เซลล์ต้นกำเนิดจากน้ำคร่ำจากน้ำคร่ำของมนุษย์บรรเทา AGVHD หลังจาก Allo‑HSCT โดยการควบคุมปฏิสัมพันธ์ระหว่างจุลินทรีย์ในลำไส้และภูมิคุ้มกันในลำไส้

เชิงนามธรรม

โรคกราฟต์เมื่อเทียบกับโฮสต์แบบเฉียบพลัน (aGVHD) หลังจากการปลูกถ่ายเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดแบบ allogeneic ถือเป็นความท้าทายที่น่ารำคาญที่สุดอย่างหนึ่ง ภาวะ dysbiosis ของจุลินทรีย์ในลำไส้สามารถดำเนินต่อไปด้วย aGVHD และเซลล์ต้นกำเนิดมีเซนไคมัล (MSCs) มีศักยภาพในการรักษา aGVHD ที่น่าหวัง อย่างไรก็ตาม ไม่ว่า hAMSCs จะส่งผลกระทบต่อจุลินทรีย์ในลำไส้ในระหว่างการบรรเทา aGVHD หรือไม่ก็ตามยังไม่เป็นที่ทราบแน่ชัด ดังนั้นเราจึงพยายามที่จะกำหนดผลกระทบและกลไกพื้นฐานของ MSCs ที่ได้มาจากเยื่อหุ้มน้ำคร่ำของมนุษย์ (hAMSCs) ซึ่งควบคุมจุลินทรีย์ในลำไส้และภูมิคุ้มกันในลำไส้ใน aGVHD ด้วยการสร้างแบบจำลองเมาส์ aGVHD ที่ทำให้มีลักษณะของมนุษย์และการรักษา hAMSCs เราพบว่า hAMSCs ช่วยแก้ไขอาการ aGVHD ได้อย่างมีนัยสำคัญ พลิกกลับความไม่สมดุลทางภูมิคุ้มกันของชุดย่อยของ T เซลล์และไซโตไคน์ และฟื้นฟูสิ่งกีดขวางในลำไส้ นอกจากนี้ ความหลากหลายและองค์ประกอบของจุลินทรีย์ในลำไส้ได้รับการปรับปรุงเมื่อได้รับการบำบัดด้วย hAMSC การวิเคราะห์ความสัมพันธ์ของสเปียร์แมนแสดงให้เห็นว่ามีความสัมพันธ์ระหว่างจุลินทรีย์ในลำไส้กับโปรตีนที่จุดเชื่อมต่อที่แน่นหนา เซลล์ภูมิคุ้มกันเช่นกัน และไซโตไคน์ การวิจัยของเราชี้ให้เห็นว่า hAMSCs บรรเทา aGVHD โดยการส่งเสริมการทำให้จุลินทรีย์ในลำไส้เป็นปกติ และควบคุมปฏิสัมพันธ์ระหว่างจุลินทรีย์ในลำไส้และอุปสรรคในลำไส้ ภูมิคุ้มกัน

ประโยชน์ของซิสตานช์สำหรับระบบภูมิคุ้มกันของผู้ชาย

คำหลัก

โรคที่เกิดจากการปลูกถ่ายอวัยวะแบบเฉียบพลันกับโฮสต์ · เซลล์ต้นกำเนิดจากน้ำคร่ำ · จุลินทรีย์ในลำไส้ · สิ่งกีดขวางในลำไส้ · ภูมิคุ้มกันในลำไส้

การแนะนำ

ข้อได้เปรียบหลักของการปลูกถ่ายเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดชนิดอัลโลจีนิก (allo-HSCT) คือการตอบสนองต่อการต่อต้านเนื้องอกที่มีศักยภาพเนื่องจากผลกระทบของกราฟต์เทียบกับมะเร็งเม็ดเลือดขาว (GVL) ซึ่งถูกกระตุ้นโดยการรับรู้ของเปปไทด์ที่เกิดจากความแตกต่างในความหลากหลายทางจีโนมระหว่างผู้ป่วยและ ผู้บริจาค อย่างไรก็ตาม โรคเฉียบพลันต่อโฮสต์ (aGVHD) เกี่ยวข้องกับการพัฒนาความเสียหายของเนื้อเยื่อผู้รับเนื่องจากการโจมตีโดยทีเซลล์ผู้บริจาคที่มีปฏิกิริยา allo-reactive และแสดงถึงภาวะแทรกซ้อนที่สำคัญที่คุกคามถึงชีวิตใน alloHSCT [1, 2] มีรายงานความผิดปกติของจุลินทรีย์ในลำไส้เพื่อกระตุ้นให้เกิดการตอบสนองการอักเสบและมีความสัมพันธ์กับโรคที่เกี่ยวข้องกับการอักเสบ [3, 4] การศึกษาจำนวนมากระบุว่าการก่อกวนในจุลินทรีย์ในลำไส้เป็นปัจจัยสำคัญที่กระตุ้นให้เกิด aGVHD หลังจาก allo-HSCT และกลายเป็นเป้าหมายใหม่สำหรับการรักษา [5, 6] โดยเฉพาะอย่างยิ่ง dysbiosis ของจุลินทรีย์ในลำไส้ใน aGVHD มักจะมีลักษณะเฉพาะคือการสูญเสียความหลากหลายของแบคทีเรียในลำไส้และการเจริญเติบโตของเชื้อโรคที่ฉวยโอกาส [6] ใน GVHD ของระบบทางเดินอาหาร สิ่งกีดขวางเยื่อเมือกที่ถูกบุกรุกจะเริ่มต้นการกระตุ้นเซลล์ที่สร้างแอนติเจนของโฮสต์และทีเซลล์ของผู้บริจาคซึ่งไปสิ้นสุดที่การสร้างความแตกต่างของทีเซลล์ตามกระบวนทัศน์ประเภท-1 และประเภท-17 ที่ทำให้เกิดโรค โดยเสียค่าใช้จ่ายของ T- รูปแบบของเซลล์ [7] โดยพื้นฐานแล้วบนพื้นฐานของการจัดลำดับ 16S ribosomal RNA (16S rRNA) บ่งชี้ว่าจุลินทรีย์ในลำไส้หลายชนิดมีความเกี่ยวข้องกับ GVHD และตัวอย่างเช่น คลอสตริเดียที่สร้างบิวไทเรตนั้นสัมพันธ์กับการบำรุงรักษาการทำงานของสิ่งกีดขวางของเยื่อบุผิวและการลดทอนของ GVHD เฉียบพลัน [8 ] เซลล์ต้นกำเนิดมีเซนไคมัล (MSCs) ได้รับความสนใจอย่างกว้างขวางในช่วงทศวรรษที่ผ่านมา เนื่องมาจากความสามารถในการต่ออายุตัวเองและศักยภาพในการสร้างความแตกต่างหลายสายพันธุ์ รวมถึงคุณสมบัติในการปรับภูมิคุ้มกัน [9] คิดว่า MSCs ช่วยให้เนื้อเยื่อเสียหายจากการอักเสบที่สมดุลและสภาพแวดล้อมจุลภาคที่สร้างใหม่ได้เมื่อมีการอักเสบที่รุนแรง และมีการใช้กันอย่างแพร่หลายในการรักษาความผิดปกติของระบบภูมิคุ้มกัน ซึ่งการประยุกต์ใช้ทางคลินิกที่ประสบความสำเร็จมากที่สุดเกี่ยวข้องกับการรักษาด้วย GVHD [10] เซลล์ต้นกำเนิดจากน้ำคร่ำของมนุษย์ (hAMSCs) เป็นเซลล์ต้นกำเนิดปริกำเนิดที่มีความสามารถในการสร้างความแตกต่างเหมือนเซลล์ต้นกำเนิดจากตัวอ่อนและมีคุณสมบัติในการปรับภูมิคุ้มกันคล้ายเซลล์ต้นกำเนิดจากผู้ใหญ่ การแบ่งปันฟีโนไทป์ที่คล้ายกับ MSC ทั่วไป hAMSC ได้กลายเป็นแหล่งของเซลล์ต้นกำเนิดที่น่าหวัง เนื่องจากความสะดวก ไม่รุกล้ำ และความปลอดภัยของการได้มาของเนื้อเยื่อ ปริมาณเซลล์ที่ได้มากมาย และข้อพิพาททางจริยธรรมและศีลธรรมที่ต่ำมากเมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ต้นกำเนิดจากแหล่งอื่น AMSC ของมนุษย์มีข้อดีคือมีภูมิคุ้มกันต่ำและไม่มีการเกิดเนื้องอก ทำให้เป็นแหล่งเซลล์ในอุดมคติสำหรับการบำบัดด้วยเซลล์ [11, 12] การทดลองในหลอดทดลองยืนยันว่า hAMSC แสดงความสามารถในการเพิ่มจำนวนที่สูงกว่าและมีความสามารถในการเติบโตในระยะยาวมากกว่า MSC ที่ได้มาจากไขกระดูก [13, 14] การศึกษาจำนวนมากได้แสดงให้เห็นว่า hAMSCs มีศักยภาพในการเยียวยาโรคที่มีการอักเสบหลายชนิด รวมถึงโรคลำไส้อักเสบ โรคข้อเข่าเสื่อม และโรคภูมิต้านตนเอง [11] การศึกษาล่าสุดของเราแสดงให้เห็นว่า hAMSCs ปรับปรุง aGVHD โดยการควบคุมความสมดุลของ T effector และเซลล์ Treg [15] อย่างไรก็ตาม ไม่ทราบผลและกลไกของ hAMSCs ต่อความผิดปกติของจุลินทรีย์ในลำไส้ใน GVHD ที่นี่เรามุ่งหวังที่จะตรวจสอบผลกระทบที่อาจเกิดขึ้นของ hAMSCs ต่อ aGVHD รวมถึงระบบนิเวศน์ขนาดเล็กในลำไส้ มันจะเป็นการศึกษาครั้งแรกที่เปิดเผยจุลินทรีย์ในลำไส้และความสัมพันธ์ของมันกับภูมิคุ้มกันในลำไส้หลังการรักษาด้วย hAMSCs ของ aGVHD

วัสดุและวิธีการ

การแยก วัฒนธรรม และการจำแนก hAMSCs

hAMSCs ถูกสกัดตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [15] เซลล์ผ่านที่สาม (P3) ถูกเก็บเกี่ยวจากการจำแนกฟีโนไทป์ผ่านการย้อมด้วยแอนติบอดีต่อ CD34 (581, BD Pharmingen, สหรัฐอเมริกา), CD45 (HI30, BD Pharmingen, สหรัฐอเมริกา), HLA-DR (G46-6, BD Pharmingen , สหรัฐอเมริกา), CD11b (ICRF44, BD Pharmingen, สหรัฐอเมริกา), CD90 (5E10, BD Pharmingen, สหรัฐอเมริกา), CD73 (AD2, BD Pharmingen, สหรัฐอเมริกา) และ CD105 (SN6, วิทยาศาสตร์ชีวภาพ, สหรัฐอเมริกา) จากนั้นวิเคราะห์โดยโฟลว์ไซโตมิเตอร์ ( บีดี แฟคส์ คันโต 2) เซลล์ถูกตรวจสอบหาความแตกต่างหลายสายเลือดโดยใช้สื่อเหนี่ยวนำเฉพาะ (BGscience, จีน) และย้อมด้วย Oil Red-O และ Alizarin Red เพื่อสร้าง adipogenesis และการสร้างความแตกต่างของกระดูกตามลำดับ hAMSCs ในตอนที่ 3 ถึง 6 ถูกนำมาใช้สำหรับการทดลอง

cistanche tubulosa-ปรับปรุงระบบภูมิคุ้มกัน

คอลเลกชัน PBMC ของมนุษย์

ตัวอย่างพลาสมาได้รับการจัดหาจากอาสาสมัครที่มีสุขภาพดีโดยได้รับความยินยอมเป็นลายลักษณ์อักษร เซลล์โมโนนิวเคลียร์ในเลือดของมนุษย์ (PBMCs) ถูกแยกออกจากเลือดโดยการหมุนเหวี่ยงความหนาแน่น Ficoll-Hypaque (เทียนจิน Haoyang, ประเทศจีน) ล้างด้วย PBS, แขวนลอยในบัฟเฟอร์การสลายเลือดแดง (Solarbio, จีน) ที่ 4 องศาเป็นเวลา 15 นาที ล้างอีกครั้งแล้วระงับใน PBS เพื่อฉีดหลอดเลือดดำส่วนหางเข้าไปในหนู NPG

หนู

หนูอายุ 8–10 สัปดาห์และหนู NPG ชายและหญิง 25–30 กรัมซื้อจาก Beijing Vitalstar Biotechnology Co., Ltd. และเลี้ยงภายใต้เงื่อนไข SPF ในรอบแสง - มืด 12 ชั่วโมงโดยมีอุณหภูมิและความชื้นคงที่ ขั้นตอนในสัตว์ทั้งหมดได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ประจำสถาบัน Southern Medical University (หมายเลข L2019132) ตามแนวทางของสภาวิจัยสุขภาพและการแพทย์แห่งชาติของจีนเกี่ยวกับการทดลองในสัตว์

แบบจำลองสัตว์เฉียบพลัน GVHD และการรักษา

เมาส์รุ่น aGVHD ได้รับการจัดตั้งขึ้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้า [15] สำหรับการรักษา 5 × 105 hAMSCs ต่อเมาส์ (ในที่นี้เป็นกลุ่ม hAMSCs) และ PBS (ในที่นี้เป็นกลุ่ม aGVHD) ถูกฉีดผ่านทางหลอดเลือดดำหางเข้าไปในหนูแต่ละตัวในวันที่สามหลังการปลูกถ่าย ในเมาส์ทุกรุ่น จะมีการตรวจสอบหนูทุกสองวันเพื่อดูความเจ็บป่วยและการเปลี่ยนแปลงของน้ำหนัก หนูแต่ละตัวได้รับคะแนนสำหรับลักษณะทางพยาธิวิทยา เช่น การลดน้ำหนัก ท่าทางหลังงอ ขนเป็นรอย รอยโรคที่ผิวหนัง การเคลื่อนไหวลดลง และอาการท้องเสีย จากนั้นจึงให้คะแนนตามระบบการให้คะแนนทางคลินิกของ aGVHD ที่ดัดแปลงมาจากระบบการให้คะแนนทางคลินิกของ aGVHD ที่ดัดแปลงมาจากระบบการให้คะแนนทางคลินิกของ Cooke [16] ในบางกรณี หนูในกลุ่ม aGVHD ได้รับความทุกข์ทรมานจาก aGVHD ที่รุนแรง และหนูในกลุ่ม hAMSCs ในวันที่สามหลังการรักษาถูกสังเวยเพื่อเก็บเกี่ยวเลือดส่วนปลายและอวัยวะเป้าหมายซึ่งรวมถึงตับ ม้าม ปอด และลำไส้ อุจจาระของหนูเหล่านี้ถูกรวบรวมก่อนการสังเวย

hAMSC ที่มีป้ายกำกับ GFP และการติดตาม ใน vivo

hAMSCs ที่ติดฉลาก GFP ได้รับการจัดตั้งและระบุตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้า [15] โดยสรุป เราได้แปลงยีนโปรตีนเรืองแสงสีเขียว (GFP) ให้เป็น hAMSCs โดยมีเลนติไวรัสเป็นเวกเตอร์ hAMSC ที่ติดฉลาก GFP 5 × 105 ที่แขวนลอยใน 500 μL PBS ถูกฉีดเข้าไปในหนู aGVHD ผ่านทางหลอดเลือดดำที่หาง หลังจาก 24 ชั่วโมงและ 72 ชั่วโมง หนูถูกการุณยฆาตเพื่อเก็บเกี่ยวลำไส้และจากนั้นจึงสร้างส่วนที่แช่แข็ง การตอบโต้ด้วย DAPI ใช้เพื่อแยกแยะเซลล์ผู้รับ

การประเมินทางจุลพยาธิวิทยา

อวัยวะเป้าหมาย aGVHD ถูกรวบรวมในช่วงเวลาของการชันสูตรศพ จากนั้นประมวลผลเป็นบล็อกที่ฝังพาราฟินเพื่อสร้างส่วนที่หนา 5-μm สำหรับการย้อมสีฮีมาทอกซิลินและอีโอซิน (H&E) คะแนนทางเนื้อเยื่อได้รับการประเมินตามการทำลายโครงสร้างเนื้อเยื่อและการแทรกซึมของลิมโฟไซต์ [17] สำหรับอิมมูโนฮิสโตเคมี ส่วนต่างๆ จะถูกลดพาราฟไนซ์ ทำให้มีน้ำกลับคืน และบำบัดด้วย 3% H2O2 ในเมทานอลเป็นเวลา 20 นาทีเพื่อยับยั้งการทำงานของเปอร์ออกซิเดสภายนอก จากนั้นส่วนต่างๆ จะถูกดึงแอนติเจนออกมาและบำบัดด้วยซีรัมอัลบูมินเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ต่อจากนั้น ส่วนต่างๆ ถูกบ่มด้วยแอนติบอดีต่อต้าน CD45 ของกระต่าย (EP322Y, Abcam, อังกฤษ) หรือแอนติบอดี ZO-1 ((EPR19945-296, Abcam, อังกฤษ) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 37 องศา ขอบเขต ตรวจพบแอนติบอดีด้วยแอนติบอดีรอง HRP-conjugated (Genentech, USA) และมองเห็นด้วย DAB วิเคราะห์พื้นที่เชิงบวกโดย Image J.

cistanche พืชเพิ่มระบบภูมิคุ้มกัน

ลำดับ 16S rRNA ของ Fecal Microbiota

DNA ของอุจจาระถูกสกัดจากตัวอย่างอุจจาระแช่แข็ง 0.1 กรัมโดยใช้ชุด DNA สตูลของ EZNA® (Omega BioTek, Norcross, GA, US) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต การใช้ DNA จีโนมเป็นเทมเพลตไพรเมอร์เฉพาะ (338F: 5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA -3′ และ 806R: 5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT -3′) พร้อมบาร์โค้ดและ PremixTaq (TaKaRa, จีน) ถูกนำมาใช้เพื่อขยาย บริเวณที่มีความแปรผันสูง V3-V4 ของยีน 16S rRNA ของแบคทีเรีย หลังจากการขยายและการทำให้บริสุทธิ์ จีโนมทั้งหมดของตัวอย่างจะถูกจัดลำดับบนแพลตฟอร์มการจัดลำดับความเร็วสูงของ Illumina Hiseq หรือ Miseq โดย Magigene Technology Co., Ltd. (กวางโจว ประเทศจีน) เพื่อรับข้อมูลดิบในรูปแบบ FASTQ การวิเคราะห์ข้อมูลลำดับดำเนินการโดยใช้แพลตฟอร์ม Magichand เป็นหลัก

การวิเคราะห์โฟลว์ไซโตเมตริก

ได้รับอวัยวะเป้าหมาย aGVHD และเลือดรอบนอกของหนูและเตรียมไปเป็นสารแขวนลอยเซลล์เดียว เซลล์ถูกย้อมด้วยโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อ CD3 (UCHT1, Biolegend, USA), CD4 (RPA-T4, Invitrogen, USA), CD8 (RPA-T8, Biolegend, USA), CD25 (BC96, Biolegend, USA) หรือการจับคู่ไอโซไทป์ ควบคุม IgG (eBioscience, USA) เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้องในที่มืด จากนั้น เซลล์ถูกประมวลผลด้วย Lysing Buffer (BD Pharm Lyse™) ที่ 4 องศาในความมืดเป็นเวลา 15 นาที การย้อมสีภายในเซลล์ Foxp3 (236A/E7, Invitrogen, USA) ดำเนินการตามคำแนะนำของผู้ผลิต (ชุดโซลูชันการตรึง / การซึมผ่าน; eBioscience) จากนั้น การวิเคราะห์โฟลว์ไซโตเมทริกแบบโพลีโครมาติกถูกดำเนินการบนโฟลว์ไซโตมิเตอร์

ปริมาณไซโตไคน์

ระดับของไซโตไคน์ในซีรัมและเนื้อเยื่อเหนือตะกอนของหนูถูกกำหนดโดยใช้ชุดไซโตไคน์ Cytometric Bead Array (CBA) ของมนุษย์ Th1 / Th2 / Th17 (BD Pharmingen, USA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต โดยสรุป 50 ไมโครลิตรของตัวอย่างส่วนลอยเหนือตะกอนแต่ละตัวอย่างถูกบ่มด้วย 50 ไมโครลิตรของเม็ดบีดสำหรับจับไซโตไคน์ Th1/Th2/Th17 ของมนุษย์ผสมและ 50 ไมโครลิตรของรีเอเจนต์สำหรับการตรวจจับ Th1/Th2/Th17 PE ของมนุษย์ที่อุณหภูมิห้องในที่มืด จากนั้นถูกแขวนลอย สำหรับการวิเคราะห์โฟลไซโตเมทรี 3 ชั่วโมงต่อมา

PCR แบบเรียลไทม์เชิงปริมาณ

Total RNA ถูกสกัดจากเนื้อเยื่อลำไส้ใหญ่ของหนูหลังจากแยกโดยใช้ Trizol Reagent (TaKaRa, China) Total RNA ถูกใช้เป็นเทมเพลตในการย้อนกลับการถอดเสียง cDNA -actin ถูกใช้เป็นข้อมูลอ้างอิงภายใน การแสดงออกของ mRNA ถูกวัดโดย qPCR โดยใช้ไพรเมอร์ต่อไปนี้: ZO-1-F, 5'-ACCACCAACCCGAGAAGAC-3' และ ZO- 1-R, 5'-CAGGAGTCATGGACGCACA-3 '; ออคลูดิน-F, 5'-TTGAAAGTCCACCTCCTTACAGA-3' และ OccludinR, 5'-CCGGATAAAAAAGAGTACGCTGG-3'; -แอกติน-F, 5'-GGCTGTATTCCCCTCCATCG-3' และ -แอกติน-R, 5'-CCAGTTGGTAACAATGCCATGT-3' วิธี 2-ct ถูกใช้เพื่อวัดระดับการแสดงออกของ RNA

การทดสอบอิมมูโนซอร์เบนท์ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ (ELISA)

วัดระดับของ D-LA และ DAO ในพลาสมาโดยใช้ชุด ELISA (จิงเหม่ย จีน) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต โดยสรุป ส่วนลอยเหนือตะกอนของพลาสมาที่ถูกรวบรวมถูกใส่ลงในเพลตเคลือบแอนติบอดีที่มีความจำเพาะเจาะจงดี 96- ตามลำดับ บันทึกการดูดกลืนแสงที่ 450 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท (Multiskan MK3, Thermo Fisher Scientific)

การวิเคราะห์ทางสถิติ

ข้อมูลถูกนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย ± SD ตัวอย่างอิสระดำเนินการและแสดงภาพโดยใช้ GraphPad Prism8 0 การวิเคราะห์ข้อมูลลำดับ 16S rRNA ดำเนินการโดยใช้แพลตฟอร์ม Magichand (http://cloud.magigeneดอทคอม/) การวิเคราะห์ความสัมพันธ์ระหว่างจุลินทรีย์ในลำไส้และภูมิคุ้มกันดำเนินการโดยแพ็คเกจ R (v3.6.3) เพื่อแสดงเมทริกซ์สหสัมพันธ์ ค่าพี<0.05 were considered statistically significant. * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001, **** p<0.0001, n.s. not signifcant.

ผลลัพธ์

บัตรประจำตัวของ hAMSCs

hAMSCs แสดงรูปหลายเหลี่ยมหรือสัณฐานวิทยาคล้ายไฟโบรบลาสต์ในการเพาะเลี้ยง (รูปที่ 1A) และมีผลบวกอย่างมากต่อการแสดงออกของพื้นผิวของเครื่องหมายเฉพาะของ MSC CD90, CD105 และ CD73 แต่เป็นลบสำหรับ CD34, CD45, HLA-DR และ CD11b (รูปที่ . 1ค) สำหรับการสร้างความแตกต่างหลายสายเลือด ผลลัพธ์ของเราแสดงให้เห็นว่า hAMSCs แสดงให้เห็นถึงความแตกต่างของ adipocytic และ osteoblastic (รูปที่ 1B)

hAMSCs บรรเทาอาการ aGVHD ในหนูได้อย่างมีนัยสำคัญ

ก่อนอื่นเราประเมินผลการรักษาของ hAMSCs ต่อ aGVHD เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม aGVHD แล้ว hAMSCs ได้ปรับปรุง aGVHD อย่างมีนัยสำคัญ โดยเห็นได้จากการลดน้ำหนักที่ลดลงอย่างเห็นได้ชัด (รูปที่ 2B) และลดคะแนนทางคลินิกของ aGVHD (รูปที่ 2C) นอกจากนี้ กลุ่ม hAMSCs ยังมีอัตราการรอดชีวิตที่สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับหนู aGVHD (รูปที่ 2D) การวิเคราะห์ทางพยาธิวิทยาแสดงให้เห็นว่า aGVHD ทำให้เกิดความเสียหายของเนื้อเยื่ออย่างรุนแรงและการแทรกซึมของเม็ดเลือดขาว hAMSCs ดังที่แสดงโดย H&E ลดทอนการหยุดชะงักของเนื้อเยื่อและการแทรกซึมของเซลล์ T ภายนอกในอวัยวะเป้าหมาย aGVHD (รูปที่ 2E) ผลลัพธ์ของ IHC ยังยืนยันอย่างต่อเนื่องว่า hAMSCs ปรับปรุงอาการทางพยาธิวิทยาที่ผิดปกติ (รูปที่ 2F) ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า hAMSC มีศักยภาพในการบรรเทาอาการ aGVHD ในหนู aGVHD

hAMSCs ส่งผลต่อภูมิคุ้มกันของโฮสต์ในหนู aGVHD

เพื่อทำความเข้าใจกลไกการปรับภูมิคุ้มกันโดยที่ hAMSCs ลด aGVHD เราได้วัดการกระตุ้นและการขยายตัวของทีเซลล์ในเลือดส่วนปลายและอวัยวะเป้าหมาย การสอบวิเคราะห์โฟลไซโตเมทรีเปิดเผยว่า hAMSC ยับยั้งจำนวน CD3+CD4+T และ CD3+CD8+T เซลล์ในเลือดและอวัยวะเป้าหมายได้อย่างน่าทึ่ง (รูปที่ 3A ข). ยิ่งไปกว่านั้น สัดส่วนของ CD4+CD25+Foxp3+Tregs ในเลือดและอวัยวะเป้าหมายของหนูในกลุ่ม hAMSCs นั้นสูงกว่าสัดส่วนในกลุ่ม aGVHD อย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 3C) . ต่อไปเราจะตรวจสอบผลกระทบของ hAMSCs ต่อโปรไฟล์ไซโตไคน์ (รูปที่ 4) การบริหารให้ hAMSCs ส่งผลให้ระดับ IL-17A, IFN- , TNF, IL-6 และ IL-2 ลดลงอย่างเห็นได้ชัดในอวัยวะเป้าหมายและเลือดเมื่อเปรียบเทียบกับระดับของกลุ่ม aGVHD ยกเว้นระดับ TNF ในม้าม ในระหว่างนี้ นอกเหนือจากระดับ IL-10 ในตับแล้ว หนูที่ได้รับการรักษาด้วย hAMSC ยังแสดงระดับ IL-10 และ IL-4 ที่เพิ่มขึ้นอย่างมากในอวัยวะเป้าหมายและเลือด เมื่อนำมารวมกัน hAMSC มีบทบาทในการป้องกันใน aGVHD โดยการกลับคืนความไม่สมดุลทางภูมิคุ้มกันของชุดย่อยของทีเซลล์และพายุไซโตไคน์

ประโยชน์ของ Cistanche Tubulosa-เสริมสร้างระบบภูมิคุ้มกัน

คลิกที่นี่เพื่อดูผลิตภัณฑ์ Cistanche Enhance Immunity

【สอบถามเพิ่มเติม】 อีเมล:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

hAMSCs ปรับปรุงความเสียหายของสิ่งกีดขวางในลำไส้ในหนู aGVHD

เพื่อตรวจสอบว่า hAMSC สามารถซ่อมแซมสิ่งกีดขวางในลำไส้ใน aGVHD ได้หรือไม่ เราสังเกตก่อนว่า hAMSC สามารถย้ายไปยังลำไส้ได้หรือไม่ ดังที่แสดงในรูปที่ 5A ตรวจพบ hAMSCs ที่ติดฉลาก GFP ในลำไส้หลังจากฉีดเข้าไปใน hAMSCs และสามารถปลูกถ่ายและแทรกซึมในลำไส้ได้ จากนั้น เราได้ออกแบบการประเมินทางจุลพยาธิวิทยาของเนื้อเยื่อลำไส้เล็ก ในกลุ่ม aGVHD ลำไส้ถูกกัดเซาะและตาย วิลไลในลำไส้ถูกทำลายอย่างเห็นได้ชัด วิลไลถูกทำลายและเม็ดเลือดขาวขนาดใหญ่แทรกซึมเข้าไปในเยื่อเมือกในลำไส้ ซับเมือกซา และลามินาโพรเพีย วิลลัสในลำไส้ถูกจัดเรียงอย่างสม่ำเสมอ และไม่มีการแตกของวิลลัสในลำไส้หรือการหลุดของเยื่อบุผิววิลลัสหลังการรักษา hAMSCs (รูปที่ 5B) การแทรกซึมของลิมโฟไซต์ของมนุษย์ยังถูกสังเกตโดยอิมมูโนฮิสโตเคมีในลำไส้ในกลุ่ม aGVHD ในขณะที่การรักษาด้วย hAMSCs สามารถลดการแทรกซึมของพวกมันได้ (รูปที่ 5C) เพื่อประเมินผลการป้องกันของ hAMSCs ต่อความสมบูรณ์ของเยื่อเมือกในลำไส้ เราได้ดำเนินการอิมมูโนฮิสโตเคมีเพื่อตรวจจับผลกระทบต่อ ZO -1 ในกลุ่มบำบัด hAMSCs ระดับการแสดงออกของโปรตีนรอยต่อแน่น ZO-1 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม aGVHD (รูปที่ 5D) นอกจากนี้เรายังตรวจสอบระดับการแสดงออกของ mRNA ของโปรตีนรอยต่อแน่นในลำไส้ (TJs) และระดับพลาสมาของกรด D-lactic (D-LA) และ diamine oxidase (DAO) เพื่อตรวจสอบการทำงานของสิ่งกีดขวางในลำไส้และการซึมผ่านของลำไส้ เมื่อให้ทางหลอดเลือดดำ hMASC สามารถเพิ่มระดับการแสดงออกของ mRNA ของ ZO-1 และ Occludin ซึ่งเป็นโปรตีนสำคัญของ TJs (รูปที่ 5E, F) ได้อย่างมีนัยสำคัญ ในขณะที่ลดระดับของ D-LA และ DAO (รูปที่ 5G, ชม). ดังนั้น เมื่อ aGVHD เกิดขึ้น สิ่งกีดขวางในลำไส้ได้รับความเสียหายด้วยการลดโปรตีนที่จุดเชื่อมต่อที่แน่นในลำไส้และการซึมผ่านของลำไส้เพิ่มขึ้น ในขณะเดียวกัน hAMCS สามารถย้อนกลับการหยุดชะงักของสิ่งกีดขวางในลำไส้ได้อย่างเห็นได้ชัด

รูปที่ 1 ลักษณะทางฟีโนไทป์และการทำงานของ hAMSC (A) ไมโครกราฟตัวแทนของ hAMSCs จากข้อความ 0 ถึง 3 (ไม่มีการย้อมสี 100 ×) (B) ความสามารถในการแยกความแตกต่างหลายสายของ hAM SCs การแยกความแตกต่างแบบ Adipogenic ของ hAMSCs (ซ้าย) ถูกย้อมด้วย Oil Red-O และการแยกความแตกต่างทางกระดูกของ hAMSCs (ขวา) ถูกย้อมด้วย Alizarin Red (การย้อมสี, 100 ×) (C) การวิเคราะห์โฟลว์ไซโตเมทริกซึ่งบ่งชี้ hAMSCs ให้ผลบวกสำหรับ CD90, CD105 และ CD73 ในขณะที่ผลลบสำหรับ CD34, CD45, CD11b และ HLA-DR

รูปที่ 2 hAMSCs บรรเทา aGVHD ในหนู NPG (A) แผนภาพที่แสดงตารางการบริหารให้ hAMSC ในโมเดลเมาส์ aGVHD (B) การเปลี่ยนแปลงของน้ำหนักตัวในกลุ่มที่แตกต่างกัน (n=10) (C) คะแนนทางคลินิกของ aGVHD (ขึ้นอยู่กับการลดน้ำหนัก ท่าทางโค้ง ขนเป็นรู รอยโรคที่ผิวหนัง การเคลื่อนไหวลดลง และท้องเสีย) ในกลุ่มที่แตกต่างกัน (n=10) (D) การอยู่รอดของกลุ่มต่างๆ (n=10) (E) ภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์ที่เป็นตัวแทนของการย้อมสี H&E (400 ×) และคะแนนมิญชวิทยา (ขึ้นอยู่กับการทำลายโครงสร้างเนื้อเยื่อและการพองตัวของลิมโฟไซต์) (n =4) ( F ) ภาพไมโครสโคปที่เป็นตัวแทนของอิมมูโนฮิสโตเคมี (400 ×) และสัดส่วนของพื้นที่บวก CD45 ( n =4) ค่าถูกนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย± SD

รูปที่ 3 hAMSC ยับยั้งการขยายตัวของทีเซลล์ของผู้ให้ในขณะที่การสร้างหรือการขยายตัวของ Tregs ในร่างกาย เพิ่มขึ้น (A) การวิเคราะห์โฟลว์ไซโตเมทรีของ CD3+CD4+ทีเซลล์(n=6), (B) การวิเคราะห์โฟลว์ไซโตเมทรีของ CD3+CD8+ ทีเซลล์(n=6), (C) การวิเคราะห์โฟลว์ไซโตเมทรีของ CD4+CD25+Foxp3+Tregs (n=6) ค่าถูกนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย± SD

รูปที่ 4 hAMSC ปรับลดไซโตไคน์ต้านการอักเสบ IL-17A, IFN- , TNF, IL-6, IL-2 และไซโตไคน์ต้านการอักเสบที่ได้รับการควบคุม IL-10 และ IL -4 ในสิ่งมีชีวิต (n=5) ค่าถูกนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย± SD

การสลับของไมโครไบโอตาในลำไส้หลังการบำบัด hAMSC ในหนูเมาส์ aGVHD

การจัดลำดับ 16S rRNA ดำเนินการใน DNA ของแบคทีเรียในอุจจาระที่แยกได้จากหนูกลุ่มต่างๆ ดัชนี -diversity รวมถึงดัชนี OUT, Chao1 และ Shannon แสดงให้เห็นแนวโน้มที่คล้ายกัน และหนูที่ได้รับการบำบัดด้วย hAMSCs ก็มี microbiota ที่มีความหลากหลายสูงกว่าอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่ม aGVHD (รูปที่ 6A) การวิเคราะห์พิกัดหลัก (PCoA) ตามระยะทาง Un Weighted-unifrac, ระยะทางแมนฮัตตัน และระยะทางเมตริก Bray – Curtis ให้ผลจุดข้อมูลกระจัดกระจายบนแปลงของทั้งสองกลุ่ม แม้ว่าความแตกต่างจะไม่มีนัยสำคัญ (รูปที่ 6B) ต่อจากนั้นเราประเมินภูมิทัศน์ของจุลินทรีย์ในลำไส้เพื่อตรวจสอบความแตกต่างขององค์ประกอบที่อาจเกิดขึ้นระหว่างทั้งสองกลุ่มเพิ่มเติม คำนวณ OTU ทั้งหมด 773 รายการ และกลุ่ม hAMSCs มี OTU ที่สูงกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม aGVHD (รูปที่ 6C) ในแง่ขององค์ประกอบของแบคทีเรียในระดับไฟลัม Firmicutes และ Bacteroidetes เป็นไฟลัมที่โดดเด่นที่สุดสองประเภท (รูปที่ 6D) นอกจากนี้เรายังจัดแผนที่ความร้อนเปรียบเทียบสำหรับการวิเคราะห์จุลินทรีย์ในลำไส้ระหว่างทั้งสองกลุ่ม (รูปที่ 6E) สกุล Odoribacter และ Ruminococcus_1 มีปริมาณค่อนข้างสูงในกลุ่ม hAMSCs ซึ่งเป็นจุลินทรีย์ที่สำคัญในการรักษาสภาวะสมดุลของลำไส้ (รูปที่ 6F, G) เพื่อยืนยันว่าแบคทีเรียตัวใดถูกเปลี่ยนแปลงโดยการรักษา hAMSCs และในทางกลับกันส่งผลต่อการลุกลามของโรคต่อ aGVHD เราทำการเปรียบเทียบคลาสมิติสูงโดยใช้การวิเคราะห์จำแนกเชิงเส้น (LDA) ของขนาดเอฟเฟกต์ (LEfSe) ที่ตรวจพบความแตกต่างที่ชัดเจนในความเด่นของชุมชนแบคทีเรียระหว่าง ทั้งสองกลุ่ม ดังที่แสดงใน (รูปที่ 6H, I), Streptococcaceae (ตระกูลและสกุล Streptococcus), Paludibacteraceae, F0058 และ Delftia เป็นแบคทีเรียประเภทสำคัญที่มีส่วนทำให้เกิด dysbiosis ของจุลินทรีย์ในลำไส้ในกลุ่ม aGVHD อย่างไรก็ตามแบคทีเรียที่เป็นประโยชน์ Lachnospiraceae, Roseburya, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter และ Clostridia (คลาสและลำดับ Clostridiales) แสดงการเสริมสมรรถนะสัมพัทธ์ในกลุ่ม hAMSCs ซึ่งอาจเกี่ยวข้องกับการบรรเทา aGVHD ที่ใช้สื่อกลาง hAMSCs โดยรวมแล้ว ความหลากหลายและองค์ประกอบของจุลินทรีย์ในลำไส้ได้รับการปรับปรุงให้ดีขึ้นหลังการบริหาร hAMSCs และมีแนวโน้มโดยรวมที่เป็นประโยชน์ต่อร่างกาย

cistanche tubulosa-ปรับปรุงระบบภูมิคุ้มกัน

hAMSCs ควบคุมปฏิสัมพันธ์ระหว่าง Gut Microbiota และภูมิคุ้มกันในลำไส้

เพื่อทำความเข้าใจความสัมพันธ์ที่เป็นไปได้ระหว่างจุลินทรีย์ในลำไส้และสิ่งกีดขวางของเยื่อเมือกในลำไส้ ความสัมพันธ์ระหว่าง TJ และจุลินทรีย์ในลำไส้ในระดับสกุลได้รับการวิเคราะห์โดยการวิเคราะห์ความสัมพันธ์ของ Spearman ดังที่แสดงในรูปที่ 7 มีความสัมพันธ์เชิงบวกระหว่าง ZO-1 และแบคทีเรียที่เป็นประโยชน์ Ruminococcaceae_UCG.014, Muribaculum, Ruminococcus_1 และ Ruminiclostridium_9 แบคทีเรียที่เป็นประโยชน์อย่าง Rosebury, Odoribacter, Ruminococcus_1 และ Ruminococcaceae_UCG.014 มีมีความสัมพันธ์เชิงบวกอย่างมากกับ Occludin ต่อไปเราทำการวิเคราะห์ความสัมพันธ์ระหว่างจุลินทรีย์ในลำไส้และอุปสรรคภูมิคุ้มกันในลำไส้โดยวิธีสหสัมพันธ์อันดับของสเปียร์แมน (รูปที่ 7) เราสังเกตว่าการเพิ่มขึ้นของ Roseburya, Muribaculum และ Ruminococcus _1 มีความสัมพันธ์เชิงลบกับเปอร์เซ็นต์ของ CD3 +CD4+T เซลล์ นอกจากนี้ การเพิ่มขึ้นของแบคทีเรียที่เป็นประโยชน์ ได้แก่ Ruminococcus_1 และ Ruminiclostridium _9 มีความสัมพันธ์เชิงบวกกับเปอร์เซ็นต์ของ Tregs ในขณะที่มีความสัมพันธ์เชิงลบกับ IL-17 ความอุดมสมบูรณ์ของแลคโตบาซิลลัสและแคนดิดาทัส_โรคข้ออักเสบมีความสัมพันธ์เชิงลบกับ IFN- มีความสัมพันธ์เชิงลบระหว่างความอุดมสมบูรณ์ของ Muribaculum และ IL-2 การเพิ่มขึ้นของ Candidatus_Saccharimonas มากมายและการลดลงของ Escherichia ความอุดมสมบูรณ์ของชิเกลล่ามีความสัมพันธ์เชิงบวกกับระดับ IL-10 (รูปที่ 7) ผลการวิเคราะห์ความสัมพันธ์บ่งชี้ว่า hAMSCs ปรับปรุงสภาพแวดล้อมการอักเสบของโฮสต์และการควบคุมสภาวะสมดุลของลำไส้ ซึ่งอาจเกี่ยวข้องกับการปรับสภาพของจุลินทรีย์ในลำไส้ และผลที่ตามมาจึงป้องกัน aGVHD

รูปที่ 5 hAMSCs ปรับปรุงความผิดปกติของสิ่งกีดขวางในลำไส้ในหนู aGVHD ( A ) hAMSCs ที่ติดฉลาก GFP แทรกซึมเข้าไปในลำไส้ (B) ภาพถ่ายด้วยกล้องจุลทรรศน์ที่เป็นตัวแทนของการย้อมสี H&E ของลำไส้ (400×) และคะแนนมิญชวิทยา (ขึ้นอยู่กับการทำลายโครงสร้างเนื้อเยื่อและการแทรกซึมของลิมโฟไซต์) (n =4) ( C ) ภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์ตัวแทนของอิมมูโนฮิสโตเคมี (400 ×) ของลำไส้และสัดส่วนของพื้นที่บวก CD45 (n =4) ( D ) ภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์ตัวแทนของอิมมูโนฮิสโตเคมี (400 ×) ของลำไส้และสัดส่วนของพื้นที่บวก ZO -1 ( n =4) (E) ระดับการแสดงออก mRNA ของ ZO -1 และ Occludin (n =3) (F) ระดับพลาสมาของ D-LA และ DAO (n=4)ค่าถูกนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย± SD

การอภิปราย

การวิเคราะห์จุลินทรีย์ขั้นสูงได้ให้ข้อมูลเชิงลึกใหม่เกี่ยวกับปฏิสัมพันธ์ที่ซับซ้อนระหว่างโฮสต์และจุลินทรีย์ในลำไส้ [18] จุลินทรีย์ในลำไส้สามารถเปลี่ยนแปลงได้หลังจาก allo-HSCT และมีความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับ aGVHD ซึ่งบ่งชี้ว่าจุลินทรีย์ในลำไส้อาจเป็นเป้าหมายใหม่สำหรับการรักษา aGVHD [5] การศึกษาจำนวนมากรวมถึงการศึกษาล่าสุดของเราได้สำรวจและยืนยันผลการรักษาของ MSCs ต่อ aGVHD [15, 19, 20] อย่างไรก็ตาม ผลกระทบต่อจุลินทรีย์ในลำไส้ในช่วงเวลานี้ยังไม่ชัดเจน ในการศึกษานี้ เราได้ตรวจสอบผลกระทบของ hAMSCs ต่อ aGVHD และกลไกที่เป็นไปได้ในนั้น ในวิฟ สอดคล้องกับการศึกษาก่อนหน้า [15, 21–23] ผลลัพธ์ของเราระบุว่า hAMSCs มีผลในการป้องกันที่ดีต่อ aGVHD ในหนู ซึ่งเห็นได้จากอาการ aGVHD ที่ลดทอนลงและการอยู่รอดที่ยืดเยื้อ นอกจากนี้เรายังแสดงให้เห็นว่า hAMSC แสดงฤทธิ์กดภูมิคุ้มกันโดยการลดการขยายตัวของทีเซลล์ของผู้ให้ในขณะที่เพิ่มการสร้าง Tregs ใน aGVHD ในขณะเดียวกัน hAMSCs สามารถปรับลดไซโตไคน์ที่ทำให้เกิดการอักเสบและควบคุมไซโตไคน์ที่ต้านการอักเสบ ในร่างกาย เพื่อยับยั้งการตอบสนองต่อการอักเสบ สิ่งกีดขวางในลำไส้ซึ่งเป็นโครงสร้างที่หนาแน่นประกอบด้วยชั้นเดียวของเซลล์เยื่อบุผิวในลำไส้ ช่วยรักษาความสมบูรณ์และป้องกันการเคลื่อนย้ายของจุลินทรีย์ในลูมินัลในสภาวะที่มีสุขภาพดี [24] ในระหว่าง allo-HSCT หน่วยงานปรับสภาพจะทำลายสิ่งกีดขวางในลำไส้ ซึ่งเป็นขั้นตอนเริ่มต้นในการพัฒนา aGVHD เนื่องจากอนุญาตให้มีการเคลื่อนย้ายของแบคทีเรียข้ามสิ่งกีดขวาง และนำไปสู่การรบกวนสภาวะสมดุลของภูมิคุ้มกันในลำไส้ [24, 25] หลักฐานที่สะสมแสดงให้เห็นว่า MSC มีความสามารถในการซ่อมแซมเนื้อเยื่อ ซึ่งได้รับการพิสูจน์แล้วว่าสามารถซ่อมแซมความสมบูรณ์ของอุปสรรคในลำไส้ในหนูที่มีอาการลำไส้ใหญ่บวมได้ [26] โปรตีนที่จุดเชื่อมต่อแน่น รวมถึง ZO-1 และ Occludin มีบทบาทสำคัญในการทำงานของสิ่งกีดขวางในลำไส้และการเคลื่อนย้ายของจุลินทรีย์ในลำไส้เหนือสิ่งกีดขวางในลำไส้ที่บกพร่องจะกระตุ้นให้เกิดการอักเสบ [27] D-LA มาจากแบคทีเรียในลำไส้ และ DAO มีความเข้มข้นอยู่ที่เยื่อเมือกในลำไส้เป็นหลัก ดังนั้นความเข้มข้นสูงของพลาสมา D-LA และ DAO อาจสะท้อนถึงการเปลี่ยนแปลงในการซึมผ่านของลำไส้และการทำงานของสิ่งกีดขวางในลำไส้ได้บางส่วน [28] ปัจจุบันเราพบว่าระดับการแสดงออกของ TJs เพิ่มขึ้นอย่างมากหลังจากการบริหาร hAMSCs ในขณะที่ระดับพลาสมาของ D-LA และ DAO ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งบ่งชี้ว่า hAMSCs สามารถปรับปรุงความผิดปกติของสิ่งกีดขวางในลำไส้และฟื้นฟูการซึมผ่านของลำไส้ได้ ลำไส้เป็นหนึ่งในอวัยวะที่ได้รับผลกระทบอย่างรุนแรงที่สุดจาก aGVHD และการวิจัยได้เน้นย้ำว่าแบคทีเรีย โดยเฉพาะจุลินทรีย์ในลำไส้มีบทบาทสำคัญในการเกิดโรคและการพัฒนาของ aGVHD [5, 6] ตามที่รายงานในการศึกษาก่อนหน้านี้ การสูญเสียความหลากหลายของแบคทีเรียของผู้ป่วย allo HSCT มีความสัมพันธ์กับอัตราการเสียชีวิตที่เพิ่มขึ้นจาก aGVHD [29, 30] การครอบงำอุจจาระโดยเชื้อก่อโรคฉวยโอกาส Enterococcus และ Proteobacteria ยังเชื่อมโยงกับ GVHD ที่เพิ่มขึ้น [6, 31] ในช่วงหลายทศวรรษที่ผ่านมา มีการให้ความสนใจเพิ่มขึ้นเกี่ยวกับความสัมพันธ์ระหว่างจุลินทรีย์ในลำไส้และการรักษา MSCs ในโรคอักเสบ MSC ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าช่วยบรรเทาอาการ dysbiosis ของจุลินทรีย์ในลำไส้ของโรคข้ออักเสบรูมาตอยด์ ภาวะติดเชื้อในกระแสเลือด และโรคลำไส้อักเสบได้ [32–34] เพื่อสำรวจกลไกเพิ่มเติมที่ hAMSCs ปรับปรุง aGVHD เราได้ตรวจสอบผลกระทบของ hAMSCs ต่อจุลินทรีย์ในลำไส้ ในการศึกษาปัจจุบัน การบริหาร hAMSCs แสดงให้เห็นผลกระทบอย่างมากต่อ -ความหลากหลายของชุมชนจุลินทรีย์เมื่อเปรียบเทียบกับไม่มีการปลูกถ่าย ซึ่งบ่งชี้ว่าความอุดมสมบูรณ์ของจุลินทรีย์ในลำไส้สามารถเปลี่ยนแปลงได้หลังการรักษาด้วย hAMSCs อย่างไรก็ตาม ไม่มีความแตกต่างที่มีนัยสำคัญในการวัด -ความหลากหลาย อาจเป็นเพราะขนาดตัวอย่างเล็กของทั้งสองกลุ่มหรือรอบการบำบัดที่ไม่เพียงพอของ hAMSC การวิเคราะห์โดยใช้แผนที่ความร้อนเปรียบเทียบในระดับสกุลบ่งชี้ว่าการบริหาร hAMSCs เพิ่มความอุดมสมบูรณ์ของแบคทีเรียที่มีประโยชน์ Odoribacter และ Ruminococcus_1 ในพืชในลำไส้ ซึ่งเป็นผู้ผลิตกรดไขมันสายสั้น (SCFAs) ที่มีคุณสมบัติต้านการอักเสบ [35 , 36]. เพื่อระบุแบคทีเรียที่โดดเด่นที่ซ่อนอยู่ซึ่งเป็นสื่อกลางผ่านการปลูกถ่าย hAMSCs การวิเคราะห์ LEfSe ได้ดำเนินการระหว่างทั้งสองกลุ่ม เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม aGVHD การรักษาด้วย hAMSCs เพิ่มความอุดมสมบูรณ์ของจุลินทรีย์ที่เป็นประโยชน์บางชนิดที่เกี่ยวข้องกับฤทธิ์ต้านการอักเสบ เช่น Lachnospiraceae, Roseburya, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter, Clostridia อย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งทั้งหมดนี้ได้รับการอธิบายว่าเป็นประโยชน์ต่อการผลิต SCFAs ของจุลินทรีย์ในลำไส้ที่เมตาบอไลต์ [ 37–42]. ดังนั้นการสังเกตของเราชี้ให้เห็นว่าหลังจากการบริหาร hAMSC แล้ว dysbiosis ของจุลินทรีย์ในลำไส้ก็ได้รับการแก้ไข ซึ่งแสดงให้เห็นได้จากความหลากหลายที่ดีขึ้นและแบคทีเรียที่มีประโยชน์เพิ่มมากขึ้น

รูปที่ 6 การสลับกันของจุลินทรีย์ในลำไส้ในหนูเมาส์ aGVHD (A) การเปรียบเทียบ -ความหลากหลาย (B) การเปรียบเทียบ -ความหลากหลาย (C) แผนภาพเวนน์ของ OTU (D) ความอุดมสมบูรณ์ของแบคทีเรียสัมพัทธ์ในระดับไฟลัม (E) แผนที่ความร้อนของความอุดมสมบูรณ์ของสายพันธุ์ในระดับสกุล (F) ปริมาณ Odoribacter ที่สัมพันธ์กันในระดับสกุล (G) ปริมาณสัมพัทธ์ของ Ruminococcus_1 ในระดับสกุล (H) คลาโดแกรมตามการวิเคราะห์ LEfSe (I) คะแนน LDA คำนวณจากคุณสมบัติที่แตกต่างกันมากมายระหว่างกลุ่ม aGVHD และ hAMSC (AI) หนู =3 ตัวต่อกลุ่ม ค่าถูกนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย± SD

aGVHD เป็นกระบวนการอักเสบที่ซับซ้อนซึ่งเริ่มต้นโดยการทำลายความสมบูรณ์ของสิ่งกีดขวางในลำไส้ ตามด้วยการโยกย้ายของจุลินทรีย์ในลำไส้และส่วนประกอบของพวกมัน การรับรู้รูปแบบโมเลกุลที่เกี่ยวข้องกับความเสียหายและรูปแบบโมเลกุลที่เกี่ยวข้องกับเชื้อโรคโดยเซลล์ที่สร้างแอนติเจนกระตุ้นให้เกิดการตอบสนองการอักเสบ รวมถึงการกระตุ้นเซลล์ T และพายุไซโตไคน์เพื่อทำให้รุนแรงขึ้นต่อความเสียหายของสิ่งกีดขวางในลำไส้ และส่งเสริมการพัฒนาของ aGVHD [24, 43] ในทางกลับกัน จุลินทรีย์ในลำไส้และสารที่ได้จากไมโครไบโอต้า เช่น SCFAs มีบทบาทสำคัญในการรักษาความสมบูรณ์ของสิ่งกีดขวางในลำไส้และสภาวะสมดุลของลำไส้ เช่นเดียวกับการสร้างระบบภูมิคุ้มกันของเยื่อเมือก และสร้างสมดุลการป้องกันโฮสต์ด้วยส่วนประกอบของจุลินทรีย์และสารเมตาบอไลต์ [24, 44] . การสื่อสารระหว่างโฮสต์และจุลินทรีย์ในลำไส้ที่สิ่งกีดขวางในลำไส้จะควบคุมการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันของเยื่อเมือกและระบบ และในสภาวะทางพยาธิวิทยา อาจส่งผลให้เกิด GVHD [6, 45, 46] ชี้ให้เห็นว่าจุลินทรีย์ในลำไส้มีความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับการแสดงออกของโปรตีนที่แยกแน่น [47] การศึกษาปัจจุบันแสดงให้เห็นว่าการแสดงออกของ mRNA ของ TJs ZO{-1 และ Occludin มีความสัมพันธ์เชิงลบกับจำนวนแบคทีเรียที่เป็นอันตรายโดยสัมพันธ์กัน ในขณะที่มีความสัมพันธ์เชิงบวกกับแบคทีเรียที่เป็นประโยชน์ ซึ่งบ่งชี้ว่าจุลินทรีย์ในลำไส้มีความสำคัญต่อการรักษาความสมบูรณ์ของ สิ่งกีดขวางในลำไส้ นอกจากนี้จุลินทรีย์ในลำไส้ยังมีความสำคัญมากในการรักษาภูมิคุ้มกันในลำไส้ [47] เราสังเกตว่าแบคทีเรียที่มีประโยชน์บางตัวมีความสัมพันธ์เชิงลบกับเปอร์เซ็นต์ของ CD3+CD4+ทีเซลล์ แต่มีความสัมพันธ์เชิงบวกกับเปอร์เซ็นต์ของ Tregs ที่นี่ เราเปิดเผยว่าแบคทีเรียที่เป็นประโยชน์ ซึ่งส่วนใหญ่เป็นผู้ผลิต SCFA มีความสัมพันธ์เชิงลบกับไซโตไคน์ที่ทำให้เกิดการอักเสบ แต่มีความสัมพันธ์เชิงบวกกับไซโตไคน์ที่ต้านการอักเสบ ในขณะที่แบคทีเรียที่เป็นอันตรายมีความสัมพันธ์ในทางกลับกัน โดยสรุป ความแตกต่างที่มีนัยสำคัญในไมโครไบโอตาในลำไส้ระหว่างการรักษาชี้ให้เห็นภาพรวมที่สมบูรณ์ของปฏิสัมพันธ์ระหว่างไมโครไบโอตาในลำไส้กับสิ่งกีดขวางในลำไส้ และภูมิคุ้มกัน ยังมีข้อจำกัดหลายประการที่ควรค่าแก่การพูดคุยในการทดลองของเรา ประการแรก แม้ว่าการศึกษาของเราจะสำรวจผลกระทบของ hAMSCs ต่อภูมิคุ้มกัน สิ่งกีดขวางในลำไส้ และจุลินทรีย์ในลำไส้ใน aGVHD แต่กลไกพื้นฐานยังคงต้องมีการตรวจสอบในการศึกษาต่อไป ประการที่สอง จำเป็นต้องมีการสูญเสียจุลินทรีย์ในลำไส้และการปลูกถ่ายจุลินทรีย์ในอุจจาระเพื่อแก้ไขความสัมพันธ์เชิงสาเหตุระหว่างจุลินทรีย์ในลำไส้ สิ่งกีดขวางในลำไส้ และภูมิคุ้มกัน ประการที่สาม มีการรับประกันการวิจัยเพิ่มเติมที่ตรวจสอบผลกระทบของ hAMSC ต่อ SCFA ที่ได้มาจากไมโครไบโอต้าและสารเมตาบอไลต์อื่นๆ โดยสรุป การวิจัยของเราชี้ให้เห็นว่า hAMSCs บรรเทา aGVHD โดยการส่งเสริมการทำให้จุลินทรีย์ในลำไส้เป็นปกติ และควบคุมปฏิสัมพันธ์ระหว่างจุลินทรีย์ในลำไส้และอุปสรรคในลำไส้ ภูมิคุ้มกัน การศึกษาของเราเป็นครั้งแรกอย่างเป็นระบบในการกำหนดผลกระทบและกลไกพื้นฐานของ hAMSCs ที่ควบคุมจุลินทรีย์ในลำไส้และภูมิคุ้มกันในลำไส้ใน aGVHD

รูปที่ 7 การวิเคราะห์ความสัมพันธ์ระหว่างจุลินทรีย์ในลำไส้และภูมิคุ้มกันในลำไส้ การวิเคราะห์ความสัมพันธ์ของสเปียร์แมนดำเนินการระหว่างความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ของไมโครไบโอตาในลำไส้ที่แตกต่างกัน 15 ชนิด (ที่ระดับสกุล) และระดับการแสดงออกของ mRNA ของ TJ เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ภูมิคุ้มกันตลอดจนความเข้มข้นของไซโตไคน์ในลำไส้ของทั้งสองกลุ่ม ค่า Spearman r มีตั้งแต่ -0.5 (สีน้ำเงิน) ถึง 0.5 (สีแดง)

อ้างอิง

1. ชมิด, ซี. (2021) เข้าใกล้ GVL ไปอีกขั้นโดยไม่มี GVHD เลือด, 137(19), 2565–2566. https://doi.org/10.1182/blood.2020010132

2. Chang, Y., Zhao, X. และ Huang, X. (2018) กลยุทธ์ในการเพิ่มและรักษาผลต้านมะเร็งเม็ดเลือดขาวโดยไม่ทำให้โรคกราฟต์กับโฮสต์รุนแรงขึ้น พรมแดนด้านภูมิคุ้มกันวิทยา, 9, 3041 https:// doi.org/10.3389/fmmu.2018.03041

3. Zhu, W., Winter, MG, Byndloss, MX, Spiga, L., Duerkop, BA, Hughes, ER, Büttner, L., de Lima Romão, E., Behrendt, CL, Lopez, CA, Sifuentes- Dominguez, L., Huf-Hardy, K., Wilson, RP, Gillis, CC, Tükel, ç., Koh, AY, Burstein, E., Hooper, LV, Bäumler, AJ, & Winter, SE (2018) การแก้ไขจุลินทรีย์ในลำไส้อย่างแม่นยำช่วยบรรเทาอาการลำไส้ใหญ่บวม ธรรมชาติ, 553(7687), 208–211. https://doi.org/10.1038/nature25172

4. Zhao, L., Zhang, F., Ding, X., Wu, G., Lam, YY, Wang, X., Fu, H., Xue, X., Lu, C., Ma, J. , Yu, L., Xu, C., Ren, Z., Xu, Y., Xu, S., Shen, H., Zhu, X., Shi, Y., Shen, Q., … Zhang, C . (2018). แบคทีเรียในลำไส้ที่ได้รับการส่งเสริมโดยเส้นใยอาหารช่วยลดโรคเบาหวานประเภท 2 วิทยาศาสตร์ (นิวยอร์ก, นิวยอร์ก), 359(6380), 1151–1156 https://doi.org/10.1126/science.aao5774

5. โชโน วาย. และฟาน เดน บริงค์ MRM (2018) การบาดเจ็บของจุลินทรีย์ในลำไส้ในการปลูกถ่ายเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดแบบ allogeneic รีวิวธรรมชาติ. มะเร็ง, 18(5), 283–295. https://doi.org/10.1038/nrc.2018.10

6. สตาฟาส, เอ., บูร์โกส ดา ซิลวา, เอ็ม., และฟาน เดน บริงค์, MRM (2017) จุลินทรีย์ในลำไส้ในการปลูกถ่ายเซลล์เม็ดเลือด allogeneic และโรคที่เกิดจากการรับสินบนเมื่อเทียบกับโฮสต์ เลือด, 129(8), 927–933. https://doi.org/10.1182/blood-2016-09-691394

7. Wu, K., Yuan, Y., Yu, H., Dai, X., Wang, S., Sun, Z., Wang, F., Fei, H., Lin, Q., Jiang, H. ., และเฉิน ต. (2020) สารจุลินทรีย์ในลำไส้ trimethylamine N-ออกไซด์ ทำให้ GVHD รุนแรงขึ้นโดยการกระตุ้นให้เกิดโพลาไรเซชันของ M1 มาโครฟาจในหนู เลือด, 136(4), 501–515 https://doi.org/10.1182/blood.2019003990

8. แมทธิวสัน, เอ็นดี, เจนคิว, ร., แมทธิว, เอวี, โคนิกสเนชท์, เอ็ม., ฮานาช, เอ., ตูไบ, ที., โอราเวซ-วิลสัน, เค., วู, เอส., ซัน, วาย., รอสซี, ซี ., Fujiwara, H., Byun, J., Shono, Y., Lindemans, C., Calafore, M., Schmidt, TM, Honda, K., Young, VB, Pennathur, S., … Reddy, P. (2559) สารที่ได้จากไมโครไบโอมในลำไส้จะปรับความเสียหายของเซลล์เยื่อบุผิวในลำไส้ และบรรเทาโรคที่เกิดจากกราฟต์เทียบกับโฮสต์ ภูมิคุ้มกันวิทยาธรรมชาติ, 17(5), 505–513 https://doi.org/10.1038/ni.3400

9. Dave, JR, Chandekar, SS, Behera, S., Desai, KU, Salve, PM, Sapkal, NB, Mhaske, ST, Dewle, AM, Pokare, PS, Page, M., Jog, A., Chivte , PA, Srivastava, RK, & Tomar, GB (2022) เซลล์ต้นกำเนิดจากเนื้อเยื่อเหงือกของมนุษย์ยังคงรักษาการเจริญเติบโตและลักษณะภูมิคุ้มกันที่เป็นอิสระจากอายุของผู้บริจาค ความก้าวหน้าทางวิทยาศาสตร์, 8(25), ม6504. https://doi.org/10. 1126/sciadv.abm6504

10. จ้าว เค. และหลิว คิว. (2016) การประยุกต์ใช้ทางคลินิกของเซลล์ mesenchymal stromal ในการปลูกถ่ายเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือด วารสารโลหิตวิทยาและมะเร็งวิทยา, 9(1), 46. https://doi.org/ 10.1186/s13045-016-0276-z

11. Liu, Q., Huang, Q., Wu, H., Zuo, G., Gu, H., Deng, K., & Xin, H. (2021) ลักษณะเฉพาะและศักยภาพในการรักษาของเซลล์ต้นกำเนิดจากน้ำคร่ำของมนุษย์ วารสารนานาชาติด้านวิทยาศาสตร์โมเลกุล, 22(2), 970 https://doi.org/10.3390/ijms22020970

12. Li, J., Zhou, Z., Wen, J., Jiang, F., & Xia, Y. (2020) เซลล์ต้นกำเนิดจากน้ำคร่ำของมนุษย์ส่งเสริมการสร้างกระดูกใหม่จากภายนอก พรมแดนด้านต่อมไร้ท่อ, 11, 543623 https:// doi.org/10.3389/fendo.2020.543623

13. Díaz-Prado, S., Muiños-López, E., Hermida-Gómez, T., Cicione, C., Rendal-Vázquez, ME, Fuentes-Boquete, I., de Toro, FJ, Blanco, FJ ( 2554) เยื่อน้ำคร่ำของมนุษย์เป็นแหล่งทางเลือกของเซลล์ต้นกำเนิดสำหรับเวชศาสตร์ฟื้นฟู ความแตกต่าง; การวิจัยความหลากหลายทางชีวภาพ, 81(3), 162–171. https://doi.org/10.1016/j.dif.2011.01.005

14. Hong, J., Gao, Y., Song, J., Zhuo, W., Sun, H., & Ping, B. (2016) การเปรียบเทียบลักษณะทางชีวภาพและกิจกรรมกดภูมิคุ้มกันระหว่างเซลล์ต้นกำเนิดจากน้ำคร่ำของมนุษย์และเซลล์ต้นกำเนิดจากไขกระดูกของมนุษย์ จงกัว ชิ หยาน เสว่ เย่ เสว่ ซา จี้, 24(3), 858–864. https:// doi.org/10.7534/j.issn.1009-2137.2016.03.041

15. Gao, Y., Li, W., Bu, X., Xu, Y., Cai, S., Zhong, J., Du, M., Sun, H., Huang, L., He, Y ., Hu, X., Liu, Q., Jin, H., Wang, Q., & Ping, B. (2021) เซลล์ต้นกำเนิดจากน้ำคร่ำของมนุษย์ยับยั้ง aGVHD โดยควบคุมความสมดุลของเซลล์ Treg และ T efector วารสารการวิจัยการอักเสบ, 14, 3985–3999 https://doi.org/10.2147/ JIR.S323054

16. Cooke, KR, Kobzik, L., Martin, TR, Brewer, J., Delmonte, JJ, Crawford, JM, & Ferrara, JL (1996) แบบจำลองการทดลองของโรคปอดบวมที่ไม่ทราบสาเหตุหลังการปลูกถ่ายไขกระดูก: I. บทบาทของแอนติเจน H รองและเอนโดทอกซิน เลือด, 88(8), 3230–3239.

17. ยาเญซ ร., ลามานา, ม.ล., การ์เซีย-คาสโตร, เจ., โคลเมเนโร, ไอ., รามิเรซ, เอ็ม., & บูเอเรน, JA (2006) เซลล์ต้นกำเนิดจากเนื้อเยื่อไขมันจากเนื้อเยื่อไขมันมีคุณสมบัติในการกดภูมิคุ้มกัน ในร่างกาย ซึ่งใช้สำหรับการควบคุมโรคที่เกิดจากกราฟต์เทียบกับโฮสต์ เซลล์ต้นกำเนิด (เดย์ตัน โอไฮโอ) 24(11) 2582–2591

18 ฮูเปอร์, แอลวี, ลิตต์แมน, ดร. และแม็คเฟอร์สัน, เอเจ (2012) ปฏิสัมพันธ์ระหว่างจุลินทรีย์และระบบภูมิคุ้มกัน วิทยาศาสตร์ (นิวยอร์ก, นิวยอร์ก), 336(6086), 1268–1273 https://doi.org/10.1126/science.1223490

19. เคลลี่ เค. และราสโก เจเจ (2021) เซลล์สโตรมัลมีเซนไคมัลสำหรับการรักษาโรคกราฟต์กับโฮสต์ พรมแดนในด้านภูมิคุ้มกันวิทยา, 12, 761616 https://doi.org/10.3389/fmmu.2021.761616

20. Macías-Sánchez, MDM, Morata-Tarifa, C., Cuende, N., Cardesa-Gil, A., Cuesta-Casas, M. Á., Pascual-Cascon, MJ, Pascual, A., Martín-Calvo , C., Jurado, M., Perez-Simón, JA, Espigado, I., Garzón López, S., Carmona Sánchez, G., Mata-Alcázar-Caballero, R., & Sánchez-Pernaute, R. (2022 ). เซลล์ Mesenchymal stromal สำหรับการรักษาโรคกราฟต์เฉียบพลันและเรื้อรังที่ดื้อต่อสเตียรอยด์เมื่อเทียบกับโฮสต์: ประสบการณ์การใช้ความเห็นอกเห็นใจจากหลายศูนย์ ยาแปลสเต็มเซลล์, 11(4), 343–355. https://doi.org/10.1093/stcltm/szac003

21. ทาโกะ, วาย., โคบายาชิ, ซี., โอกุระ, เอ็ม., วาดะ, เจ., ยามากุจิ, เอส., ยามากุจิ, ต., ฮายาชิ, เอ็ม., นากาอิชิ, ต., คูโบ, เอช., & อูเอดะ, ย. (2021). เซลล์ต้นกำเนิดมีเซนไคม์ที่ได้มาจากน้ำคร่ำของมนุษย์ทำให้โรคที่เกิดจากการปลูกถ่ายซีโนจีนิกเทียบกับโฮสต์โดยการป้องกันการกระตุ้นและการแพร่กระจายของทีเซลล์ รายงานทางวิทยาศาสตร์, 11(1), 2406. https://doi. org/10.1038/s41598-021-81916-y

22. ยามาฮาระ, เค., ฮาราดะ, เค., โอชิมะ, เอ็ม., อิชิคาเนะ, เอส., โอนิชิ, เอส., สึดะ, เอช., โอตานิ, เค., ทากูจิ, เอ., โซมะ, ที., โอกาวะ, เอช ., Katsuragi, S. , Yoshimatsu, J. , Harada-Shiba, M. , Kangawa, K. , & Ikeda, T. (2014) การเปรียบเทียบคุณสมบัติการสร้างเส้นเลือดใหม่ ไซโตโปรเทคทีฟ และภูมิคุ้มกันของเซลล์ต้นกำเนิดมีเซนไคมอลที่ได้มาจากน้ำคร่ำและคอรีออนของมนุษย์ โปรดหนึ่ง 9(2) e88319 https://doi.org/10.1371/journal.pone.0088319

23. ยามาฮาระ, เค., ฮามาดะ, เอ., โซมะ, ที., โอคาโมโตะ, ร., โอคาดะ, เอ็ม., โยชิฮาระ, เอส., โยชิฮาระ, เค., อิเคกาเมะ, เค., ทามากิ, เอช., ไคดะ, เค ., อิโนะอุเอะ, ต., โอสุกิ, วาย., นิชิกาวา, เอช., ฮายาชิ, เอช., อิโตะ, วายเอ็ม, อิจิมะ, เอช., โอนิชิ, เอส., ฮาชิโมโตะ, ดี., ไอโซเอะ, ที., … ฟูจิโมริ, วาย . (2019). ความปลอดภัยและประสิทธิภาพของเซลล์ต้นกำเนิดจากเยื่อหุ้มเซลล์ (AM01) ที่ได้มาจากน้ำคร่ำในผู้ป่วยที่เป็นโรคกราฟต์เฉียบพลันและโฮสต์ที่ดื้อต่อสเตียรอยด์หลังการปลูกถ่ายเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดชนิด allogeneic: โปรโตคอลการศึกษาสำหรับการทดลองระยะที่ 1/2 ของญี่ปุ่น BMJ เปิด, 9(7), e26403. https://doi.org/10.1136/bmjop th-2018-026403

24. Lin, D., Hu, B., Li, P., Zhao, Y., Xu, Y. และ Wu, D. (2021) บทบาทของจุลินทรีย์ในลำไส้และสารของจุลินทรีย์ใน GVHD เฉียบพลัน โลหิตวิทยาเชิงทดลองและมะเร็งวิทยา, 10(1), 49. https:// doi.org/10.1186/s40164-021-00240-3

25. Ghimire, S., Weber, D., Mavin, E., Wang, XN, Dickinson, AM, & Holler, E. (2017) พยาธิสรีรวิทยาของ GvHD และภาวะแทรกซ้อนที่สำคัญอื่น ๆ ที่เกี่ยวข้องกับ HSCT พรมแดนด้านภูมิคุ้มกันวิทยา, 8, 79. https://doi.org/10.3389/fmmu.2017.00079

26. Xu, J., Wang, X., Chen, J., Chen, S., Li, Z., Liu, H., Bai, Y., & Zhi, F. (2020) เซลล์ต้นกำเนิดจากเซลล์ต้นกำเนิดจากตัวอ่อนส่งเสริมความสมบูรณ์ของเยื่อบุผิวลำไส้ใหญ่และการงอกใหม่โดยการยกระดับ IGF{3}} หมุนเวียนในหนูที่เป็นโรคลำไส้ใหญ่บวม ทฤษฎี 10(26), 12204– 12222 https://doi.org/10.7150/thno.47683

27. Zhao, Y., Huang, J., Li, T., Zhang, S., Wen, C., & Wang, L. (2022) Berberine ปรับปรุง aGVHD โดยการเปลี่ยนแปลงของจุลินทรีย์ในลำไส้ การปราบปรามการส่งสัญญาณ TLR4 และการซ่อมแซมสิ่งกีดขวางลำไส้ใหญ่สำหรับการยับยั้งการอักเสบของ NLRP3 วารสารการแพทย์ระดับเซลล์และโมเลกุล, 26(4), 1060–1070 https://doi.org/10. 1111/jcmm.17158

28. Yuan, M., Lin, L., Cao, H., Zheng, W., Wu, L., Zuo, H., Tian, ​​X., & Song, H. (2022) จุลินทรีย์ในลำไส้มีส่วนร่วมในการป้องกันของ HO-1/BMMSC ต่อการปลูกถ่ายตับด้วยการปลูกถ่ายตับที่มีภาวะไขมันพอกตับในหนู พรมแดนทางจุลชีววิทยา, 13, 905567 https://doi.org/10.3389/fmicb.2022.905567

29. ทัว, วาย., เจ็นคิว, RR, เปราเลส, เอ็ม., ลิตต์มันน์, ER, มอร์จาเรีย, เอส., หลิง, แอล., ไม่, ดี., โกบอร์น, เอ., วิอาเล, เอ., ดาฮี, พีบี, ปอนเซ , DM, Barker, JN, Giralt, S., van den Brink, M., & Pamer, EG (2014) ผลของความหลากหลายของแบคทีเรียในลำไส้ต่อการเสียชีวิตหลังการปลูกถ่ายเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดแบบ allogeneic เลือด, 124(7), 1174–1182. https://doi.org/10.1182/ เลือด-2014-02-554725

30. Jenq, RR, Taur, Y., Devlin, SM, Ponce, DM, Goldberg, JD, Ahr, KF, Littmann, ER, Ling, L., Gobourne, AC, Miller, LC, Docampo, MD, Peled, JU, Arpaia, N., Cross, JR, Peets, TK, Lumish, MA, Shono, Y., Dudakov, JA, Poeck, H., … van den Brink, MRM (2015) โรคเบลาเตียในลำไส้สัมพันธ์กับการเสียชีวิตที่ลดลงจากโรคที่เกิดจากการปลูกถ่ายอวัยวะกับโฮสต์ ชีววิทยาของการปลูกถ่ายเลือดและไขกระดูก: วารสารสมาคมอเมริกันเพื่อการปลูกถ่ายเลือดและไขกระดูก, 21(8), 1373–1383 https://doi.org/10.1016/j.bbmt.2015.04.016

31. เลอ Bastard, Q., Chevallier, P. และ Montassier, E. (2021) ไมโครไบโอมในลำไส้ในการปลูกถ่ายเซลล์ต้นกำเนิดเม็ดเลือดอัลโลจีนิกและการเปลี่ยนแปลงเฉพาะที่เกี่ยวข้องกับการปลูกถ่ายเฉียบพลันและโรคโฮสต์ วารสารโลกของระบบทางเดินอาหาร, 27(45), 7792–7800 https://doi.org/10.3748/wjg.v27.i45.7792

32. Li, X., Lu, C., พัดลม, D., Lu, X., Xia, Y., Zhao, H., Xu, H., Zhu, Y., Li, J., Liu, H. ., & เซียว ซี. (2020). เซลล์ต้นกำเนิดมีเซนไคมัลจากสะดือของมนุษย์แสดงศักยภาพในการรักษาโรคข้ออักเสบรูมาตอยด์โดยการควบคุมปฏิสัมพันธ์ระหว่างภูมิคุ้มกันและจุลินทรีย์ในลำไส้ผ่านทางตัวรับอะริลไฮโดรคาร์บอน ขอบเขตในเซลล์และชีววิทยาพัฒนาการ 8, 131 https://doi.org/10.3389/fcell.2020.00131

33. ซัน, เจ., ดิง, X., หลิว, เอส., ด้วน, X., เหลียง, เอช., และซัน, ที. (2020) เซลล์ต้นกำเนิดจากไขมันจากไขมันช่วยลดอาการบาดเจ็บเฉียบพลันของปอดและปรับปรุงจุลินทรีย์ในลำไส้ในหนูติดเชื้อ การวิจัยและบำบัดเซลล์ต้นกำเนิด 11(1), 384 https://doi.org/10.1186/ s13287-020-01902-5

34. Soontararak, S., Chow, L., Johnson, V., Coy, J., Wheat, W., Regan, D., & Dow, S. (2018) เซลล์ต้นกำเนิดมีเซนไคมัล (MSC) ที่ได้มาจากเซลล์ต้นกำเนิด Pluripotent ที่ถูกชักนำ (iPSC) เทียบเท่ากับ MSC ที่ได้มาจากไขมันในการส่งเสริมการรักษาลำไส้และการทำให้จุลินทรีย์เป็นปกติในแบบจำลองโรคลำไส้อักเสบของหนู ยาแปลสเต็มเซลล์, 7(6), 456–467. https://doi.org/ 10.1002/sctm.17-0305

35. หลี่ เจ. ซู ซี. และหลิว วาย. (2022) การแก้ไขอาการแพ้อาหารที่เกิดจากโอวัลบูมินในหนูโดยการนำไซยานิดิน-3-โอ-กลูโคไซด์ทางทวารหนักและลำไส้แบบกำหนดเป้าหมาย อาหาร (บาเซิล สวิตเซอร์แลนด์), 11(11), 1542 https://doi.org/10.3390/foods11111542

36. มารุยามะ, เอส., มัตสึโอกะ, ต., โฮโซมิ, เค., ปาร์ค, เจ., นิชิมูระ, เอ็ม., มูราคามิ, เอช., โคนิชิ, เค., มิยาจิ, เอ็ม., คาวาชิมะ, เอช., มิซูกุจิ, เค ., Kobayashi, T., Ooka, T., Yamagata, Z., & Kunisawa, J. (2022) การจำแนกประเภทของการเกิดภาวะไขมันผิดปกติโดยพิจารณาจากแบคทีเรียในลำไส้ที่เกี่ยวข้องกับการบริโภคข้าวบาร์เลย์ พรมแดนด้านโภชนาการ, 9, 812469 https://doi.org/10.3389/fnut.2022.812469

37. Lee, SH, Park, H., Kang, CD, Choi, DH, Park, SC, Park, JM, Nam, S., Chae, GB, Lee, KY, Cho, H., & Lee, SJ ( 2022) การเสริมวิตามิน D3 ในกล้ามเนื้อขนาดสูงส่งผลต่อจุลินทรีย์ในลำไส้ของผู้ป่วยที่มีการติดเชื้อ clostridioides difcile พรมแดนทางจุลชีววิทยาเซลล์และการติดเชื้อ, 12, 904987 https://doi.org/10.3389/fcimb.2022.904987

38. เมเยอร์, ​​อาร์เค, เลน, เอไอ, เวนิงเกอร์, SN, มาร์ติเนซ, TM, คังกัธ, เอ., เลาบิทซ์, ดี., & ดูก้า, เอฟเอ (2022) โอลิโกฟรุคโตสช่วยคืนระดับกรดไขมันสายสั้นภายหลังตอนกลางวันในระหว่างการให้อาหารที่มีไขมันสูง โรคอ้วน (ซิลเวอร์ สปริง, Md.), 30(7), 1442–1452 https://doi.org/ 10.1002/oby.23456

39. Sang, J, Zhuang, D, Zhang, T, Wu, Q, Yu, J, Zhang, Z (2022) การสร้างรูปแบบอายุที่บรรจบกันและแตกต่างของความหลากหลายของจุลินทรีย์ในลำไส้ในมนุษย์และไพรเมตที่ไม่ใช่มนุษย์ M-ระบบ: e151221. https:// doi.org/10.1128/msystems.01512-21

40. Ge, X., He, X., Liu, J., Zeng, F., Chen, L., Xu, W., Shao, R., Huang, Y., Farag, MA, Capanoglu, E. , El-Seedi, HR, Zhao, C., & Liu, B. (2022) การเยียวยาโรคเบาหวานประเภท 2 โดยนวนิยาย 6, 8-การประสานงานของกัวนิดิล ลูทีโอลิน ควิโนน-โครเมียมผ่านกลไกทางชีวเคมีและปฏิสัมพันธ์ของจุลินทรีย์ในลำไส้ วารสารการวิจัยขั้นสูง, S2090–1232(22), 121–129 https://doi.org/ 10.1016/j.jare.2022.06.003

41. Ding, Q., Cao, F., Lai, S., Zhuge, H., Chang, K., Valencak, TG, Liu, J., Li, S., & Ren, D. (2022) Lactobacillus plantarum ZY08 บรรเทาอาการไขมันพอกตับที่เกิดจากแอลกอฮอล์เรื้อรังและการบาดเจ็บของตับในหนูโดยการฟื้นฟูสภาวะสมดุลของลำไส้ ศูนย์วิจัยอาหารนานาชาติ (ออตตาวา ออนแทรีโอ), 157, 111259 https://doi.org/10 1016/j.foodres.2022.111259

42. Rees, NP, Shaheen, W., Quince, C., Tselepis, C., Horniblow, RD, Sharma, N., Beggs, AD, Iqbal, TH, & Quraishi, MN (2022) การทบทวนตัวชี้วัดทางชีวภาพเชิงคาดการณ์ของผู้บริจาคและผู้รับอย่างเป็นระบบเกี่ยวกับการตอบสนองต่อการปลูกถ่ายจุลินทรีย์ในอุจจาระในผู้ป่วยที่เป็นโรคลำไส้ใหญ่บวมเป็นแผล EBioMedicine, 81, 104088 https:// doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.104088

43. Li, A., Abraham, C., Wang, Y. และ Zhang, Y. (2020) ข้อมูลเชิงลึกใหม่เกี่ยวกับชีววิทยาพื้นฐานของการรับสินบนเฉียบพลันกับโรคโฮสต์ โลหิตวิทยา, 105(11), 2540–2549. https://doi.org/10.3324/haematol. 2019.240291 44. Kayama, H., Okumura, R., & Takeda, K. (2020) ปฏิสัมพันธ์ระหว่างจุลินทรีย์ เยื่อบุผิว และเซลล์ภูมิคุ้มกันในลำไส้ การทบทวนภูมิคุ้มกันวิทยาประจำปี, 38, 23–48 https://doi.org/ 10.1146/Annu rev-immunol-070119-115104

45. ชลูเตอร์, เจ., เปเลด, จู, เทย์เลอร์, บีพี, มาร์กี้, KA, สมิธ, เอ็ม., เทาร์, วาย., นีฮุส, ร., สตาฟาส, เอ., ได, เอ., ฟอนทาน่า, อี., อมอเรตติ , LA, Wright, RJ, Morjaria, S., Fenelus, M., Pessin, MS, Chao, NJ, Lew, M., Bohannon, L., Bush, A., … Xavier, JB (2020) จุลินทรีย์ในลำไส้มีความเกี่ยวข้องกับการเปลี่ยนแปลงของเซลล์ภูมิคุ้มกันในมนุษย์ ธรรมชาติ, 588(7837), 303–307. https://doi.org/10.1038/ ส41586-020-2971-8

46 Yang, J, Yang, H, Li, Y (2022) ปฏิสัมพันธ์สามประการระหว่างจุลินทรีย์ในลำไส้, มัยโคไบโอต้าและภูมิคุ้มกันของโฮสต์ บทวิจารณ์เชิงวิพากษ์ด้านวิทยาศาสตร์การอาหารและโภชนาการ: 1–21 https://doi.org/10.1080/10408 398.2022.2094888

47. An, J., Liu, Y., Wang, Y., Fan, R., Hu, X., Zhang, F., Yang, J., & Chen, J. (2022) บทบาทของสิ่งกีดขวางเยื่อเมือกในลำไส้ต่อโรคแพ้ภูมิตัวเอง: เป้าหมายที่เป็นไปได้ พรมแดนในด้านภูมิคุ้มกันวิทยา, 13, 871713 https://doi.org/10.3389/fmmu.2022.871713