ในการบริหาร Vivo ของ Consortia แบคทีเรียในลำไส้จำลองเมตาโบไทป์ของ Urolithin A และ B ในแบบจำลองหนูที่ไม่ได้ผลิต UrolithinⅡ

ผลลัพธ์

การวิเคราะห์ความจำเพาะและความไวของไพรเมอร์และโพรบที่ออกแบบมาสำหรับ Ellagibacter และ Enterocloster

ความจำเพาะของไพรเมอร์และโพรบ Ellagibacter และ Enteroccloster ได้รับการยืนยันโดยการอัปโหลดลำดับในโปรแกรมการจัดตำแหน่ง Quence ProbeMatch.31 ผลลัพธ์จะแสดงขึ้นในตารางที่ 1S และ 2S† ต่อจากนั้น ความจำเพาะของไพรเมอร์และโพรบได้รับการตรวจสอบโดย qPCR โดยใช้เงื่อนไขปฏิกิริยาที่เหมาะสมที่สุดที่อธิบายไว้ในส่วนวัสดุและวิธีการ แบคทีเรียที่เป็นตัวแทนของตระกูล Eggerthellaceae และ Lachnospiraceae ที่มีความคล้ายคลึงกันมากที่สุดกับ Ellagibacter และ Enterocloster ในลำดับยีน 16S rRNA ได้รับการทดสอบเพิ่มเติมจากสายพันธุ์อื่นๆ ที่เกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดที่ตรวจพบบ่อยครั้งในลำไส้ของมนุษย์ (ตารางที่ 1S และ 2S†) 2 แสดงแผนการขยายสัญญาณที่สอดคล้องกับกราฟปริมาณมาตรฐาน

คลิกเพื่อการรักษาอาการท้องผูก

ค่า CT ถูกพล็อตเทียบกับความเข้มข้นของแบคทีเรีย (Co) เป็นบันทึก 1 0 เทียบเท่าจีโนม / ปฏิกิริยา (6.25 × 1 0 -6 ng สำหรับจีโนมเดี่ยว) ความชันของเส้นโค้งการถดถอยเชิงเส้นซึ่งคำนวณโดยใช้ DNA ของจีโนมคือ −3.78 และค่า R2 มากกว่า 0.99 เกี่ยวกับความไวของระบบ qPCR นั้นจำเป็นต้องมีจีโนมเทียบเท่า 1.5 รายการเป็นขั้นต่ำสำหรับปฏิกิริยาเชิงบวกโดยใช้โหมด TaqMan ค่า CT ที่ได้รับจากเส้นโค้งการสอบเทียบของ E. isourolithinifaciens และ E. bolted อยู่ระหว่าง 15.5 ± 0.7 ถึง 37.8 ± 0.7 ในขณะที่ตรวจไม่พบการขยาย DNA สำหรับสายพันธุ์อื่นที่ทดสอบ

การหาปริมาณของ Ellagibacter และ Enterocloster ในตัวอย่างอุจจาระของหนูดำเนินการด้วยวิธีนี้ (qPCR) โดยพิจารณาค่าเฉลี่ยของการจำลองสามครั้ง ผลลัพธ์ถูกแสดงเป็นแบคทีเรีย log 10 ต่อกรัม และเปรียบเทียบกับค่าความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ที่ได้จากการหาลำดับ 16S rRNA เราสังเกตความสัมพันธ์เชิงบวกระหว่างผลลัพธ์ที่ได้รับจากทั้งสองวิธีใน Ellagibacter (r=0.660, p < 0.001) และ Enterocloster (r=0.459, p< 0.001) (data not shown).

ผลของการรวมตัวของแบคทีเรียที่ให้ทางปากต่อการผลิตยูโรลิติน ในร่างกาย

การวิเคราะห์ Uro ในอุจจาระแสดงให้เห็นว่าในตอนแรก (T{{0}}) หนูไม่ได้สร้าง Uros หลังจากกินผง EA (รูปที่ 3A–C) อย่างไรก็ตาม หลังจากให้กลุ่มแบคทีเรีย A (รูปที่ 3A) ) และ B (รูปที่ 3B) หนูสามารถผลิต Uros ได้ ในช่วงสามสัปดาห์แรก เมื่อหนูจากกลุ่ม A และ B กินเฉพาะผง EA เท่านั้น ความเข้มข้นของ Uro (ช่วง:0–1.43 µg g− 1) และสารตั้งต้นของ EA (ช่วง: 0.07–4.54 µg g−1) ในอุจจาระอยู่ในระดับต่ำ อย่างไรก็ตาม ตั้งแต่วันที่ 21 เมื่อการบริโภควอลนัทเริ่มต้นเป็นแหล่ง EA ที่สอง มีการเพิ่มขึ้นอย่างมากในอุจจาระ EA (รูปที่ 3A–C) และการผลิต Uro ในกลุ่ม A (รูปที่ 3A) และ B (รูปที่ 3B) ).

ยิ่งไปกว่านั้น มีการสังเกตความแตกต่างในโปรไฟล์ Uro ระหว่างกลุ่ม A และ B ในกลุ่ม A อุจจาระ Uro-C, Uro-M6, Uro-M7 และสารเมตาบอไลต์สุดท้าย Uro-A มีความโดดเด่น ในทางตรงกันข้าม ในกลุ่ม B มี Uros สุดท้ายสามตัว (Uro-A, UroB และ IsoUro-A) ในขณะที่ตัวกลางมีน้อย อย่างไรก็ตาม ตรวจพบความเข้มข้นของอุจจาระของ Uro-G ที่อธิบายไว้เมื่อเร็วๆ นี้ในกลุ่ม B มากกว่าในกลุ่ม A นอกจากนี้ความเข้มข้นของ Uro-B ยังต่ำกว่าความเข้มข้นของ Uro-A และ IsoUro-A ในกลุ่ม B นอกจากนี้ Uro-A และ IsoUro-A แต่ไม่ใช่ Uro-B ถูกผลิตในหนูทุกตัวของกลุ่ม B (รูปที่ 3B) เมื่อเพิ่มวอลนัทในอาหารของหนูควบคุม (กลุ่ม C) ในวันที่ 21 ความเข้มข้นของอุจจาระที่สูงขึ้นของ EA ก็ถูกสังเกตเช่นกัน กว่าก่อนการบริโภควอลนัท โดยที่ความเข้มข้นของอุจจาระ EA ต่ำมาก (รูปที่ 3C) อย่างไรก็ตาม ทั้งการบริโภคผง EA หรือการบริโภควอลนัทไม่สนับสนุนการผลิต Uros ในลำไส้ของหนูควบคุม (กล่าวคือ ไม่มีกลุ่มแบคทีเรีย)

การตั้งอาณานิคมในลำไส้ของแบคทีเรียที่ให้รับประทานในขั้นต้น ก่อนที่หนูของกลุ่ม A และ B จะเริ่มการบริโภคกลุ่มแบคทีเรีย Gordonibacter หรือ Ellagibacter อยู่ภายใต้ขีดจำกัดของการตรวจพบในตัวอย่างอุจจาระ เมื่อทำการวิเคราะห์ลำดับ metagenomic โดยใช้แพลตฟอร์ม MiSeq-Illumina (รูปที่ 3D-F ). เมื่อใช้ qPCRระดับ Gordonibacter ในหนูอยู่ในระดับต่ำ (<5.8 log bacteria per g faeces), and Ellagibacter levels were under the limit of detection (data not shown). In contrast, Enterocloster was detected using the MiSeq-Illumina and qPCR in the faeces of rats from all groups (A, B, and C) at the baseline (Fig. 3D–F). 

ความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ (ค่าเฉลี่ย ± SD) ของเอนเทอโรโคลสเตอร์ในกลุ่ม A, B และ C คือ {{0}}.03 ± 0.02, {{10 }}.04 ± 0.06 และ 0.13 ± 0.17% ตามลำดับ แต่ไม่มีความแตกต่างที่มีนัยสำคัญ (p=0.570) การบริหารงานของกลุ่มแบคทีเรีย A และ B ส่งผลให้เกิดการปรากฏตัวและการเพิ่มขึ้นอย่างค่อยเป็นค่อยไปของ Gordonibacter และ Ellagibacter ในอุจจาระกลุ่ม A และ B ตามลำดับ (รูปที่ 3 มิติ และ E) นอกจากนี้ ระดับเอนเทอโรคลอสเตอร์ในอุจจาระเพิ่มขึ้นตลอดการศึกษาในกลุ่ม A และ B (รูปที่ 3D และ E)

อย่างไรก็ตาม การวิเคราะห์ LEfSe แสดงให้เห็นความแตกต่างที่หายากในกลุ่มแบคทีเรียในลำไส้อื่น ๆ เมื่อข้อมูลการจัดลำดับ metagenomic ของกลุ่ม A และ Bwere เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม (รูปที่ 4A และ B) สิ่งที่น่าสนใจคือการลดลงของสกุล Streptococcus และตระกูล Streptococcaceae ในกลุ่ม A และ B เปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม (รูปที่ 4A และ B) ห้าวันหลังจากการหยุดการบริหารช่องปากของกลุ่มแบคทีเรีย (วันที่สิ้นสุดของการศึกษา) ตรวจพบการลดลงของความอุดมสมบูรณ์ของ Ellagibacter และ Enterocloster ในกลุ่ม B ซึ่งส่งผลให้การผลิต Uro ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 3B และ E) ในกลุ่ม A ยังพบการลดลงของความอุดมสมบูรณ์ของ Gordonibacter แต่ไม่ใช่ Enterocloster (รูปที่ 3A) ซึ่งส่งผลให้ความเข้มข้นของ Uro ลดลง แต่เด่นชัดน้อยกว่ากลุ่ม B (รูปที่ 3 มิติและ E) ในกลุ่มควบคุม Ellagibacter อยู่ภายใต้ขีดจำกัดของการตรวจพบตลอดการศึกษา และ Enterocloster และ Gordonibacter ยังคงอยู่ที่ระดับต่ำมาก (รูปที่ 3F)

การศึกษาความเป็นพิษของแบคทีเรียในลำไส้ที่รับประทานทางปาก

มีการตรวจสอบผลข้างเคียงที่อาจเกิดขึ้นจากการกินกลุ่มแบคทีเรีย ไม่พบผลข้างเคียงต่อการเจริญเติบโต น้ำหนักที่เพิ่มขึ้น การรับประทานอาหาร และอวัยวะสำคัญหลังการให้ทางปากเป็นเวลา 4 สัปดาห์โดยการตรวจกลุ่มแบคทีเรียในหนูกลุ่ม A และ B เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม อย่างไรก็ตาม หนูตัวผู้ได้รับ 107.4 ± 2.4 กรัม ในขณะที่หนูตัวเมียได้รับน้อยลงน้ำหนัก (25.7 ± 5 กรัม) เมื่อสิ้นสุดการศึกษาโดยไม่มีความแตกต่างเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม การบริโภคอาหารโดยกรงคือ 63.1 ± 1.4 กรัมสำหรับหนูตัวผู้และ 33.8 ± 1.8 กรัมสำหรับหนูตัวเมีย อย่างไรก็ตาม ปริมาณน้ำที่บริโภคคือ 136.1 ± 37.2 กรัมและ 76.0 ± 12.6 กรัม โดยหนูตัวผู้และหนูตัวเมียแยกกรงตามลำดับ .

พบความแตกต่างทางโลหิตวิทยาระหว่างเพศชายและเพศหญิงในบางตัวแปร เช่น การกระจายตัวของเม็ดเลือดแดง (RDW, p {{0}}.005), เม็ดเลือดขาว (p=0.005), ความกว้างของการกระจายของเกล็ดเลือด (PDW, p =0.005) และปริมาณรีติคูโลไซต์ฮีโมโกลบิน (CHr, p=0.013)(ตารางที่ 2) ยังคงไม่พบความแตกต่างสำหรับตัวแปรใด ๆ ระหว่างกลุ่มที่ใช้กลุ่มแบคทีเรีย (กลุ่ม A และ B) และกลุ่มควบคุม (กลุ่ม C) วิเคราะห์ค่าทางชีวเคมีด้วย และตรวจพบความแตกต่างระหว่างเพศชายและเพศหญิงในตัวแปรบางอย่าง เช่น ดัชนีครีเอตินีน (p < 0.001) ฟอสฟอรัส (p=0.007) อัลคาไลน์ฟอสฟาเตส (ALP) (p {{13 }}.003) และไทรอกซีน (T4) (p=0.002)(ตารางที่ 3) อย่างไรก็ตาม ไม่พบความแตกต่างสำหรับตัวแปรใดๆ ระหว่างกลุ่มที่ใช้กลุ่มแบคทีเรีย (กลุ่ม A และ B) และกลุ่มควบคุม (กลุ่ม C)

ยาสมุนไพรธรรมชาติบรรเทาอาการท้องผูก-Cistanche

Cistanche เป็นพืชสกุลกาฝากที่อยู่ในวงศ์ Orobanchaceae พืชเหล่านี้ขึ้นชื่อในด้านคุณสมบัติทางยาและมีการใช้ในการแพทย์แผนจีน (TCM) มานานหลายศตวรรษ พันธุ์ Cistanche มักพบในพื้นที่แห้งแล้งและทะเลทรายของจีน มองโกเลีย และส่วนอื่นๆ ของเอเชียกลาง พืช Cistanche มีลักษณะลำต้นที่มีเนื้อสีเหลือง และมีคุณค่าสูงในด้านประโยชน์ต่อสุขภาพ ใน TCM เชื่อกันว่า Cistanche มีคุณสมบัติในการบำรุง และมักใช้ในการบำรุงไต เพิ่มความมีชีวิตชีวา และสนับสนุนการทำงานทางเพศ นอกจากนี้ยังใช้เพื่อจัดการกับความชรา ความเหนื่อยล้า และปัญหาความเป็นอยู่โดยรวม แม้ว่า Cistanche จะมีประวัติการใช้มายาวนานในการแพทย์แผนโบราณ แต่การวิจัยทางวิทยาศาสตร์เกี่ยวกับประสิทธิภาพและความปลอดภัยของยายังคงดำเนินต่อไปและจำกัด อย่างไรก็ตาม มันมีสารประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพหลายชนิด เช่น ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ ไอริดอยด์ ลิกแนน และโพลีแซ็กคาไรด์ ซึ่งอาจมีส่วนทำให้เกิดผลทางยาได้

เวซิสตานช์ผงซิสแทนช์, เม็ดซิสแทนช์, แคปซูลซิสแทนเช่และผลิตภัณฑ์อื่นๆได้รับการพัฒนาโดยใช้ทะเลทรายถังน้ำเป็นวัตถุดิบซึ่งล้วนมีผลดีต่อการบรรเทาอาการท้องผูก กลไกเฉพาะมีดังนี้: เชื่อกันว่า Cistanche อาจมีประโยชน์ในการบรรเทาอาการท้องผูกโดยพิจารณาจากการใช้แบบดั้งเดิมและสารประกอบบางชนิดที่มีอยู่ แม้ว่าการวิจัยทางวิทยาศาสตร์โดยเฉพาะเกี่ยวกับผลกระทบของ Cistanche ต่ออาการท้องผูกนั้นมีจำกัด แต่เชื่อกันว่ามีกลไกหลายอย่างที่อาจมีส่วนช่วยในการบรรเทาอาการท้องผูกได้ ผลยาระบาย:ซิสแทนเช่มีการใช้กันมานานในการแพทย์แผนจีนเพื่อแก้อาการท้องผูก เชื่อกันว่ามีฤทธิ์เป็นยาระบายอ่อนๆ ซึ่งสามารถช่วยส่งเสริมการเคลื่อนไหวของลำไส้และทำให้ท้องผูกได้ ผลกระทบนี้อาจเกิดจากสารประกอบต่างๆ ที่พบใน Cistanche เช่น ฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์และโพลีแซ็กคาไรด์ การทำให้ลำไส้ชุ่มชื้น: จากการใช้แบบดั้งเดิม Cistanche ถือว่ามีคุณสมบัติในการให้ความชุ่มชื้น โดยเฉพาะสำหรับลำไส้ การส่งเสริมความชุ่มชื้นและการหล่อลื่นของลำไส้อาจช่วยให้เครื่องมือนิ่มลงและช่วยให้ขับผ่านได้ง่ายขึ้น ซึ่งช่วยบรรเทาอาการท้องผูกได้ ผลต้านการอักเสบ: บางครั้งอาการท้องผูกอาจเกี่ยวข้องกับการอักเสบในระบบทางเดินอาหาร Cistanche มีสารประกอบบางชนิด รวมถึงฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์และลิกแนน ซึ่งเชื่อกันว่ามีคุณสมบัติต้านการอักเสบ การลดการอักเสบในลำไส้อาจช่วยให้การเคลื่อนไหวของลำไส้สม่ำเสมอและบรรเทาอาการท้องผูกได้