การบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันร่วมที่ใช้ไลโปโซมร่วมกับ TLR Agonist และ CD47- SIRP Checkpoint Blockade เพื่อการรักษามะเร็งลำไส้ใหญ่อย่างมีประสิทธิภาพ

เชิงนามธรรม:

ภูมิคุ้มกันต้านเนื้องอกเป็นองค์ประกอบสำคัญของการรักษาโรคมะเร็ง และโดยพื้นฐานแล้วอาศัยการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติ ซึ่งมีบทบาทสำคัญในการเริ่มต้นและสร้างรูปแบบการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันแบบปรับตัว หลักฐานที่เกิดขึ้นใหม่ได้ระบุจุดตรวจสอบภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติและตัวรับการจดจำรูปแบบ เช่น CD47 และ Toll-like receptor 7 (TLR7) เป็นเป้าหมายการรักษาที่มีแนวโน้มสำหรับการรักษาโรคมะเร็ง โดยมีพื้นฐานมาจากฟิวชันโปรตีน Fc-CV1 ซึ่งประกอบรวมด้วยแวเรียนต์ SIRP ที่มีสัมพรรคภาพสูง (CV1) และชิ้นส่วน Fc ของแอนติบอดี IgG1 ของมนุษย์ เราใช้ประโยชน์จากการเตรียมการที่ควบคู่ Fc-CV1 กับอิมิควิโมด (TLR7 อะโกนิสต์) ที่บรรจุไลโปโซม ( CILPs) เพื่อกำหนดเป้าหมาย CT26 อย่างแข็งขัน แบบจำลองเนื้องอกลำไส้ใหญ่แบบซินจีนิก WT การศึกษาในหลอดทดลองพบว่า CILP มีคุณสมบัติการปลดปล่อยอย่างต่อเนื่องที่เหนือกว่าและประสิทธิภาพการดูดซึมของเซลล์เมื่อเปรียบเทียบกับอิมิควิโมดอิสระ การทดสอบในสัตว์ทดลองพิสูจน์ว่า CILP แสดงการสะสมในเนื้องอกที่มีประสิทธิภาพมากกว่า และผลการยับยั้งเนื้องอกที่มีนัยสำคัญมากกว่ากลุ่มควบคุม การเตรียมภูมิคุ้มกันบำบัดนี้มีข้อดีคือให้ยาในปริมาณต่ำและความเป็นพิษต่ำ ผลลัพธ์เหล่านี้แสดงให้เห็นว่าการผสมผสานระหว่างการรักษาด้วยการปิดกั้นจุดตรวจภูมิคุ้มกัน (ICB) และผู้เร่งปฏิกิริยาภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติ เช่น Fc-CV1 และการเตรียมไลโปโซมที่โหลดด้วยอิมิควิโมดที่ใช้ในการศึกษานี้อาจเป็นตัวแทนของกลยุทธ์ที่มีประสิทธิภาพสูงสำหรับการรักษาเนื้องอก

ประโยชน์ของ cistanche tubulosa-Antitumor

คำสำคัญ:

อิมิควิโมด; ไลโปโซม; Fc-CV1; การบำบัดด้วยภูมิคุ้มกัน; มะเร็งลำไส้ใหญ่

1. บทนำ

อุบัติการณ์ของโรคมะเร็งทั่วโลกยังคงเพิ่มขึ้นทุกปี ก่อให้เกิดภัยคุกคามร้ายแรงต่อสุขภาพของประชากรโลก และสร้างภาระหนักให้กับระบบการรักษาพยาบาล ตามรายงานขององค์การอนามัยโลก ในปี 2020 มีผู้ป่วยมะเร็งรายใหม่ 19.29 ล้านราย และผู้เสียชีวิตด้วยโรคมะเร็ง 9.96 ล้านรายทั่วโลก [1] อย่างไรก็ตาม ด้วยความก้าวหน้าอย่างต่อเนื่องในการวินิจฉัยทางคลินิก การผ่าตัด การฉายรังสี และเคมีบำบัด ทำให้อัตราการรอดชีวิตและคุณภาพชีวิตโดยรวมของผู้ป่วยโรคมะเร็งดีขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง การบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันซึ่งมีต้นกำเนิดจากวัคซีนโคลีย์ในคริสต์ทศวรรษ 1890 [2] มีมาก่อนทั้งการรักษาด้วยรังสีรักษาและเคมีบำบัด และมีความก้าวหน้าอย่างมากในทศวรรษที่ผ่านมา ซึ่งเป็นประโยชน์ต่อผู้ป่วยโรคมะเร็ง

การบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันสำหรับเนื้องอกได้รับการยอมรับว่ามีความเข้ากันได้ทางชีวภาพที่ดีเยี่ยมและมีความจำเพาะสูง และสามารถกระตุ้นการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันเพื่อกำจัดเซลล์เนื้องอกได้ [3–5] กลยุทธ์หลักสองประการสำหรับการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันจากเนื้องอกคือการเสริมภูมิคุ้มกันและการทำให้ภูมิคุ้มกันเป็นปกติ [6] รูปแบบของการเสริมภูมิคุ้มกันส่วนใหญ่ประกอบด้วยการบำบัดด้วยไซโตไคน์ วัคซีนรักษาเนื้องอก และโมโนโคลนอลแอนติบอดี Toll-like receptors (TLR) ถือเป็นเป้าหมายที่เป็นไปได้สำหรับการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันโรคมะเร็ง เนื่องจากมีบทบาทในการกระตุ้นระบบภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติ ตัวเอก TLR ได้รับการพัฒนาเป็นสารเสริมภูมิคุ้มกัน และตัวเอก TLR หลายชนิดกำลังอยู่ระหว่างการทดลองทางคลินิก [7] Monophosphoryl lipid A และ imiquimod, TLR4 และ TLR7 agonists ตามลำดับได้รับการอนุมัติจากสำนักงานคณะกรรมการอาหารและยาสำหรับการใช้งานทางคลินิก [7-9] Imiquimod ซึ่งเป็น TLR7 agonist [9] กระตุ้นการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันและเพิ่มฤทธิ์ต้านเนื้องอกโดยกระตุ้น TLR7 [10,11] กลยุทธ์การทำให้ภูมิคุ้มกันเป็นมาตรฐานนั้นแสดงโดยยาปิดกั้นจุดตรวจภูมิคุ้มกัน (ICB) ซึ่งควบคุมการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของเนื้องอกแบบปรับตัวที่มีข้อบกพร่อง นับตั้งแต่ตัวยับยั้งจุดตรวจตัวแรก ipilimumab ได้รับการอนุมัติสำหรับการใช้งานทางคลินิกในสหรัฐอเมริกาในปี 2554 ตัวยับยั้งจุดตรวจภูมิคุ้มกัน เช่น ตัวยับยั้ง PD1/PDL1 ได้สร้างความก้าวหน้าในการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันบำบัดมะเร็ง [12–14] ยกเว้นจุดตรวจภูมิคุ้มกันที่ดัดแปลงคล้ายกับ PD1/PDL1 จุดตรวจภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติบางจุด เช่น SIRP -CD47 ยังดึงดูดความสนใจอย่างมากและกลายเป็นพื้นที่ที่สนใจอย่างมากในการพัฒนายาแอนติบอดี [15–17]

จุดตรวจสอบ SIRP -CD47 ได้รับการระบุครั้งแรกในปี 1999 [18,19] SIRP คือตัวรับ CD47 ที่แสดงออกในเซลล์ประสาทของระบบประสาทส่วนกลาง [20] และเซลล์ไมอีลอยด์ ซึ่งรวมถึงโมโนไซต์ มาโครฟาจ แกรนูโลไซต์ และเซลล์เดนไดรต์ CD47 เป็น "โมเลกุลที่ติดฉลากได้เอง" ที่แสดงออกมาในเซลล์ปกติเกือบทั้งหมดและมีการแสดงออกมากเกินไปในเซลล์เนื้องอกส่วนใหญ่ [21] บนพื้นผิวของเซลล์เนื้องอก CD47 จับกับ SIRP โดยยับยั้งเซลล์ฟาโกไซโตซิสที่ใช้มาโครฟาจเป็นสื่อกลาง ซึ่งเป็นวิธีการสำคัญในการหลบหนีของภูมิคุ้มกันของเนื้องอก [22] ได้รับการแสดงให้เห็นว่าสามารถเพิ่มประสิทธิภาพฟาโกไซโตซิสของมาโครฟาจภายในสภาพแวดล้อมจุลภาคของเนื้องอกได้เมื่อการจับกันของ CD47 และ SIRP ถูกปิดกั้น [20–25] ดังนั้น สารยับยั้งจุดตรวจภูมิคุ้มกันที่ขัดขวางวิถี CD47/SIRP จึงได้รับการพัฒนาและประยุกต์ใช้ในการรักษาโรคมะเร็ง [26]

cistanche tubulosa-ปรับปรุงระบบภูมิคุ้มกัน

คลิกที่นี่เพื่อดูผลิตภัณฑ์ Cistanche Enhance Immunity

【สอบถามเพิ่มเติม】 อีเมล:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

ในการศึกษานี้ เราใช้การผสมผสานระหว่าง imiquimod และฟิวชันโปรตีน (Fc-CV1) เพื่อรักษามะเร็งลำไส้ใหญ่ CV1 เป็นโปรตีน SIRP ชนิดลูกผสมของมนุษย์ที่ได้รับการดัดแปลงซึ่งมีสัมพรรคภาพสำหรับ CD47 สูงกว่าโปรตีนดั้งเดิมถึง 50,000- เท่า [27] Fc-CV1 ถูกสร้างโดยใช้เทคโนโลยี "น็อบส์-อินทู-โฮล" ที่มีพื้นฐานอยู่บนโมโนเมอร์ CV1 และชิ้นส่วน Fc ของ IgG1 ของมนุษย์ เพื่อเอาชนะข้อจำกัดของประสิทธิภาพการรักษาที่ไม่ดีและความเป็นพิษต่อระบบที่เกี่ยวข้องกับ imiquimod [28,29] เราได้เตรียมนาโนไลโปโซมโดยวิธีฉีดเอทานอล นาโนไลโปโซมมีลักษณะความเป็นพิษต่ำในการส่งยา [30,31] ต่อมา อิมิควิโมดถูกห่อหุ้มในไลโปโซมซึ่งพื้นผิวที่คอนจูเกต Fc-CV1 สุดท้ายนี้ การเตรียมนาโนแบบใหม่นี้สามารถส่งตัวเอก TLR7 ไปยังเนื้อเยื่อเนื้องอกได้อย่างแข็งขัน และมีหน้าที่สองประการคือยา ICB และตัวเอก TLR มันถูกใช้เพื่อรักษาแบบจำลองเนื้องอกในลำไส้ใหญ่แบบซินเจนิก CD47+ CT26.WT [32]

2. ผลลัพธ์และการสนทนา

2.1. การแสดงคุณลักษณะของ LP (ไลโปโซมว่าง), ILP (ไลโปโซมที่ถูกห่อหุ้มด้วยอิมิคิโมดที่เป็นเป้าหมายที่ไม่ใช่ CD47-), CLP (ไลโปโซมที่ถูกห่อหุ้มด้วย CD47) และ CILP (Fc-CV1 ที่ควบคู่กับอิมิกิโมด (TLR7 อะโกนิสต์)-ไลโปโซมที่โหลด)

เตรียม CILP ได้สำเร็จโดยการฉีดเอทานอลและวิธีการไล่ระดับแอมโมเนียมซัลเฟต รูปที่ 1A แสดงกระบวนการสังเคราะห์ของ CILP การวิเคราะห์ TEM แสดงให้เห็นว่า CILP มีลักษณะเป็นทรงกลมและมีรูปร่างสม่ำเสมอ (รูปที่ 1B) นอกจากนี้ ผลลัพธ์ของ DLS ยังเผยให้เห็นว่าขนาดอนุภาคของไลโปโซมทั้งสี่นั้นมีการกระจายแบบ Unimodal (รูปที่ 1C) อัตราการจับ (BR) ได้รับการตรวจสอบโดย SDS-PAGE ซึ่งแสดงไว้ในรูปที่ 1D, E รูปที่ 1D แสดงน้ำหนักโมเลกุลของ Fc-CV1 และความสว่างของแถบสัมพัทธ์ของ CILP ที่ถูกไดอะไลซ์และ CILP ที่ถูกไดอะไลซ์ล่วงหน้า BR ถูกคำนวณเป็น 67.13 ± 37.10% ผ่านการสแกนความหนาแน่นของแถบอิเล็กโตรโฟเรติกของ Image J (รูปที่ 1E) ซึ่งให้ความเป็นไปได้สำหรับ CD47- ที่กำหนดเป้าหมายเซลล์เนื้องอก

รูปที่ 1 (A) ภาพประกอบแผนผังของการสังเคราะห์ CILP (B) รูปภาพ TEM ของ CILP

HPLC ถูกใช้เพื่อตรวจจับประสิทธิภาพการห่อหุ้ม (EE) ของ imiquimod (รูปที่ S1 เสริม) ดังที่แสดงในรูปที่ S1A เพิ่มเติม imiquimod อิสระแสดงจุดสูงสุดเดียวที่มีนัยสำคัญ ในขณะที่ CLP ไม่แสดงจุดสูงสุดภายใต้เงื่อนไขการทดสอบเดียวกัน (รูปที่ S1B เสริม) ดังนั้นจึงเป็นไปได้ที่จะตรวจจับ CILP ได้โดยตรงภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ ตามที่คาดไว้ ค่าการตรวจจับของ CILP ก่อนและหลังการฟอกไตถือเป็นปริมาณยาทั้งหมดและปริมาณยาในไลโปโซมตามลำดับ (รูปที่ S1C, D เสริม) EE ของ imiquimod คำนวณเป็น 85.44 ± 4.11% เมื่อเปรียบเทียบกับระบบนำส่งยาแบบพาสซีฟที่รายงาน [33–35] การศึกษานี้มีประสิทธิภาพในการห่อหุ้มที่สูงขึ้นและกระบวนการเตรียมการที่สะดวกยิ่งขึ้น

DLS แสดงให้เห็นว่าเส้นผ่านศูนย์กลางของ LP คือ 111.567 ± 0.655 นาโนเมตร ในขณะที่ CLP, ILP และ CILP แสดงขนาดที่ใหญ่กว่าเล็กน้อยเป็น 117.467 ± 0.34{{10} } นาโนเมตร, 120.233 ± 0.776 นาโนเมตร และ 13{{30}}.033 ± 0.974 นาโนเมตร ตามลำดับ (ตารางที่ 1) การเปลี่ยนแปลงขนาดของไลโปโซมเหล่านี้อาจมีสาเหตุมาจากการดัดแปลง Fc-CV1 และอิมิควิโมด ค่า PDI มีค่าใกล้เคียง 0.1 (ตารางที่ 1) ซึ่งบ่งชี้ว่าพาหนะส่งยาเหล่านี้มีความเป็นเนื้อเดียวกันสูงในการจำหน่าย นอกจากนี้ ค่าศักย์ซีตาของ LP, CLP, ILP และ CILP ถูกวัดเป็น −2.231 ± 0.167 mV, −2.492 ± 0.033 mV, −2.383 ± 0.070 mV และ −2.075 ± 0.070 mV ตามลำดับ (ตารางที่ 1) ซึ่งเสนอแนะว่า Fc-CV1 ที่ควบกับพื้นผิวและอิมิคิโมดที่ถูกห่อหุ้มมีผลเพียงเล็กน้อยต่อประจุของไลโปโซม

ตารางที่ 1 เส้นผ่านศูนย์กลาง, ศักย์ซีตา, PDI และ EE ของ LPs, CLPs, ILPs และ CILPs ตามลำดับ

2.2. ประสิทธิภาพการดูดซึมของเซลล์ภายนอกร่างกาย

ประสิทธิภาพการดูดซึมของเซลล์ของ CILP ได้รับการประเมินผ่านความเข้มของฟลูออเรสเซนซ์ของ Cy5 ที่เซลล์ CT26.WT ใช้ระบบการถ่ายภาพที่มีเนื้อหาสูง ดังที่แสดงไว้ในรูปที่ 2 เมื่อเปรียบเทียบกับหมู่ Cy5 และ ILP-Cy5 อิสระ หมู่ CILPs-Cy5 แสดงความสามารถในการดูดซึมของเซลล์ที่แข็งแกร่งขึ้นหลังจากการบ่ม 30 นาที ผลลัพธ์เหล่านี้อนุมานได้ว่า Fc-CV1 เพิ่มความสามารถในการนำส่งภายในเซลล์ของไลโปโซมที่บรรจุอิมิควิโมดเนื่องจากสัมพรรคภาพจำเพาะกับรีเซพเตอร์ Fc-CV1 ซึ่งนำไปสู่การมีผลต้านเนื้องอกที่มีศักยภาพมากขึ้น

รูปที่ 2 รูปภาพของเซลล์ CT26.WT หลังจากการฟักตัวด้วย Cy5, ILPs-Cy5 และ CILPs-Cy5 อิสระ (สีแดง) เป็นเวลา 0.5 ชั่วโมง และย้อมด้วย DAPI (สีน้ำเงิน) สเกลบาร์: 50 µm (น {{10}}) * พี < 0.05; **** พี < 0.0001

2.3. ปล่อยเส้นโค้งของไลโปโซม

เส้นโค้งการปลดปล่อยยาของอิมิควิโมดอิสระ, ILP และ CILP ถูกวัดในสภาพแวดล้อมในร่างกายจำลอง รูปที่ 3 แสดงให้เห็นว่า imiquimod อิสระถูกปล่อยออกมาทั้งหมดหลังจาก 1 ชั่วโมง ในขณะที่อัตราการปลดปล่อย (RR) ของ imiquimod ที่ห่อหุ้มด้วย ILP และ CILP อยู่ที่เพียง 54.75 ± 408% และ 39.70 ± 0.05% ที่ 12 ชั่วโมง ตามลำดับ นอกจากนี้ การปล่อย imiquimod อย่างช้าๆ ใน ILP และ CILP สามารถปิดได้ด้วยคุณสมบัติการปลดปล่อยยาที่ควบคุมของไลโปโซม RR ของ imiquimod ใน ILPs และ CILPs ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญที่ 96 ชั่วโมง ซึ่งบ่งชี้ว่า "การแทรกภายหลัง" มีผลกระทบเล็กน้อยต่อความเสถียรของเมมเบรนของไลโปโซม

รูปที่ 3 เส้นโค้งการปล่อย Imiquimod ของ imiquimod, ILPs และ CILPs อิสระใน PBS ที่อุณหภูมิ 37 °C ข้อมูลถูกนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย ± ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (n=3) * p < 0.05, ** p < 0.01

2.4. การศึกษาความเป็นพิษต่อเซลล์

เพื่อศึกษาความเป็นพิษต่อเซลล์ของ CILP ในหลอดทดลอง ได้ทำการทดสอบ CCK{{0}} บนเซลล์ CT26.WT ดังที่แสดงในรูปที่ 4 CILP ที่ความเข้มข้นต่ำ (0.1–1 µg/mL) ไม่แสดงความเป็นพิษต่อเซลล์ ซึ่งสอดคล้องกับความปลอดภัยของการรักษาด้วยการสร้างภูมิคุ้มกัน ความมีชีวิตของเซลล์ลดลงเล็กน้อยหลังการรักษาด้วย imiquimod 5 µg/mL อาจเป็นเพราะ ROS และการตายของเซลล์ที่สร้างภูมิคุ้มกันโดยอาศัย endoplasmic reticulum ที่เกิดจาก imiquimod [36] นอกจากนี้ CILP ยังนำไปสู่การมีชีวิตของเซลล์ลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม ซึ่งมีสาเหตุมาจากผลการทำงานร่วมกันของ imiquimod และ Fc-CV1

รูปที่ 4 ความมีชีวิตของเซลล์ที่บำบัดด้วย Fc-CV1, อิมิควิโมด, CLPs, ILPs และ CILPs เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ความเข้มข้นของ Fc-CV1 และอิมิควิโมดอยู่ที่ 0–10 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรทั้งคู่ * p < 0.05, ** p < 0.01, ns=ไม่มีความแตกต่างที่มีนัยสำคัญ

2.5. การศึกษาการกระจายตัวทางชีวภาพ

การแพร่กระจายและการสะสมของสูตรต่างๆ ในเนื้องอกและอวัยวะสำคัญส่งผลโดยตรงต่อผลการรักษา หลังจากการบริหารให้ในหลอดเลือดดำ สัญญาณเรืองแสงถูกติดตามโดยใช้ระบบการมองเห็นด้วยอินฟราเรดใกล้เพื่อประเมินการกระจายและการสะสมของสูตรผสมที่แตกต่างกันในเนื้องอกและอวัยวะสำคัญหลังจาก 24 ชั่วโมง ดังที่แสดงในรูปที่ 5 ความเข้มของแสงฟลูออเรสเซนต์ทั้งหมดของ ILPs-Cy5 และ CILPs-Cy5 สูงกว่า Cy5 อิสระ ซึ่งบ่งชี้ว่าไลโปโซมมีคุณสมบัติการหมุนเวียนที่ยาวนาน ในร่างกาย นอกจากนี้ ความเข้มของการเรืองแสงของกลุ่มการรักษา CILPs-Cy5 ยังสูงที่สุดในเนื้อเยื่อเนื้องอก ซึ่งอาจกำหนดได้จากผลการกำหนดเป้าหมายเนื้องอกของลิแกนด์ Fc-CV1 ซึ่งจะช่วยเพิ่มประสิทธิภาพในการต่อต้านเนื้องอก ความเข้มของแสงเรืองแสงของตับและม้ามมีศักยภาพมากกว่าอวัยวะอื่นๆ ซึ่งอาจเป็นผลมาจากกระบวนการทำลายเซลล์ของไลโปโซมโดยระบบเรติคูโลเอนโดธีเลียม (RES) ในตับและไต [37]

รูปที่ 5 การกระจายของ Cy5-สารเรืองแสงในเนื้องอกและอวัยวะสำคัญที่ 24 ชั่วโมงหลังการให้ยาทางหลอดเลือดดำ ข้อมูลแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (n=3) **** หน้า < 0.0001

2.6. ในการศึกษาการยับยั้งเนื้องอกของ Vivo

ตารางการรักษา (รูปที่ 6A) และผลของการเตรียมการต่างๆ แสดงไว้ในรูปที่ 6 เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม PBS และ LP กลุ่มการรักษาอื่นๆ แสดงผลในการยับยั้งเนื้องอกบางอย่าง โดยเฉพาะอย่างยิ่ง ปริมาตรของเนื้องอกมีเพียงเล็กน้อยหลังการรักษาด้วย CILP ซึ่งบ่งชี้ว่า CILP มีผลในการยับยั้งเนื้องอกที่ดีเยี่ยม (รูปที่ 6B)

รูปที่ 6 (A) ภาพประกอบแผนผังของการรักษามะเร็งลำไส้ใหญ่ในแบบจำลองเนื้องอก CT26.WT (B) กราฟการเติบโตของปริมาตรเนื้องอกในระหว่างช่วงการรักษา (C) ภาพถ่ายเนื้องอกสัมพัทธ์และ (D) น้ำหนักของเนื้องอกที่รวบรวมจากกลุ่มการรักษาที่แตกต่างกันในวันที่ 17 (E) อัตราส่วนน้ำหนักตัวสัมพัทธ์ของน้ำหนักตัวเปรียบเทียบกับ 0 วัน ข้อมูลแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (n=5) * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001

ในตอนท้ายของการทดลอง หนูถูกสังเวยและเนื้องอกของพวกมันถูกตัดออก ถ่ายภาพ และชั่งน้ำหนักเพื่อตรวจสอบประสิทธิภาพการรักษาของการเตรียมต่างๆ ดังที่แสดงในรูปที่ 6C, D กลุ่มการรักษาของ CILP มีเนื้องอกที่เล็กที่สุดและเบาที่สุดเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มอื่น ซึ่งแสดงให้เห็นว่า CILP มีผลในการยับยั้งเนื้องอกมากที่สุด ตารางที่ 2 แสดงให้เห็นว่าอัตราการยับยั้งการเจริญเติบโตของเนื้องอกของ CILP ถูกคำนวณเป็น 84.35% นอกจากนี้ อัตราการยับยั้งเนื้องอก 84.35% ยังสูงกว่ากลุ่ม CLP และ ILPs อย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งหมายความว่ามีผลเสริมฤทธิ์กันของการปิดกั้นแกน "อย่ากินฉัน" และการกระตุ้นการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกัน . เมื่อเปรียบเทียบกับการเตรียมที่เทียบเท่า ในหลอดทดลอง (2.5–5 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) อัตราการยับยั้งที่สูงกว่ามีความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันที่กระตุ้นด้วยสูตรผสม และขัดขวางกลไกการหลบหนีของภูมิคุ้มกัน ในร่างกาย ซึ่งไม่มีในหลอดทดลอง

ตารางที่ 2 ข้อมูลน้ำหนักเนื้องอกและการยับยั้งการเจริญเติบโตของเนื้องอก (TGI) ของกลุ่มการรักษาต่างๆ

2.7. CILPs เพิ่มการแทรกซึมของ T-Cell และการหลั่ง IFN

เพื่อสำรวจสภาพแวดล้อมของเซลล์ภูมิคุ้มกันของเนื้องอก เซลล์ภูมิคุ้มกันที่เกิดจาก CILP ได้รับการวิเคราะห์ทางอิมมูโนฮิสโตเคมีเมื่อสิ้นสุดการทดสอบการต่อต้านเนื้องอก ทีเซลล์ CD4+ และ CD8+ ถูกเพิ่มขึ้นในส่วนของเนื้องอกของกลุ่ม CILP (รูปที่ 7) การนำส่งร่วมกันของ Fc-CV1 และการบำบัดด้วยอิมิควิโมดทำให้เกิดการแทรกซึมของทีเซลล์ CD4+ และ CD8+ ที่มีนัยสำคัญ นอกจากนี้ มีการหลั่ง IFN อย่างมีนัยสำคัญในเนื้องอกที่ได้รับการรักษาด้วย CILPs ซึ่งเป็นเพราะ CILP กระตุ้นตัวรับที่มีลักษณะคล้ายค่าผ่านทาง 7 และกระตุ้นการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกัน

รูปที่ 7 อิมมูโนฮิสโตเคมีของเนื้อเยื่อเนื้องอกของหนู เซลล์บวกจะมีคราบสีน้ำตาล สเกลบาร์ 50 µm (n=5)

2.8. การประเมินความปลอดภัยทางชีวภาพของ CILPs

ความปลอดภัยทางชีวภาพของการบำบัดโดยใช้ CILPs ก็เป็นดัชนีที่สำคัญในแง่ของการเข้าถึงการประเมินการรักษา ในระหว่างการศึกษาการยับยั้งเนื้องอก ในร่างกาย CILP ไม่ได้ทำให้น้ำหนักลดลงอย่างมีนัยสำคัญในช่วงเวลาของการรักษา (รูปที่ 6D) พารามิเตอร์ทางชีวเคมีของตับและไตทั้งหมดอยู่ในช่วงปกติตามช่วงอ้างอิงมาตรฐานของหนู (ตารางที่ 3) และมิญชวิทยาของอวัยวะไม่พบการเปลี่ยนแปลงที่มีนัยสำคัญ ซึ่งบ่งชี้ว่า CILP มีความปลอดภัยทางชีวภาพที่ดีเยี่ยม (รูปที่ 8) การค้นพบนี้มีความสำคัญอย่างยิ่งในการประเมินศักยภาพของ CILP ในฐานะตัวแทนการรักษาโรคมะเร็งที่ปลอดภัยและมีประสิทธิภาพ

ตารางที่ 3. พารามิเตอร์ทางชีวเคมีของตับและไต

รูปที่ 8 การย้อมสี H&E (hematoxylin และ eosin) ของอวัยวะหลัก สเกลบาร์ 50 µm (n=3)

3. วัสดุและวิธีการ

3.1. วัสดุ

Imiquimod ถูกซื้อจาก MedChem Express (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) Fc-CV1 ถูกจัดให้มีขึ้นโดยห้องปฏิบัติการหลักของรัฐของยาแอนติบอดีและการรักษาแบบมุ่งเป้า คอเลสเตอรอล, เลซิตินที่เติมไฮโดรเจน (HSPC), DSPE-PEG2000, DSPE-PEG2000-NHS และ DSPE-PEGCy5 ถูกซื้อจาก Xi'an Ruixi Biological Technology Co., Ltd. (ซีอาน ประเทศจีน) 40,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) ได้มาจาก Keygen Biotech (หนานจิง ประเทศจีน) แอมโมเนียมซัลเฟตได้มาจาก Sinopharm (เซี่ยงไฮ้, จีน) ซื้อเมทานอล (เกรดโครมาโตกราฟี) และอะซิโตไนไตรล์ (เกรดโครมาโตกราฟี) จากบริษัท Aladdin Reagent (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) รีเอเจนต์อื่นๆ ทั้งหมดเป็นเกรดการวิเคราะห์ภายในประเทศ เซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่ของหนูเมาส์ CT26 WT จัดทำโดย Cell Bank ของ Chinese Academy of Science เซลล์ถูกเลี้ยงในตู้ฟักเซลล์ในตัวกลาง RPMI 1640 ที่มี FBS 10% (Thermo Fisher Scientific, New York, NY, USA) ที่ 5% CO2 และอากาศ 95% หนู BALB / c ตัวเมียอายุ 4-6 สัปดาห์จัดทำโดย Pengyue Laboratory Animal Breeding Co., Ltd. (จี่หนาน, จีน)

3.2. การเตรียมไลโปโซมเปล่า

ขั้นแรก HSPC 13.455 มก., DSPE-PEG2000 4.3595 มก. และโคเลสเตอรอล 4.7095 มก. ได้รับการชั่งน้ำหนักอย่างแม่นยำและละลายในเอธานอล 0.1 มล. (HSPC: DSPE-PEG2000:โคเลสเตอรอล=55.5: 5.05:39.3 อัตราส่วนฟันกราม) ประการที่สอง สารละลายเอทานอลถูกฉีดอย่างรวดเร็วเข้าไปในสารละลายแอมโมเนียมซัลเฟตที่ได้รับความร้อนล่วงหน้า (250 มิลลิโมลาร์, 1 มิลลิลิตร, 65 ◦C) โดยใช้หลอดฉีดยา จากนั้นบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่ 65 ◦C โดยใช้การกวนแม่เหล็ก ต่อจากนั้น สารละลายที่เตรียมไว้จะถูกอัดรีดอย่างต่อเนื่องผ่านเมมเบรนโพลีคาร์บอเนต (Avanti, Alabaster, AL, USA); ขนาดคือ 200 นาโนเมตร 100 นาโนเมตร และ 50 นาโนเมตร ตามลำดับ สุดท้าย สารละลายที่เป็นผลลัพธ์คือไลโปโซมเปล่า (LP) ที่มีความเข้มข้นของไขมัน 22.5 มก./มล.

3.3. การเตรียมไลโปโซมอิมิกิโมดที่ถูกห่อหุ้มแบบกำหนดเป้าหมาย CD47

ขั้นแรก DSPE-PEG2000-NHS ถูกละลายใน ddH2O (60 ◦C) จากนั้นผสมกับ Fc-CV1 และบ่มในโต๊ะเขย่าที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 ชั่วโมง (Fc-CV1:DSPPEG2000- NHS=12:1 อัตราส่วนโมล) กลไกปฏิกิริยาทางเคมีของการเชื่อมต่อระหว่าง Fc-CV1 และ DSPE-PEG2000-NHS เกี่ยวข้องกับเอสเทอร์ของ NHS ที่ทำปฏิกิริยากับเอมีนปฐมภูมิบน Fc-CV1 และก่อตัวเป็นคอนจูเกตพันธะเอมีนตาราง สารละลายที่เตรียมไว้ผสมตามสัดส่วนกับ LP และบ่มที่อุณหภูมิ 60 °C เป็นเวลา 1 ชั่วโมงเพื่อใส่ Fc-CV1 เข้าไปในไลโปโซมซึ่งมีชื่อว่า "หลังการแทรก" [38] สัดส่วนของผสมคือ Fc-CV1 2.25 มิลลิกรัมถูกดัดแปลงต่อไลโปโซม 22.5 มิลลิกรัม จากนั้นได้รับไลโปโซมแบบกำหนดเป้าหมาย (CLP) CD47

ต่อจากนั้น CLP ถูกใส่ในถุงฟอกไต (300 กิโลดาลตัน) และฟอกไตกับ HEPES (10 มิลลิโมลาร์, pH=7.4) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงเพื่อกำจัดแอมโมเนียมซัลเฟตและ Fc-CV1 ที่ตกค้างในเฟสน้ำภายนอก CLP ที่ถูกไดอะไลซ์ถูกบ่มด้วยสารละลายอิมิควิโมด (5 มก./มล.) ที่อัตราส่วนของฟอสโฟลิปิดทั้งหมด 1 มก. ถึง 7 ไมโครโมลที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 24 ชั่วโมงและจากนั้นถูกไดอะไลซ์กับ PBS (300 กิโลดาลตัน) สามครั้งเพื่อกำจัดอิมิกิโมดที่ไม่ถูกห่อหุ้ม ซึ่งอ้างอิงถึง เทคนิคการไล่ระดับแอมโมเนียมซัลเฟต [39] จากนั้นจึงได้รับ CILPs นอกจากนี้ ไลโปโซม (ILP) ที่ถูกห่อหุ้มด้วยอิมิควิโมดแบบกำหนดเป้าหมายที่ไม่ใช่ซีดีถูกเตรียมไว้ CLP และ ILP ถือเป็นตัวควบคุมสำหรับ CILP

3.4. ลักษณะ

สัณฐานวิทยาของไลโปโซมเหล่านี้ถูกถ่ายภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน (TEM, Joel, โตเกียว, ญี่ปุ่น) ขนาด ศักย์ซีตา และดัชนีการกระจายตัวของโพลีเมอร์ (PDI) ของไลโปโซมเหล่านี้ถูกกำหนดโดยการกระเจิงของแสงแบบไดนามิก (DLS) และการกระเจิงของแสงด้วยไฟฟ้า (ELS) โดยใช้ Zeta sizer ZSE ของ Malvern (Malvern, UK) อัตราการจับ (BR) ของ Fc-CV1 ที่ใส่เข้าไปในไลโปโซมวัดโดยโซเดียมลอริลซัลเฟต-โพลีอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโทรโฟเรซิส 15% (SDS-PAGE) และซอฟต์แวร์ Image J (Bethesda, MD, USA) ประสิทธิภาพการห่อหุ้ม (EE) ของ imiquimod ถูกตรวจพบโดยโครมาโทกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC, Thermo Fisher Scientific, New York, NY, USA)

ประโยชน์ของ cistanche tubulosa-Antitumor

3.5. การศึกษาการดูดซึมเซลล์ภายนอกร่างกาย

การดูดซึมเซลล์ ในหลอดทดลอง ของไลโปโซมเหล่านี้ถูกกำหนดโดยความเข้มของแสงเรืองแสงสะสมของ Cy5 ใน CT26 เซลล์ WT DSPE-PEG-Cy5 ถูกบ่มด้วย CILPs และ ILPs (DSPE-PEG-Cy5: CILPs หรือ ILPs=1:5 อัตราส่วนมวล) ที่ 60 o C เป็นเวลา 1 ชั่วโมงตามลำดับ จากนั้นตามด้วยไลโปโซมเรืองแสง ได้รับชื่อเป็น CILPs-Cy5 และ ILPs-Cy5 เซลล์ CT26.WT ถูกเพาะในจานหลุม 96- และแบ่งออกเป็นสามกลุ่มแบบสุ่ม (1 × 104 เซลล์/หลุม, n=3) หลังจากการบรรจบกันของเซลล์ถึง 50–70% แต่ละกลุ่มจะถูกบ่มด้วย Cy5, ILPs-Cy5 และ CILPs-Cy5 อิสระ ตามลำดับ เป็นเวลา 30 นาทีที่ 37 —C ซึ่งความเข้มข้นสุดท้ายของ Cy5 คือ 1 µg/mL 0.1 มล. RPMI 1640 มีเดียม ต่อมา เซลล์ถูกตรึงด้วย 4% พาราฟอร์มัลดีไฮด์เป็นเวลา 15 นาทีหลังจากถูกล้างสองครั้งด้วย PBS และจากนั้นย้อมด้วย 10 ไมโครลิตร DAPI (1 ไมโครกรัม/ไมโครลิตร) เป็นเวลา 10 นาทีหลังจากถูกล้างสองครั้งด้วย PBS ในที่สุดการดูดซึมของเซลล์แต่ละกลุ่มจะถูกบันทึกโดยระบบการถ่ายภาพเนื้อหาสูง (อุปกรณ์ระดับโมเลกุล, ซันนีเวล, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) หลังจากล้างด้วย PBS สองครั้ง

3.6. การศึกษาการเผยแพร่ Imiquimod

เส้นโค้งการปลดปล่อยของไลโปโซมที่บรรจุยาหลายชนิดถูกดำเนินการโดยใช้วิธีการฟอกไต (300 kDa) และผลลัพธ์ถูกเปรียบเทียบกับสารละลายอิมิควิโมดอิสระ โดยสรุป 0.6 มิลลิลิตร ILP, CILP และสารละลายอิมิควิโมดถูกบรรจุแยกกันในถุงล้างไตและจากนั้นใส่ในสารละลาย PBS 500 มิลลิลิตร (pH=7.4, 37 ◦C) ตัวอย่างที่มีปริมาตรเท่ากันถูกสกัดจากถุงในช่วงเวลาที่กำหนดไว้ล่วงหน้า (0, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 48, 72 และ 96 ชั่วโมง) และอัตราการปลดปล่อย (RR) ของ imiquimod คำนวณโดยใช้สมการต่อไปนี้:

โดยที่ Sund และ Sd เป็นตัวแทนของพื้นที่จุดสูงสุดของ HPLC ของ imiquimod ในการเตรียมการฟอกไตและฟอกไตในเวลาต่าง ๆ ตามลำดับ (n=3)

3.7. ความเป็นพิษต่อเซลล์ของ CILP

เซลล์ CT{{0}}.WT ถูกเพาะในจานหลุม 96- (1 × 104/หลุม, n=3) และเพาะเลี้ยงในตัวกลาง RPMI 1640 100 µL จนกระทั่งเกิดการบรรจบกัน เข้าใกล้ถึง 70% แล้ว เพื่อกำหนดความเป็นพิษต่อเซลล์ของ CILP ตัวกลาง RPMI 1640 ถูกนำออกจากแต่ละหลุมและแทนที่ด้วยสารละลายที่ซับซ้อนของ CILP และตัวกลาง RPMI 1640 โดยมีความเข้มข้นของ Fc-CV1 และอิมิควิโมดอยู่ในช่วงตั้งแต่ 0 ถึง 10 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร เซลล์ถูกบ่มด้วยสารละลายที่ซับซ้อนเป็นเวลา 24 ชั่วโมง นอกจากนี้ เซลล์ที่ได้รับการบำบัดด้วย Fc-CV1, CLPs, สารละลาย imiquimod และ ILPs ในความเข้มข้นใกล้เคียงกันถือเป็นกลุ่มควบคุม เซลล์ที่รอดตายถูกตรวจพบด้วยการสอบวิเคราะห์ CCK-8 หลังจากผ่านไป 24 ชั่วโมง และความมีชีวิตของเซลล์ที่ไม่ได้รับการบำบัดถูกพิจารณาว่าเป็น 100%

3.8. การศึกษาการกระจายตัวทางชีวภาพ

หนูเมาส์ BALB/c ตัวเมียเก้าตัวถูกฉีดใต้ผิวหนังด้วย CT26 เซลล์ WT (5 × 105 ) ที่ปีกขวาและหนูที่มีเนื้องอกเหล่านี้ถูกสุ่มแบ่งออกเป็นสามกลุ่ม (n=3) ปริมาตรของเนื้องอกถูกวัดโดยใช้คาลิเปอร์และคำนวณโดยสูตรต่อไปนี้:

เมื่อปริมาตรของเนื้องอกถึง 100 ลูกบาศก์มิลลิเมตร Cy5, ILP-Cy5 และ CILPs-Cy5 อิสระถูกฉีดเข้าเส้นเลือดดำที่ขนาดยา Cy5 0.4 มก./กก. ยี่สิบสี่ชั่วโมงหลังการฉีดเข้าเส้นเลือดดำ เนื้องอก หัวใจ ตับ ม้าม ปอด และไต ถูกนำออกไป สัญญาณเรืองแสงของเนื้องอกและอวัยวะหลักถูกตรวจพบโดยระบบถ่ายภาพด้วยแสง IVIS (IVIS Lumina LT III, PerkinElmer, Waltham, MA, USA)

3.9. ในการศึกษาการยับยั้งเนื้องอกของ Vivo

หนู BALB/c ตัวเมียสามสิบห้าตัวถูกสุ่มแบ่งออกเป็นเจ็ดกลุ่ม (n=5) และ 5 × 105 CT26 เซลล์ WT ถูกฉีดเข้าใต้ผิวหนังที่ปีกขวาของเมาส์แต่ละตัว เมื่อเนื้องอกของหนูเมาส์มีขนาดประมาณ 100 มิลลิเมตร3 การบำบัดเริ่มต้นขึ้น PBS, LPs, imiquimod, Fc-CV1, ILPs, CLPs และ CILPs ถูกฉีดเข้าเส้นเลือดดำในวันที่ 0, 4, 8 และ 12 ปริมาณของ imiquimod คือ 2.5 มก./กก. ในการฉีดครั้งแรกและครั้งที่สอง และ 5 มก./กก. ในการฉีดครั้งที่สามและสี่ ในการฉีดทั้งหมด ขนาดยาของ Fc-CV1 คือ 5 มก./กก. ในขนาดยานี้ ความเข้มข้นของยาในร่างกายอยู่ที่ 2.5–5 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร ซึ่งทำให้เกิดความเป็นพิษต่อเซลล์ในการทดลองในหลอดทดลอง วัดเส้นผ่านศูนย์กลางของเนื้องอกและน้ำหนักตัวทุกวันระหว่างการรักษา ในวันที่ 17 เนื้องอกของหนูถูกนำออกและวัดน้ำหนักของพวกมัน การยับยั้งการเจริญเติบโตของเนื้องอก (TGI) คำนวณตามสูตรต่อไปนี้:

3.10. อิมมูโนวิทยา

การย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมีของ CD4, CD8 และ IFN ดำเนินการในเนื้อเยื่อเนื้องอกตามเกณฑ์วิธีมาตรฐาน หลังจากแยกพาราฟินและเติมน้ำให้กับส่วนพาราฟินของเนื้อเยื่อเนื้องอกแล้ว ให้เติม BSA 3% ลงในวงกลมเพื่อปกปิดเนื้อเยื่อ จากนั้นจึงปิดผนึกเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ส่วนต่างๆ ถูกย้อมด้วยแอนติบอดี CD4, CD8 และ IFN (Servicebio, หวู่ฮั่น, จีน) ข้ามคืนที่ 4 ° C จากนั้นบ่มด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิ (ติดฉลาก HRP, Servicebio, หวู่ฮั่น, จีน) ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 50 นาที หลังจากล้างด้วย PBS สองครั้ง ในท้ายที่สุด ส่วนต่างๆ จะถูกมองเห็นภายใต้กล้องจุลทรรศน์ (Nikon, E100, โตเกียว, ญี่ปุ่น) หลังจากทำปฏิกิริยากับตัวแทน chromogenic ของ DAB

cistanche tubulosa-ปรับปรุงระบบภูมิคุ้มกัน

3.11. การประเมินความปลอดภัยทางชีวภาพของ CILPs

ในตอนท้ายของการศึกษาการยับยั้งเนื้องอก เนื้องอกทั้งหมดถูกรวบรวม และวัดน้ำหนักของเนื้องอกเหล่านี้ ตรวจพบพารามิเตอร์ทางชีวเคมี ได้แก่ อะลานีนทรานซามิเนส (ALT), แอสพาเทตทรานซามิเนส (AST), ครีเอตินีน (CREA) และยูเรีย (UREA) ในเลือดของหนู เนื้อเยื่อเนื้องอกสดและอวัยวะสำคัญได้รับการแก้ไขด้วยพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4% และฝังในพาราฟินโดยใช้เครื่องฝัง (Wuhan Junjie Electronics, JB-P5, หวู่ฮั่น, จีน) ชิ้นเนื้อเยื่อที่มีความหนา 5 µm ถูกตัดผ่าน microtome (Leica Instrument, RM2016, เซี่ยงไฮ้, จีน) จากนั้นย้อมด้วย hematoxylin และ eosin (H&E) ตามระเบียบการ ต่อจากนั้น สังเกตชิ้นรอยเปื้อนด้วยกล้องจุลทรรศน์ (Nikon, E100, โตเกียว, ญี่ปุ่น)

3.12. การวิเคราะห์ทางสถิติ

ข้อมูลทั้งหมดแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± SD ระดับนัยสำคัญระหว่างกลุ่มได้รับการทดสอบโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบทางเดียวโดยใช้ Graphpad Prism 80.2 p < 0.05 ถูกกำหนดให้เป็นความแตกต่างที่มีนัยสำคัญ

3.13. จริยธรรมสัตว์

ขั้นตอนและคำแนะนำทั้งหมดเกี่ยวกับสัตว์ได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการพิเศษด้านจริยธรรมการวิจัยทางวิทยาศาสตร์ของมหาวิทยาลัย Liaocheng ตามแนวทางระดับชาติสำหรับการดูแลและการใช้สัตว์ทดลอง (รหัสการอนุมัติ: 2022111010; วันที่อนุมัติ: 1 พฤศจิกายน 2022)

cistanche พืชเพิ่มระบบภูมิคุ้มกัน

4. ข้อสรุป

โดยสรุป ไลโปโซมเป้าหมายที่ห่อหุ้มซีดี47-ของ imiquimod ได้รับการพัฒนาอย่างประสบความสำเร็จ และผลลัพธ์ภายนอกร่างกายพิสูจน์ว่า CILP มีการปลดปล่อยที่ยั่งยืนที่ดีกว่าและผลในการกำหนดเป้าหมายเฉพาะ ผลการศึกษาในสิ่งมีชีวิตแสดงให้เห็นว่า เซลล์เนื้องอกสามารถเตรียมการเตรียมการได้อย่างมีประสิทธิภาพ และแสดงประสิทธิภาพการรักษาเนื้องอกและความปลอดภัยทางชีวภาพที่ดีเยี่ยม เนื่องจากฟังก์ชันสองประการของการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันและการปิดกั้นจุดตรวจภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติ ดังนั้นไลโปโซมที่ห่อหุ้ม imiquimod ควบคู่กับ Fc-CV1 ดูเหมือนจะเป็นยานาโนชนิดใหม่ที่มีแนวโน้มว่าจะปรับปรุงการรักษาเนื้องอกในการแสดงออกของ CD47 การบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันโดยใช้ภูมิคุ้มกันโดยกำเนิดอาจทำหน้าที่เป็นกลยุทธ์ทั่วไปในการป้องกันการเติบโตของเนื้องอกสำหรับการผสมผสานที่เสริมฤทธิ์กันกับ ICB ในอนาคต

อ้างอิง

1. ซอง ฮ.; เฟอร์เลย์ เจ.; ซีเกล, RL; ลาเวอร์ซาน ม.; เซอร์โจมาตาราม ไอ.; เจมัล, อ.; Bray, F. สถิติมะเร็งทั่วโลกปี 2020: การประมาณการอุบัติการณ์และการเสียชีวิตของ Globocan ทั่วโลกสำหรับโรคมะเร็ง 36 รายใน 185 ประเทศ CA Cancer เจ. คลินิก 2021, 71, 209–249. [CrossRef] [PubMed]

2. คาร์ลสัน ถ.; ฟลิคกิงเกอร์ เจซี จูเนียร์; Snook, AE Talkin 'Toxins: จาก Coleys ไปจนถึงการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันมะเร็งสมัยใหม่ สารพิษ 2020, 12, 241. [CrossRef] [PubMed]

3. บาร์บารี ค.; ฟงแตน ต.; ปาราจูลี ป.; ลามิเชน น.; ยาคุบสกี้ ส.; ลามิเชน ป.; Deshmukh, RR การบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันและกลยุทธ์ผสมผสานสำหรับภูมิคุ้มกันและมะเร็งวิทยา นานาชาติ เจ. โมล. วิทยาศาสตร์ 2020, 21, 5009. [CrossRef]

4. เฮกเด PS; Chen, DS ความท้าทาย 10 อันดับแรกในการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันโรคมะเร็ง ภูมิคุ้มกัน 2020, 52, 17–35. [ครอสอ้างอิง]

5. Jain, KK ภูมิคุ้มกันวิทยาส่วนบุคคล ยา ปริญญ์ การปฏิบัติ 2021, 30, 1–16. [ครอสอ้างอิง]

6. สันมาเม็ด MF; Chen, L. การเปลี่ยนกระบวนทัศน์ในการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันมะเร็ง: จากการเพิ่มประสิทธิภาพไปสู่การทำให้เป็นมาตรฐาน เซลล์ 2018, 175, 313–326 [ครอสอ้างอิง]

7. ฮุสเซน, ดับเบิลยูเอ็ม; หลิว ตี้; สวาร์ซินสกี้ ม.; Toth, I. Agonists ตัวรับแบบ Toll-Like: การทบทวนสิทธิบัตร (2011–2013) ความคิดเห็นของผู้เชี่ยวชาญ เธอ. แพท. 2014, 24, 453–470. [ครอสอ้างอิง]

8. จิ ฮ.; หลี่ ค.; จ้าว FS; จาง ล.; อึ้ง, วัณโรค; จิน ก.; Sha, O. กิจกรรมต่อต้านเนื้องอกของ Toll-Like Receptor 7 Agonists ด้านหน้า. เภสัช 2017, 8, 304. [CrossRef] [PubMed]

9. วัง ย.; จาง ส.; หลี่ฮ.; วัง, เอช.; จาง ต.; ฮัทชินสัน นาย; หยิน เอช.; Wang, X. ตัวปรับโมเลกุลขนาดเล็กของตัวรับแบบ Toll-Like บัญชี เคมี. ความละเอียด 2020, 53, 1046–1055. [CrossRef] [PubMed]

10. เลอ เมอร์ซิเอร์ ไอ.; ปูจอล, ด.; สันลาวิลล์ อ.; วี.สีสิรักษ์.; โกเบิร์ต ม.; ดูรันด์ ฉัน.; ดูบัวส์ บ.; เทรลเลอซ์ ฉัน.; มาร์เวล เจ.; วลัค เจ.; และคณะ การส่งเสริมเนื้องอกโดยเซลล์พลาสมาไซตอยด์เดนไดรต์ในเนื้องอกจะถูกกลับรายการโดยการรักษาลิแกนด์ Tlr7 มะเร็ง Res 2013, 73, 4629–4640. [ครอสอ้างอิง]

11. แม่ ฟ.; จางเจ.; จางเจ.; Zhang, C. Agonists Tlr7 Imiquimod และ Gardiquimod ปรับปรุงการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันแบบ DC-Based สำหรับ Melanoma ในหนู เซลล์ โมล อิมมูนอล. 2010, 7, 381–388. [ครอสอ้างอิง]

12. บิลลัน ส.; Kaidar-บุคคล, O.; Gil, Z. การรักษาหลังความก้าวหน้าในยุคของการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกัน มีดหมอ Oncol 2020, 21, e463–e476 [CrossRef] [PubMed]

13. ดาร์วิน พี.; ทูร์ เอสเอ็ม; ศศิธารัน แนร์, วี.; Elkord, E. Immune Checkpoint Inhibitors: ความคืบหน้าล่าสุดและไบโอมาร์คเกอร์ที่มีศักยภาพ ประสบการณ์ โมล ยา 2018, 50, 1–11. [CrossRef] [PubMed]

14. หลี่ บ.; ชาน, เอชแอล; Chen, P. Immune Checkpoint Inhibitors: พื้นฐานและความท้าทาย สกุลเงิน ยา เคมี. 2019, 26, 3009–3025. [CrossRef] [PubMed]

15. เจีย เอ็กซ์.; ยัน บ.; เทียน เอ็กซ์.; หลิวคิว.; จิน เจ.; ชิเจ.; Hou, Y. Cd47/Sirpalpha Pathway เป็นสื่อกลางในการหลบหนีจากภูมิคุ้มกันของมะเร็งและการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกัน นานาชาติ เจ. ไบโอล. วิทยาศาสตร์ 2021, 17, 3281–3287. [ครอสอ้างอิง]

16. สโบดา DM; Salman, DA คำมั่นสัญญาของสารยับยั้งจุดตรวจสอบที่กำกับโดย Macrophage ในมะเร็งชนิดไมอีลอยด์ แนวปฏิบัติที่ดีที่สุดและการวิจัย คลินิก. ฮีมาทอล. 2020, 33, 101221.

17. เลนทซ์ RW; โคลตัน นพ.; มิตรา, เอสเอส; Messersmith, WA สารยับยั้งจุดตรวจภูมิคุ้มกันโดยกำเนิด: ความก้าวหน้าครั้งต่อไปในด้านเนื้องอกวิทยาทางการแพทย์? โมล มะเร็งเธอ 2021, 20, 961–974. [ครอสอ้างอิง]

18. เจียง ป.; ลาเกนอร์ ซีเอฟ; Narayanan, V. โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับอินทิกรินเป็นลิแกนด์สำหรับโมเลกุลการยึดเกาะของระบบประสาท P84 เจ. ไบโอล. เคมี. 1999, 274, 559–562. [ครอสอ้างอิง]

19. ไซเฟิร์ต ม.; คานท์, ค.; เฉิน ซ.; แรปโปลด์ ไอ.; บรูกเกอร์ ว.; คานซ์, ล.; บราวน์ อีเจ; อัลริช, อ.; โปรตีนควบคุมสัญญาณของมนุษย์ของ Buhring, HJ แสดงออกตามปกติ แต่ไม่ได้อยู่ในกลุ่มย่อยของเซลล์มะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิดมัยอีลอยด์ และเป็นสื่อกลางในการยึดเกาะของเซลล์ที่เกี่ยวข้องกับตัวรับ Cd47 เลือด 1999, 94, 3633–3643 [ครอสอ้างอิง]

20. มัตลุง เอชแอล; Szilagyi, K.; บาร์เคลย์ นา; van den Berg, TK The Cd47-Sirpalpha Signaling Axis ในฐานะจุดตรวจภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติในโรคมะเร็ง อิมมูนอล. ฉบับที่ 2017, 276, 145–164. [CrossRef] [PubMed]

21. โอลเดนบอร์ก, เพนซิลเวเนีย; Zheleznyak, A.; ฝาง วายเอฟ; ลาเกนอร์ ซีเอฟ; เกรแชม เอชดี; Lindberg, FP บทบาทของ Cd47 ในฐานะเครื่องหมายของตนเองในเซลล์เม็ดเลือดแดง วิทยาศาสตร์ 2000, 288, 2051–2054 [ครอสอ้างอิง]

22. หลี่ ซ.; หลี่ย.; เกา เจ.; ฟู่ ย.; หัว ป.; จิงย.; ไค ม.; วัง, เอช.; Tong, T. บทบาทของ Cd47-จุดตรวจภูมิคุ้มกัน Sirpalpha ในการหลีกเลี่ยงภูมิคุ้มกันของเนื้องอกและการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติ วิทยาศาสตร์ชีวิต 2021, 273, 119150. [CrossRef]

23. ฮายัต SMG; เบียงโคนี, วี.; ปิโร, ม.; จาฟารี นาย; ฮาตามิปูร์ ม.; Sahebkar, A. Cd47: บทบาทในระบบภูมิคุ้มกันและการประยุกต์กับการรักษาโรคมะเร็ง เซลล์ อองคอล. 2020, 43, 19–30. [ครอสอ้างอิง]

24. หวาง ย.; อาจ.; เกา ป.; Yao, Z. การกำหนดเป้าหมาย Cd47: ความสำเร็จและข้อกังวลของการศึกษาปัจจุบันเกี่ยวกับการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันโรคมะเร็ง เจ. ทอรัก. โรค 2017, 9, E168–E174. [ครอสอ้างอิง]

25. จาง ว.; หวง คิว.; เซียว ว.; จ้าว ย.; พี่เจ.; ซู เอช.; จ้าว เอช.; ซู เจ.; อีแวนส์ ซีอี; Jin, H. ความก้าวหน้าในการรักษาเนื้องอกโดยมุ่งเป้าไปที่แกน Cd47/Sirpalpha ด้านหน้า. อิมมูนอล. 2020, 11, 18. [CrossRef] [PubMed]

26. หลิว เอ็กซ์.; ปู่ย.; ครอน, เค.; เติ้ง, ล.; ไคลน์ เจ.; เฟรเซอร์, วอชิงตัน; ซู เอช.; เป็ง เอช.; ฟู่ YX; Xu, MM Cd47 การปิดล้อมกระตุ้นให้เกิดการทำลายเซลล์โดยอาศัย T ของเนื้องอกที่สร้างภูมิคุ้มกัน แนท. ยา 2015, 21, 1209–1215. [CrossRef] [PubMed]

27. ไวสคอฟ ค.; ริง, น.; โฮ ซีซี; โวลค์เมอร์ เจพี; เลวิน น.; โวลค์เมอร์ อลาสกา; ออซคาน อี.; เฟิร์นฮอฟฟ์, NB; ฟาน เดอ ไรน์ ม.; ไวส์แมน อิลลินอยส์; และคณะ วิศวกรรมพันธุ์ Sirpalpha ให้เป็นสารเสริมภูมิคุ้มกันบำบัดสำหรับแอนติบอดีต้านมะเร็ง วิทยาศาสตร์ 2013, 341, 88–91. [ครอสอ้างอิง]

28. ซยง จ.; Ohlfest, JR Topical Imiquimod มีผลการรักษาและภูมิคุ้มกันต่อเนื้องอกในกะโหลกศีรษะ เจ. ภูมิคุ้มกัน. 2011, 34, 264–269. [ครอสอ้างอิง]

29. ป. คามัท; ดาร์วิน อี.; อโรร่า, เอช.; Nouri, K. การทบทวนเกี่ยวกับการบำบัดด้วย Imiquimod และการอภิปรายเกี่ยวกับการจัดการที่เหมาะสมที่สุดของมะเร็งเซลล์ต้นกำเนิด คลินิก. การสืบสวนเรื่องยาเสพติด 2018, 38, 883–899. [ครอสอ้างอิง]

30. หลิว ย.; คาสโตร บราโว กม.; Liu, J. การส่งยา Liposomal แบบกำหนดเป้าหมาย: มุมมองนาโนวิทยาศาสตร์และชีวฟิสิกส์ ระดับนาโน Horiz 2021, 6, 78–94. [CrossRef] [PubMed]

31. ฟาร์จาเดียน ฟ.; กาเซมิ อ.; โกฮาริ โอ.; รูอินตัน, อ.; คาริมิ ม.; Hamblin, MR Nanopharmaceuticals และ Nanomedicines กำลังอยู่ในตลาด: ความท้าทายและโอกาส นาโนการแพทย์ 2019, 14, 93–126. [ครอสอ้างอิง]

32. โจว เอ็กซ์.; เจียว ล.; เคียน ย.; ดงคิว.; ซัน ย.; เจิ้ง ว.; จ้าวว.; ไจ่, ว.; ชิว ล.; วู, ย.; และคณะ การเปลี่ยนตำแหน่งอะเซลนิดิพีนเป็นสารยับยั้งคู่โดยกำหนดเป้าหมายเส้นทาง Cd47/Sirpalpha และ Tigit/Pvr สำหรับการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันมะเร็ง ชีวโมเลกุล 2021, 11, 706. [CrossRef]

33. นี ก.; หลัว ต.; คัลเบิร์ต, อ.; คอฟมันน์ ม.; เจียงเอ็กซ์.; Lin, W. Nanoscale Metal-Organic Framework ร่วมกันส่งมอบ Tlr-7 Agonists และ Anti-Cd47 Antibodies เพื่อปรับมาโครฟาจและประสานการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันโรคมะเร็ง แยม. เคมี. สังคมสงเคราะห์ 2020, 142, 12579–12584. [ครอสอ้างอิง]

34. เฉิน คิว.; ซู ล.; เหลียงค.; วังค.; เป็ง ร.; Liu, Z. การบำบัดด้วยความร้อนด้วยอนุภาคนาโนแบบเสริมภูมิคุ้มกันร่วมกับการปิดล้อมจุดตรวจเพื่อการบำบัดด้วยภูมิคุ้มกันมะเร็งที่มีประสิทธิภาพ แนท. ชุมชน 2016, 7, 13193. [CrossRef] [PubMed]

35. เหว่ย เจ.; ลองย.; กัวร.; หลิวเอ็กซ์.; ถังเอ็กซ์.; เราเจ.; หยิน ส.; จาง ซ.; หลี่ ม.; He, Q. การบำบัดด้วยเคมีบำบัดด้วยไมเซลล์โพลีเมอร์แบบมัลติฟังก์ชั่นพร้อมการปิดล้อมจุดตรวจภูมิคุ้มกันเพื่อการรักษามะเร็งเต้านมออร์โธโทปิกและระยะลุกลามอย่างมีประสิทธิภาพ แอคต้า ฟาร์มา. บาป. บ 2019, 9, 819–831. [ครอสอ้างอิง]

36. หวง SW; วัง, เซนต์; ช้าง ช.; จวง เคซี; วัง HY; เก้า เจเค; เหลียง เอสเอ็ม; วู, แคลิฟอร์เนีย; เกา SH; เฉิน วายเจ; และคณะ Imiquimod ออกฤทธิ์ต้านเนื้องอกโดยกระตุ้นการตายของเซลล์ภูมิคุ้มกัน และปรับปรุงประสิทธิภาพโดยสารยับยั้งไกลโคไลติก 2-ดีออกซีกลูโคส เจ. สืบสวน. เดอร์มาทอล 2020, 140, 1771–1783.e6. [CrossRef] [PubMed]

37. วัง บ.; เขาเอ็กซ์.; จาง ซ.; จ้าว ย.; Feng, W. การเผาผลาญของวัสดุนาโนใน Vivo: การไหลเวียนโลหิตและการกวาดล้างอวัยวะ บัญชี เคมี. ความละเอียด 2013, 46, 761–769. [ครอสอ้างอิง]

38. อัคตารี เจ.; เรซายัต, เอสเอ็ม; เตย์มูรี ม.; อลาวิซาเดห์, SH; เกย์บี เอฟ.; บาดี้, อ.; Jaafari, การกำหนดเป้าหมาย MR, การกระจายตัวทางชีวภาพและการเจริญเติบโตของเนื้องอกที่ยับยั้งการแสดงลักษณะของการเชื่อมต่อแบบ Anti-Her2 Affibody กับ Liposomal Doxorubicin โดยใช้ Balb/C Mice Bearing Tubo Tumors นานาชาติ เจ ฟาร์มา. 2016, 505, 89–95. [ครอสอ้างอิง]

39. วูดเดิ้ล พิธีกร; Papahadjopoulos, D. การเตรียมไลโปโซมและการกำหนดลักษณะขนาด วิธีการใช้เอนไซม์ 1989, 171, 193–217. [ผับเมด]