อิทธิพลของการจำลองการย่อยอาหารของมนุษย์ในหลอดทดลองต่อเนื้อหาฟีนอลิกและกิจกรรมทางชีวภาพของสารสกัดที่เป็นน้ำจากสายพันธุ์ Cistus ของตุรกี ตอนที่ 2

โปรดติดต่อoscar.xiao@wecistanche.comสำหรับข้อมูลเพิ่มเติม

3. อภิปราย

อนุมูลอิสระอาจโจมตีโปรตีน ไขมัน หรือ DNA เพื่อจัดหาอิเล็กตรอน ส่งผลให้เกิดปัญหาสุขภาพต่างๆ ด้วยเหตุผลนี้ จึงจำเป็นต้องปรับสมดุลระบบต้านอนุมูลอิสระของร่างกายและอนุมูลอิสระที่เกิดจากการเกิดออกซิเดชัน ในกรณีที่เครื่องชั่งนี้เสื่อมสภาพ จะเกิดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน [29] ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันเป็นหนึ่งในปัจจัยหลักที่ส่งผลให้เกิดความผิดปกติเรื้อรังต่างๆ เช่น มะเร็ง เบาหวาน โรคหัวใจและหลอดเลือด โรคอัลไซเมอร์ เป็นต้น ในขณะที่ร่างกายมนุษย์มีระบบการต้านอนุมูลอิสระในตัวเองเพื่อต่อสู้กับความเสียหายต่อเนื้อเยื่อและอวัยวะต่างๆ ระบบอาจสูญเสียประสิทธิภาพเนื่องจากสภาวะต่างๆ เช่น การบริโภคแอลกอฮอล์มากเกินไป การสูบบุหรี่ ความเครียด การใช้สารเสพติดเรื้อรัง และการฉายรังสี เป็นต้น [30] รายงานทางวิทยาศาสตร์หลายฉบับระบุว่าเมแทบอไลต์จากพืชทุติยภูมิมีบทบาทสำคัญในการป้องกันความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและผลกระทบที่เป็นอันตราย [13,14,31] แม้ว่าการดูดซึมจะเป็นตัวแปรสำคัญที่ส่งผลต่อฤทธิ์ทางชีวภาพของสารประกอบเหล่านี้ แต่ก็ไม่ได้นำมาพิจารณา การศึกษาส่วนใหญ่ อย่างไรก็ตาม เป็นที่ทราบกันดีว่าเมแทบอไลต์ทุติยภูมิอยู่ภายใต้การเปลี่ยนแปลงเชิงโครงสร้างเนื่องจากสภาวะ pH ที่แตกต่างกัน กิจกรรมของเอนไซม์ และอุณหภูมิของร่างกายในระบบทางเดินอาหาร นอกจากนี้ ลักษณะทางเคมีของเมแทบอไลต์ทุติยภูมิ เช่น น้ำหนักโมเลกุล ขั้ว และระดับการจับกับโมเลกุลขนาดใหญ่ในเมทริกซ์พืชยังเป็นปัจจัยสำคัญที่ส่งผลต่อการดูดซึมของพวกมัน [13] ดังนั้น การดูดซึมของสารประกอบหรือสารเมตาโบไลต์ของพวกมันเข้าสู่กระแสเลือดเมื่อกลืนเข้าไปจึงมีความจำเป็นเพื่อให้เกิดผลทางสรีรวิทยาที่เป็นระบบ แบบจำลองการจำลองการย่อยในหลอดทดลองอาจให้หลักฐานสำหรับการประเมินลักษณะการดูดซึมของสารที่เป็นไปได้ แม้ว่าการยืนยันในการทดลองในมนุษย์จะเป็นสิ่งจำเป็นในการอ้างสิทธิ์คุณสมบัติเชิงหน้าที่ แต่แบบจำลองในหลอดทดลองมักถูกใช้เป็นทางเลือกแทนการศึกษาในร่างกายหรือการทดลองในมนุษย์ ซึ่งมักเป็นที่ถกเถียงกันอย่างมีจริยธรรม ใช้ทรัพยากรมาก มีราคาแพง และใช้เวลานาน [32]

กรุณาคลิกที่นี่เพื่อทราบข้อมูลเพิ่มเติม

นักวิจัยหลายคนยังได้ตรวจสอบศักยภาพในการต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดที่เตรียมจากอวัยวะต่างๆ ของ Cistus จากการสำรวจวรรณกรรม นี่เป็นการศึกษาครั้งแรกเกี่ยวกับสปีชีส์ Cistus เกี่ยวกับการดูดซึมของสารฟีนอลและผลกระทบต่อฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระโดยใช้แบบจำลองการจำลองการย่อยในหลอดทดลอง Karas และคณะ [33] เสนอแนะว่า 10 เปอร์เซ็นต์ของส่วนประกอบโพลีฟีนอลยังคงไม่ถูกย่อยในเมทริกซ์พืช และ 90 เปอร์เซ็นต์ของพวกเขาต้องผ่านการย่อยอาหารในระยะกระเพาะอาหารหรือลำไส้ (ประมาณ 48 เปอร์เซ็นต์ และ 52 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ) ดังที่ได้กล่าวไว้ก่อนหน้านี้ ปริมาณฟีนอลิกทั้งหมดในสารสกัดที่เป็นน้ำได้รับผลกระทบในทางลบจากขั้นตอนการจำลองการย่อยอาหารของมนุษย์ในหลอดทดลอง ดังนั้นจึงตรวจพบการสูญเสียที่มีนัยสำคัญในเนื้อหาฟีนอลของตัวอย่างที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพของสารสกัดทั้งหมด นอกจากนี้ ความเข้มข้นของโปรแอนโธไซยานิดินรวมของตัวอย่าง IN ยังต่ำกว่าขีดจำกัดการตรวจจับในสารสกัดที่เป็นน้ำทั้งหมด การศึกษาต่างๆ ยังได้กระตุ้นอิทธิพลเชิงลบของกระบวนการย่อยอาหารที่มีต่อสารประกอบฟีนอลิกในสารสกัดจากพืชและด้วยเหตุนี้ฤทธิ์ทางชีวภาพที่เกี่ยวข้อง ตัวอย่างเช่น เรารายงานเนื้อหาฟีนอลทั้งหมดของ Salvia virgata Jacq ยังได้รับผลกระทบในทางลบจากกระบวนการย่อยอาหารในการศึกษาก่อนหน้านี้ของเรา นอกจากนี้ ปริมาณสารเมแทบอไลต์ที่สำคัญของสารสกัด ได้แก่ รูตินและกรดโรสมารินิก มีแนวโน้มลดลง [13] ในทางตรงกันข้าม การศึกษาหลายชิ้นได้รายงานผลลัพธ์ที่ขัดแย้งกัน ในการศึกษาโดย Celeb et al. [34] พวกเขาสังเกตเห็นการเพิ่มขึ้นของปริมาณกรดฟีนอลิก ฟลาโวนอยด์ และฟีนอลิกทั้งหมดในตัวอย่างที่ใช้ประโยชน์ทางชีวภาพของสารสกัดเมทานอลจาก Hypericum perfoliatum L อันที่จริง สารเมแทบอไลต์หลัก เคอร์ซิทริน กรดคลอโรจีนิก และกรดแกลลิก มีอัตราส่วนความสามารถในการเข้าถึงทางชีวภาพมากกว่า 100 เปอร์เซ็นต์ การศึกษาเหล่านี้แสดงให้เห็นว่าผลของกระบวนการย่อยอาหารอาจแตกต่างกันไปตามวัสดุของพืช เพื่อชี้แจงความแตกต่างเหล่านี้ จำเป็นต้องพิจารณากลไกการทำงานของระบบย่อยอาหารต่อสารฟีนอล (ประโยชน์ของไบโอฟลาโวนอยด์) Serra et al. [35] แนะนำว่าสารประกอบฟีนอลิกส่วนใหญ่พบในรูปแบบไกลโคไซด์ โพลีเมอร์ และเอสเทอร์ในเมทริกซ์พืชและถูกไฮโดรไลซ์ในระบบย่อยอาหารก่อนการดูดซึม ปัจจัยต่างๆ อาจส่งผลต่อการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างของสารประกอบฟีนอลิกในทางเดินอาหาร ตัวอย่างเช่น สารประกอบที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูง เช่น โปรแอนโธไซยานิดินหรือโพรไซยานิดิน จำเป็นต้องถูกไฮโดรไลซ์ก่อนการดูดซึมในลำไส้ โครงสร้างของเมทริกซ์พืชยังเป็นปัจจัยสำคัญในการดูดซึมของฟีนอล (ซื้อ cistanche)สารประกอบฟีนอลิกสามารถจับกับโมเลกุลขนาดใหญ่ในเมทริกซ์พืช เช่น เส้นใย โปรตีน และโมเลกุลของไขมัน ดังนั้น เฉพาะส่วนประกอบฟีนอลที่ถูกปลดปล่อยจากเมทริกซ์เท่านั้นที่สามารถดูดซึมได้จากทางเดินอาหาร นอกจากนี้ ค่า pH ที่แตกต่างกันและการทำงานของเอนไซม์ของจุลินทรีย์ในลำไส้เป็นปัจจัยสำคัญอื่นๆ ที่ส่งผลต่อการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างทางเคมีของสารประกอบฟีนอลิก [36] จากข้อมูลเหล่านี้ เราสามารถตั้งสมมติฐานได้ว่าผลลัพธ์ที่แตกต่างกันที่ได้จากการศึกษาทดลองประเภทเดียวกันอาจเนื่องมาจากความซับซ้อนของระบบย่อยอาหารและองค์ประกอบของเมทริกซ์พืช ตามที่นำเสนอในตารางที่ 3 ตัวอย่างทางชีวภาพของสารสกัด Cistus มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระที่อ่อนแอกว่าตัวอย่างที่ไม่ย่อยและหลังกระเพาะอาหารเนื่องจากมีปริมาณฟีนอลต่ำกว่า

Cistancheสามารถเสริมภูมิต้านทาน

นอกจากนี้ สารสกัดทั้งสองของ C.saluifolius ยังแสดงฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระได้ดีขึ้นในการทดสอบ DPPH, CUPRAC, FRAP และ TOAC เมื่อเปรียบเทียบกับสายพันธุ์อื่น นอกจากนี้ สารสกัดของ C.paroifforus ทั้งสองชนิดมีฤทธิ์ในการขจัดอนุมูลอิสระ DMPD ได้ดีกว่าสารสกัดจากสายพันธุ์อื่น ตามที่ระบุในตารางที่ 1 ปริมาณฟีนอลิก ฟลาโวนอยด์ และกรดฟีนอลิกทั้งหมดของ C. salviifolius สูงกว่าตัวอย่างอื่นๆ ดังนั้นศักยภาพในการต้านอนุมูลอิสระที่สูงขึ้นของสารสกัด C. salviifolius อาจเกี่ยวข้องกับเนื้อหาฟีนอล

นอกจากนี้ การลดลงของศักยภาพในการต้านอนุมูลอิสระ การยับยั้งเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับคาร์โบไฮเดรต และ AGEs ของตัวอย่างที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพ อาจเกี่ยวข้องกับการลดลงในเครื่องหมายฟลาโวนอยด์ไกลโคไซด์ อย่างไรก็ตาม สารสกัด Cistus ยังมีสารฟีนอลิกอื่นๆ ตามที่ระบุไว้ในรูปที่ 1 ดังนั้น จำเป็นต้องมีการวิเคราะห์โครมาโตกราฟีโดยละเอียดของสารสกัดเพื่อตรวจสอบอิทธิพลของการย่อยอาหารที่มีต่อกิจกรรมทางชีวภาพ

ศักยภาพในการยับยั้งของสารสกัดจากพืชที่มีต่อเอนไซม์ย่อยอาหารได้รับความสนใจมากขึ้นเมื่อเร็วๆ นี้ เนื่องจากความกังวลด้านความปลอดภัยของสารยับยั้งสังเคราะห์ ดังนั้น ผลการยับยั้งของสารสกัดจากพืชจึงถูกกำหนดในการศึกษาหลายครั้ง และผลกระทบนี้โดยทั่วไปเกี่ยวข้องกับสารฟีนอล เช่น ฟลาโวนอยด์ กรดฟีนอล โปรแอนโธไซยานิดิน ฯลฯ Sun et al [37] เสนอแนะว่าสารประกอบโพลีฟีนอลแสดงผลการยับยั้งโดยจับกับเอนไซม์ที่กล่าวถึงข้างต้นด้วยความช่วยเหลือของแรงที่ไม่ชอบน้ำและพันธะที่ไม่ใช่โควาเลนต์ ดังนั้นการยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ o-amylase และ a-glucosidase โดยโพลีฟีนอลจึงสัมพันธ์กับโครงสร้างโมเลกุลของพวกมัน ในขณะที่กลไกปฏิสัมพันธ์นี้ได้รับการศึกษาโดยใช้เทคนิคต่างๆ เช่น จลนพลศาสตร์การยับยั้ง การเทียบท่าของโมเลกุล การดับการเรืองแสง ฯลฯ ยังไม่มีข้อสรุปที่แน่นอน [38] อย่างไรก็ตาม การศึกษาจำนวนมากได้รายงานว่าการยับยั้งเอนไซม์ย่อยอาหารของสารสกัดจากพืชมีความสัมพันธ์โดยตรงกับเนื้อหาฟีนอล การศึกษาที่คล้ายกันเกี่ยวกับกิจกรรมการยับยั้งเอนไซม์ของ Cistus ก็มีรายงานก่อนหน้านี้เช่นกัน ซายาห์ et al. [39] ตรวจสอบกิจกรรมการยับยั้ง -amylase และ -glucosidase ของสารสกัดเมทานอลและน้ำ 8{{10}} เปอร์เซ็นต์จาก C. monspeliensis และ C. saluifolius ผลลัพธ์ของพวกเขาเป็นไปตามการศึกษาปัจจุบัน เปิดเผยว่าสารสกัดน้ำ C. salvifolius แสดง o-glucosidase ที่สูงขึ้น (ICso ug/mL:0.95±0.14)และ -amylase(IC5{ ฤทธิ์ในการยับยั้ง {55}} ug/mL:217.1±0.15) กว่าสารสกัดที่เป็นน้ำของ C. monspeliensis (IC50 ug/mL∶ 14.58±1.26) และ （IC50 4g/mL:886.10±0.10) ตามลำดับ อัตราการยับยั้งของสารสกัดที่เป็นน้ำทั้งสองชนิดในเอนไซม์เหล่านี้สูงกว่าสารประกอบอะคาร์โบสอ้างอิง (ICso ug/mL:18.01±2.00) คล้ายกับการศึกษาของเรา พวกเขาพบว่ามีความสัมพันธ์กับอัตราการยับยั้งเอนไซม์และผลรวม ปริมาณฟีนอลและฟลาโวนอยด์ ทั้งปริมาณฟีนอลและฟลาโวนอยด์รวมของสารสกัดน้ำ C. saloijfolius (408.43±1.09 มก. GAE และ 140.00±1.15 RE ตามลำดับ) สูงกว่าสารสกัดน้ำ C.monspeliensis (261.76±1.9 มก. GAE และ 78.00±1.15 RE ตามลำดับ) Orhan และคณะ [40] ยังได้ตรวจสอบศักยภาพในการยับยั้งเอนไซม์ย่อยอาหารของสารสกัดที่เป็นน้ำและเอธานอล 80 เปอร์เซ็นต์จากใบของ C.laurifolius จากผลการศึกษาพบว่า สารสกัดเอธานอล 80 เปอร์เซ็นต์ (71.7 เปอร์เซ็นต์ ±0.6) แสดงฤทธิ์การยับยั้ง -amylase ที่แข็งแกร่ง เมื่อเทียบกับสารสกัดที่เป็นน้ำ (39.3% ±2.2) ที่ความเข้มข้น 1 มก./มล. พวกเขาแนะนำว่าสารประกอบฟีนอลิก โดยเฉพาะอย่างยิ่งฟลาโวนอยด์ ส่งผลโดยตรงต่อการหลั่งอินซูลินโดยป้องกันการตายของเซลล์เบต้าและสนับสนุนฤทธิ์ต้านเบาหวาน สมมติฐานนี้ซึ่งสัมพันธ์กับผลลัพธ์ของเรา ทำเครื่องหมายว่าตัวอย่าง ND ของสารสกัดที่เป็นน้ำของ C. salviifolius มีปริมาณฟลาโวนอยด์และฟีนอลรวมสูงสุด และกิจกรรมการยับยั้ง -amylase และ o-glucosidase ที่ยิ่งใหญ่ที่สุด ตามตารางที่ 4 สารสกัดที่เป็นน้ำของ C. salviifolius มีฤทธิ์ยับยั้งเอนไซม์ย่อยอาหารได้ดีกว่าสารสกัดอื่นๆ นอกจากนี้ ตัวอย่าง IN ของสารสกัดที่เป็นน้ำมีปริมาณฟีนอลิกและฟลาโวนอยด์ต่ำกว่าตัวอย่าง ND ดังนั้นจึงเผยให้เห็นกิจกรรมการยับยั้งเอนไซม์ที่ต่ำกว่าในงานปัจจุบัน แม้ว่าปริมาณฟีนอลในสารสกัดจะได้รับผลกระทบในทางลบจากขั้นตอนการย่อยอาหาร แต่ก็ยังแสดงฤทธิ์ยับยั้งเอนไซม์ย่อยอาหารได้อย่างมีนัยสำคัญ ในการศึกษาหลายครั้ง ฟลาโวนอยด์ไกลโคไซด์ได้รับการรายงานว่าเป็นสารเมแทบอไลต์ที่สำคัญของสารสกัดจากพืชที่มีศักยภาพในการยับยั้ง -amylase และ -glucosidase ที่แข็งแกร่ง [41-43] ในขณะที่กลไกการยับยั้งของสารประกอบฟีนอลิกในเอนไซม์ย่อยอาหารยังไม่ได้รับการเปิดเผย โครงสร้าง- มีการศึกษาความสัมพันธ์เชิงกิจกรรมกับองค์ประกอบฟีนอลบางชนิด เช่น ฟลาโวนอยด์ กรดฟีนอล โปรแอนโธไซยานิดิน และแทนนิน การศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างโครงสร้างกับกิจกรรมเกี่ยวกับฟลาโวนอยด์แสดงให้เห็นว่าพันธะคู่ C2=C3 ของ C-ring ช่วยเพิ่มศักยภาพในการยับยั้งเอนไซม์ย่อยอาหารของสารประกอบดังกล่าว เนื่องจากพันธะนี้เพิ่มความหนาแน่นของอิเล็กตรอน ความแรงของปฏิกิริยาระหว่างฟลาโวนอยด์และเอนไซม์จึงเพิ่มขึ้น [44] นอกจากนี้ หมู่ไฮดรอกซิลบน C-5 และ C-7 เอื้อต่อศักยภาพในการยับยั้ง -อะไมเลสของฟลาโวนอยด์ นอกจากนี้ยังแนะนำว่าไฮดรอกซิเลชันของโครงกระดูกฟลาโวนอยด์ส่งผลในทางบวกต่อศักยภาพในการยับยั้งเอนไซม์อะไมเลสและกลูโคซิเดส [45] ตามที่ระบุไว้ก่อนหน้านี้ สารฟลาโวนอยด์ที่เป็นเครื่องหมายทั้งหมดในการศึกษาปัจจุบันคือฟลาโวนอลไกลโคไซด์ที่มีข้อกำหนดด้านโครงสร้างเหล่านี้ตามที่อธิบายข้างต้น อย่างไรก็ตาม หลังจากขั้นตอนการย่อยในหลอดทดลอง กิจกรรมที่เกี่ยวข้องของพวกมันลดลงอย่างมีนัยสำคัญในตัวอย่างที่ดูดซึมได้ทางชีวภาพของสารสกัดที่เป็นน้ำ

โดยทั่วไป ศักยภาพในการยับยั้งของสารสกัดจากพืชใน AGEs เกี่ยวข้องกับปัจจัยหลายประการ เช่น ปริมาณฟีนอลิก ศักยภาพในการต้านอนุมูลอิสระ ความสามารถในการคีเลตของโลหะ ปฏิกิริยาของโปรตีน และกิจกรรมการบล็อกตัวรับ AGE [13] ตามที่นำเสนอในตารางที่ 4 ตัวอย่างที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพของสารสกัดที่เป็นน้ำแสดงฤทธิ์การยับยั้ง AGE ที่ต่ำกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับตัวอย่าง ND เนื่องจากขั้นตอนการย่อยในหลอดทดลองส่งผลเสียต่อเนื้อหาฟีนอลของสารสกัด จากผลการศึกษาปัจจุบัน ตัวอย่าง ND ของสารสกัดที่เป็นน้ำของ C. (cistanche และ tongkat ali reddit) ซาลูโฟลิอุสมีฤทธิ์ยับยั้ง AGE สูงสุด เช่นเดียวกับเนื้อหาฟีนอลและฟลาโวนอยด์ทั้งหมด ในการเปรียบเทียบ ตัวอย่าง IN ของสารสกัดที่เป็นน้ำของ C. monspeliensis แสดงศักยภาพในการยับยั้ง AGE ที่อ่อนแอที่สุด ซึ่งอาจระบุถึงปริมาณฟลาโวนอยด์และฟีนอลรวมที่ต่ำที่สุด เนื่องจากฟลาโวนอยด์มีการแพร่กระจายอย่างกว้างขวางในสารสกัดจากพืช ผลไม้ ผัก และเครื่องดื่ม การศึกษาหลายชิ้นจึงได้เน้นย้ำถึงศักยภาพในการยับยั้งของฟลาโวนอยด์ต่อการเกิด AGE ฟลาโวนอยด์เดียวกันที่กำหนดให้เป็นฟีนอลที่เป็นเครื่องหมายในการศึกษานี้ถูกรายงานเป็นสารประกอบมาร์คเกอร์ในการศึกษาอื่นๆ[46-48]

คล้ายกับการยับยั้งเอนไซม์ย่อยอาหาร กิจกรรมการยับยั้ง AGE ของฟลาโวนอยด์ถูกกระตุ้นโดยพันธะคู่ C2=C3 และไฮดรอกซิเลชันของวงแหวน A และ C อย่างไรก็ตาม การยึดติดของน้ำตาลกับโครงกระดูกฟลาโวนอยด์ทำให้ฤทธิ์ยับยั้งลดลง [49] ในทางกลับกัน Cervantes-Lauren และคณะ[50] ชี้ให้เห็นว่าฟลาโวน-3-ของไกลโคไซด์มีศักยภาพในการยับยั้ง AGE มากกว่าฟลาโวนอยด์ไกลโคไซด์อื่นๆ สมมติฐานนี้อาจเป็นคำอธิบายสำหรับการยับยั้ง AGE ที่ลดลงในตัวอย่างที่สามารถใช้ประโยชน์ได้ทางชีวภาพ ตัวอย่างเช่น ไม่พบ quercitrin และ hyperoside ในตัวอย่าง bioavailable ของสารสกัดที่เป็นน้ำของ C.monspeliensis ซึ่งเป็นสาเหตุของกิจกรรมที่ต่ำกว่าของตัวอย่าง IN ของ C. monspeliensis เมื่อเทียบกับสารสกัดจากสายพันธุ์อื่น แม้ว่าจะตรวจไม่พบ quercitrin ในสารสกัดที่เป็นน้ำของ C. saloifolius แต่ปริมาณ hyperoside และ salidroside ในปริมาณที่สูงกว่าอย่างมีนัยสำคัญอาจเป็นสาเหตุของฤทธิ์ยับยั้ง AGE ที่สูง โดยทั่วไป พบว่ามีความสัมพันธ์เชิงบวกระหว่างปริมาณฟลาโวนอยด์ที่เป็นเครื่องหมายของตัวอย่างกับศักยภาพในการยับยั้งของพวกมันใน AGEs

4. วัสดุและวิธีการ

4.1.เคมีภัณฑ์

ข้อมูลอ้างอิง เอนไซม์ และสารเคมีทั้งหมดที่ใช้ในการทดลองซื้อจาก Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA) ใช้วัสดุเกรดวิเคราะห์ในการทดลอง

4.2.ตัวอย่างพืช

ชิ้นส่วนทางอากาศของ C.creticus และ C.saloifolius ถูกรวบรวมจากวิทยาเขตของมหาวิทยาลัย Yeditepe (Kayisdagi, อิสตันบูล) ในช่วงสัปดาห์สุดท้ายของเดือนเมษายน 2018 ส่วนทางอากาศของ C.mon-speliensis และ C. paroiflorus ถูกรวบรวมจากใกล้กับ Alacant Kutlu Aktas Balaji, Cesme, Izmir ในสัปดาห์ที่สองของเดือนพฤษภาคม 2018 ชิ้นส่วนทางอากาศของ C. laurifolius ถูกเก็บรวบรวมจากถนน Kemer-Doganhisar เมือง Konya ในสัปดาห์แรกของเดือนมิถุนายน 2018 Prof. Dr. Erdem Yesilada ได้รับรองวัสดุจากพืช ตัวอย่างใบสำคัญสำหรับ C. creticus (YEF18013), C. Lauri folium(YEF18017), C.monspeliensis(YEF18015),C.paroiflorus(YEF18016) และ C.salvifolius (YEF18014) ถูกเก็บไว้ที่ Herbarium of the Department of Pharmacognosy คณะ คณะเภสัชศาสตร์ มหาวิทยาลัยเยดิเตเป เมืองอิสตันบูล ประเทศตุรกี 4.3.ขั้นตอนการสกัด

การสกัดด้วยน้ำได้รับการคัดเลือกเนื่องจากมักใช้เป็นเทคนิคในการเตรียมยาแผนโบราณ ชิ้นส่วนอากาศแห้งและผงของ Cistus สายพันธุ์ (100 ก.) ถูกสกัดด้วยน้ำกลั่นร้อน (80 องศา ,1.5 ลิตร) โดยใช้เครื่องเขย่าเป็นเวลา 15 นาที จากนั้นจึงกรองสารสกัดที่เป็นน้ำผ่านกระดาษกรองและระเหยจนแห้งภายใต้แรงดันที่ลดลง หลังจากกระบวนการไลโอฟิไลเซชันเสร็จสิ้น สารสกัดถูกละลายในน้ำกลั่นเพื่อดำเนินการต่อไป (ตัวอย่างที่ไม่ย่อย: ND) (ผลผลิตของสารสกัด:13.04 เปอร์เซ็นต์สำหรับ C.creticus, 15.7% สำหรับ C.laurifolus, 12.8 เปอร์เซ็นต์สำหรับ C.monspeliensis ,14.94 เปอร์เซ็นต์สำหรับ C.parviflorus,14.74 เปอร์เซ็นต์สำหรับ C.salvifolius) 4.4.วิธีการจำลองการย่อยอาหารของมนุษย์ในหลอดทดลอง

แบบจำลองการจำลองการย่อยอาหารของมนุษย์ถูกนำไปใช้กับตัวอย่าง Cistus ในหลอดทดลอง ตามวิธีการที่มีรายละเอียดก่อนหน้านี้โดย Celeb et al. [34] ประการแรก 1g NaCl และ 1.6g pepsin ถูกละลายในน้ำกลั่น 500 มล. เพื่อให้ได้สารละลายของเหลวในกระเพาะอาหารจำลอง (SGF) ต่อมา ค่า pH ของสารละลาย SGF ถูกจัดเรียงเป็น 2 ด้วย HCl(5 M) 17.5 มล. ของสารละลายนี้ ถูกผสมกับตัวอย่างพืช 2.5 มล. และของผสมนี้ถูกจัดวางในอ่างน้ำเขย่าที่ 37 องศา เป็นเวลา 2 ชั่วโมงเพื่อเลียนแบบการเคลื่อนที่แบบบีบบีบของระบบย่อยอาหาร หลังจาก 2 ชั่วโมง ตัวอย่างถูกใส่ลงในอ่างน้ำแข็งเพื่อทำให้ปฏิกิริยาของเอนไซม์หยุดทำงาน; ตัวอย่าง 2 มล. ถูกพักไว้เป็นตัวอย่าง "หลังกระเพาะอาหาร" (PG) สำหรับการทดลองเพิ่มเติม เมมเบรนสำหรับล้างไตด้วยเซลลูโลสที่บรรจุ NaHCO3 ในปริมาณที่เหมาะสม (1 โมลาร์, pH7) อยู่ในสารละลายตัวอย่างเย็น ดังนั้นจึงเลียนแบบการดูดซึมทางเดินอาหาร จากนั้น 4.5 มล. ของกรดน้ำดี/สารละลายตับอ่อนถูกรวมเข้ากับสารละลาย และของผสมถูกบ่มอีก 2 ชั่วโมงที่ 37 องศา สุดท้าย ของเหลวภายในเมมเบรนสำหรับการฟอกไตได้รับมาเป็นตัวอย่างที่ "มีอยู่ทางชีวภาพ" (IN) หลังจากขั้นตอนสิ้นสุด ตัวอย่างทั้งหมดถูกเก็บรักษาไว้ที่ -20 องศาสำหรับการทดลองเพิ่มเติม 4.5.การประมาณค่าฟีนอลิกในหลอดทดลอง 4.5.1 การวิเคราะห์เนื้อหาฟีนอลิกทั้งหมด การกำหนดสเปกโตรโฟโตเมตรีของปริมาณฟีนอลิกทั้งหมดของตัวอย่างดำเนินการในเทมเพลตเพลต 96-หลุมตามวิธีการที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดย Barak et al. 【32】; 75 uL ของ NagCO3 (20 เปอร์เซ็นต์ใน H2O ） ถูกเติมลงในตัวอย่างและสารละลายอ้างอิงที่เตรียมใหม่ 20 ไมโครลิตร จากนั้น 100 ไมโครลิตรของน้ำยา Folin-Ciocalteu ถูกรวมเข้ากับของผสม หลังจากระยะฟักตัว 30 นาทีที่อุณหภูมิห้องในที่มืด วัดการดูดกลืนแสงที่ 690 นาโนเมตร กรดแกลลิกถูกใช้เป็นสารละลายอ้างอิงที่ความเข้มข้นต่างกันเพื่อสร้างเส้นโค้งการสอบเทียบและปริมาณฟีนอลิกทั้งหมดถูกแสดงเป็นกรดแกลลิกที่เทียบเท่า (GAE) 4.5.2. การวิเคราะห์ปริมาณฟลาโวนอยด์ทั้งหมด การวัดสเปกโตรโฟโตเมตรีของปริมาณฟลาโวนอยด์ทั้งหมดของตัวอย่างได้รับการจัดการในเทมเพลตเพลต 96-หลุมตามวิธีการที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดย Bardakci et al 【51】;150 ไมโครลิตรของเอทานอล 75 เปอร์เซ็นต์, 10 ไมโครลิตรของอะลูมิเนียมคลอไรด์และ 10 ไมโครลิตรของ 1 โมลาร์ของโซเดียมอะซิเตตไตรไฮเดรตถูกรวมเข้ากับ 50 uL ของตัวอย่างและสารละลายอ้างอิง แยกกัน จากนั้น ของผสมเหล่านี้ถูกบ่มที่อุณหภูมิห้องมืดเป็นเวลา 30 นาที หลังจากระยะฟักตัว คำนวณค่าการดูดกลืนแสงที่ 405 นาโนเมตร เควอซิทินถูกใช้เป็นสารละลายอ้างอิงที่ความเข้มข้นต่างกันเพื่อสร้างเส้นโค้งการสอบเทียบและปริมาณฟลาโวนอยด์ทั้งหมดถูกแสดงเป็นเควอซิทินที่เทียบเท่า (QE)

4.5.3.การทดสอบปริมาณกรดฟีนอลิกทั้งหมด

ปริมาณกรดฟีนอลิกทั้งหมดของตัวอย่างถูกวัดด้วยสเปกโตรโฟโตเมตริกตามขั้นตอนที่ Barak et al ได้รายงานไว้ก่อนหน้านี้ [52]. ประการแรก ละลายโซเดียมไนไตรต์และโซเดียมโมลิบเดตในปริมาณที่เหมาะสมในน้ำกลั่นเพื่อให้ได้รีเอเจนต์ของ Arnow จากนั้น 1 มล. ของตัวอย่างถูกรวมกับรีเอเจนต์ Arnow 1 มล., 1 มล. ของ 0.1 M HCl และ 1 มล. ของ 1 M NaOH แยกกัน หลังจากนั้น ปรับปริมาตรของส่วนผสมเป็น 10 มล. ด้วยน้ำกลั่น และอ่านค่าการดูดกลืนแสงทันทีที่ 490 นาโนเมตร กรดคาเฟอีนถูกใช้เป็นสารละลายอ้างอิงที่ความเข้มข้นต่างกันเพื่อให้ได้กราฟการปรับเทียบ และให้ปริมาณกรดฟีนอลิกทั้งหมดเป็นกรดคาเฟอีนที่เทียบเท่า (CAE)

4.5.4.การทดสอบเนื้อหาโปรแอนโธไซยานิดินรวม

การหาค่าสเปกโตรโฟโตเมตริกของปริมาณโปรแอนโธไซยานิดินทั้งหมดของตัวอย่างดำเนินการในแม่แบบจานหลุม 96-หลุม โดยทำตามวิธีการของ Barak และคณะ [11]. โดยสังเขป 25 uL ของสารละลายตัวอย่างถูกผสมกับ 150 uL ของวานิลลิน 4 เปอร์เซ็นต์และ 75 uL ของสารละลาย HCl (32 เปอร์เซ็นต์) ตามลำดับ หลังจากเวลาฟักตัว 15 นาทีที่อุณหภูมิห้องมืด การดูดกลืนแสงถูกปรับไปที่ 492 นาโนเมตร คาเทชินไฮเดรตถูกใช้เป็นสารละลายอ้างอิงที่ความเข้มข้นต่างกันเพื่อให้ได้กราฟการปรับเทียบ เมทานอลถูกใช้เป็นสารละลายควบคุม ปริมาณโปรแอนโธไซยานิดินทั้งหมดของตัวอย่างถูกระบุเป็นคาเทชินที่เทียบเท่า (CE)

4.6.ฟรี Radical Scavenging Activity Assays 4.6.1.DPPH Radical Scavenging Activity Assay

กิจกรรมการขจัดอนุมูลอิสระ DPPH ของตัวอย่างถูกกำหนดหาใน96-เทมเพลตเพลตตามวิธีการที่แก้ไขโดย Celeb et al.[53] ในตอนแรก 150 ไมโครโมลาร์ของสารละลาย DPPH ถูกเตรียมใหม่ จากนั้น 200 ไมโครลิตรของสารละลาย DPPH ถูกผสมกับสารละลายตัวอย่าง 25 ไมโครลิตร จากนั้น ของผสมนี้ถูกบ่มที่อุณหภูมิห้องมืดเป็นเวลา 50 นาที คำนวณค่าการดูดกลืนแสงที่ 540 นาโนเมตร บิวทิเลตไฮดรอกซีโทลูอีน (BHT) ถูกใช้เป็นสารละลายอ้างอิงที่ความเข้มข้นต่างกัน เมทานอลถูกใช้เป็นสารละลายควบคุม กิจกรรมของตัวอย่างถูกนำเสนอเป็น EC50 ซึ่งสอดคล้องกับความเข้มข้นที่แสดงการออกฤทธิ์ 50 เปอร์เซ็นต์

4.6.2.DMPD Radical Scavenging Activity Assay

DMPD* (N, N-ไดเมทิล-p-ฟีนิลีนไดเอมีน) ฤทธิ์ขจัดรากของตัวอย่างถูกดำเนินการใน 96-เทมเพลตเพลตตามวิธีการที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดย Inan และคณะ [13]. ประการแรก 10{{10}} mM DMPD plus solution,0.05 M FeCl; สารละลาย 6H2O และบัฟเฟอร์อะซิเตท 0.01 โมลาร์ถูกเตรียมขึ้นใหม่ จากนั้น, สารละลาย DMPD 1 มิลลิลิตร, บัฟเฟอร์อะซิเตท 100 มิลลิลิตร และสารละลาย FeCl3-6H2O 0.2 มิลลิลิตรถูกผสม และสารละลายตัวอย่าง 15 ยูลอฟต่อมาถูกรวมเข้ากับ 210 ไมโครลิตรของของผสมนี้ หลังจากระยะฟักตัวที่อุณหภูมิห้องมืดเป็นเวลา 50 นาที วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 492 นาโนเมตร Trolox ถูกใช้เป็นสารละลายอ้างอิงที่ความเข้มข้นต่างกันเพื่อให้ได้กราฟการปรับเทียบ ความเข้มข้นของสารละลายตัวอย่างคือ 1 มก./มล. กิจกรรมการกำจัดอนุมูล DMPD ของตัวอย่างถูกระบุเป็น Trolox เทียบเท่า (TE) 4.7.การทดสอบกิจกรรมการลดโลหะ

4.7.1.Ferric Reducing Antioxidant Power Assay (FRAP)

การกำหนดกิจกรรม FRAP ของตัวอย่างทำได้สำเร็จในเทมเพลตเพลท 96 หลุมตามขั้นตอนที่ Bardakci et al รายงานก่อนหน้านี้ ในช่วงเริ่มต้นของการทดลอง รีเอเจนต์ FRAP ถูกก่อรูปขึ้นโดยการผสมสารละลายบัฟเฟอร์อะซีเตต, เฟอริก-ทริปไพริดิลไตรอะซีนและสารละลาย FeCl;6H2O หลังจากนั้น น้ำยา FRAP ถูกใส่ในเตาอบ 37 องศาเป็นเวลา 30 นาที จากนั้น 10 uL ของสารละลายตัวอย่างถูกรวมเข้ากับน้ำกลั่น 30 ไมโครลิตรและรีเอเจนต์ FRAP 260 uL ตามลำดับ หลังจากเวลาฟักตัวที่ 37 องศาเป็นเวลา 30 นาที, การดูดกลืนแสงถูกปรับไปที่ 593 นาโนเมตร เส้นโค้งมาตรฐานถูกสร้างขึ้นโดยใช้โมลาริตีที่แตกต่างกันของสารละลายเฟอร์รัสซัลเฟต (0.{15}} มิลลิโมลาร์) เพื่อประเมินผลลัพธ์ ใช้ BHT เป็นสารละลายอ้างอิงที่ความเข้มข้นต่างกัน กิจกรรม FRAP ของตัวอย่างถูกนำเสนอเป็น mM FeSO4 ในสารสกัดแห้ง 1 กรัม

4.7.2.Cupric Reducing Antioxidantความจุ Assay (CUPRAC)

กิจกรรม CUPRAC ของตัวอย่างถูกกำหนดใน96-เทมเพลตเพลตหลุมตามวิธีที่แก้ไขโดย Celeb et al 【31】; 85 ไมโครลิตรของสารละลาย CuSO4 (10 มิลลิโมลาร์) นีโอคัพเพรน และแอมโมเนียม อะซิเตต และน้ำกลั่น 51 uL ถูกเติมลงในสารละลายตัวอย่าง 43 uL แยกกัน หลังจากระยะฟักตัว (20 นาที) ที่ 50 องศาในอ่างน้ำ วัดการดูดกลืนแสงที่ 450 นาโนเมตร กรดแอสคอร์บิกถูกใช้เป็นสารละลายอ้างอิงที่ความเข้มข้นต่างกันเพื่อให้ได้กราฟการปรับเทียบ กิจกรรม CUPRAC ของตัวอย่างถูกนำเสนอเป็นกรดแอสคอร์บิกที่เทียบเท่า (AAE) 4.8.การทดสอบฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระทั้งหมด (TOAC)

การกำหนดกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดของตัวอย่างดำเนินการใน 96-เทมเพลตเพลตหลุมตามขั้นตอนโดย Celeb et al [55]. ในตอนแรก โซเดียม ฟอสเฟต โมโนเบสิก แอมโมเนียม โมลิบเดต เตตระไฮเดรต และกรดซัลฟิวริกจำนวนหนึ่งถูกผสมเพื่อให้ได้สารละลาย TOAC จากนั้น เติมสารละลาย TOAC 300 ไมโครลิตรลงในสารละลายตัวอย่าง 30 ไมโครลิตร หลังจากระยะฟักตัวที่ 95 องศาในอ่างน้ำเป็นเวลา 90 นาที หาค่าการดูดกลืนแสงที่ 690 นาโนเมตร กรดแอสคอร์บิกถูกใช้เป็นสารละลายอ้างอิงที่ความเข้มข้นต่างกันเพื่อให้ได้กราฟการปรับเทียบ กิจกรรม TOAC ของตัวอย่างถูกแสดงเป็นกรดแอสคอร์บิกที่เทียบเท่า (AAE) 4.9.การประมาณค่าดัชนีชีวปริมาณออกฤทธิ์

ดัชนีการดูดซึม (BAvI) คำนวณตามสมการทางทฤษฎีที่อธิบายโดย Inan และคณะ[13]:

BAVI=CIN/CND "ดัชนีการดูดซึมทางชีวภาพ" (BAvI) ถูกอธิบายว่าเป็นอัตราส่วนของจำนวนฟีนอลในตัวอย่างที่ดูดซึมได้ทางชีวภาพ (IN) กับในตัวอย่างที่ไม่ได้ย่อย (ND) 4.10. การหาปริมาณสารฟลาโวนอยด์โดย HPTLC

การหาปริมาณความเข้มข้นของซาลิโดรไซด์ ไฮเปอร์โรไซด์ และเคอร์ซิทรินในตัวอย่างการจำลองทั้งหมด (ND, PG, IN) ของสารสกัดที่เป็นน้ำจากสปีชีส์ Cistus ดำเนินการโดยโครมาโตกราฟีแบบชั้นบางที่มีประสิทธิภาพสูง (CAMAG, Muttenz, ประเทศสวิตเซอร์แลนด์) ตามวิธีการตรวจสอบโดย Guzelmeric et al. [16]. ไฮเปอร์โรไซด์ ซาลิโดรไซด์ และเคอร์ซิทรินถูกเตรียมในความเข้มข้น 25,50 และ 10{{30}} ไมโครกรัม/มิลลิลิตร และความเข้มข้นของสารละลายตัวอย่างที่เตรียมใหม่ถูกปรับเป็น 10 มก./มล. สารละลายเหล่านี้ใช้กับแผ่นซิลิกาเจลที่เคลือบด้วยแก้วเฟสปกติ (20 ซม. × 10 ซม., Merck, ดาร์มสตัดท์, เยอรมนี) โดยมีปริมาตรที่แน่นอน （1-5 สารละลายมาตรฐาน μL และสารละลายตัวอย่าง 5 μL） โดยใช้หลอดฉีดยา 100 μL （ แฮมิลตัน, โบนาดุซ, สวิตเซอร์แลนด์） ขั้นตอนการสมัครดำเนินการด้วยเครื่องมือตัวอย่าง Linomat 5 กระบวนการพัฒนาดำเนินการในห้องพัฒนาอัตโนมัติ (ADC 2) และเอทิลอะซิเตท: ไดคลอโรมีเทน กรดอะซิติก กรดฟอร์มิก: น้ำ (10:25:10) :10:10:10me) ถูกเลือกให้เป็นเฟสเคลื่อนที่ จากนั้น เพลตถูกทำให้เป็นอนุพันธ์ด้วยรีเอเจนต์ผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติ (NPR) (1g กรดไดฟีนิลบอริก 2-อะมิโนเอทิลเอสเทอร์ใน 200 มล. ลอฟเอทิล อะซิเตต)ในอุปกรณ์การแช่ (CAMAG) spectrophotometrically ที่ 260 nm ปริมาณของ salidroside ถูกวัดที่ 330 nm โดยเครื่องสแกน UV ค่า Rf ของมาตรฐานถูกกำหนดเป็น hyperoside （≈0.35）, quercitrin （c0.45）, tiliroside （≈ 0.65）พบสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์（r²）พบว่า เป็น ×0.98 สำหรับการหาปริมาณของเครื่องหมายฟลาโวนอยด์

4.11.กิจกรรมการยับยั้งเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับโรคเบาหวาน 4.11.1. -กิจกรรมการยับยั้งกลูโคซิเดส

กิจกรรมการยับยั้ง -glucosidase ของตัวอย่างที่ไม่ได้ย่อยและ bioavailable ที่ได้จากสารสกัดที่เป็นน้ำของ Cistus ถูกตรวจสอบตามวิธีการที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดย Balan et al [56]. ประการแรก ปริมาณที่เหมาะสมของโมโนโซเดียมฟอสเฟตและไดโซเดียมฟอสเฟตถูกผสมกับบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 100 มิลลิโมลาร์ (pH7) เอนไซม์เอซีกลูโคซิเดสถูกละลายในบัฟเฟอร์ฟอสเฟตเพื่อได้รับสารละลาย -กลูโคซิเดส （0.2U/มล.) จากนั้น 170 uL ของบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 20 ไมโครลิตรของสารละลาย -กลูโคซิเดส และ 20 ไมโครลิตรของสารละลายตัวอย่างถูกรวมเข้าด้วยกันและบ่มในเตาอบ 37 องศาเป็นเวลา 15 นาที หลังจากนั้น 20 uL ของ 2.5 mM p-nitrophenyl- -D-glucopyranoside solution ใน 100 mM โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH7.0) ถูกเติมลงในของผสม และระยะฟักตัวอื่นถูกดำเนินการที่ 37 องศาเป็นเวลา 15 นาที จากนั้น 80 ไมโครลิตรของสารละลายโซเดียมคาร์บอเนต 0.2 โมลาร์ถูกผนวกเข้ากับของผสมเพื่อยุติปฏิกิริยา วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 405 นาโนเมตร สารละลายเควอซิทินที่ความเข้มข้นต่างกันถูกใช้เป็นข้อมูลอ้างอิง ผลลัพธ์ถูกประเมินเป็นเปอร์เซ็นต์ของการออกฤทธิ์ในการยับยั้งใน 1 มก./มล. และความเข้มข้น 0.5 มก./มล. ของตัวอย่าง ND และ IN ของสารสกัดที่เป็นน้ำของสปีชีส์ Cistus

4.11.2. -กิจกรรมการยับยั้งอะไมเลส

ฤทธิ์ยับยั้ง -amylase ของตัวอย่างที่ไม่ได้ย่อยและ bioavailable ที่ได้จากสารสกัดที่เป็นน้ำของ Cistus ถูกกำหนดโดยทำตามขั้นตอนที่ได้ให้รายละเอียดไว้ก่อนหน้านี้โดย Balan et al.[56] การหาค่าสเปกโตรโฟโตเมตริกของกิจกรรมการยับยั้งเอ-อะไมเลสของตัวอย่างดำเนินการโดยใช้รีเอเจนต์ DNS (3,5-กรดไดนิโตรซาลิไซลิก) ตามที่ระบุไว้ในวิธีการ มอลโตสเกิดขึ้นจากการแปลงแป้ง และสีเหลืองของอัลคาไลน์ DNS จะเปลี่ยนเป็นสีส้มแดงเนื่องจากมอลโตสที่ผลิตจากแป้ง ดังนั้น สารละลาย DNS 96 mM จึงถูกเตรียมจากส่วนผสมของสารละลายโซเดียมโพแทสเซียม ทาร์เทรต (ละลายใน 2 โมลาร์ NaOH) และ DNS จำนวนหนึ่ง (ละลายในน้ำกลั่น) จากนั้น 20mM โซเดียม ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่มี 6.7 มิลลิโมลาร์ NaCl (ปัจจัยร่วมของเอนไซม์เอ-อะไมเลส) ถูกเตรียมที่ 20 องศา (pH:6.9) เอนไซม์เอ-อะไมเลส (1U/มล.) และแป้ง (10 มก./มล.) ถูกละลายในบัฟเฟอร์นี้ หลังจากนั้น โซเดียม ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 50 ไมโครลิตร และสารละลายเอนไซม์เอ-อะไมเลส 10 ไมโครลิตร ผสมกับสารละลายตัวอย่าง 20 ไมโครลิตร ของผสมนี้ถูกบ่มที่ 37 องศาเป็นเวลา 45 นาที หลังจากระยะฟักตัว 20 ไมโครลิตรของสารละลายแป้งถูกเติมลงในของผสม ระยะฟักตัวอีกครั้งเริ่มต้นที่ 37 องศาเป็นเวลา 45 นาที ขั้นตอนเดียวกันนี้ใช้กับตัวอย่างโดยไม่ต้องเติมสารละลายเอนไซม์โอ-อะไมเลสที่เรียกว่า "พื้นหลังตัวอย่าง" กลุ่มควบคุมได้รับการศึกษาด้วยขั้นตอนเดียวกันในกรณีที่ไม่มีสารละลายตัวอย่าง วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 540 นาโนเมตร Acarbose ถูกใช้เป็นสารละลายอ้างอิงที่ความเข้มข้นต่างกัน ผลลัพธ์ถูกนำเสนอเป็นเปอร์เซ็นต์ของกิจกรรมการยับยั้งใน 1 มก./มล. และความเข้มข้น 0.5 มก./มล. ของตัวอย่าง ND และ IN จากสารสกัดที่เป็นน้ำของสปีชีส์ Cistus 4.11.3.AGE กิจกรรมยับยั้ง

ฤทธิ์ในการยับยั้ง AGE ของตัวอย่างที่ไม่ได้ย่อยและ bioavailable จากสารสกัดที่เป็นน้ำของสปีชีส์ Cistus ถูกกำหนดตามวิธีการที่อธิบายโดย Starow-icz et al [57]. ก่อนกระบวนการใดๆ ความเข้มข้น 1 มก./มล. และ 0.5 มก./มล. ของตัวอย่าง ND และ IN ถูกเตรียมขึ้นใหม่ จากนั้น 1 มล. ของความเข้มข้น 10 มก./มล. ของสารละลายอัลบูมินในเลือดจากวัว (BSA) ถูกเติมลงในสารละลายตัวอย่าง ND และ IN 1 มล. ตัวอย่างกลุ่มควบคุมถูกเตรียมโดยไม่ต้องเติมสารละลายตัวอย่าง ND และ IN และตัวอย่างเปล่าถูกเตรียมโดยไม่เติมน้ำตาลกลูโคส 0.5 โมลาร์ จากนั้น ตัวอย่างที่เตรียมไว้ทั้งหมดถูกบ่มเป็นเวลา 40 ชั่วโมงในอ่างน้ำเขย่าที่ 55 องศา หลังจากสิ้นสุดระยะฟักตัวแล้ว เครื่องอ่านไมโครเพลทแบบไมโครเพลท Thermo ScientificTM VarioskanTMLUXmultimode ถูกใช้ในช่วงการปล่อยสารกระตุ้น 370 nm/440 nm เพื่อคำนวณความเข้มของการเรืองแสง เควอซิทินถูกใช้เป็นสารละลายอ้างอิงที่ความเข้มข้นต่างกัน

5. สรุปผลการวิจัย

ในการศึกษานี้ ได้ทำการศึกษาสารสกัดที่เป็นน้ำของ Cistus ทุกสายพันธุ์ที่บันทึกในพืชตุรกีเพื่อหารูปแบบฟีนอลและสารต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลองและศักยภาพในการต้านเบาหวาน เนื่องจากยาต้มหรือยาฉีดเป็นรูปแบบทั่วไปในยาแผนโบราณ การใช้สารสกัดที่เป็นน้ำสำหรับการประเมินกิจกรรมในการศึกษาทดลองจึงมีความสำคัญเป็นพิเศษ ในทางกลับกัน องค์ประกอบที่ชอบน้ำในสารสกัดที่เป็นน้ำจะอยู่ภายใต้การเปลี่ยนแปลงทางเมตาบอลิซึมในระบบทางเดินอาหารเมื่อกินเข้าไป ดังนั้นสำหรับการประเมินกิจกรรมที่ถูกต้องของสูตรดั้งเดิม ควรมีการตรวจสอบกิจกรรมของสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพด้วย

นี่เป็นการศึกษาครั้งแรกเพื่อตรวจสอบผลที่ตามมาของวิธีการจำลองการย่อยอาหารของมนุษย์ในหลอดทดลองในสายพันธุ์ Cistus ของตุรกี นอกจากนี้ ยังได้ศึกษาศักยภาพการยับยั้งของพันธุ์ Cistus ตุรกีต่อ AGEs ในการศึกษานี้เป็นครั้งแรก นอกจากนี้ salidroside, hyperoside และ quercitrin ได้รับเครื่องหมาย flavonoids และการเปลี่ยนแปลงในความเข้มข้นของพวกมันได้รับการตรวจสอบในขั้นตอนการย่อยอาหารในหลอดทดลอง แม้ว่าปริมาณฟีนอลและฤทธิ์ต้านเบาหวานและสารต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดจะได้รับผลกระทบในทางลบจากกระบวนการย่อยอาหารในทางเดินอาหาร แต่ก็ยังแสดงฤทธิ์ทางชีวภาพอย่างมีนัยสำคัญ จากผลการวิจัยพบว่าสารสกัด C. salviifolius เป็นพืชที่มีศักยภาพมากที่สุดในแง่ของปริมาณฟีนอลิกและสารต้านอนุมูลอิสระและฤทธิ์ต้านเบาหวาน โดยสรุป ชิ้นส่วนทางอากาศจากสายพันธุ์ Cistus ของตุรกีมีเนื้อหาฟีนอลิกที่เข้มข้นและมีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระและต้านโรคเบาหวาน ในขณะที่ใช้วิธีการจำลองการย่อยในหลอดทดลองเพื่อประเมินการดูดซึม แต่อาจไม่สามารถเลียนแบบวิถีเมแทบอลิซึมที่เกิดขึ้นในร่างกายได้อย่างเต็มที่ ดังนั้น จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมในร่างกายและทางคลินิกเพื่อประเมินการดูดซึมของสารประกอบฟีนอลิกและการมีส่วนร่วมของพวกมันต่อผลทางเภสัชวิทยาที่รายงานโดยละเอียด

ผลงานของผู้เขียน:แนวความคิด, YI, EC, EY; วิธีการ, YI, SA, IK, การวิเคราะห์อย่างเป็นทางการของ EC, YI, IK.-C., SA; การสอบสวน, YI, IK.-C, SA; ทรัพยากร, YI, IK.SA, EC และ EY; การจัดการข้อมูล, YI, IK-C., SA; การเขียน——YI, การเขียน—การทบทวนและแก้ไข, YI, EC, EY; การสร้างภาพ, YI; การกำกับดูแล ECand EY ผู้เขียนทุกคนได้อ่านและตกลงที่จะเผยแพร่ต้นฉบับของต้นฉบับ

เงินทุน:งานวิจัยนี้ไม่ได้รับเงินทุนจากภายนอก คำชี้แจงของคณะกรรมการพิจารณาสถาบัน: ไม่เกี่ยวข้อง คำชี้แจงความยินยอมที่ได้รับแจ้ง: ไม่เกี่ยวข้อง

คำชี้แจงเกี่ยวกับความพร้อมใช้งานของข้อมูล:ข้อมูลที่นำเสนอในการศึกษานี้สามารถขอได้จากผู้เขียนที่เกี่ยวข้อง

ผลประโยชน์ทับซ้อน:ผู้เขียนประกาศไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์

ความพร้อมของตัวอย่าง:ไม่มีตัวอย่างของสารประกอบจากผู้เขียน

บทความนี้คัดมาจาก Molecules 2021, 26, 5322 https://doi.org/10.3390/molecules26175322 https://www.mdpi.com/journal/molecules