เมลาโทนินป้องกันการแทรกซึมของ T Lymphocyte ไปยังไตของหนูที่มีความดันโลหิตสูงซึ่งเกิดจากอาหารที่มีเกลือสูงโดยการป้องกันการแสดงออกของ CXCR3 Ligand Chemokines
Mar 14, 2022
สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม:ali.ma@wecistanche.com
Ariel Bier1, รวัน คชาบ2, เยโฮนาตัน ชาราบี1,2,3, เอฮุด กรอสแมน1,2,3และอัฟชาลอม ไลโบวิทซ์1,2,3,*
1Medicine D, ศูนย์การแพทย์ Chaim Sheba, Tel-Hashomer 5262000, อิสราเอล; arielbier@gmail.com (AB);Yehonatan.Sharabi@sheba.health.gov.il (YS); Ehud.Grossman@sheba.health.gov.il (เช่น)2 Hypertension Unit, the Chaim Sheba Medical Center, Tel-Hashomer 5262000, Israel;rawankhasbab@gmail.com3คณะแพทยศาสตร์ Sackler Tel-Aviv University, Tel-Aviv 6997801 ประเทศอิสราเอล*
บทคัดย่อ: ในการศึกษาก่อนหน้านี้ เราแสดงให้เห็นว่าเมลาโทนินป้องกันไตความเสียหายในแบบจำลองความดันโลหิตสูงที่เกิดจากเกลือโดยการลดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน เราตั้งสมมติฐานว่าผลกระทบนี้เกี่ยวข้องกับคุณสมบัติของภูมิคุ้มกันของเมลาโทนิน ในหนูทดลองที่ไวต่อเกลือ (DSS) ใน vivo Study-Dahl ได้รับอาหารเชาปกติ อาหารที่มีเกลือสูง (HSD) หรือ HSD และเมลาโทนิน(30 มก./กก./วัน) ในน้ำเป็นเวลาแปดสัปดาห์ไตถูกเก็บเกี่ยวสำหรับการแยกลิมโฟไซต์ทันทีและการกำหนดคุณลักษณะโดยโฟลว์ ไซโตเมทรี (CD3 บวก CD4 บวก และ CD3 บวก CD8 บวก ) และสำหรับลิมโฟไซต์ คีโมแอตแทรคแคนต์ (ส่วนใหญ่เป็น CXCLคีโมไคน์) การศึกษาการแสดงออกของยีน หนูทดลองในหลอดทดลอง เซลล์ mesangial (RMC) ถูกเพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีเกลือสูงโดยไม่มีและเมลาโทนิน. HSD เกี่ยวข้องกับการกรองไตที่มีนัยสำคัญของ CD4 บวกและ CD8 บวกทีลิมโฟไซต์ที่เปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม เมลาโทนินลดการแทรกซึมของลิมโฟไซต์ของไตอย่างมีนัยสำคัญ HSD เพิ่มการแสดงออกของ mRNA ของ CXCL . อย่างมีนัยสำคัญคีโมไคน์.การเพิ่มเมลาโทนินใน HSD ได้ยกเลิกผลกระทบนี้ การบำบัดเซลล์ RMC ด้วยเกลือเพิ่มการแสดงออกของ CXCL10 และ CXCL11 แต่ไม่ใช่ CXCL9 กำลังเพิ่มเมลาโทนินเพื่อป้องกันไม่ให้สื่อวัฒนธรรมเพิ่มขึ้นนี้ การรักษาหนูที่ได้รับ HSD ด้วยเมลาโทนินลดการแสดงออกของ chemoattractantmRNA ของไตในไต และสัมพันธ์กับการลดการแทรกซึมของ T lymphocyte ของไตอย่างมีนัยสำคัญ เกลืออาจมีผลโดยตรงต่อเซลล์ไตที่ผลิตคีโมไคน์ ซึ่งลดทอนลงโดยการรักษาด้วยเมลาโทนิน
คำสำคัญ:เมลาโทนิน; เกลือ; ที-ลิมโฟไซต์; ความดันโลหิตสูงไต; CXCL 9; CXCL 10; CXCL 11
1. บทนำ
ความดันโลหิตสูง (HTN) เป็นปัจจัยเสี่ยงโรคหัวใจและหลอดเลือดชั้นนำที่ปรับเปลี่ยนได้ เนื่องจากประชากรสูงอายุ ความชุกของ HTN เพิ่มขึ้นอย่างต่อเนื่อง โดยสูงถึง 30 เปอร์เซ็นต์ในขั้นสูง [1] แม้จะมีตัวเลือกการรักษาทางการแพทย์ที่หลากหลาย แต่การควบคุม HTN ทั่วโลกนั้นไม่ดี ผลที่ตามมาของ HTN ที่ไม่สามารถควบคุมได้นั้นสร้างความเสียหายอย่างรุนแรง ก่อให้เกิดผลกระทบด้านลบอย่างใหญ่หลวงต่อสุขภาพของประชาชน [2]
ปัจจัยทางพฤติกรรม สิ่งแวดล้อม และพันธุกรรมต่างๆ เกี่ยวข้องกับการเกิดโรคของ HTN ปริมาณเกลือที่สูงในอาหารตะวันตกมีส่วนเกี่ยวข้องกับ HTN และเกี่ยวข้องกับการเจ็บป่วยและการตายที่เพิ่มขึ้น แนวทางและการประชาสัมพันธ์แนะนำให้ลดการบริโภคเกลือสำหรับประชากรทั่วไป อย่างไรก็ตาม ไม่ใช่ทุกรายที่จะได้รับประโยชน์จากข้อจำกัดนี้ เนื่องจากพยาธิสรีรวิทยาที่เชื่อมต่อความไวของเกลือกับ HTN นั้นยังไม่เป็นที่เข้าใจอย่างถ่องแท้และต้องการความเข้าใจเชิงกลไกที่ดีขึ้น [3] ดังนั้น กลยุทธ์ใหม่จึงมีความสำคัญอย่างยิ่งต่อการทำความเข้าใจและควบคุม HTN ที่ดีขึ้น ทำให้กระบวนทัศน์การวิจัยใหม่มีความจำเป็นในทันที
พบว่าการอักเสบและความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันมีส่วนเกี่ยวข้องกับการเกิดโรคของ HTN ที่จำเป็น ขณะค้นคว้าหาตัวกระตุ้นที่เริ่มต้นและดำเนินการตามกระบวนการเหล่านี้ แบบจำลอง HTN เชิงทดลองจำนวนมากแนะนำถึงการมีส่วนร่วมของการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันแบบปรับตัว [4]
คลิกเพื่อประโยชน์ของ Cistanche และผลข้างเคียงสำหรับการทำงานของไต
เบาะแสที่เชื่อมโยงภูมิคุ้มกันแบบปรับตัวเข้ากับ HTN นั้นมีอยู่แล้วตั้งแต่ทศวรรษ 1960 อย่างไรก็ตาม เมื่อไม่นานมานี้ ด้วยความเข้าใจในระบบภูมิคุ้มกันที่ดีขึ้น ความก้าวหน้าก็สามารถทำได้ในทิศทางนี้ การศึกษาบุกเบิกโดย Guzik et al. แสดงให้เห็นว่าเกลือ HTN ของ angiotensin (Ang) II หรือ deoxycorticosterone (DOC) ถูกทำให้ทู่ใน rag1−/−mice ซึ่งขาด T และ B lymphocytes และการถ่ายโอนแบบรับเอา T แต่ไม่ใช่เซลล์ B สามารถฟื้นฟูการตอบสนองของ BP [5] ตั้งแต่บทความนี้ พบว่าองค์ประกอบภูมิคุ้มกันแบบรับเลี้ยงบุตรบุญธรรมต่างๆ มีความเกี่ยวข้องกับการเกิดโรคของ HTN ในแบบจำลองสัตว์ทั่วไปส่วนใหญ่ บทบาทของทีเซลล์ในแบบจำลอง HTN ที่เหนี่ยวนำด้วยเกลือยังได้รับการศึกษาอย่างกว้างขวางอีกด้วย การศึกษาในหลอดทดลองแสดงให้เห็นว่าเกลืออาจผลักความแตกต่างของทีเซลล์ไร้เดียงสาไปเป็น TH17cells [6] การทำงานในร่างกายจำนวนมากในแบบจำลอง HTN ที่เหนี่ยวนำด้วยอาหารที่มีเกลือสูง (HSD) เช่น หนูที่ไวต่อเกลือของ Dhal (DSS) แสดงการแทรกซึมของ T เซลล์ของไตอย่างกว้างขวาง [7–9]
ท่ามกลางกระบวนการทางสรีรวิทยามากมายเมลาโทนินการมีส่วนร่วมกับการควบคุมความดันโลหิตค่อนข้างง่าย รูปแบบของความดันโลหิตในช่วงกลางวันสนับสนุนให้มีการวิจัยอย่างกว้างขวางเกี่ยวกับเมลาโทนินและ HTN ผลงานมากมายในอดีต ในมนุษย์และในแบบจำลองการทดลอง เชื่อมโยงระดับเมลาโทนินต่ำกับ HTN [10] มีข้อมูลทางคลินิกบางอย่างที่ชี้ให้เห็นว่าการเสริมเมลาโทนินอาจรักษา HTN ได้ ส่วนใหญ่สำหรับผู้ป่วยที่มี HTN ตอนกลางคืน [11] อย่างไรก็ตาม ความไม่สอดคล้องกันของข้อมูลเหล่านี้ทำให้เกิดคำถามว่าคุณสมบัติของเมลาโทนินที่ไม่ใช่ circadian มีส่วนเกี่ยวข้องกับการควบคุมความดันโลหิตด้วยหรือไม่
คุณสมบัติต้านการอักเสบและต่อต้านอนุมูลอิสระของเมลาโทนินได้แนะนำว่าเมลาโทนินมีปฏิสัมพันธ์กับระบบภูมิคุ้มกัน ข้อมูลที่เกิดขึ้นใหม่ได้เกี่ยวข้องกับบทบาทของการส่งสัญญาณเมลาโทนินในการพัฒนาทีเซลล์ การกระตุ้น การแยกความแตกต่าง และหน่วยความจำ มีหลักฐานว่าเมลาโทนินเมมเบรนและตัวรับนิวเคลียร์มีอยู่ในทีเซลล์ [12,13]เมลาโทนินส่งผลกระทบต่อการผลิตไซโตไคน์จำนวนมากที่เกี่ยวข้องกับการตอบสนองทางภูมิคุ้มกัน เช่น อินเตอร์เฟอรอน (IFN) ซึ่งเป็นตัวควบคุมเดือยของการตอบสนองของ Th1 [14]
นักวิจัยบางคนกล่าวว่าความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและการตอบสนองของทีเซลล์ทำงานร่วมกันเพื่อส่งเสริมการพัฒนาของ HTN และความเสียหายจากความดันโลหิตสูงของอวัยวะ [15] ในงานก่อนหน้านี้เราแสดงให้เห็นว่าเมลาโทนินลดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันในท้องถิ่น (ไต) และป้องกันการพังผืดของไตที่เกิดจากเกลือและโปรตีนในปัสสาวะในแบบจำลองหนู HTN ที่ไวต่อเกลือ (แบบจำลอง DSS) [16] เนื่องจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันมีบทบาทสำคัญในการตอบสนองของภูมิคุ้มกันแบบปรับตัวที่เกี่ยวข้องกับ HTN เราจึงตั้งสมมติฐานว่าคุณสมบัติทางภูมิคุ้มกันของเมลาโทนินมีหน้าที่ในการป้องกันใน HTN ที่เกิดจาก HSD
จุดมุ่งหมายของการศึกษานี้คือการประเมินว่าเมลาโทนินลดการตอบสนองของเซลล์ T ที่เกิดจากเกลือและเพื่ออธิบายกลไกที่รับผิดชอบต่อผลกระทบนี้
2. วัสดุและวิธีการ
2.1. พิธีสารเกี่ยวกับสัตว์และการศึกษา
โปรโตคอลการศึกษาได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการจริยธรรมสัตว์สถาบันในศูนย์การแพทย์ Sheba ในอิสราเอล สภาพสุขภาพของพวกมันได้รับการตรวจสอบโดยการวัดน้ำหนักตัวและการสังเกตทั่วไปรายวันสำหรับการเคลื่อนไหวและสภาวะสุขภาพของสัตว์แต่ละตัว หนูที่ไวต่อเกลือของ Dahl เพศผู้อายุสี่สัปดาห์ (RGD Cat# 1582190, RRID: RGD_1582190) คือ ตั้งอยู่ในสถานเลี้ยงสัตว์ในกรงปกติ (หนูสองตัวต่อกรง) ที่อุณหภูมิ 22 ◦C โดยมีวัฏจักรมืด 14 ชั่วโมง/10 ชั่วโมง หนูถูกเลี้ยงด้วยอาหารเกลือตามปกติและได้รับน้ำประปาเพื่อดื่มโดยไม่จำเป็นเป็นระยะเวลาห้าวัน จากนั้นหนูถูกแบ่งออกเป็นสามกลุ่ม (n=8) ตามอาหารในช่วง 8 สัปดาห์ ตามรายงานของคณะกรรมการจริยธรรม สัตว์ที่แสดงอาการป่วยและความทุกข์ทรมานจะต้องเสียสละ
กลุ่มควบคุมได้รับอาหารหนูทดลองมาตรฐาน (2018 SC; Teklad Envigo, Madison, WI, USA) และน้ำประปา; กลุ่มอาหารที่มีเกลือสูง (HSD) ได้รับอาหารที่มีเกลือเสริมที่เข้าคู่กัน (4 เปอร์เซ็นต์) (TD.120485; Teklad Envigo, Madison, WI, USA) และน้ำประปา และเมลาโทนินกลุ่มได้รับอาหารเกลือเสริม (ร้อยละ 4 ) ร่วมกับเมลาโทนิน (M5250; Sigma, Rehovot,Israel) (30 มก./กก./วัน) ในน้ำดื่ม วัดปริมาณการใช้น้ำและน้ำหนักตัวเป็นระยะ ปริมาณเมลาโทนินที่ถูกต้องถูกละลายในความต้องการน้ำที่ตรงกันต่อแต่ละกรงเพื่อส่งปริมาณที่ถูกต้องสำหรับสัตว์แต่ละตัว วันที่ศูนย์ถูกกำหนดเป็นวันที่เริ่มต้นการบริโภค HSD และเมลาโทนิน ในตอนท้ายของการศึกษา หนูถูกสังเวยโดยการดมยาสลบด้วยไอโซฟลูเรน 3 เปอร์เซ็นต์ (ความลึกของการดมยาสลบยืนยันโดยการบีบเท้าด้านหลัง) และไตถูกเก็บเกี่ยว ไตทั้งสองถูกเอาออกและผ่าครึ่ง ไตถูกนำไปวิเคราะห์โฟลว์ไซโตเมทรี ยกเว้นหลายส่วนซึ่งถูกนำออกอย่างรวดเร็วและแช่แข็งสแน็ปในของเหลว N2 และเก็บไว้ที่ −80 ◦C เนื้อเยื่อแช่แข็งถูกใช้สำหรับการสกัดอาร์เอ็นเอ
อาการโรคไต-ไต
2.2. PCR การถอดความเชิงปริมาณแบบเรียลไทม์แบบเรียลไทม์ PCR
ตรวจสอบระดับการแสดงออกของ mRNA ของยีนในไตเนื้อเยื่อโดยเรียลไทม์เชิงปริมาณ reverse transcriptase-PCR (qRT-PCR) RNA ทั้งหมดถูกสกัดจากเนื้อเยื่อไตโดยใช้ NucleoSpin RNA Kit (MACHERY-NAGEL, Düren, Germany) ทำการถอดรหัสย้อนกลับโดยใช้ Applied Biosystems High-Capacity cDNAReverse Transcription Kit (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) ปฏิกิริยา qRT-PCR ดำเนินการโดยใช้ Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Warrington, UK) และระบบ Applied Biosystems 7500 แบบเรียลไทม์ สภาพการปั่นคือ: ขั้นตอนเดียวครั้งแรกที่ 95 ◦C เป็นเวลา 0.20 นาที จากนั้น 40 รอบของระยะหลอมเหลวเป็นเวลา 3 วินาทีที่ 95 ◦C และระยะที่ขยาย 30 วินาทีที่ 60 ◦C ที่จุดสิ้นสุดของรอบ 40 รอบ ขั้นเส้นโค้งหลอมเหลวถูกดำเนินการ ยูนิตย่อยโปรตีนไรโบโซมที่ก้านด้านข้าง P0 (Rplp0) mRNA ถูกใช้เป็นตัวควบคุมภายใน ไพรเมอร์แสดงอยู่ในตารางที่ 1
ตารางที่ 1. รายชื่อไพรเมอร์หนูที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้
2.3. การแยก T Cells จากไต
หลังจากถอดแคปซูลไตทั้งสองไตถูกบดและล้อด้วยปลายกระบอกฉีดของหลอดฉีดยา 2 มล. ผ่านตัวกรองเซลล์ 100 µm ใน RPMI 1640 ที่มี 2 mML-กลูตามีน, 10 เปอร์เซ็นต์ FBS, 10 ug/mL DNase 1 (เทคโนโลยีเซลล์ต้นกำเนิด, เคมบริดจ์, แมสซาชูเซตส์ สหรัฐอเมริกา)และคอลลาเจนประเภท 0.1 เปอร์เซ็นต์ชนิด IV (CLS 4, Worthington Decatur, AL, USA) สารละลายถูกบ่มเป็นเวลา 25 นาทีที่ 37 ◦C สารละลายสำหรับล้าง (DPBS/2 เปอร์เซ็นต์ FBS/2 mM EDTA) ถูกเติมไปยังโฮโมจีเนตของไตเพื่อให้ได้ 45 มล. และถูกกรองผ่านเซลล์เทรนเนอร์ 70 ไมโครเมตร สารละลายถูกหมุนเหวี่ยงที่ 400× g/7 นาที และเม็ดถูกแขวนลอยในสารละลายล้าง 5 มล. และกรองผ่านตัวกรองเซลล์ขนาด 40 ไมโครเมตรและล่าสุด 400× g/7 นาที เม็ดถูกแขวนลอยใหม่ใน 3 มล. FBS (10 mM EDTA) และซ้อนทับ Histopaque-1083 (Sigma, Rehovot, Israel) และหมุนเหวี่ยงที่ 20 ◦C ที่ 400× g/30 นาทีโดยที่เบรกถูกปิด ชั้นเซลล์โมโนนิวเคลียร์ที่วางอยู่เหนือฮิสโทปาคถูกเอาออก ล้างด้วยสารละลายซักสองครั้ง และแขวนลอยในสารละลายล้างขนาด 5 มล. สำหรับการวิเคราะห์โฟลว์ไซโทเมตริก
2.4. Flow Cytometry
จากแต่ละกลุ่มไตวิเคราะห์หนูตั้งแต่ 5-7 ตัว สำหรับแต่ละตัวอย่าง 1 × 106 เซลล์ถูกถ่าย เซลล์โมโนนิวเคลียร์ที่แยกออกมาถูกฟักด้วยเครื่องหมายภายนอกเซลล์: แอนติ-CD3 (Thermo Fisher Scientific Cat# 12-0030-82, RRID:AB_465493) และกลุ่มควบคุมไอโซไทป์ของมัน (Thermo Fisher Scientific Cat# 12-4742-41, RRID :AB_10753770), แอนติ-CD4 (Thermo FisherScientific Cat# 17-0040-80, RRID:AB_1210581) และกลุ่มควบคุมไอโซไทป์ของมัน (Thermo Fisher Scientific Cat# 17-4724-81, RRID: AB_470188), แอนติ-CD8 (Thermo Fisher Scientific Cat# 25-0084-82, RRID:AB_10548361) และกลุ่มควบคุมไอโซไทป์ของมัน (Thermo Fisher Scientific Cat# 25-4714-80, RRID: AB_657914). เซลล์ทั้งหมดถูกวิเคราะห์โดยโฟลว์ไซโตเมทรี (BD FACSCalibur Flow Cytometry System, RRID: SCR_000401) โดยใช้ซอฟต์แวร์ FlowJo (FlowJo, RRID: SCR-008520)
การทำงานของไตและไต
2.5. การเพาะเลี้ยงเซลล์
สายเซลล์ของหนูที่มีเซลล์ mesangial, RMC (ATCC Cat# CRL{{0}}, RRID: CVCL_0506), ถูกหาได้จาก ATCC® เซลล์ถูกเพาะเลี้ยงในตัวกลาง Eagle ดัดแปลงของ Dulbecco (01-055-1A, อุตสาหกรรมชีวภาพ, Beit HaEmek, อิสราเอล) ด้วย 4 mM L-glutamine ปรับให้มีโซเดียมไบคาร์บอเนต 1.5 g/L และกลูโคส 4.5 g/L และเสริมด้วย 0.4 มก./มล.418 และ 15 เปอร์เซ็นต์ของซีรั่มวัวในครรภ์ เมลาโทนินได้มาจากซิกมา (M5250 Rehovot ประเทศอิสราเอล) A 250 mMเมลาโทนินสต็อกทำในเอทานอล เซลล์ถูกเพาะเลี้ยงในสภาวะปกติหรือเกลือสูง (เติม NaCl 80 มิลลิโมลาร์ให้กับอาหารเลี้ยงเชื้อ) โดยไม่มีหรือด้วยเมลาโทนิน(0.5 มิลลิโมลาร์) การรักษาเมลาโทนินใช้เวลา 45 นาทีก่อนที่จะเติม NaCl ลงในอาหาร การทดลองทั้งหมดอยู่ในเพลต 6 หลุมที่มี 3 × 105 เซลล์ต่อหลุมและดำเนินการโดยการทดลองอิสระ 6 การทดลอง
2.6. การวิเคราะห์ทางสถิติ
ข้อมูลแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SEM การวิเคราะห์ทางสถิติดำเนินการโดยใช้สถิติ IBMSPSS, RRID: SCR_019096 การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) และวิธีการ posthoc Tukey ตรวจสอบความแตกต่างระหว่างกลุ่ม ข้อมูล qPCR แบบเรียลไทม์ถูกวิเคราะห์โดยใช้ DataAssist, RRID: SCR_014969
3. ผลลัพธ์
3.1. เมลาโทนินปกป้องหนูที่บริโภคHSD
หนูอายุระหว่างการศึกษานี้คือ 4-13 สัปดาห์ ในวัยนี้ สวัสดิภาพของหนูแสดงให้เห็นโดยการเพิ่มน้ำหนักซึ่งแสดงโดยกลุ่มควบคุม [17] อย่างไรก็ตาม HSDgroup มาถึงที่ราบสูงในวันที่ 30 และการเพิ่มของเมลาโทนินเพื่อแก้ไข HSD ปรากฏการณ์นี้ (รูปที่ 1A) กลุ่ม HSD มีอัตราการตายสูง โดย 50% ของหนูตายหรือมีอาการทางคลินิกที่จำเป็นต้องทำการุณยฆาตตามกฎของคณะกรรมการจริยธรรมของสัตว์ ในช่วงระยะเวลาทดลอง อาหารเสริมเมลาโทนินป้องกันการตายของหนูอย่างมีนัยสำคัญ โดยมีเพียงหนึ่งในแปดหนูที่เสียชีวิตในวันที่ 58 เมื่อสิ้นสุดระยะเวลาทดลอง (รูปที่ 1B)
รูปที่ 1.เมลาโทนินความดันโลหิตดีขึ้นและการรอดชีวิตใน HSD หนู DSS ได้รับการรักษาเป็นเวลา 9 สัปดาห์ด้วย HSD โดยมีและไม่มีเมลาโทนิน การรับประทานอาหารที่มีเกลือสูงทำให้น้ำหนักตัวลดลงจากวันที่ 36 และเมลาโทนินก็ลดผลกระทบนี้ (A) HSD เพิ่มอัตราการเสียชีวิตจากวันที่ 40 การรักษา HSD-fedrats ด้วยเมลาโทนินช่วยเพิ่มอัตราการรอดชีวิต (ข). (n=8) *-p น้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.05 เกลือและเกลือบวกเมลาโทนินกับกลุ่มควบคุม #-p เกลือน้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.05 เทียบกับกลุ่มควบคุมและเกลือบวกเมลาโทนิน HSD—อาหารที่มีเกลือสูง
3.2. เมลาโทนินป้องกันการแทรกซึมของไต T Cell ที่เหนี่ยวนำโดยHSD
เราแยกเซลล์ออกจากไตและล้อมรั้วไว้กับเครื่องหมายทีเซลล์ CD3 CD3 บวกเซลล์ถูกปิดกั้นเป็น CD4 และ CD8 ทั้ง CD3 บวก CD4 plus และ CD3 บวก CD8 plus มีค่า HSD สูงกว่าอย่างมีนัยสำคัญ (5.18 ± 1.62 และ 4.6 ± 0.75 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ) เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม (0.16 ± {{18} }.{{20}}2 และ 0.95 ± 0.15 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ) และเมลาโทนินการเสริม HSD ลดลงทั้ง CD3 บวก CD4 plus และ CD3 บวก CD8 plus เซลล์กลับสู่ระดับการควบคุม (0.68 ± 0.21 และ 1.37 ± 0.45 ตามลำดับ) (รูปที่ 2A–D).
รูปที่ 2 เมลาโทนินป้องกันการแทรกซึมของทีเซลล์ไปยังไต. ทีเซลล์ถูกแยกออกจากไตของหนูและถูกปิดกั้นสำหรับ CD3 ซีดี3-เซลล์ที่เป็นบวกถูกเกตสำหรับ CD4 และ CD8 เมลาโทนิน (C) ลดทั้ง CD3 plus CD4 plus และ CD3 plus CD8 plus เมื่อเปรียบเทียบกับ HSD ที่ไม่มีเมลาโทนิน (B) โดยไม่มีความแตกต่างจากกลุ่มควบคุม (A) การวิเคราะห์หนูทุกตัวแสดงใน (D) (n=7–8) HSD—อาหารที่มีเกลือสูง *-p น้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.05 เทียบกับกลุ่มควบคุม #-p น้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.05 เมื่อเทียบกับเกลือและเมลาโทนิน
3.3. เมลาโทนินช่วยลดคีโมไคน์ในไตบางชนิดซึ่งถูกควบคุมในHSD
การจัดหาทีเซลล์ไปยังเนื้อเยื่ออักเสบถูกควบคุมโดยการแสดงออกของคีโมไคน์เฉพาะที่ ดังนั้นเราจึงวัดการแสดงออกของสองตระกูลคีโมไคน์ใน .ของหนูไต: ลิแกนด์ของคีโมไคน์ (CXC motif) ลิแกนด์ (CXCL) และตระกูลลิแกนด์ของคีโมไคน์ (C-Cmotif) (CCL)
สำหรับตระกูล CXCL CXCL 9, 10 และ 11 ซึ่งดึงดูด T เซลล์ไปยังเนื้อเยื่อเป้าหมายโดยใช้ตัวรับ CXCR3 บนเซลล์ T ได้รับการควบคุมอย่างมีนัยสำคัญในหนูแรท HSD การเสริมของเมลาโทนินไปที่ HSD ลดการแสดงออกของพวกเขากลับไปที่ระดับการควบคุม ตรวจพบรูปแบบเดียวกันสำหรับ CXCL 1 และ 16 อย่างไรก็ตาม สำหรับ CXCL12 ไม่พบการเพิ่มขึ้นใน HSD (รูปที่ 3A)
สำหรับแฟมิลี CCL CCL 2, 4, 12, 17, 19 และ CX3CL1 ไม่มีการควบคุมใน HSD.CCL3 ถูกควบคุมใน HSD แต่ไม่พบการเปลี่ยนแปลงที่มีนัยสำคัญด้วยการเพิ่มเมลาโทนินในอาหาร สำหรับ CCL7 การปรับขึ้นที่สำคัญใน HSD และการปรับลดอย่างมีนัยสำคัญด้วยการเพิ่มเมลาโทนินตรวจพบ HSD (รูปที่ 3B)
รูปที่ 3 Upregulation ของไตคีโมไคน์ใน HSD ที่มีและไม่มีเมลาโทนิน การแสดงออกของลิแกนด์แฟมิลีของคีโมไคน์ (CXC โมทีฟ) ลิแกนด์ (CXCL) (A), ตระกูลลิแกนด์ของคีโมไคน์ (CC โมทีฟ) และ CX3CL1 (B) ถูกกำหนดหาในหนูแรท (n=7–8) *-p น้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.05 เทียบกับกลุ่มควบคุม #-p น้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.05 เมื่อเทียบกับเกลือและเมลาโทนิง HSD—อาหารที่มีเกลือสูง
3.4. ผลกระทบโดยตรงของเมลาโทนินต่อ RMC Mesangial Cell Line
จากนั้นเรามุ่งเน้นไปที่ CXCL9, 10 และ 11 ซึ่งดึงดูด T เซลล์โดยจับกับตัวรับ CXCR3 เรากำหนดการแสดงออกของสิ่งเหล่านี้คีโมไคน์ในเซลล์ RMC ซึ่งเป็นเซลล์เซลล์ mesangial ของหนู
เราบำบัดเซลล์ด้วย 80 mM NaCl ที่ไม่มีและ 0.5 mMเมลาโทนิน. ความเข้มข้นของ NaCl นี้เพิ่มการแสดงออกของ CXCR10 อย่างมีนัยสำคัญ 2.4 ± 026-เท่าเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม และการเพิ่ม 0.5 mM เมลาโทนินลดลงอย่างมีนัยสำคัญ นิพจน์นี้เป็น 1.4 ± 0.{{10}}เท่าเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม (รูปที่ 4A) สำหรับ CXCL11, 80 mM NaCl เพิ่มการแสดงออกอย่างมีนัยสำคัญ 3 ± 0.48-เท่าเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม และการเพิ่ม 0.5 mM เมลาโทนินทำให้การแสดงออกนี้ลดลงอย่างมีนัยสำคัญเป็น 1.8 ± 0{{22 }}เท่าเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม (รูปที่ 4B) ไม่พบ CXCL9 ในเซลล์ RMC
รูปที่ 4. เกลือเพิ่มการแสดงออกของ CXCL10 และ CXCL11 ในสายเซลล์ mesangial โดยที่เมลาโทนินทรีตเมนต์ปรับลดการแสดงออกของมัน RMC (สายเซลล์ mesangial ของหนูแรท) ถูกบำบัดด้วยเกลือ80 มิลลิโมลาร์ โดยมีและไม่มีเมลาโทนิน 0.5 มิลลิโมลาร์ CXCL10 (A) และ CXCL11 (B) ถูกปรับเพิ่มโดยการบำบัดด้วยเกลือและการเติมเมลาโทนินลดการปรับขึ้นนี้ กราฟแสดงการทดลองอิสระ 6 ครั้ง *-p น้อยกว่าหรือเท่ากับ 0001 เทียบกับกลุ่มควบคุม #-p น้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.005 เทียบกับเกลือ 80 mM และเมลาโทนิน 0.5 mM $-p น้อยกว่าหรือเท่ากับ 0.05 เทียบกับเกลือ 80 mM และเมลาโทนิน 0.5 mM
4. การอภิปราย
ผลประโยชน์ของเมลาโทนินเกี่ยวกับ HTN ได้แสดงให้เห็นในการศึกษาก่อนหน้านี้ และถูกเสนอแนะว่าเป็นแนวทางปฏิบัติที่เป็นไปได้สำหรับ HTN ที่ดื้อการรักษา [18] ในการศึกษาครั้งแรก เราเน้นที่ความเครียดออกซิเดชันและเปิดเผยว่าเมลาโทนินช่วยลดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันที่เกิดจาก HSD ในการศึกษานี้ เรามุ่งเน้นไปที่ผลภูมิคุ้มกันแบบปรับตัว และแสดงให้เห็นว่าเมลาโทนินช่วยเพิ่มอัตราการรอดชีวิตของหนูที่ได้รับ HSD ผลกระทบนี้สัมพันธ์กับการลดลงของทีเซลล์ที่แทรกซึมเข้าไปในไตและการปรับลดของไตการแสดงออกของคีโมไคน์
ข้อมูลในอดีตแสดงให้เห็นว่าหนู DSS ที่บริโภค HSD จะพัฒนา HTN ที่รุนแรงและมีอัตราการตายที่สูงขึ้น [19] ดาห์ลรายงานขณะสร้างแบบจำลองว่าเมื่อหนู DSS ถูกวางบน HSD (8 เปอร์เซ็นต์ NaCl) เมื่อหย่านม (อายุ 21–23 วัน) พวกมันพัฒนา HTN อย่างรวดเร็วและทั้งหมดเสียชีวิตในสัปดาห์ที่ 16 ของการให้อาหารเกลือ [20] ภายหลังหลังจากการปรับเปลี่ยนความเครียด Rapp et al. รายงานว่าหนูทั้งหมดตายภายในแปดสัปดาห์ของ HSD (8 เปอร์เซ็นต์ NaCl) [21] หนูในการศึกษาของเรามีอัตราการตายสูง แต่ยังไม่ถึง 100 เปอร์เซ็นต์ อาจเป็นเพราะเกลือในอาหารของพวกเขามีเปอร์เซ็นต์ที่ต่ำกว่า (4 เปอร์เซ็นต์) อย่างไรก็ตาม เห็นได้ชัดว่าเมลาโทนินเสริมอย่างมีนัยสำคัญป้องกันการตายของหนู.
การเพิ่มน้ำหนักเป็นเครื่องหมายของความเป็นอยู่ที่ดีของหนูเมื่ออายุ 4-13 สัปดาห์ DSS ratsoriginate จาก Sprague Dawley ซึ่งเป็นสายพันธุ์ที่มีลักษณะเฉพาะ ตอนอายุของหนูที่เราใช้ในการทดลอง หนูควรจะมีน้ำหนักเพิ่มขึ้นอย่างสม่ำเสมอ [22] ในการศึกษาในสัตว์ทดลองจำนวนมาก การลดน้ำหนักถือเป็นหนึ่งใน "จุดสิ้นสุด" ของการทดลอง [23] จากการศึกษาหลายชิ้น เป็นที่ชัดเจนว่า HSD ในหนู DSS ส่งผลให้น้ำหนักตัวเพิ่มขึ้นเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม [24,25] สอดคล้องกับการศึกษาเหล่านี้ เรายังสังเกตความแตกต่างของน้ำหนักระหว่างกลุ่ม ที่นี่หนูไม่ได้รับน้ำหนักหลังจาก HSD สี่สัปดาห์ เมลาโทนินหยุดผลกระทบของ HSD เช่นกัน เนื่องจากหนูที่ได้รับการรักษาด้วยเมลาโทนินยังคงมีน้ำหนักเพิ่มขึ้น แม้ว่าจะน้อยกว่ากลุ่มควบคุมก็ตาม
ความสามารถของเมลาโทนินเพื่อลดความดันโลหิตในสัตว์จำลองถูกค้นพบในช่วงปลายศตวรรษที่ 20 [26] ตั้งแต่นั้นมา มีรายงานในแบบจำลองอื่นๆ อีกหลายแบบ เช่น อาหารที่มีฟรุกโตสสูงทำให้เกิดกลุ่มอาการเมตาบอลิซึมในหนูที่มีความดันโลหิตสูงตามธรรมชาติ [29,30] การศึกษาของเราในด้านนี้เป็นครั้งแรกที่แสดงให้เห็นว่าเมลาโทนินมีบทบาทใน HTN ที่เกิดจากเกลือโดยการป้องกันความเสียหายของอวัยวะและลดอัตราการตาย
ในการศึกษานี้ เราได้แสดงให้เห็นว่า HSD ทำให้เกิดการแทรกซึมของ T ลิมโฟไซต์ไปยังไตกระบวนการที่อธิบายไว้ในหนู DSS ส่วนใหญ่โดยกลุ่มของ Mattson [31-13] บทบาทสำคัญของกระบวนการแทรกซึมนี้ในแบบจำลอง DSS ได้แสดงให้เห็นโดยการศึกษาแบบ arecent ซึ่งสังเกตว่าหนู DSS ที่ขาด T-cell ได้รับการปกป้องจาก HTN ที่เหนี่ยวนำโดย HSD และการถ่ายโอนเซลล์ม้ามทำให้ HTN ไวต่อเกลือรุนแรงขึ้น [34]
เมลาโทนินสามารถส่งผลต่อทีเซลล์ในด้านต่างๆ (สำหรับการทบทวน ดู [35]) การศึกษาครั้งนี้ได้แสดงให้เห็นเป็นครั้งแรกว่าเมลาโทนินลดแรงดึงดูดของทั้ง CD4 plus และ CD8 plus Tcells ลงสู่ไตใน HSD ผลกระทบของเมลาโทนินนี้อาจเป็นกลไกที่เน้นย้ำถึงผลที่เป็นประโยชน์ในแบบจำลองนี้
ความสามารถของเมลาโทนินในการลดการแทรกซึมของทีเซลล์ได้รับการอธิบายไว้ในแบบจำลองหนูทดลองโรคไข้สมองอักเสบจากภูมิต้านตนเอง (EAE) ใน EAE แสดงเมลาโทนินเพื่อลดการแทรกซึมของ CD4 บวก T เซลล์และเซลล์ Th17 เข้าไปใน CNS [36,37]
แรงดึงดูดของทีเซลล์ไปยังเนื้อเยื่อเฉพาะนั้นส่วนใหญ่ควบคุมโดยความเข้มข้นสูงในท้องถิ่นของคีโมไคน์ซึ่งเป็นไซโตไคน์เคมีที่ควบคุมรูปแบบการอพยพและการวางตำแหน่งของเซลล์ภูมิคุ้มกัน ตระกูลคีโมไคน์ขนาดใหญ่สองกลุ่มที่กระตุ้นการแทรกซึมของทีเซลล์ ได้แก่ ลิแกนด์ CXC โมทีฟลิแกนด์ (CXCL) และตระกูลเคโมไคน์ CC โมทีฟลิแกนด์ (CCL) [38]
Cistanche สำหรับการปรับปรุงความผิดปกติของไต
ในการศึกษาของเรา เราไม่พบรูปแบบคงที่ในการตอบสนองของครอบครัว CCL ต่อ HSDและเมลาโทนิน. จากเก้าคีโมไคน์ในครอบครัวนี้ มีเพียง CCL7 และ CLL21 เท่านั้นที่ถูกสังเกตเพื่อเพิ่มการแสดงออกเนื่องจาก HSD และการเสริมเมลาโทนินลดลง HSD เพิ่มการแสดงออกของ CCL3 แต่ไม่พบการลดลงในหนูที่ได้รับการบำบัดด้วยเมลาโทนิน การศึกษาล่าสุดในรูปแบบเดียวกันได้แสดงให้เห็นว่า HSD upregulate CCL2 ในไตโดยใช้วิธี RNA-Seq [39] อย่างไรก็ตาม การศึกษานี้ทดสอบระดับในวันที่ 3 และ 21 หลังจากที่เริ่มรับประทานอาหาร ในการศึกษาของเรา เราทดสอบระดับหลังจากแปดสัปดาห์ เป็นไปได้ว่าการแสดงออกของคีโมไคน์จะเปลี่ยนไปในช่วงระยะเวลา HSD
ในทางกลับกัน ระดับของตระกูล CXCL ส่วนใหญ่ รวมถึง CXCL 1, 9, 10, 11 และ 16 เพิ่มขึ้นในหนูที่ได้รับการรักษาด้วย HSD และเมลาโทนินอาหารเสริมยกเลิกการเพิ่มขึ้นนี้ มีเพียง CXCL12 เท่านั้นที่ไม่ตอบสนองต่อ HSD เพิ่มขึ้น
CXCL9, CXCL10 และ CXCL11 ที่ชื่อ "ลิแกนด์ CXC คีโมไคน์รีเซพเตอร์ 3 ที่เหนี่ยวนำให้เกิดอินเตอร์เฟอรอน" ถูกเหนี่ยวนำโดย IFN- และเป็นลิแกนด์ของ CXC คีโมไคน์รีเซพเตอร์ 3(CXCR3) การศึกษาในร่างกายได้แสดงให้เห็นความสำคัญในการกระตุ้นและการจัดหาทีลิมโฟไซต์ไปยังอวัยวะเป้าหมาย [40–42] คุณและคณะ แสดงให้เห็นในผู้ป่วยความดันโลหิตสูงในมนุษย์ ทั้งการแทรกซึมของ T-cell ของไตและระดับการหมุนเวียนที่เพิ่มขึ้นของทั้งสาม CXCR3คีโมไคน์โดยแนะนำว่า CXCR3 และลิแกนด์ของมันเกี่ยวข้องกับทีเซลล์ที่เกี่ยวข้องกับ HTN ของมนุษย์ [43] การศึกษาอื่นได้แสดงให้เห็นว่า CXCL10 สูงขึ้นในผู้ป่วยความดันโลหิตสูง และระดับของมันสัมพันธ์กับค่าความดันโลหิต [44]
จากการศึกษาเหล่านี้ เราจึงมุ่งเน้นไปที่ CXCL9, CXCL10 และ CXCL11 เราเพาะเลี้ยงสายเซลล์ของหนูที่มีเซลล์ mesangial และรักษาพวกมันด้วย 80 mM NaCl และ 0.5 mM เมลาโทนิน เราพบว่า CXCL 10 และ 11 ได้รับการควบคุมในเซลล์และเมลาโทนินจะยกเลิกการยกระดับนี้ ผลลัพธ์ของเราบ่งชี้ว่าผลของเกลือในการยกระดับ CXCL 10 และ 11 และผลตรงข้ามของเมลาโทนินถูกตรวจพบโดยตรงในเซลล์ mesangial ในทางตรงกันข้าม ไม่พบ CXCL9 ในเซลล์เหล่านี้
การศึกษาของเรามีข้อจำกัด ในผลลัพธ์ FACS ของเรา CD3 plus จำนวนมากมีผลลบเป็นสองเท่าสำหรับทั้ง CD4 และ CD8 ผลลัพธ์เดียวกันนี้พบในการศึกษาของ Mattson ในปี 2010 [31] อย่างไรก็ตาม ในการศึกษาล่าสุดจากกลุ่มของ Mattson พบว่า CD3 plus CD4-CD8-เซลล์มีจำนวนน้อยมาก [32,33,45,46] การลดลงอย่างมีนัยสำคัญในเซลล์ CD3 เชิงลบสองเท่าอาจเป็นผลมาจากการเพิ่มเครื่องหมาย CD45 และวิเคราะห์เฉพาะเซลล์ที่มี CD45 บวกเท่านั้น ซึ่งเป็นสิ่งที่ดำเนินการในการศึกษาในภายหลังของ Mattson เป็นไปได้ว่า CD3 plus CD4-CD8- ที่มีประชากรจำนวนมากเป็นสิ่งประดิษฐ์ อย่างไรก็ตาม ไม่มีสิ่งประดิษฐ์ใดเป็นที่รู้จักสำหรับ CD3 บวก CD4 plus และ CD3 บวก CD8 บวกประชากรเซลล์
5. สรุปผลการวิจัย
โดยสรุป อาหารที่มีเกลือสูงเกี่ยวข้องกับการแทรกซึมของทีเซลล์เข้าไปในไตของหนู DSS เกลือยังเพิ่มการแสดงออกของสารเคมีทีเซลล์จำเพาะในไตอีกด้วย รักษาด้วยเมลาโทนิน(30 มก./กก./วัน) ยกเลิกผลกระทบเหล่านี้ (เมลาโทนินลดการแทรกซึมของทีเซลล์ที่เกิดจาก HSD เข้าไปในไตพร้อมกับการแสดงออกของลิแกนด์คีโมไคน์ใน CXCL3 ที่ลดลง)
การศึกษาในหลอดทดลองของเราแสดงให้เห็นว่าเกลือและเมลาโทนินอาจควบคุมการแสดงออกของเคมีบำบัดโดยส่งผลกระทบโดยตรงไตเซลล์.
ผลงานของผู้แต่ง: Conceptualization, AL; การวิเคราะห์อย่างเป็นทางการ AB และ RK; การสืบสวน RK วิธีการ AB และ AL; การเขียน—ร่างต้นฉบับ AB และ AL; การเขียน—ทบทวนและแก้ไข, YSและ EG ผู้เขียนทุกคนได้อ่านและตกลงที่จะตีพิมพ์ต้นฉบับของต้นฉบับ
เงินทุน: งานวิจัยนี้ไม่ได้รับเงินทุนจากภายนอก
คำชี้แจงของคณะกรรมการพิจารณาสถาบัน: ระเบียบวิธีการศึกษาได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการจริยธรรมสัตว์สถาบันในศูนย์การแพทย์ Sheba โปรโตคอลหมายเลข 1219/19/ANIM และระเบียบการของกระทรวงสาธารณสุขหมายเลข 16418
คำชี้แจงความยินยอมที่ได้รับแจ้ง: ไม่เกี่ยวข้อง
คำชี้แจงความพร้อมใช้งานของข้อมูล: ข้อมูลที่นำเสนอในการศึกษานี้มีให้ตามคำขอจากผู้เขียนที่เกี่ยวข้อง
กิตติกรรมประกาศ: ผู้เขียนขอขอบคุณ Zehava Shabtai สำหรับการสนับสนุนทางเทคนิคที่ยอดเยี่ยมของเธอ และMichael Kanovsky สำหรับบริการด้านบรรณาธิการของเขา
ความขัดแย้งทางผลประโยชน์: ผู้เขียนประกาศว่าไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์
อ้างอิง
1. โอลเซ่น MH; แองเจลล์ SY; Asma, S.; บูทูรี, พี.; เบอร์เกอร์, ดี.; Chirinos, เจเอ; Damasceno, A.; Delles, C.; Gimenez-Roqueplo, AP;แฮร์ริ่ง, D.; และคณะ คำกระตุ้นการตัดสินใจและกลยุทธ์หลักสูตรชีวิตเพื่อจัดการกับภาระความดันโลหิตสูงทั่วโลกของคนรุ่นปัจจุบันและอนาคต: The Lancet Commission on hypertension มีดหมอ 2016, 388, 2665–2712. [ข้ามอ้างอิง]
2. O'Brien, E. คณะกรรมการ Lancet เกี่ยวกับความดันโลหิตสูง: กล่าวถึงภาระทั่วโลกของความดันโลหิตสูงขึ้นกับคนรุ่นปัจจุบันและอนาคต เจ. คลิน. ไฮเปอร์เทนส์ 2017, 19, 564–568. [ข้ามอ้างอิง]
3. โอดอนเนลล์, เอ็ม.; Mente, A.; Yusuf, S. ปริมาณโซเดียมและสุขภาพหัวใจและหลอดเลือด เซอร์ ความละเอียด 2015, 116, 1046–1057. [ข้ามอ้างอิง]
4. Schiffrin, EL Mechanisms of remodeling of small arteries, antihypertensive therapy and the immune system in hypertension.คลินิก สำรวจ เมดิ. 2015, 38, E394–E402. [ข้ามอ้างอิง]
5. กุซิก, ทีเจ; Hoch, เนบราสก้า; บราวน์, KA; แมคแคน แอลเอ; เราะห์มาน, A.; Dikalov, S.; โกรอนซี เจ.; Weyand, C.; Harrison, DG บทบาทของ Tcell ในการกำเนิดของความดันโลหิตสูงที่เกิดจาก angiotensin II และความผิดปกติของหลอดเลือด เจ. เอ็กซ์พี. เมดิ. 2550, 204, 2449–2460. [ข้ามอ้างอิง][PubMed]
6. Kleinewietfeld, M.; แมนเซล, เอ.; Titze, เจ.; ควาคาน H.; โยเซฟ N.; ลิงเกอร์, RA; มุลเลอร์ DN; Hafler, DA โซเดียมคลอไรด์ขับเคลื่อนโรคภูมิต้านตนเองโดยการเหนี่ยวนำเซลล์ TH17 ที่ทำให้เกิดโรค ธรรมชาติ 2013, 496, 518–522. [ข้ามอ้างอิง]
7. แมตต์สัน ดีแอล; ลุนด์, เอช.; Guo, C.; Rudemiller, N.; เกิร์ตส์, น.; Jacob, H. การกลายพันธุ์ทางพันธุกรรมของยีนกระตุ้นการรวมตัวใหม่ 1 ในหนูที่ไวต่อเกลือของ Dahl ช่วยลดความดันโลหิตสูงและความเสียหายของไต เป็น. เจ. ฟิสิออล. เรกูล จำนวนเต็ม. คอมพ์ ฟิสิออล 2013, 304, 407–414.[ข้ามอ้างอิง]
8. Mattson, DL แทรกซึมเซลล์ภูมิคุ้มกันในไตในความดันโลหิตสูงที่ไวต่อเกลือและการบาดเจ็บของไต เป็น. เจ. ฟิสิออล. เร็น. Physiol.2014, 307. [CrossRef] [PubMed]
9. ลู่ X.; Crowley, SD Inflammation ในความดันโลหิตสูงที่ไวต่อเกลือและความเสียหายของไต สกุลเงิน Hypertens Rep. 2018, 20. [CrossRef][PubMed]
10. เบเกอร์ เจ.; Kempinski, K. บทบาทของเมลาโทนินในการควบคุมความดันโลหิต: สารป้องกันความดันโลหิตสูงเสริม คลินิก ประสบการณ์ เภสัช.ฟิสิออล. 2018, 45, 755–766. [CrossRef] [PubMed]
11. กรอสแมน อี.; เลาดอน, ม.; Zisapel, N. ผลของเมลาโทนินต่อความดันโลหิตตอนกลางคืน: การวิเคราะห์เมตาดาต้าของการทดลองแบบสุ่มควบคุม วาส. การจัดการความเสี่ยงด้านสุขภาพ 2011, 7, 577–584. [CrossRef] [PubMed]
12. Pozo, D.; เดลกาโด, ม.; เฟอร์นันเดซ-ซานโตส เจเอ็ม; คาลโว เจอาร์; โกมาริซ RP; มาร์ติน-ลาเคฟ ฉัน; ออร์ติซ, GG; Guerrero, JM Expression ของ Mel1a-melatonin receptor mRNA ในชุดย่อย T และ B ของลิมโฟไซต์จากต่อมไทมัสและม้ามของหนู Faseb J. ออฟ. มหาชน เฟด ซ. ประสบการณ์ ไบโอล. 1997, 11, 466–473. [ข้ามอ้างอิง]
13. เกร์เรโร เจเอ็ม; โปโซ, ดี.; García-Mauriño, S.; Osuna, C .; โมลิเนโร พี.; Calvo, JR การมีส่วนร่วมของตัวรับนิวเคลียร์ในการผลิต IL-2 ที่ได้รับการปรับปรุงโดยเมลาโทนินในเซลล์ Jurkat แอน. นิวยอร์ก อเคด วิทย์. 2000, 917, 397–403. [CrossRef] [PubMed]
14. ฟาเรซ MF; มาสแคนโฟรนี, ไอดี; Méndez-Huergo, เอสพี; Yeste, A.; Murugaiyan, G.; Garo, LP; บัลบูเอน่า อากีร์เร เมน; Patel, B.;Ysrraelit, MC; จู, C.; และคณะเมลาโทนินมีส่วนทำให้เกิดอาการกำเริบของเส้นโลหิตตีบหลายเส้นตามฤดูกาล เซลล์ 2015, 162, 1338–1352.[CrossRef] [PubMed]
15. Kirabo, A.; ฟอนทานา, วี.; เดอฟาเรีย APC; Loperena, R.; กาลินโด CL; วู เจ.; Bikinyeva, AT; Dikalov, S.; เซียวแอล.; เฉิน W.;et al. DC isoketal-modified proteins กระตุ้นทีเซลล์และส่งเสริมความดันโลหิตสูง เจ. คลิน. สำรวจ 2014, 124, 4642–4656. [ข้ามอ้างอิง][PubMed]
16. Leibowitz, A.; วอลคอฟ, A.; Voloshin, K.; เชเมช, C.; Barshack, ฉัน.; กรอสแมน อี. เมลาโทนิน ป้องกันไตการบาดเจ็บในรูปแบบความดันโลหิตสูงที่เกิดจากอาหารที่มีเกลือสูงโดยการลดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน J. Pineal Res. 2016, 60, 48–54. [CrossRef] [PubMed]
17. ฮอว์กินส์ พี.; มอร์ตัน ดีบี; พม่า, O.; เดนนิสัน, น.; ท่านพี่ ป.; เจนนิงส์, เอ็ม.; เลน, เอส.; มิดเดิลตัน, วี.; รูแกน กิจการร่วมค้า; Wells, S.;et al. คู่มือการกำหนดและดำเนินการตามระเบียบวิธีในการประเมินสวัสดิภาพสัตว์ทดลอง: รายงานที่สิบเอ็ดของคณะทำงานร่วมว่าด้วยการปรับแต่ง BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW แล็บ. แอนิม. 2554, 45, 1–13. [ข้ามอ้างอิง]
18. Simko, F.; ไรเตอร์, อาร์เจ; เปาลิส, แอล.เมลาโทนินเป็นทางเลือกที่สมเหตุสมผลในการรักษาภาวะความดันโลหิตสูงที่ดื้อยาแบบอนุรักษ์นิยมHypertens Res 2019, 42, 1828–1831. [CrossRef] [PubMed]
19. Rapp, JP Dahl หนูที่ไวต่อเกลือและทนต่อเกลือ ความดันโลหิตสูง 1982, 4, 753–763 [ข้ามอ้างอิง]
20. ดาห์ล แอลเค; คนุดเซ่น, KD; ไฮเนอ แมสซาชูเซตส์; Leitl, GJ ผลของการกลืนกินเกลือที่มากเกินไปเรื้อรัง. การปรับเปลี่ยนการทดลองความดันโลหิตสูงในหนูโดยการเปลี่ยนแปลงในอาหาร เซอร์ ความละเอียด 2511, 22, 11–18. [CrossRef] [PubMed]
21. Rapp, เจพี; Dene, H. การพัฒนาและลักษณะของสายพันธุ์แท้ของหนูที่ไวต่อเกลือและทนต่อเกลือของ Dahl ไฮเปอร์เทนส์ 1985,7, 340–349. [ข้ามอ้างอิง]
22. บราวเซอร์, ม.; เกรซ, ม.; คอตซ์ CM; Koya, V. การวิเคราะห์เปรียบเทียบลักษณะการเจริญเติบโตของหนู Sprague Dawley ที่ได้จากแหล่งต่างๆ แล็บ. Anim Res. 2015, 31, 166–173. [ข้ามอ้างอิง]
23. ทัลบอต อาร์เอส; เบียร์นาท, เอส.; Bleich, A.; ฟาน ไดค์, อาร์เอ็ม; เอิร์นส์, แอล.; ฮาเกอร์, C.; ฮิลเจอร์ส SOA; Koegel, บี.; Koska, ฉัน.; Kuhla, A.; et al. การกำหนดการลดน้ำหนักตัวเป็นจุดสิ้นสุดที่มีมนุษยธรรม: การประเมินที่สำคัญ แล็บ. อนิเมชั่น 2020, 54, 99–110. [CrossRef] [PubMed]
24. Geschka, S.; Kretschmer, A.; ชาร์คอฟสกา, วาย.; Evgenov, OV; ลอว์เรนซ์, บี.; Hucke, A.; Hocher, บี.; สตาช, เจ.-พี. การกระตุ้นด้วย guanylatecyclase ที่ละลายน้ำได้ช่วยป้องกันการสร้างเนื้อเยื่อไฟโบรติกและช่วยให้รอดชีวิตในหนู Dahl ที่ไวต่อเกลือ PLOS ONE 2011, 6,e21853. [CrossRef] [PubMed]
25. วัง Y.; หมู่ เจเจ; หลิว FQ; เร็น KY; เซียว HY; ยาง Z.; Yuan, ZY การเปลี่ยนเยื่อบุผิวไปเป็น mesenchymal ที่เกิดจากเกลือในหนูที่ไวต่อ Dahlsalt ขึ้นอยู่กับความดันโลหิตสูง บราซ เจ เมด ไบโอล. ความละเอียด รายได้ยกทรง เพสกิซ่า เมด. อี ไบโอล. 2014, 47, 223–230.[ข้ามอ้างอิง]
26. โฮล์มส์ เซาท์เวลส์; Sugden, D. การดำเนินการต่อไป: ผลของเมลาโทนินต่อความดันโลหิตสูงที่เกิดจากไพเนอเล็คโตมีในหนู บรา เจ. Pharm.1976, 56, 360P–361P.
27. ซาโนโบนี, ก.; Zanoboni-Muciaccia, W. ความดันโลหิตสูงในการทดลองในหนูทดลอง วิทย์ชีวิต. 2510, 6, 2327–2331. [ข้ามอ้างอิง]
28. ซาโนโบนี, ก.; Forni, A.; Zanoboni-Muciaccia, W. ; Zanussi, C. ผลของการตัด pinealectomy ต่อความดันโลหิตแดงและการรับประทานอาหารและน้ำในหนู เจ. เอ็นโดครินอล. สำรวจ 2521, 1, 125–130. [CrossRef] [PubMed]
29. Pechanová, O.; ซิชา เจ.; Paulis, L.; Zenebe, W .; Dobesová, Z.; Kojsová, S.; Jendeková, L.; Sládková, M.; Dovinová, I.; Simko, F.;et al. ผลของ N-acetylcysteine และเมลาโทนินในหนูที่มีความดันโลหิตสูงตามธรรมชาติและเป็นโรคความดันโลหิตสูง ยูโร เจ.เภสัช. 2550, 561, 129–136. [CrossRef] [PubMed]
30. Leibowitz, A.; Peleg, E.; ชาราบี, Y.; Shabtai, Z.; Shamiss, A.; กรอสแมน อี บทบาทของเมลาโทนินในการเกิดโรคความดันโลหิตสูงในหนูที่มีอาการเมตาบอลิซึม เป็น. J. Hypertens 2008, 21. [CrossRef] [PubMed]
31. เดอ มิเกล ซี.; Das, S.; ลุนด์, เอช.; Mattson, DL T lymphocytes ไกล่เกลี่ยความดันโลหิตสูงและไตความเสียหายใน Dahl salt-sensitiverats เป็น. เจ. ฟิสิออล. เรกูล จำนวนเต็ม. คอมพ์ ฟิสิออล 2010, 298, R1136–R1142 [CrossRef] [PubMed]
32. อีแวนส์ LC; เปโตรวา, G.; เคิร์ท, ต.; ยาง, C.; บูโควี เจดี; แมตต์สัน ดีแอล; Cowley, AW ไดรฟ์ความดัน Perfusion ที่เพิ่มขึ้นการแทรกซึม T-Cell ของไตในหนูที่ไวต่อเกลือของ Dahl ความดันโลหิตสูง 2017, 70, 543–551 [ข้ามอ้างอิง]
33. Abais-Battad, JM; อัลชีค, เอเจ; แพน, X.; Fehrenbach ดีเจ; แดซิงเงอร์ เจเอช; ลุนด์, เอช.; โรเบิร์ตส์ มลรัฐแมสซาชูเซตส์; ครีเกล เอเจ; Cowley, AWJ;Kidambi, S.; และคณะ ผลทางอาหารต่อความดันโลหิตสูงที่ไวต่อเกลือของ Dahl ความเสียหายของไต และ T Lymphocyte Transcriptome ไฮเปอร์เทน 2019, 74, 854–863 [CrossRef] [PubMed]
34. Fehrenbach ดีเจ; แดซิงเงอร์ เจเอช; ลุนด์, เอช.; Zmaj, J.; Mattson, DL Splenocyte transfer ทำให้ความดันโลหิตสูงที่ไวต่อเกลือรุนแรงขึ้น ประสบการณ์ ฟิสิออล 2020, 105, 864–875. [CrossRef] [PubMed]
35. Ren, W.; หลิวจี .; เฉิน, เอส.; หยิน, เจ.; วังเจ .; ตาล, บี.; วู, จี.; บาเซอร์ FW; เป็ง, วาย.; หลี่ ต.; และคณะ การส่งสัญญาณเมลาโทนินในทีเซลล์:หน้าที่และการใช้งาน J. Pineal Res. 2017, 62. [ข้ามอ้างอิง]
36. อัลวาเรซ-ซานเชซ, N.; ครูซ-ชามอร์โร, I.; López-González, A.; ยูทริลลา เจซี; Fernández-Santos, JM; Martínez-López, A.; ลาร์โดน, พีเจ; เกร์เรโร เจเอ็ม; Carrillo-Vico, A. Melatonin ควบคุมโรคไข้สมองอักเสบ autoimmune ทดลองโดยการเปลี่ยนแปลง T effector / ความสมดุลของระเบียบ พฤติกรรมสมอง. ภูมิคุ้มกัน 2015, 50, 101–114. [ข้ามอ้างอิง]
37. เฉิน, ส.-เจ.; Huang, S.-H.; เฉิน, J.-W.; วัง, K.-C.; ยาง Y.-R.; หลิว, P.-F.; หลิน, จี.-เจ.; ซิตวู, H.-K.เมลาโทนินช่วยเพิ่มการแสดงออกของ interleukin 10 และยับยั้ง chemotaxis เพื่อยับยั้งการอักเสบในแหล่งกำเนิดและลดความรุนแรงของการทดลอง autoimmuneencephalomyelitis อินเตอร์ อิมมูโนฟาร์มาคอล 2016, 31, 169–177. [CrossRef] [PubMed]
38. กริฟฟิธ เจดับบลิว; โซกล CL; ความมันวาว ADคีโมไคน์และตัวรับคีโมไคน์: การวางตำแหน่งเซลล์สำหรับการป้องกันโฮสต์และภูมิคุ้มกัน รายได้อิมมูนอล 2014, 32, 659–702. [CrossRef] [PubMed]
39. อัลชีค, เอเจ; แดซิงเงอร์ เจเอช; Abais-Battad, เจเอ็ม; Fehrenbach ดีเจ; ยาง, C.; คาวลีย์, AWJ; Mattson, DL CCL2 ไกล่เกลี่ยการแทรกซึมของเม็ดโลหิตขาวในไตในระยะเริ่มต้นระหว่างความดันโลหิตสูงที่ไวต่อเกลือ เป็น. เจ. ฟิสิออล. เร็น. ฟิสิออล 2020, 318, F982–F993. [ข้ามอ้างอิง][PubMed]
40. หลิวแอล.; สิทธิชัย เอ็มเค; หวาง, D.; Ransohoff, RM Chemokine receptor CXCR3: ปริศนาที่ไม่คาดคิด สกุลเงิน สูงสุด. กำลังพัฒนา Biol.2005, 68, 149–181. [CrossRef] [PubMed]
41. เจ้าบ่าว JR; Luster, AD CXCR3 ลิแกนด์: ฟังก์ชันซ้ำซ้อน การทำงานร่วมกันและเป็นปฏิปักษ์ อิมมูนอล เซลล์ไบโอล. 2554, 89,207–215. [CrossRef] [PubMed]
42. แวน แรมดอนค์, เค.; แวนเดนสตีน, พลศึกษา; Liekens, S.; แวน Damme เจ.; Struyf, S. CXCR3 แกนด์ในโรคและการรักษา CytokineGrowth Factor Rev. 2015, 26, 311–327. [CrossRef] [PubMed]
43. Youn, J.-C.; ยู HT; ลิม บีเจ; เกาะ เอ็มเจ; ลี เจ.; ช้าง, ดี.-วาย.; ชอย, YS; ลี S.-H.; คัง, ส.-ม.; จาง, วาย.; และคณะ ภูมิคุ้มกัน CD8 บวก T เซลล์และ CXC คีโมไคน์รีเซพเตอร์ประเภท 3คีโมไคน์จะเพิ่มขึ้นในความดันโลหิตสูงของมนุษย์ Hypertens 2013, 62, 126–133.[CrossRef] [PubMed]
44. Stumpf, C.; Auer, C .; Yilmaz, A.; Lewczuk, P.; คลิงแฮมเมอร์, L.; ชไนเดอร์, ม.; แดเนียล WG; Schmieder, RE; Garlichs, CDSerum ระดับของ Th1 chemoattractant interferon-gamma-inducible protein (IP) 10 สูงขึ้นในผู้ป่วยที่มีความดันโลหิตสูง Hypertens Res. 2554, 34, 484–488. [CrossRef] [PubMed]
45. Rudemiller, NP; ลุนด์, เอช.; พรีสลีย์ เจอาร์ซี; Endres, BT; โปรคอป เจดับบลิว; เจคอบ, เอชเจ; เกิร์ตส์, น.; โคเฮน EP; Mattson, DL Mutation of SH2B3 (LNK) ซึ่งเป็นผู้สมัครศึกษาเกี่ยวกับความดันโลหิตสูงในกลุ่มจีโนม ช่วยลดความดันโลหิตสูงที่ไวต่อเกลือของ Dahl ผ่านการมอดูเลตการอักเสบ ความดันโลหิตสูง 2015, 65, 1111–1117. [CrossRef] [PubMed]
46. เวด, บี.; เปโตรวา, G.; Mattson, DL บทบาทของปัจจัยภูมิคุ้มกันในความดันโลหิตสูงที่เกิดจาก angiotensin II และความเสียหายของไตในหนูที่ไวต่อ Dahlsalt เป็น. เจ. ฟิสิออล. เรกูล จำนวนเต็ม. คอมพ์ ฟิสิออล 2018, 314, R323–R333 [CrossRef] [PubMed]
