gp96 ในการควบคุมการสร้างเมลาโนเจเนซิส เม็ดสีเซลล์เมลาโนมาเรส 2014;27(1):82–9.

27. Park H, Song KH, Jung PM, Kim JE, Ro H, Kim MY, Ma JY ผลการยับยั้ง apigenin จากสารสกัด Fructus Arctii ต่อการสังเคราะห์เมลานินผ่านการยับยั้งการแสดงออกของเอนไซม์ไทโรซิเนส Evid Based Complement Alternat Med: eCAM 2556; 2556:965312.

28. เชียง HM, Lin TJ, Chiu CY, Chang CW, Hsu KC, Fan PC, Wen KC สารสกัดจากกาแฟอาราบิก้าและส่วนประกอบช่วยป้องกันการถ่ายภาพโดยยับยั้งการแสดงออกของ MMP และเส้นทาง MAP ไคเนส สารเคมีในอาหารเป็นพิษ 2554;49(1):309–18.

29. เชียง HM, Chiu HH, Liao ST, Chen YT, Chang HC, Wen KC. สารสกัด Flemingia macrophylla ที่อุดมด้วยไอโซฟลาโวนอยด์ช่วยลดความเสียหายของผิวหนังที่เกิดจากรังสี UVB โดยการกำจัดออกซิเจนที่มีปฏิกิริยาและยับยั้งการแสดงออกของ MAP Kinase และ MMP Evid Based Complement Alternat Med. 2556;2556:12.

30 Bertolotto C, Bille K, Ortonne JP, Ballotti R. กฎระเบียบของการแสดงออกของยีนไทโรซิเนสโดย cAMP ในเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16 เกี่ยวข้องกับลวดลาย CATGTG สองตัวที่ล้อมรอบกล่อง TATA: นัยของผลิตภัณฑ์ยีน microphthalmia เจ เซลล์ ไบโอล 2539;134(3):747–55.

31. Korner A, Pawelek J. Mammalian tyrosinase เร่งปฏิกิริยาสามปฏิกิริยาในการสังเคราะห์ทางชีวภาพของเมลานิน วิทยาศาสตร์ (นิวยอร์ก นิวยอร์ก) 2525;217(4565):1163–5.

32. Tripathi RK, Hearing VJ, Urabe K, Aroca P, Spritz RA การทำแผนที่ร่วมกันของกิจกรรมการเร่งปฏิกิริยาของไทโรซิเนสของมนุษย์ เจ ไบโอล เคม. 2535;267(33):23707–12.

33. Slominski A, Tobin DJ, Shibahara S, Wortsman J. เม็ดสีเมลานินในผิวหนังของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมและการควบคุมฮอร์โมน Physiol Rev. 2004;84(4):1155–228.

34. Fu YT, Lee CW, Ko HH, เยน ฟลอริดา สารสกัดจาก Artocarpus communis ช่วยลดการสร้างเม็ดสีเมลาโนเจเนซิสที่เกิดจากฮอร์โมนกระตุ้นอัลฟ่าเมลาโนไซต์ผ่านการกระตุ้นเส้นทางการส่งสัญญาณ ERK และ JNK วารสารวิทยาศาสตร์โลก 2557; 2557:724314.

35. Chou TH, Ding HY, Hung WJ, Liang CH. ลักษณะการต้านออกซิเดชันและการยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสที่กระตุ้นฮอร์โมนอัลฟ่าเมลาโนไซต์ของวานิลลินและกรดวานิลลิกจากโอริกานัม vulgare เอ็กซ์พีเดอร์มาทอล 2553;19(8):742–50.

36. Kumar KJ, Yang JC, Chu FH, Chang ST, Wang SY Lucidone สารยับยั้งเมลานินชนิดใหม่จากผลของ Lindera erythroderma Makino ไฟโตเทอร์เรส 2553; 24(8):1158–65.

37. Liu Q, Kim C, Jo YH, Kim SB, Hwang BY, Lee MK การสังเคราะห์และการประเมินทางชีวภาพของอนุพันธ์ของเรสเวอราทรอลในฐานะสารยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิส โมเลกุล (บาเซิล สวิตเซอร์แลนด์) 2558;20(9):16933–45.

38. Jimenez-Cervantes C, Solano F, Kobayashi T, Urabe K, Hearing VJ, Lozano JA, Garcia-Borron JC การทำงานของเอนไซม์ใหม่ในเส้นทางเมลาโนจีนิก 5,6-ไดไฮดรอกซีอินโดล-2-กิจกรรมของกรดคาร์บอกซิลิกออกซิเดสของโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับไทโรซิเนส-1 (TRP1) เจ ไบโอล เคม. 2537;269(27):17993–8000.

39. Kobayashi T, Urabe K, Winder A, Jimenez-Cervantes C, Imokawa G, Brewington T, Solano F, Garcia-Borron JC, วีเจการได้ยิน โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับไทโรซิเนส 1 (TRP1) ทำหน้าที่เป็น DHICA oxidase ในการสังเคราะห์เมลานิน EMBO J. 1994;13(24):5818–25.

40. Gaggioli C, Busca R, Abbe P, Ortonne JP, Ballotti R. Microphthalmia-associated transcription factor (MITF) เป็นสิ่งจำเป็น แต่ไม่เพียงพอที่จะกระตุ้นการแสดงออกของยีน melanogenic เม็ดสีเซลล์ Res. 2546;16(4):374–82.

41. Khaled M, Larribere L, Bille K, Aberdam E, Ortonne JP, Ballotti R, Bertolotto C. Glycogen synthase kinase 3beta ถูกกระตุ้นโดย cAMP และมีบทบาทสำคัญในการควบคุมการสร้างเมลาโนเจเนซิส เจ ไบโอล เคม. 2545;277(37):33690–7.

42. Khaled M, Larribere L, Bille K, Ortonne JP, Ballotti R, Bertolotto C. ปัจจัยการถอดรหัสที่เกี่ยวข้องกับไมโครพาทาลเมียเป็นเป้าหมายของวิถีไคเนสของฟอสฟาติดิลโนซิทอล-3- เจ อินเวส เดอร์มาทอล 2546;121(4):831–6.

43. Shao YY, Chen CC, Wang HY, Chiu HL, Hseu TH, Kuo YH. องค์ประกอบทางเคมีของ Antrodia camphorate จมอยู่ในน้ำซุปทั้งหมด Nat Prod ความละเอียด 2551;22(13):1151–7.

44. Oka M, Nagai H, Ando H, Fukunaga M, Matsumura M, Araki K, Ogawa W, Miki T, Sakaue M, Tsukamoto K และอื่นๆ ระเบียบของเมลาโนเจเนซิสผ่าน phosphatidylinositol 3-kinase-Akt pathway ในเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด G361 ของมนุษย์ เจ อินเวส เดอร์มาทอล 2543;115(4):699–703.

45. Busca R, Ballotti R. Cyclic AMP เป็นผู้ส่งสารหลักในการควบคุมการสร้างเม็ดสีผิว เม็ดสีเซลล์ Res. 2543;13(2):60–9.

46 Shibahara S, Takeda K, Yasumoto K, Udono T, Watanabe K, Saito H, Takahashi K. ปัจจัยการถอดความที่เกี่ยวข้องกับ Microphthalmia (MITF): หลายหลากในโครงสร้าง หน้าที่ และการควบคุม J Invest Dermatol Symp Proc/Soc Invest Dermatol, Inc [และ] Eur Soc Dermatol Res. 2544;6(1):99–104.

47. Lee JY, Choi HJ, Chung TW, Kim CH, Jeong HS, Ha KT Caffeic Acid Phenethyl Ester ยับยั้ง Alpha-Melanocyte ที่กระตุ้นการสังเคราะห์เมลานินที่เกิดจากฮอร์โมน ผ่านการยับยั้งกิจกรรม Transactivation ของ Microphthalmia Associatet Transcription Factor เจ ณัฐ โปรดัก. 2556;76(8):1399–405.

48. Huang GJ, Huang SS, Lin SS, Shao YY, Chen CC, Hou WC, Kuo YH ฤทธิ์ระงับปวดและกลไกการต้านการอักเสบของ ergostatrien-3beta-ol จาก Antrodia camphorate จมอยู่ในน้ำซุปทั้งตัวในหนู J Agric Food Chem. 2553;58(12):7445–52.

49. Tsai TC, Tung YT, Kuo YH, Liao JW, Tsai HC, Chong KY, Chen HL, Chen CM ฤทธิ์ต้านการอักเสบของ Antrodia camphorate ซึ่งเป็นยาสมุนไพรในแบบจำลองผิวหนังขาดเลือดของหนู เจ เอ็ทโนฟาร์มาคอล. 2558;159:113–21.

For more information:1950477648nn@gmail.com