การประเมินในหลอดทดลองของปฏิกิริยาแสงและความเป็นพิษต่อแสงของสารต้านอนุมูลอิสระโพลีฟีนอลตามธรรมชาติ

โปรดติดต่อoscar.xiao@wecistanche.comเพื่อทราบข้อมูลเพิ่มเติม

เชิงนามธรรม:โพลีฟีนอลเป็นสารประกอบธรรมชาติกลุ่มใหญ่ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในผลิตภัณฑ์เครื่องสำอาง เนื่องจากมีคุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระและต้านการอักเสบ และความสามารถในการป้องกันความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันที่เกิดจากรังสียูวี เนื่องจากสารประกอบเหล่านี้มีโครโมฟอร์และถูกนำไปใช้กับผิวหนังโดยตรง พวกมันจึงสามารถทำปฏิกิริยากับแสงแดดและปล่อยพิษต่อแสงได้ ข้อมูลทางวิทยาศาสตร์ที่มีอยู่เกี่ยวกับศักยภาพในการเกิดพิษต่อแสงของสารประกอบธรรมชาติเหล่านี้มีน้อยมาก ดังนั้นการศึกษานี้จึงมีวัตถุประสงค์เพื่อประเมินความเป็นพิษต่อแสงและความเป็นพิษต่อแสงของสารฟีนอล 5 ชนิดสารต้านอนุมูลอิสระด้วยเอกสารการใช้ในผลิตภัณฑ์เครื่องสำอาง การสอบวิเคราะห์ ROS แบบมาตรฐานได้รับการตรวจสอบและนำไปใช้เพื่อคัดกรองปฏิกิริยาต่อแสงของกรดคาเฟอีนิกสารต้านอนุมูลอิสระฟีนอลตามธรรมชาติ, กรดเฟรูลิก, กรด p-coumaric,3,4-กรดไดไฮดรอกซีฟีนิลอะซิติก (DOPAC) และรูติน ศักยภาพในการเป็นพิษต่อแสงถูกกำหนดโดยการใช้สายเซลล์เคราติโนไซต์ของมนุษย์ (HaCaT) บนพื้นฐานของการทดสอบความเป็นพิษต่อแสงด้วยแสง 3T3 Neutral Red Uptake แม้ว่าทั้งหมดศึกษาสารต้านอนุมูลอิสระฟีนอลดูดซับรังสี UV/Vis ในช่วง 290 ถึง 700 นาโนเมตร มีเพียง DOPAC เท่านั้นที่สามารถสร้างออกซิเจนเดี่ยวได้ การสร้างชนิดออกซิเจนที่เกิดปฏิกิริยาเป็นปฏิกิริยาเคมีระยะเริ่มต้นซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของกลไกการเกิดพิษต่อแสง กระนั้น ไม่มีสารประกอบที่ศึกษาใดๆ ที่ลดความมีชีวิตของ keratinocytes หลังจากการฉายรังสี นำไปสู่ข้อสรุปว่าพวกมันไม่มีศักยภาพในการเป็นพิษต่อแสง ข้อมูลที่ได้จากงานนี้แสดงให้เห็นว่าสารประกอบเหล่านี้ปลอดภัยเมื่อรวมอยู่ในผลิตภัณฑ์เครื่องสำอาง

คำสำคัญ:ความปลอดภัยของภาพถ่าย ปฏิกิริยาแสง; ความเป็นพิษต่อแสง; โพลีฟีนอล;สารต้านอนุมูลอิสระฟีนอลจากธรรมชาติ; ชนิดของออกซิเจนที่เกิดปฏิกิริยา keratinocytes; สกินแคร์; ผลิตภัณฑ์เครื่องสำอาง

กรุณาคลิกที่นี่เพื่อทราบข้อมูลเพิ่มเติม

บทนำ 

โพลีฟีนอล (PPs) เป็นหนึ่งในกลุ่มผลิตภัณฑ์ธรรมชาติที่มีจำนวนมากมายและกระจายอย่างกว้างขวางที่สุดในอาณาจักรพืช โครงสร้างทางเคมีของ PPs มีลักษณะเฉพาะด้วยการมีอยู่ของกลุ่มฟีนอลิกไฮดรอกซิลตั้งแต่หนึ่งกลุ่มขึ้นไป ที่จับกับระบบวงแหวนเบนซีนหนึ่งระบบหรือมากกว่า [1] โพลีฟีนอลแสดงกิจกรรมทางชีววิทยาที่เป็นประโยชน์มากมายในมนุษย์ รวมถึงฤทธิ์ต้านไวรัส ต้านแบคทีเรีย ต้านมะเร็ง ปกป้องตับ ต้านการอักเสบ และต้านอนุมูลอิสระ [2–5]เป็นสารต้านอนุมูลอิสระโพลีฟีนอลอาจปกป้ององค์ประกอบของเซลล์จากผลเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชันของชนิดออกซิเจนที่เกิดปฏิกิริยา (ROS) เช่น ออกซิเจนเดี่ยว ซูเปอร์ออกไซด์ และไฮดรอกซิล เรดิคัล ซึ่งจำกัดความเสี่ยงของโรคต่างๆ ที่เกี่ยวข้องกับความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน [6,7] เนื่องจากคุณสมบัติทางเคมีของ PPs จึงสามารถกำจัด ROS และไอออนของโลหะทรานสิชั่นที่เป็นคีเลตได้ เช่น เหล็กและทองแดง ซึ่งดึงดูดความสนใจของอุตสาหกรรมเครื่องสำอางให้ใช้ในสูตรผลิตภัณฑ์ดูแลผิว [8–10] การได้รับรังสีอัลตราไวโอเลต (UV) เป็นปัจจัยหลักประการหนึ่งที่กระตุ้นให้เกิดมะเร็งผิวหนัง และเซลล์ผิวหนังอาจได้รับความเสียหายโดยตรงจากรังสียูวีหรือโดยอ้อมจากการผลิต ROS ที่มากเกินไปของรังสี UV [11] การศึกษาเชิงทดลองและระบาดวิทยาได้เสนอแนะว่าโพลีฟีนอลช่วยปกป้องผิวจากผลเสียของรังสียูวีผ่านหลายช่องทาง [12] ดังนั้นสารประกอบหลายชนิดในตระกูลนี้จึงถูกใช้เป็นส่วนผสมในผลิตภัณฑ์เครื่องสำอางเชิงพาณิชย์จำนวนมากที่มีอยู่ในตลาด [13] ความต้องการของผู้บริโภคที่เพิ่มขึ้นสำหรับเครื่องสำอางจากธรรมชาติได้กระตุ้นให้อุตสาหกรรมพัฒนาสูตรโดยใช้สารสกัดจากธรรมชาติที่มีส่วนผสมออกฤทธิ์ เช่น โพลีฟีนอล ซึ่งเป็นวิธีแก้ปัญหาที่มีแนวโน้มและมีประสิทธิภาพสำหรับการดูแลผิว [13] อย่างไรก็ตาม โครโมฟอร์ที่มีอยู่ในโครงสร้างของโพลีฟีนอลมีความสามารถในการดูดซับรังสี UV/Vis และเกิดปฏิกิริยาเคมีซึ่งส่งผลให้เกิดเหตุการณ์ที่อาจส่งผลให้เกิดปฏิกิริยาต่อแสงได้ [14] ความเป็นพิษต่อแสงถูกกำหนดให้เป็นการตอบสนองที่เป็นพิษที่เกิดจากสารเคมีที่ทำปฏิกิริยากับแสงเฉพาะที่หรือตามระบบหลังจากที่ร่างกายได้รับแสงจากสิ่งแวดล้อม [15] สารออกฤทธิ์ทางเภสัชกรรมและสารเพิ่มปริมาณสำหรับการบริหารให้ทั่วร่างกาย, สูตรทางคลินิกสำหรับการใช้เฉพาะที่, แผ่นแปะผิวหนัง และอื่นๆ มีศักยภาพที่จะเป็นพิษต่อแสงและอาจทำให้เกิดปฏิกิริยาที่เป็นพิษต่อแสงที่สังเกตได้ ดังนั้น หน่วยงานกำกับดูแล US FDA, EU EMA และ ICH ได้จัดทำแนวทางด้านความปลอดภัยของภาพถ่าย แนะนำวิธีการทดสอบและกลยุทธ์การประเมิน [15–17] การประเมินความปลอดภัยของผลิตภัณฑ์เครื่องสำอางเป็นข้อบังคับตามกฎหมายของสหภาพยุโรป [18] การประเมินความปลอดภัยที่จำเป็นรวมถึงการศึกษาทางพิษวิทยาที่เกี่ยวข้องกับส่วนผสมเครื่องสำอาง รวมถึงการประเมินความเป็นพิษที่เกิดจากภาพถ่าย [18] เนื่องจากการทดลองในสัตว์เป็นสิ่งต้องห้ามสำหรับผลิตภัณฑ์เครื่องสำอาง จึงได้มีการเสนอการทดสอบความปลอดภัยของภาพถ่ายในหลอดทดลองหลายครั้งในช่วงหลายปีที่ผ่านมา รวมถึงการวิเคราะห์สเปกตรัม UV การทดสอบความเป็นพิษต่อแสงด้วยแสงสีแดงที่เป็นกลาง 3T3 (3T3 NRU PT) และชนิดของออกซิเจนที่ทำปฏิกิริยา ( ROS) การทดสอบ [18–20] การทดสอบ ROS ได้รับการออกแบบมาสำหรับการประเมินปฏิกิริยาไวแสงของยา ซึ่งมีหลักการคือการตรวจสอบปฏิกิริยาเคมีในสารเคมีในการทดสอบที่สัมผัสกับแสงแดดจำลอง [19,20] ด้วยปฏิกิริยาโฟโตเคมีเหล่านี้ ROS เช่น superoxide anion และ singlet oxygen สามารถสร้างได้ และกระบวนการ photochemical เหล่านี้สามารถเป็นตัวกระตุ้นสำหรับ phototoxicity ที่เกิดจากยา [19,20] ROS ระดับสูงสามารถทำให้เกิดพิษต่อเซลล์จากการทำลาย DNA, ลิปิด และโปรตีนจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันhttps://www.voachinese.com/a/us-lawmakers-united-condemn-russias-ukraine-invasion-20220224/6458599.htmlวิธีการในหลอดทดลอง 3T3 NRU-PT ใช้สายเซลล์เซลล์ไฟโบรบลาสต์ของเมาส์ Balb/c 3T3 และการรับสีแดงที่เป็นกลางเป็นจุดสิ้นสุดของความเป็นพิษต่อเซลล์ ความเป็นพิษต่อแสงจะถูกกำหนดโดยการลดลงสัมพัทธ์ในความมีชีวิตของเซลล์ที่สัมผัสกับสารเคมีทดสอบในที่ที่มีและไม่มีแสงจำลองแสงแดด การศึกษาที่รายงานในวรรณคดีสรุปว่าการทดสอบนี้มีความไวสูงเกินไป คาดการณ์ความเสี่ยงด้านความปลอดภัยของสัตว์และภาพถ่ายมนุษย์โดยผิดพลาด ซึ่งนำไปสู่ผลบวกที่ผิดพลาดจำนวนมากเมื่อเปรียบเทียบกับผลลัพธ์ในร่างกาย [21-23] เมื่อพิจารณาจากข้อจำกัดนี้ กลุ่มของเราได้เสนอการปรับเปลี่ยนวิธีการ 3T3 NRU-PT โดยอิงจากการใช้สายเซลล์เคราติโนไซต์ของมนุษย์ (HaCaT) [24] เนื่องจากวิธีการนี้ใช้เซลล์ keratinocyte ของมนุษย์ จึงเป็นแบบจำลองที่เหมือนจริงมากขึ้น เนื่องจากเซลล์เหล่านี้เป็นเซลล์ที่มีอยู่มากที่สุดในชั้นภายนอกของผิวหนัง โดยที่สารประกอบเฉพาะที่จะถูกนำไปใช้และสัมผัสกับแสงแดด [24] จุดมุ่งหมายของการศึกษาครั้งนี้คือเพื่อประเมินความเป็นพิษที่เกิดจากแสงของกรด polyphenols p-coumaric ตามธรรมชาติ กรด caffeic 3 4-dihydroxyphenylacetic acid (DOPAC) กรด ferulic และ rutin (รูปที่ 1) ซึ่งใช้เป็นส่วนผสมเครื่องสำอางอยู่แล้วหรือกำลังพิจารณาอยู่เนื่องจากคุณสมบัติทางเคมีและสารต้านอนุมูลอิสระที่น่าสนใจ [25–27] การทดสอบ ROS ได้รับการตรวจสอบและนำไปใช้สำหรับการประเมินความปลอดภัยของภาพถ่ายเพื่อการสำรวจของสารประกอบ และความเป็นพิษต่อเซลล์และความเป็นพิษต่อแสงของพวกมันได้รับการประเมินเพิ่มเติมโดยใช้สายเซลล์เคราติโนไซต์ของมนุษย์ (HaCaT)

2. ผลลัพธ์และการอภิปราย 

การพิจารณาเบื้องต้นสำหรับการประเมินศักยภาพของโฟโตรีแอกทีฟคือว่าสารประกอบดูดซับโฟตอนที่ความยาวคลื่นใดๆ ระหว่าง 290 ถึง 700 นาโนเมตรหรือไม่ สารประกอบที่มีค่าสัมประสิทธิ์การสูญพันธุ์ของฟันกราม (MEC) มากกว่า 1000 L mol-1 cm-1 ที่ความยาวคลื่นใดๆ ระหว่าง 290 ถึง 700 nm ถือว่ามีปฏิกิริยาแสงเพียงพอที่จะส่งผลให้เกิดความเป็นพิษต่อแสงโดยตรง [15] สเปกตรัมการดูดกลืนของกรด caffeic, p-coumaric และ ferulic, DOPAC และรูตินใน DMSO ที่แสงยูวีที่มองเห็นได้แสดงไว้ในรูปที่ 2 สารประกอบทั้งหมดดูดซับในช่วงสเปกตรัม 200 ถึง 700 นาโนเมตร โดยมีความยาวคลื่นสูงสุดที่หรือ มากกว่า 290 นาโนเมตรและด้วย MEC โดยทั่วไปแล้วจะมากกว่า 4000 L mol-1 cm-1 (ตารางที่ 1) โพลีฟีนอลเป็นสารประกอบทางชีวภาพที่มี π ระบบคอนจูเกตที่มีหมู่ฟีนอลิกไฮดรอกซิล ทรานซิชันทางอิเล็กทรอนิกส์ของออร์บิทัลโมเลกุลชนิด π มีหน้าที่ในสเปกตรัมที่มองเห็นด้วยแสงยูวีของสารประกอบกลุ่มนี้ [28]

สารประกอบทั้งหมดที่ทดสอบแสดง MEC ที่สูงกว่า 1,000 L mol-1 cm-1 ซึ่งหมายความว่าทั้งหมดเป็นสารประกอบที่เป็นพิษต่อแสงซึ่งควรค่าแก่การศึกษา [15] ก่อนทำการทดสอบ ROS เครื่องจำลองสุริยะได้รับการประเมิน และเงื่อนไขการทดลองได้รับการปรับให้เหมาะสมเพื่อให้แน่ใจว่าค่าที่วัดได้ของออกซิเจนเดี่ยว (SO) และซูเปอร์ออกไซด์แอนไอออน (SA) ใกล้เคียงกับที่กล่าวถึงในวรรณกรรม [29] การเพิ่มประสิทธิภาพของการทดสอบการสร้าง ROS โดยใช้การควบคุมเชิงบวกและเชิงลบ และการศึกษาความเป็นไปได้ดำเนินการโดยใช้สารเคมีอ้างอิง ภายใต้เงื่อนไขการทดลองที่ใช้ สารทั้งหมดที่ทดสอบในการศึกษาความเป็นไปได้นั้นตรงตามเกณฑ์การยอมรับโดยให้ค่า SO และ SA ภายในช่วงค่าที่ยอมรับได้ [29]

การทดสอบ ROS ดำเนินการสำหรับสารประกอบโพลีฟีนอล และความสามารถของสารที่ทดสอบเพื่อสร้าง ROS ที่ความเข้มข้น 200 ไมโครโมลาร์ แสดงในตารางที่ 2 ตารางที่ 2 ได้ผลลัพธ์สำหรับสารประกอบที่ทดสอบโดยใช้การทดสอบ ROS

ผลลัพธ์ที่ได้แสดงว่า ยกเว้น DOPAC สารประกอบทั้งหมด สามารถจำแนกเป็น non-photoreactive แม้ว่าสารเหล่านี้จะแสดงให้เห็นการดูดกลืนแสงที่มองเห็นได้ของ UV และ MEC สูงกว่า 1000 L mol-1 cm-1 สารเหล่านี้ไม่ได้สร้าง ROS ภายใต้สภาวะที่ทดสอบ ไม่ว่าจะเป็นชนิด SO หรือ SA น่าแปลกที่ DOPAC สามารถกระตุ้นการสร้างสปีชีส์ SO ดังนั้นจึงถูกจัดประเภทเป็นปฏิกิริยาแสง แม้ว่าสารประกอบนี้จะมีค่า MEC ต่ำที่สุดในช่วงที่มองเห็นได้ UV ในบรรดาสารประกอบทั้งหมดที่ศึกษา จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมเพื่อทำความเข้าใจผลลัพธ์ที่ได้จาก DOPAC ซึ่งอาจมีความสำคัญในอนาคตอันใกล้ เพื่อสร้างความสัมพันธ์ระหว่างโครงสร้างทางเคมีของสารประกอบกับความสามารถในการทำปฏิกิริยากับแสง ความเป็นพิษต่อเซลล์ของ DMSO ที่ใช้สำหรับการประเมินผลกระทบต่อแสง เมื่อมีและไม่มีการฉายรังสี หลังจากผ่านไป 1 ชั่วโมงของการสัมผัสถูกประเมิน สำหรับเพลตที่ไม่ฉายรังสี DMSO ไม่แสดงความแตกต่างที่มีนัยสำคัญทางสถิติที่สัมพันธ์กับกลุ่มควบคุมเชิงลบ อย่างไรก็ตาม สำหรับเพลตที่ถูกฉายรังสี มีความแตกต่างที่มีนัยสำคัญระหว่าง DMSO 1 เปอร์เซ็นต์และกลุ่มควบคุมตัวทำละลายที่สัมพันธ์กับกลุ่มควบคุมเชิงลบ (p < 0.0001)="" ซึ่งให้เหตุผลในการใช้การควบคุมตัวทำละลายในการทดลองทั้งหมดเพื่อรับประกันว่าความแตกต่างในความมีชีวิตของเซลล์="" มีสาเหตุมาจากสารประกอบภายใต้การศึกษาเท่านั้น="" เพื่อให้มั่นใจถึงความเป็นไปได้ของการทดสอบความเป็นพิษต่อแสงโดยใช้สายเซลล์เคราติโนไซต์ของมนุษย์="" (hacat),="" 5-methoxy="" psoralen,="" chlorpromazine="" hydrochloride="" และ="" quinine="" ถูกทดสอบเป็นตัวควบคุมเชิงบวก="" และกรดอะซิติลซาลิไซลิก="" เฮกซาคลอโรฟีน="" และโซเดียมลอริลซัลเฟตเป็นตัวควบคุมเชิงลบ="" [24].="" ผลลัพธ์ที่ได้จากการทดสอบความเป็นพิษต่อแสงโดยเปรียบเทียบความมีชีวิตของเซลล์="" hacat="" เซลล์="" ที่ฉายรังสีและไม่ฉายรังสี="" เมื่อมีสารประกอบฟีนอลิกที่ทดสอบ="" (โพลี)="" แสดงไว้ในรูปที่="" 3="" ช่วงของความเข้มข้นของสารเคมีที่ทดสอบต่อหน้า="" (irr="" plus="" )="" และการขาด="" (irr−)="" ของแสงถูกกำหนดหาในการทดลองหาช่วงขนาดยา="" โดยพิจารณาจากความเข้มข้นสูงสุดที่="" 1000="" ไมโครโมลาร์="" ชุดการเจือจางทางเรขาคณิตถูกนำมาใช้และปรับเมื่อจำเป็น="" โดยเป็นหน้าที่ของการตอบสนองความเข้มข้นเมื่อมีและไม่มีการฉายรังสี="" ภายในช่วงความเข้มข้นที่ทดสอบ="" (12.5;="" 31.25;="" 62.5;="" 125;="" 250;="" 500="" และ="" 1000="" µm)="" ไม่มีสารทดสอบใดที่เหนี่ยวนำให้เซลล์มีชีวิตรอดลดลง="" 50="" เปอร์เซ็นต์="" ดังนั้นจึงไม่สามารถคำนวณค่า="" ic50="" และ="" pif="" ที่สอดคล้องกันได้="" .="" ในทางตรงกันข้าม="" มีความเป็นไปได้ที่จะรับรู้ถึงความมีชีวิตที่เพิ่มขึ้นโดยขึ้นอยู่กับขนาดยาสำหรับเซลล์ที่ถูกฉายรังสีเมื่อมีสารที่ทดสอบ="" อาจเป็นเพราะผลของสารป้องกันแสงของสารต้านอนุมูลอิสระเหล่านี้ต่อความเสียหายที่เกิดจากออกซิเดชันที่เกิดจากรังสีทำให้มีเปอร์เซ็นต์สูงขึ้น="" ของเซลล์ที่มีชีวิตเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม="" (เซลล์ที่ฉายรังสีที่ไม่ผ่านการบำบัด)="" มีการอธิบายไว้ในวรรณกรรมว่ารังสี="" uv="" นำไปสู่การสร้าง="" ros="" การผลิตไนตริกออกไซด์ที่มากเกินไป="" และการสูญเสียการป้องกันสารต้านอนุมูลอิสระใน="" keratinocytes="" [30]="" ด้วยเหตุผลเหล่านี้="" โพลีฟีนอลที่มีความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระจึงได้รับการศึกษาในฐานะสารป้องกันแสง="" แม้ว่าการศึกษาส่วนใหญ่จะเน้นไปที่ความสามารถในการปกป้องแสงของโพลีฟีนอล="" แต่ก็ไม่ได้ศึกษาถึงศักยภาพในการป้องกันแสงของแสง="" การศึกษาก่อนหน้านี้ยืนยันความสามารถของกรด="" caffeic,="" ferulic="" และ="" p-coumaric="" ในการไล่="" ros="" และไนโตรเจนชนิดปฏิกิริยา="" (rns)="" นอกจากนี้="" การป้องกันผลกระทบที่เป็นอันตรายของรังสียูวียังถูกสร้างขึ้นในร่างกายหรือเซลล์ผิวหนังสำหรับสารประกอบฟีนอลิกทั้งสามนี้="" [31–34]="" ข้อมูลเหล่านี้อาจอธิบายการเพิ่มขึ้นในเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่มีชีวิตเมื่อสัมผัสกับการฉายรังสีต่อหน้าสารประกอบภายใต้การศึกษา="" rutin="" เช่นกรด="" caffeic,="" ferulic="" และ="" p-coumaric="" ทดสอบเป็นลบในการทดสอบการสร้าง="" ros="" และไม่ก่อให้เกิดความเป็นพิษต่อแสงในสายเซลล์="" hacat="" มีข้อมูลที่ขัดแย้งในวรรณคดีเกี่ยวกับความเป็นพิษต่อแสงของรูติน="" ดังนั้นจึงสนใจผลลัพธ์ที่ได้="" การประเมินความเป็นพิษต่อแสงโดยใช้ระบบเซลล์เคราติโนไซต์="" (hacat)="" พบว่ารูตินแสดงความเป็นพิษต่อแสง="" [35]="" ในทางตรงกันข้าม="" การใช้การตั้งค่าการทดลองที่ใช้="" capillary="" electrophoresis="" กับการตรวจจับด้วยไฟฟ้าเคมีและ="" uv="" เพื่อทดสอบความเป็นพิษต่อแสงของสารสกัดจากพืชและส่วนประกอบในแง่ของการใช้ออกซิเจนและการสร้างชนิดของออกซิเจนปฏิกิริยาจากการฉายรังสีด้วยแสงที่มองเห็นได้="" จึงสรุปได้ว่ารูตินเป็น="" ไม่เป็นพิษต่อแสง="" [36]="" ซึ่งสอดคล้องกับผลลัพธ์ที่ได้จากงานนี้โดยที่รูตินไม่แสดงปฏิกิริยาต่อแสงเนื่องจากไม่ได้สร้าง="" so="" หรือ="" sa="" ในการทดสอบการสร้าง="" ros="" ในทางกลับกัน="" ในงานนี้="" ยังแสดงให้เห็นว่ารูตินโดยตัวมันเองไม่มีศักยภาพในการเป็นพิษต่อแสงในสายเซลล์="" hacat="" การค้นพบที่ขัดแย้งกันเหล่านี้เน้นถึงความสำคัญของการใช้เงื่อนไขการทดสอบที่ได้มาตรฐานและการใช้แหล่งกำเนิดแสงที่เหมาะสมเพื่อหลีกเลี่ยงผลลัพธ์ที่ทำให้เข้าใจผิด="" ที่น่าสนใจ="" และถึงแม้จะมีความคล้ายคลึงกันของโครงสร้างระหว่าง="" dopac="" และ="" pp="" อื่นๆ="" ที่ศึกษา="" dopac="" ก็สร้าง="" so="" ในการทดสอบการสร้าง="" ros="" และถูกจัดประเภทเป็น="" photoreactive="" อย่างไรก็ตาม="" เมื่อทดสอบในสายเซลล์="" hacat="" แล้ว="" dopac="" พบว่าไม่เป็นพิษต่อแสง="" จากผลที่ได้รับ="" dopac="" ดูเหมือนจะไวต่อแสงแต่ไม่เป็นพิษต่อแสง="">

3. วัสดุและวิธีการ

3.1. รีเอเจนต์

3,4-กรดไดไฮดรอกซีฟีนิลอะซีติก (DOPAC), กรดคาเฟอีน, กรดทรานส์-เฟรูลิก, กรด p-คูมาริก, รูติน, คลอโปรมาซีน ไฮโดรคลอไรด์, ไดโซเดียม ไฮโดรเจน ฟอสเฟต โดเดคาไฮเดรต, โซเดียม ฟอสเฟต โมโนเบสิก โมโนไฮเดรต, นิวทรัลเรด (NR) และไดเมทิล ซัลฟอกไซด์ (DMSO) ซื้อมาจากซิกมา–อัลดริช (มาดริด สเปน) Quinine hydrochloride, benzocaine, diclofenac และ erythromycin ซื้อจาก Acofarma (มาดริด, สเปน) สายเซลล์ของเคราติโนไซต์ของมนุษย์ (HaCaT) ที่ถูกทำให้เป็นอมตะได้มาจาก Cell Lines Service (CLS) (Eppelheim ประเทศเยอรมนี) Modified Eagle Medium (DMEM) ของ Dulbecco พร้อม D-glucose 4.5 g/L, L-glutamine, 25 mM HEPES และ DMEM ที่มี D-glucose 4.5 g/L, L glutamine, 25 mM HEPES ไม่มีฟีนอลแดง, Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS), Fetal Bovine Serum (FBS) และ trypsin EDTA ซื้อมาจาก Gibco Life Technologies (Waltham, MA, USA) เอทานอลจัดหาโดย Aga (ลิสบอน โปรตุเกส) ซื้อ N, N-Dimethyl-4-nitroguanidine (RNO), imidazole และ Nitro Blue Tetrazolium (NBT) จาก Alfa Aesar (Kandel, Germany)

3.2. การดูดซับสเปกตรัม 

สเปกตรัมการดูดกลืนของสารประกอบที่ศึกษาแต่ละชนิดถูกกำหนดหาในช่วง 290 ถึง 700 นาโนเมตร ตามแนวทางการทดสอบ OECD 101 โดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ Jasco V650 UV/VIS [37] สารถูกละลายใน DMSO เพื่อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 10 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร และสเปกตรัมการดูดกลืนแสงถูกวัดโดยใช้คิวเวตควอตซ์แบบโปร่งใสด้วยรังสียูวี (ความยาวเส้นทาง=10 มม.) แต่ละสเปกตรัมได้รับการแก้ไขสำหรับการดูดซับพื้นฐานที่จำเพาะต่อตัวทำละลาย ค่าสัมประสิทธิ์การสูญพันธุ์ของกราม (MEC) คำนวณโดยใช้พีคการดูดกลืนสูงสุดตั้งแต่ 290 ถึง 700 นาโนเมตร [15]

3.3. Reactive Oxygen Species (ROS) Assay 

มีการกำหนดโปรโตคอลการทดสอบ ROS และการศึกษาการตรวจสอบได้ดำเนินการตามขั้นตอนที่อธิบายไว้ในเอกสาร [19,29] สารละลายสต็อคของสารที่ทดสอบทั้งหมดถูกเตรียมที่ความเข้มข้น 10 มิลลิโมลาร์ใน DMSO และใช้ภายในวันเดียวกัน โดยป้องกันไม่ให้ถูกแสง โดยสังเขป การสร้างออกซิเจนเดี่ยว (SO) ตรวจพบโดยการวัดสเปกโตรโฟโตเมตรีของการฟอกสี p-nitrosodimethylaniline (RNO) ที่ 440 นาโนเมตรโดยใช้อิมิดาโซลในฐานะตัวรับออกซิเจนสายเดี่ยว ตัวอย่าง ที่ประกอบด้วยสารเคมีที่ทดสอบแล้ว (200 µM), RNO (50 µM) และอิมิดาโซล (50 µM) ในบัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟต 20 mM (PB, pH 7.4) ถูกวางในหลอดและผสมกับเครื่องผสมน้ำวนและโซนิเคต ป้องกันแสงเป็นเวลา 10 นาที ส่วนผสมถูกถ่ายโอนไปยังเซลล์ประสิทธิภาพสูงของแก้วควอทซ์ของ Hellma และตรวจสอบการตกตะกอนภายใต้กล้องจุลทรรศน์ก่อนสัมผัสกับแสง จากนั้น ตัวอย่างถูกฉายรังสีโดยใช้เครื่องจำลองพลังงานแสงอาทิตย์แบบควบคุมอุณหภูมิ Fitoclima S600PL (อาราลับ ประเทศโปรตุเกส) ซึ่งติดตั้งหลอด UV-Vis Repti Glo (20 W) แปดดวง เป็นเวลา 90 นาทีที่อุณหภูมิ 25 ◦C หลังจากการฉายรังสี จะอ่านค่าการดูดกลืนแสงอีกครั้งที่ 440 นาโนเมตร ตรวจพบการสร้างซูเปอร์ออกไซด์แอนไอออน (SA) โดยการสังเกตการลดลงของไนโตรบลู เตตตราโซเลียม (NBT) เป็นโมโนฟอร์มซาน (NBT plus ) ซึ่งการก่อตัวสามารถตรวจสอบได้ด้วยสเปกโตรโฟโตเมตริกที่ 560 นาโนเมตร ตัวอย่างที่มีสารประกอบที่ทดสอบ (200 µM) และ NBT (50 µM) ใน 20 mM NaPB ถูกฉายรังสี และการลดลงของ NBT ถูกวัดโดยการเพิ่มการดูดกลืนแสงที่ 560 นาโนเมตรในลักษณะเดียวกับการกำหนด SO ทำการทดลองเป็นสามเท่า เนื่องจากเครื่องจำลองสุริยะที่ใช้แตกต่างจากรุ่นที่แนะนำ จึงจำเป็นต้องตรวจสอบเงื่อนไขการฉายรังสี การทดสอบ ROS ได้ดำเนินการเพื่อให้แน่ใจว่าสภาวะการฉายรังสีเป็นไปตามเกณฑ์ที่แนะนำโดยใช้กลุ่มควบคุมเชิงบวก (ควินิน) และเชิงลบ (ซูลิโซเบนโซน) และสารประกอบทางเคมีอ้างอิง [29] ตามผลลัพธ์ (ค่าเฉลี่ยของการหาค่าสามเท่า) จากการทดสอบ ROS สารประกอบโพลีฟีนอลที่ทดสอบถูกจัดประเภทเป็นสารโฟโตรีแอกทีฟเมื่อวัดค่า SO 25 ขึ้นไป และ/หรือค่า SA เท่ากับ 20 หรือมากกว่า ในทางกลับกัน มันถูกพิจารณาว่าเป็นสารที่ไม่ทำปฏิกิริยากับแสงเมื่อบันทึกค่าน้อยกว่า 25 สำหรับ SO และน้อยกว่า 20 สำหรับ SA ถูกบันทึก [29]

3.4. การเพาะเลี้ยงเซลล์ 

เซลล์ HaCaT ถูกรักษาไว้ที่ 37 ◦C ในบรรยากาศที่มีความชื้นในอากาศ 95 เปอร์เซ็นต์และ CO2 5 เปอร์เซ็นต์ในตู้ฟักไข่ใน DMEM โดยมี FBS 10 เปอร์เซ็นต์และยาปฏิชีวนะ 1 เปอร์เซ็นต์ โดยใช้กล้องจุลทรรศน์แบบกลับหัว สังเกตการบรรจบกันของเซลล์ และถ้าเซลล์ถึงจุดบรรจบกัน 70–80 เปอร์เซ็นต์ จะมีการเพาะเลี้ยงย่อยเพื่อป้องกันการตายของเซลล์ เพื่อจุดประสงค์นี้ อาหารเลี้ยงเชื้อถูกสำลัก และเซลล์ถูกล้างด้วย DPBS, ทริปซิน 0.25 เปอร์เซ็นต์ 2 มล. ถูกเติมและบ่มเป็นเวลา 7 ถึง 8 นาทีที่ 37 ◦ซ ในบรรยากาศ CO2 5 เปอร์เซ็นต์ หลังจากแยกเซลล์ออกแล้ว จะมีการเติมตัวกลางที่สดใหม่เพื่อป้องกันการออกฤทธิ์ของทริปซิน สำหรับการนับเซลล์ สารแขวนลอยของเซลล์ 10 ไมโครลิตรถูกวางไว้ในห้องนอยบาวเออร์ที่ซึ่งเซลล์ถูกนับ สารแขวนลอยของเซลล์ที่ได้รับจากนั้นถูกแบ่งย่อยเป็นขวดใหม่ด้วยอาหารเลี้ยงเซลล์สด สำหรับการแช่แข็งของเซลล์ DMSO (5 เปอร์เซ็นต์โดยปริมาตร/ปริมาตร) ถูกใช้เป็นสารกันเสียด้วยการแช่แข็งเพื่อป้องกันการก่อรูปของผลึกในระหว่างขั้นตอนการจัดเก็บ เพื่อที่จะกำหนดเวลาที่จำเป็นสำหรับเซลล์ในการทำซ้ำ เซลล์ 1 × 106 เซลล์ถูกเพาะในขวดขนาด 75 ซม. 2 ห้าขวดและฟักเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ 37 ◦C ในบรรยากาศ CO2 5 เปอร์เซ็นต์เพื่อให้เกิดการเกาะติดอย่างสมบูรณ์ จากนั้นนับเซลล์ของขวดแต่ละขวดในเวลาที่ต่างกัน ผลลัพธ์ถูกพล็อตในรูปแบบกราฟิกที่แสดงจำนวนเซลล์เทียบกับเวลา ซึ่งคำนวณเวลาเป็นสองเท่าโดยใช้การวิเคราะห์การถดถอยเชิงเส้น เวลาที่คำนวณได้เป็นสองเท่าที่ได้รับคือ 20.43 ชั่วโมง ซึ่งสอดคล้องกับค่าที่รายงานในวรรณคดี ซึ่งเป็นการยืนยันว่าเซลล์ที่ใช้อยู่ในสภาวะการเจริญเติบโตตามปกติ [38] 3.5. การทดสอบความเป็นพิษต่อแสง สำหรับการศึกษาความเป็นพิษต่อแสง ได้มีการปฏิบัติตามโปรโตคอลก่อนหน้านี้ในห้องปฏิบัติการของเรา [24] ความสูงของหลอด UVA/UVB Osram (240V E27) ถูกปรับเพื่อฉายรังสีเซลล์ด้วยปริมาณรังสี UVA ที่ฉายรังสี 1.7 mW/cm2 (Cosmedico radiometer, UVM-7) ตามแนวทางของ OECD [23] . ในระหว่างการฉายรังสี (10 นาที) เพลตถูกเก็บไว้ภายในผู้รับโฟมที่มีระบบระบายความร้อนด้วยน้ำ และอุณหภูมิถูกเฝ้าติดตามตลอดขั้นตอน โดยย่อ เพื่อดำเนินการสอบวิเคราะห์การดูดซึม NR เซลล์ HaCaT ถูกเพาะ (2 × 104 เซลล์/หลุม) และบ่มที่ 37 ◦C ในบรรยากาศ CO2 5 เปอร์เซ็นต์ เป็นเวลา 24 ชั่วโมง หลังจากนั้น นำสื่อออก เติมความเข้มข้นที่แตกต่างกันของสารทดสอบ และเซลล์ถูกบ่มภายใต้สภาวะเดียวกันเป็นเวลา 1 ชั่วโมง จานหนึ่งถูกเก็บไว้ในที่มืดในขณะที่อีกจานหนึ่งถูกฉายรังสีเป็นเวลา 10 นาทีโดยเก็บอุณหภูมิไว้ที่ 29–32 ◦C หลังจากนั้น เซลล์อาหารถูกแทนที่ด้วย DMEM สด โดยไม่มีฟีนอลแดงและฟักเป็นเวลา 18–22 ชั่วโมง หลังจากระยะฟักตัวนี้ เซลล์จากเพลตทั้งสองถูกล้างด้วย DPBS และ DMEM ที่สมบูรณ์ที่มี 50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร NR ถูกเติมลงในแต่ละหลุมและบ่มเป็นเวลา 3 ชั่วโมง หลังจากการฟักไข่ด้วย NR สารละลาย NR จะถูกลบออก และสารละลาย NR desorb (50 เปอร์เซ็นต์เอธานอล: 1 เปอร์เซ็นต์กรดอะซิติก: 49 เปอร์เซ็นต์น้ำกลั่น) ถูกเติมเพื่อแยกสีย้อม NR ออกจากเซลล์ สำหรับขั้นตอนการอ่านค่า การดูดกลืนแสงถูกวัดที่ 540 นาโนเมตร ภายในแต่ละเพลต การควบคุม DMSO ถูกทดสอบ ข้อมูลความมีชีวิตของเซลล์ที่ได้รับจากแต่ละเพลตถูกแสดงออกเป็นอัตราส่วนการดูดกลืนแสงของเซลล์ที่บำบัดแล้วต่อเซลล์ควบคุมตัวทำละลาย และถูกใช้เพิ่มเติมเพื่อประมาณค่า IC50 โดยใช้การวิเคราะห์การถดถอยเชิงเส้น ค่า Photo-Irritation-Factor (PIF) ของสารทดสอบแต่ละชนิดคำนวณเป็นอัตราส่วนระหว่างค่า IC50 ของค่าที่ฉายรังสี (Irr plus ) กับค่า IC50 ของเซลล์ที่ไม่ผ่านการฉายรังสี (Irr−) ตามแนวทางของ OECD ดัชนี PIF ที่ต่ำกว่า 2 คาดการณ์ว่าจะไม่มีผลกระทบจากแสง ดัชนี PIF ระหว่าง 2 ถึง 5 คาดการณ์ถึงผลกระทบจากแสงที่น่าจะเป็นไปได้ และ PIF ที่สูงกว่า 5 คาดการณ์ถึงผลกระทบจากแสง [23] สารประกอบที่ทดสอบได้รับการประเมินในช่วงความเข้มข้น: 12.5; 31.25; 62.5; 125; 250; 500 และ 1,000 ไมโครโมลาร์ 3.6. การวิเคราะห์ทางสถิติ ข้อมูลทั้งหมดแสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD) จากการทดลองอิสระอย่างน้อยสามรายการที่ทำงานเป็นสามเท่า เพื่อยืนยันภาวะปกติและความเหมือนกันของความแปรปรวน การทดสอบความปกติของรถโดยสารประจำทางของ D'Agostino–Pearson ถูกนำมาใช้ และหลังจากนั้นจึงใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) ตามด้วยการทดสอบหลังเฉพาะกิจของ Dunnett (เปรียบเทียบกับเซลล์ควบคุมเชิงลบที่มีตัวทำละลาย) ถูกดำเนินการ กราฟถูกสร้างขึ้นด้วยซอฟต์แวร์ GraphPadPrism สำหรับ Windows (เวอร์ชัน 6.0, GraphPad Software, Inc. (ซานดิเอโก แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา)

4. บทสรุป

ในการศึกษานี้ ใช้การทดสอบ Reactive Oxygen Species (ROS) และ 3T3 Neutral Red UptakePhototoxicity assay (3T3 NRU-PT) เพื่อตรวจสอบพฤติกรรมของสารต้านอนุมูลอิสระฟีนอลตามธรรมชาติเมื่อสัมผัสกับรังสีที่เลียนแบบแสงแดดเพื่อตรวจสอบปฏิกิริยาต่อแสงและความเป็นพิษต่อแสง ศักยภาพ. ผลลัพธ์ที่ได้ทำให้สรุปได้ว่าแม้ว่ากรดรูตินและคาเฟอีน, กรดคูมาริกและกรดเฟรูลิกจะดูดซับรังสี UV ที่มองเห็นได้และมี MEC สูงกว่า 1,000 ลิตรต่อโมล-1 ซม.-1 แต่ก็จัดว่าไม่ทำปฏิกิริยากับแสง นอกจากนี้ สารประกอบเหล่านี้ไม่ก่อให้เกิดความเป็นพิษต่อแสงเมื่อทดสอบโดยใช้สายเซลล์ HaCaT จากข้อมูลพบว่าสารต้านอนุมูลอิสระเหล่านี้ด้วยตัวเองไม่คาดว่าจะทำให้เกิด phototoxicity ดังนั้นจึงถือว่าปลอดภัยสำหรับใช้ในสูตรเครื่องสำอาง ในทางกลับกัน มีความเป็นไปได้ที่จะสังเกตเห็นความมีชีวิตที่เพิ่มขึ้นของเซลล์ที่สัมผัสกับรังสี เมื่อสารต้านอนุมูลอิสระเหล่านี้ปรากฏให้เห็นถึงผลกระทบจากแสงที่อาจน่าสนใจในการศึกษาเพื่อสนับสนุนการใช้เป็นสารป้องกันแสงที่เป็นไปได้ในสูตรเครื่องสำอาง ในกรณีของ DOPAC สารประกอบนี้แสดงให้เห็นว่ามีปฏิกิริยากับแสง แม้ว่าจะไม่พบความเป็นพิษต่อแสงในการทดสอบ 3T3 Neutral Red Uptake อย่างไรก็ตาม ควรมีการศึกษาเพิ่มเติมเพื่อทำความเข้าใจกลไกเบื้องหลังการทำปฏิกิริยากับแสงของ DOPAC เพื่อความปลอดภัยของภาพถ่าย และเพื่อทำความเข้าใจบทบาทและความสัมพันธ์ระหว่างโครงสร้างทางเคมีและศักยภาพของสารประกอบที่จะทำปฏิกิริยากับแสง ผู้เขียนร่วม: การวิเคราะห์อย่างเป็นทางการ BA; การเขียน—การเตรียมร่างต้นฉบับ BA; แนวความคิด IFA, HC และ JG: ทรัพยากร, IFA, HC, JMSL และ JG; การเขียน—การทบทวนและการแก้ไข, IFA, HC, JMSL และ JG; การกำกับดูแล, IFA, HC และ JG; การจัดหาเงินทุน IFA, HC, JMSL และ JG ผู้เขียนทุกคนได้อ่านและตกลงที่จะตีพิมพ์ต้นฉบับ การจัดหาเงินทุน: งานวิจัยนี้ไม่ได้รับเงินทุนจากภายนอก คำชี้แจงของคณะกรรมการพิจารณาสถาบัน: ไม่เกี่ยวข้อง คำชี้แจงความยินยอมที่ได้รับแจ้ง: ไม่เกี่ยวข้อง ข้อมูล คำชี้แจงความพร้อมใช้งาน: ข้อมูลทั้งหมดที่นำเสนอในการศึกษานี้มีอยู่ในบทความ กิตติกรรมประกาศ: งานนี้ได้รับทุนจากกองทุนระดับชาติจาก FCT-Fundação para a Ciência ea Tecnologia, IP ในขอบเขตของโครงการ UIDP/04378/2020, UIDB /04378/2020 ของ ResearchUnit on Applied Molecular Biosciences-UCIBIO และโครงการ LA/P/0140/2020 ของ AssociateLaboratory Institute for Health and Bioeconomy-i4HB และ UIDB/00081/2020 ซึ่งได้รับทุนสนับสนุนจาก FCT/MCTES (PIDDAC) ผลประโยชน์ทับซ้อน: ผู้เขียนประกาศไม่มีผลประโยชน์ทับซ้อน ตัวอย่างที่มีจำหน่าย: ไม่เกี่ยวข้อง

อ้างอิง

1. ซิลลิช OV; ชไวเกิร์ท-ไวซ์ ยู.; ไอส์เนอร์, พี.; Kerscher, M. Polyphenols เป็นส่วนประกอบสำคัญสำหรับผลิตภัณฑ์เครื่องสำอาง อินเตอร์ เจ. คอสเมท. วิทย์. 2015, 37, 455–464. [ข้ามอ้างอิง]
2. เจเลนา CH; จิออร์จิโอ, อาร์.; Justyna, G.; Neda, นพ.; Natasa, S.; อาร์เทอร์, บี.; Giuseppe, G. ผลประโยชน์ของโพลีฟีนอลต่อโรคเรื้อรังและการเสื่อมสภาพ ในโพลีฟีนอล: คุณสมบัติ การกู้คืน และการใช้งาน Galanakis, CM, เอ็ด.; สำนักพิมพ์ Woodhead: Kidlington สหราชอาณาจักร 2018; หน้า 69–102.
3. คอรี, เอช.; Passarelli, S.; เซโต เจ.; ทาเมซ, ม.; Mattei, J. บทบาทของโพลีฟีนอลต่อสุขภาพของมนุษย์และระบบอาหาร: บทวิจารณ์สั้น ๆ ด้านหน้า. Nutr. 2018, 5, 87. [ข้ามอ้างอิง]
4. Fraga, CG; ครอฟต์, KD; เคนเนดี ดีโอ; Tomás-Barberán, FA ผลกระทบของโพลีฟีนอลและสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพอื่น ๆ ต่อสุขภาพของมนุษย์. ฟังก์ชั่นอาหาร 2019, 10, 514–528. [ข้ามอ้างอิง]
5. Bertelli, A.; Biagi, ม.; Corsini, ม.; Baini, G.; Cappellucci, G.; Miraldi, E. Polyphenols: จากทฤษฎีสู่การปฏิบัติ. อาหาร 2021, 10, 2595. [CrossRef]
6. เฉิน K.; ลู, พี.; เบียร์กา, นิวเม็กซิโก; ซูโกเชวา โอเอ; Madhunapantula, SV; หลิว เจ.; Sinelnikov, MY; นิโคเลนโก, เวียดนาม; Bulygin, KV; มิคาเลวา LM; และคณะ การกลายพันธุ์ของไมโตคอนเดรียและไมโตอีพีเจเนติกส์: มุ่งเน้นไปที่การควบคุมการตอบสนองที่เกิดจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันในมะเร็งเต้านม เซมิน. มะเร็งชีวภาพ. 2020. [CrossRef] [PubMed]

7. ฟอร์แมน เอช.เจ.; Zhang, H. การกำหนดเป้าหมายความเครียดจากการเกิดออกซิเดชันในโรค: สัญญาและข้อจำกัดของการบำบัดด้วยสารต้านอนุมูลอิสระ แนท. รายได้ยา Discov. 2564 20 689 [ข้ามอ้างอิง] [PubMed]
8. Boo, YC สารประกอบฟีนอลจากพืชสามารถปกป้องผิวจากฝุ่นละอองในอากาศได้หรือไม่? สารต้านอนุมูลอิสระ 2019, 8, 379. [CrossRef]
9. Jesumani, V.; ดูเอช.; เป้ย ป.; อัสลาม, ม.; Huang, N. การศึกษาเปรียบเทียบกิจกรรมการปกป้องผิวของสารสกัดที่อุดมด้วยโพลีฟีนอลและสารสกัดที่อุดมด้วยโพลีแซ็กคาไรด์จาก Sargassum vachellianum PLOS ONE 2020, 15, e0227308. [CrossRef] [PubMed]
10. Saraf, S.; Kaur, CD Phytoconstituents เป็นสูตรเครื่องสำอางที่ปกป้องแสง เภสัช. รายได้ 2010, 4, 1–11. [ข้ามอ้างอิง]