ปัจจัยภูมิคุ้มกันใน Cistanche Salsa

ติดต่อ: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 อีเมล:audrey.hu@wecistanche.com

ชินจิโร มารุยามะ," โคจิ ยามาดะ, ฮิโรฟุมิ ทาจิบานะ

ซิสแทนเช่ ซัลซ่า(CAMever) G.Beck, Orobanchaceae เป็นพืชกาฝากที่ใช้เป็นยาชูกำลังแบบตะวันออกในญี่ปุ่น ในการศึกษาก่อนหน้านี้ เราพบว่า C สารสกัดจากซัลซ่าช่วยเพิ่มการผลิตทั้ง IgM และ IgG ในลิมโฟไซต์ของโหนด Ivmph ของมนุษย์ นอกจากนี้ C, salsa dialysate (CSD) ที่เตรียมโดยใช้เมมเบรนสำหรับการฟอกไตที่มี a3.500-การตัดน้ำหนักโมเลกุลของ Da เพิ่มประสิทธิภาพการผลิต IgM ในสาย BALL ของมนุษย์ BALL-1; นอกจากนี้ยังทำให้เกิดการเพิ่มจำนวนเซลล์เล็กน้อย อย่างไรก็ตาม ในทางตรงกันข้าม CSD กระตุ้นการยับยั้งการเจริญเติบโตพร้อมกับการตายของเซลล์ในเซลล์มะเร็งต่อมน้ำเหลืองของ Burkitt Namalwa ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ถึงการมีอยู่ขององค์ประกอบที่ใช้งานอยู่ใน CSD ที่จำเพาะต่อเซลล์เม็ดเลือดขาว จนถึงขณะนี้ คุณสมบัติทางเคมีขององค์ประกอบเหล่านี้ยังไม่ได้รับการอธิบายอย่างชัดเจน ในการศึกษานี้ เราตรวจสอบคุณสมบัติทางเคมีขององค์ประกอบออกฤทธิ์ใน CSD กิจกรรมทั้งสองที่กล่าวถึงข้างต้นในสายพันธุ์ B-cell ไม่ได้ถูกปิดใช้งานโดยการบำบัดด้วยหม้อนึ่งความดันของ CSD โดยใช้เจลกรองคอลัมน์โครมาโตกราฟี เราพบว่าพีคของเศษส่วนที่ใช้งานถูกทำให้เข้มข้นในเศษส่วนที่แตกต่างกัน ผลลัพธ์ของเราแนะนำว่ามีองค์ประกอบออกฤทธิ์อย่างน้อย 2 ชนิดใน CSD และอาจเป็นพอลิแซ็กคาไรด์เนื่องจากเป็นองค์ประกอบที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูงที่ละลายน้ำได้และทนความร้อนได้

คีย์เวิร์ด: Cistanche salsa น้ำหนักโมเลกุลสูง IgM ยับยั้งการเจริญเติบโต

บทนำ

ซิสแทนเช่ ซัลซ่า(CA Meyer) G.Beck, Orobanchaceae เป็นพืชกาฝากที่ใช้เป็นยาชูกำลังทางตะวันออกในญี่ปุ่น ในประเทศจีน พืชชนิดนี้เป็นยาแผนโบราณที่สำคัญที่ใช้รักษาโรคไตและโรคประสาทอ่อน จากการศึกษาในหลอดทดลอง เราได้รายงานผลของ C. salsa ต่อระบบภูมิคุ้มกันแล้ว อันดับแรก. เราแสดงให้เห็นว่าสารสกัด C. salsa ช่วยเพิ่มการผลิต IgM และ IgG ในลิมโฟไซต์ของต่อมน้ำเหลืองของมนุษย์ อย่างที่สอง เราแสดงให้เห็นว่า C. salsa dialysate(CSD) ที่เตรียมโดยใช้เมมเบรนกรองแบบตัดด้วยน้ำหนักโมเลกุล Da 3,500-Da ช่วยเพิ่มประสิทธิภาพการผลิต IgM ในสาย BALL ของมนุษย์ BALL-1; นอกจากนี้ยังกระตุ้นให้เกิดการงอกขยายของเซลล์ในระดับเล็กน้อย2นอกจากนี้ CSD ยังมีผลในทางตรงกันข้ามโดยจะกระตุ้นการยับยั้งการเจริญเติบโตพร้อมกับการตายของเซลล์ในสายเซลล์มะเร็งต่อมน้ำเหลืองของ Burkitt Namalwa.3) ผลการวิจัยเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าผลกระทบของ CSD นี้เกี่ยวข้องกับ การกระตุ้นบีเซลล์ ในขณะที่อะพอพโทซิสเกิดจากการขาดสัญญาณอื่นๆ ที่จำเป็นสำหรับการสร้างความแตกต่างของบีเซลล์ เช่น ไซโตไคน์และการสัมผัสระหว่างเซลล์-เซลล์ อย่างไรก็ตาม คุณสมบัติทางเคมีของ CSD ไม่ได้รับการอธิบายในการศึกษาก่อนหน้านี้ ดังนั้น ในการศึกษานี้ เราจึงตรวจสอบคุณสมบัติทางเคมีขององค์ประกอบออกฤทธิ์ใน CSD

วัสดุและวิธีการ

CSD จัดทำขึ้นด้วยวิธีเดียวกันในการศึกษาครั้งก่อนของเรา CSD ถูกละลายในน้ำเกลือที่บัฟเฟอร์ด้วยฟอสเฟต (PBS)ที่ 20 มก./มล. สารละลายที่เตรียมไว้ (0.8 มล.) ถูกส่งผ่านตัวกรอง(0.22 um)ก่อนนำไปใช้ จากนั้นชะด้วยสารละลายเดียวกันผ่านคอลัมน์ที่มี TOYOPEARL HW-40F (1.0×96.5 ซม. Tosoh Corp, Japan),TOYOPEARL HW-55F(1.0 × 98.0 cm; Tosoh Corp. ประเทศญี่ปุ่น) , และ Sephacryl S-400HR(1.0×98.0 cm; GE Healthcare UK Ltd.,.England); จากนั้นเก็บเศษส่วน 1 มิลลิลิตร (30 หยด) เพื่อตรวจสอบปริมาตรโมฆะของเจลและน้ำหนักโมเลกุลโดยประมาณ (MW) ขององค์ประกอบที่เป็นเศษส่วน บลูเดกซ์ทราน (BD)(Sigma-Aldrich Japan KK, Japan); และเดกซ์ทรานส์ของ MW ที่รู้จักซึ่งได้จาก Leuconostoc spp.(Sigma-Aldrich Japan KK, Japan), ieof MW2,000kDa(D1),500kDa(D2),70 kDa (D3) and 6 kDa (D4); และไซยาโนโคบาลามิน (VB12, MW:1355.4)(Wako Pure Chemical Industries Ltd., Japan) ถูกนำมาใช้ ปริมาณน้ำตาลและโปรตีนทั้งหมดของแต่ละส่วนถูกกำหนดโดยใช้วิธีกรดฟีนอล-ซัลฟูริก และวิธีโลว์รีด้วยชุดทดสอบโปรตีน PIERCETM bicinchoninic acids (BCA) (Thermo Fisher Scientific Inc. สหรัฐอเมริกา) ตามลำดับ กลูโคสและอัลบูมินในซีรัมของวัวถูกใช้เป็นมาตรฐานตามลำดับ นอกจากนี้ การดูดกลืนแสงที่ 320 นาโนเมตร(A:2o) ของเศษส่วนแต่ละส่วนถูกวัด พีคการชะของเดกซ์ทรานสีน้ำเงินและไซยาโนโคบาลามินถูกกำหนดโดยค่าการดูดกลืนแสงของพวกมันที่ 260 นาโนเมตร และพีคของเดกซ์ทรานส์ของ MW ที่รู้จักถูกกำหนดโดยใช้วิธีกรดฟีนอล-ซัลฟูริก CSD ถูกนึ่งฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 120 องศาเป็นเวลา 20 นาทีเพื่อประเมินความคงตัวต่อความร้อน ในการวิเคราะห์ทางชีวภาพ การเพาะเลี้ยงเซลล์และการวัดค่า IgM ทำได้ด้วยวิธีเดียวกันในการศึกษาก่อนหน้านี้ของเรา

สารสกัดจากซิสทานเช่ ซัลซ่า

ผลลัพธ์และการอภิปราย

รูปที่ 1 แสดงโครมาโตแกรมของคอลัมน์การกรองเจลของ CSD บน HW-40F จากรูปที่ la MW ขององค์ประกอบที่ทำงานอยู่ถูกประมาณว่ามากกว่า 6 kDa ตามเครื่องหมายของเดกซ์แทรน D4 นอกจากนี้ ทั้งกิจกรรม CSD เช่น การเพิ่มการผลิต IgM และการกระตุ้นการยับยั้งการเจริญเติบโต ไม่ถูกปิดใช้งานโดยการบำบัดด้วยหม้อนึ่งความดัน (รูปที่ 2) แม้ว่าองค์ประกอบบางส่วนจะรวมกันและสูญเสียไปหลังจาก CSD ถูกส่งผ่าน 0 ก็ตาม{{6} }อืม ตัวกรอง รูปแบบการชะของ CSD และ Autoclaved CSD เกือบจะเหมือนกัน อย่างไรก็ตาม กิจกรรมสัมพัทธ์ของการเพิ่มการผลิต IgM ใน Autoclaved CSD นั้นต่ำกว่า CSD ที่ไม่ได้รับการรักษา เหตุผลบางประการดูเหมือนว่ามวลรวมถือองค์ประกอบที่ใช้งานอยู่หรือองค์ประกอบที่ใช้งานอยู่บางส่วนถูกปิดใช้งาน ผลลัพธ์ของโครมาโตกราฟีบน HW-55F แสดงให้เห็นการมีอยู่ของปัจจัยกระตุ้นภูมิคุ้มกัน 2 ประเภท: ครั้งแรก เข้มข้นใน fr หมายเลข 32. เป็นองค์ประกอบออกฤทธิ์ที่มีน้ำหนักโมเลกุลสูง (HCS) ที่สามารถเพิ่มการผลิต IgM ได้ ในขณะที่ส่วนที่สอง เข้มข้นใน fr หมายเลข 50 เป็นองค์ประกอบที่ออกฤทธิ์น้ำหนักโมเลกุลปานกลาง (MCS) ที่สามารถยับยั้งการเพิ่มจำนวนเซลล์ (รูปที่ 3) อย่างไรก็ตาม พีคที่ได้รับสำหรับทั้ง HCS และ MCS (fr.no.32 และ 50 ตามลำดับ) นั้นไม่คมชัดเท่ากับเดกซ์ทรานส์ของ MW ที่รู้จัก (ไม่แสดงข้อมูล) การสังเกตเหล่านี้บ่งชี้ถึงความเป็นไปได้ที่จะมีผลิตภัณฑ์พลอยได้ที่สร้างขึ้นในระหว่างการเตรียม CSD โพลีเมอร์ขององค์ประกอบที่ออกฤทธิ์ที่ถูกทำลายได้ง่ายและประกอบรวมด้วยหน่วยต่างๆ หรือองค์ประกอบเชิงรุกต่างๆ ที่มี MW ดั้งเดิมต่างกัน รูปแบบการชะบนโครมาโตแกรมแสดงให้เห็นว่าการหาองค์ประกอบที่บริสุทธิ์จาก HCS และ MCS นั้นไม่ใช่เรื่องง่าย เนื่องจากดูเหมือนว่าจะมีองค์ประกอบต่างๆ ที่มี MW แตกต่างกันเล็กน้อยตามที่กล่าวไว้ข้างต้น แม้ว่าทั้งสองจะเป็นของผสมขององค์ประกอบที่ออกฤทธิ์ แต่ปรากฏว่า HCS ประกอบด้วยองค์ประกอบของ MW ที่เกิน 70 kDa ในขณะที่ MCS ประกอบรวมด้วย MW ที่มากกว่า 6 kDa HCS ถูกชะบน HW-55F ในเศษส่วนที่อยู่นอกเหนือช่วงการแยก บน Sephacryl-S400.a ส่วนหนึ่งของ HCS(fr.no.36) ถูกชะออกเป็นเศษส่วนเดียวกันกับเครื่องหมาย D1 ซึ่งเท่ากับ MW 2,000 kDa (รูปที่ 4) โดยทั่วไป โพลีแซคคาไรด์และโปรตีนจะถูกนำมาพิจารณาว่าเป็นองค์ประกอบที่มี MW สูงที่ละลายน้ำได้ในน้ำในสารสกัดจากพืช เนื่องจากโปรตีนที่ใช้งานได้เกือบทั้งหมดถูกปิดใช้งานโดยการให้ความร้อน พวกมันจึงดูเหมือนเป็นพอลิแซ็กคาไรด์ อย่างไรก็ตาม ปาร์คเอต อัล ได้รายงานโปรตีนขนาดเล็กที่เป็นพิษต่อเซลล์ซึ่งเก็บอุณหภูมิได้ที่เรียกว่า viscotoxin ซึ่งเตรียมจากสารสกัดมิสเซิลโท (Viscum album L., Viscaceae) นอกจากนี้ วิสโคทอกซินยังแสดงให้เห็นเพื่อเพิ่มกิจกรรมภูมิคุ้มกันของเซลล์นักฆ่าตามธรรมชาติของมนุษย์5ในรูปที่ 3 MCS ซึ่ง มี MW ต่ำกว่า แสดงปริมาณโปรตีนที่สูงขึ้น เมื่อพิจารณาถึงข้อเท็จจริงเหล่านี้ MCS อาจเป็นพอลิแซ็กคาไรด์ที่จับกับโปรตีนหรืออาจเป็นโปรตีนที่ทนความร้อนได้ เช่น วิสโคทอกซิน ผลลัพธ์เหล่านี้แสดงว่าองค์ประกอบที่ออกฤทธิ์ 2 อย่างอาจเป็นพอลิแซ็กคาไรด์ มิฉะนั้น MCS อาจเป็นโปรตีนที่ทนความร้อนได้

อ้างอิง

1) Deng, M. , Zhao, JY, Ju, XD, Tu, PF, Jiang, Y. , Li, ZB: ผลการป้องกันของ tubuloside B ต่อการตายของ TNF alpha ในเซลล์ประสาท Acta Pharmacol บาป.,25, 1276-1284,2004.

2) Maruyama, S., Yamada, K., Tachibana, H.:สารสกัดจากซิสทานเช่ ซัลซ่าการผลิต IgM ที่เพิ่มขึ้นในสาย B เซลล์ของมนุษย์ BALL-1.J. ตราด. พ.ศ.24,209-211,2007.

3) Maruyama, S., Yamada, K., Tachibana, H:ซิสแทนเช่ ซัลซ่าสารสกัดกระตุ้นการตายของเซลล์ในเซลล์มะเร็งต่อมน้ำเหลืองของ Burkitt Namalwa เจ.ตราด. พ.ศ. 2524-27, 2008.

4) สวนสาธารณะ JH,Hyun, CK,Shin HK: ผลกระทบที่เป็นพิษต่อเซลล์ของส่วนประกอบในมิสเซิลโทที่ได้รับการบำบัดด้วยความร้อน (อัลบั้ม Viscum)Cancer Let, 139, 207-213,1999

5) Tabasco, J. , Pont, F, Fournic, JJ, Vercellone, A.: Mistletoe viscotoxins เพิ่มความเป็นพิษต่อเซลล์ของนักฆ่าตามธรรมชาติ ยู.เจ. Biochem.,269,2591-2600, 2002.

6) Fisher, M. , Yang, LX: ฤทธิ์ต้านมะเร็งและกลไกของ poly saccharide-K (PSK): ผลกระทบของภูมิคุ้มกันบำบัดมะเร็ง Anticancer Res., 22,1737-1754,2002

อาหารเสริม cistanche