การวิจัยการแทรกแซงของ Phenylethyl Alcohol GlycosidesinCistanche ในสัตว์ทดลองกลุ่มอาการในวัยหมดประจำเดือนⅡ

การทดลองที่ 1 การเตรียม Cistanche phenylethanoid glycoside 1 แหล่งที่มาของวัตถุดิบยา

Cistanche tubulosa, Chengdu Wecistanche biotech Ltd.d, หมายเลขแบทช์: 20130501

รีเอเจนต์ 2 รายการ

เอทานอล 95% (เกรดทางการแพทย์); เรซินดูดซับที่มีรูพรุนขนาดใหญ่ AB-8 สถาบันวิจัยเคมีขั้นสูง Guangfu เทียนจิน หมายเลขแบทช์: 20130618

สารอ้างอิงเอไคนาโคไซด์ จัดทำโดย China Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products หมายเลขแบทช์: 111670-200503.3

CISTANCHE ใช้เวลานานเท่าใดในการทำงาน?

วิธีการเตรียม

มีการอ้างอิงถึงวิธีการทางวรรณกรรม [19] และดำเนินการภายใต้การแนะนำของศาสตราจารย์เฟิง ซูเซียง จากแผนกวิเคราะห์ยาของวิทยาลัยการแพทย์แผนจีนเหอหนานบด Cistancheให้เป็นผงหยาบ เติมเอทานอล 10 เท่าของปริมาณเอธานอล 70% เพื่อไหลย้อน แล้วสกัด 2 ครั้ง ครั้งละ 1.5 ชั่วโมง รวมสารสกัดแอลกอฮอล์ทั้งสองเข้าด้วยกัน ตั้งสมาธิภายใต้ความดันลดลงจนไม่มีกลิ่นแอลกอฮอล์ แล้วจึงแยกย้ายกันไป ด้วยน้ำกลั่น (ความเข้มข้นคือ 0.5 กรัมของตัวยา/มล.) เป็นสารละลายตัวอย่าง ผ่านเรซิน AB-8 (ยาคอลัมน์: เรซินคือ 1:10) โหลดตัวอย่างตามการไหล และปล่อยทิ้งไว้ 5 ชั่วโมงจนกระทั่งถูกดูดซับจนหมด ขั้นแรก ล้างด้วยน้ำกลั่น 10 เท่าของปริมาตรคอลัมน์ ทิ้งน้ำออก จากนั้นใช้ 10 เท่าของปริมาตรคอลัมน์ ใช้เอทานอล 10% เพื่อขจัดสิ่งสกปรก และสุดท้ายชะล้างด้วยปริมาตรคอลัมน์ 7 เท่าของเอทานอล 60% รวบรวมสารชะและระเหยให้แห้งเพื่อให้ได้ผง 4 การเลือกความยาวคลื่นการวัด

วัดสารละลายอ้างอิง {{0}}.5 มล. อย่างแม่นยำ เติมสารละลายโซเดียมไนไตรท์ 5% 1 มล. เขย่าให้เข้ากัน และปล่อยทิ้งไว้ 6 นาที เติมสารละลายอะลูมิเนียมไนเตรต 10% 1 มล. เขย่าขวดให้เข้ากันแล้วปล่อยทิ้งไว้ 6 นาที เติมสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 10% 10 มล. เจือจางด้วยน้ำ 25 มล. เขย่าให้เข้ากัน และปล่อยทิ้งไว้ 18 นาทีเพื่อใช้เป็นสารละลายอ้างอิง 0.5มลCistanche ฟีนิลเอทานอลไกลโคไซด์สารละลายถูกเตรียมในลักษณะเดียวกับสารละลายทดสอบ ใช้ตัวอย่างแบบขนานโดยไม่ต้องเติมสารอ้างอิงและทดสอบสารละลายว่างเปล่า และเตรียมสารละลายเปล่าในลักษณะเดียวกัน บนเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV ให้ทำการสแกนความยาวคลื่นเต็มรูปแบบกับสารละลายสามชนิดข้างต้นในช่วงความยาวคลื่น 200-800 นาโนเมตร ทั้งสารอ้างอิงและสารละลายทดสอบมียอดการดูดกลืนแสงสูงสุดที่ 507 นาโนเมตร ดังนั้น 507 นาโนเมตรจึงถูกกำหนดให้เป็นความยาวคลื่นของการดูดกลืนแสง

หลังจากการพัฒนาสีของตัวอย่าง Cistanche ฟีนิลเอธานอลไกลโคไซด์ + การพัฒนาสีของสารอ้างอิงส้มเขียวหวาน Echinacea (การเปรียบเทียบแบบซ้อนทับ) ดูรูปที่ 1

รูปที่ 1 หลังการพัฒนาสีของตัวอย่าง Cistanche phenylethanoid glycoside + หลังการพัฒนาสีของสารอ้างอิง Echinacea ส้มแมนดาริน รูปที่ 5 วิธีการตรวจจับเนื้อหา

วัดสารละลายที่จะทดสอบอย่างแม่นยำ 1 มล. เติมสารละลายโซเดียมไนไตรท์ 5% 1 มล. เขย่าให้เข้ากัน และปล่อยทิ้งไว้ 6 นาที เติมสารละลายอะลูมิเนียมไนเตรต 10% 1 มล. เขย่าให้เข้ากัน และปล่อยทิ้งไว้ 6 นาที เติมโซเดียมไฮดรอกไซด์ 10% สารละลายคือ 10 มล. เจือจางด้วยน้ำ 25 มล. เขย่าให้เข้ากัน และปล่อยทิ้งไว้ 18 นาที ใช้ตัวอย่างแบบขนานโดยไม่ต้องเพิ่มสารละลายตัวอย่างเป็นค่าเปล่า และเตรียมสารละลายเปล่าในลักษณะเดียวกัน วัดโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV ที่ 507 นาโนเมตร 6 การทบทวนระเบียบวิธี

6.1 การเตรียมสารละลายอ้างอิงและสารละลายตัวอย่าง

การเตรียมสารละลายอ้างอิง: ชั่งน้ำหนักอย่างถูกต้อง 3.0 6 มก. ของสารมาตรฐานอ้างอิงเอคินาโคไซด์ที่ถูกทำให้แห้งจนถึงน้ำหนักคงที่ ใส่ลงในขวดวัดปริมาตรขนาด 25 มล. เติมสารละลาย 70% เพื่อละลายและเจือจางตามเครื่องหมาย เขย่าให้เข้ากันแล้วพักไว้ ความเข้มข้นมาตรฐานคือ 0.1224 มก./มล.

การเตรียมสารละลายตัวอย่าง: ชั่งน้ำหนักอย่างแม่นยำ 5 มกCistanche ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ สารสกัดลงในขวดปริมาตรขนาด 10 มล. ละลายด้วยเอธานอล 70% แล้วเจือจางให้เป็นปริมาตร

6.2 การเตรียมโค้งมาตรฐาน

วาดอย่างแม่นยำ {{0}}, 1.0, 2.0, 3.0, 4.{{10}}, 5.0 , สารละลายอ้างอิง 6.0 มล. พัฒนาสีและเจือจางให้เป็นปริมาตรตามวิธีใน 4.2 และวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 507 นาโนเมตร การใช้ความเข้มข้นเทียบกับการดูดกลืนแสงเพื่อสร้างเส้นโค้งการถดถอย สมการการถดถอยคือ: Y=20.296X-0.0015 (r=0.9994) และช่วงเชิงเส้นคือ 4{{ 23}}.4ไมโครกรัม/มล.

6.3 การทดสอบความแม่นยำ

นำสารละลายตัวอย่างมาวัดแบบขนานหกครั้งตามรายการ "วิธีการตรวจวัดเนื้อหา" คำนวณค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ของการดูดกลืนแสง การดูดกลืนแสงคือ {{0}}.299, 0.299, 0.298, 0.297, 0.297, 0.297 ตามลำดับ ค่าดูดกลืนแสงเฉลี่ย=0.298, RSD=0.330% (n =6)

6.4 การทดสอบความเสถียร

ใช้สารละลายตัวอย่างในปริมาณที่เหมาะสม และตามรายการ "วิธีการกำหนดเนื้อหา" ให้วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ {{0}}, 15, 30, 50 และ 60 นาทีหลังจากเติมสีสารละลายแล้ว และคำนวณค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ ค่าการดูดกลืนแสงคือ 0.304, 0.303, 0.300 และ 0.296 ตามลำดับ , 0.295, 0.295, การดูดกลืนแสงเฉลี่ย=0.299, RSD=1.362% (n=5)

6.5 การทดสอบความสามารถในการทำซ้ำ

นำตัวอย่าง เตรียมสารละลายตัวอย่าง 6 รายการตามรายการ "การเตรียมสารละลายตัวอย่าง" และวัดค่าการดูดกลืนแสงตามรายการ "วิธีการกำหนดเนื้อหา" แล้วคำนวณเนื้อหา มีเนื้อหาเป็น 65.2%, 65.6%, 66.7%, 67.2% และ 66.5% ตามลำดับ , 65.8%, เนื้อหาเฉลี่ย 66.2%, RSD=1.142% (n=6)

6.6 การทดสอบการกู้คืนตัวอย่าง

วาดสารละลายตัวอย่างอย่างแม่นยำ 0.5 มล. โดยมีปริมาณที่ทราบ ทั้งหมด 9 ส่วน และเพิ่ม 200, 250 และ 300 ul ของสารละลายมาตรฐานตามลำดับ วัดและคำนวณอัตราการฟื้นตัวและค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ของ Cistanche ฟีนิลเอทานอลไกลโคไซด์ อัตราการฟื้นตัวอยู่ที่ 101.45% และ 99.26% ตามลำดับ , 98.94%, 101.83%, 99.05%, 99.47%, 98.72%, 99.17%, 100.64%, อัตราการฟื้นตัวเฉลี่ยคือ 99.84%, RSD=1.164% (n=9)

7 การกำหนดเนื้อหาตัวอย่าง

ตารางที่ 1 ผลการพิจารณาปริมาณฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ใน Cistanche