สารสกัดจากน้ำของ Cistanche ส่งเสริมการบีบตัวของลำไส้และปรับปรุงอาการท้องผูกได้อย่างไร?

Shuai Yan,1,2 Yin-zi Yue,1 Xiao-peng Wang,1 Hong-li Dong,1 Shu-guang Zhen,1 Ben-sheng Wu,1 และ Hai-hua Qian3

มีรายงานว่ายาจีนโบราณมีผลดีในการรักษาอาการท้องผูกจากการทำงาน งานนี้พยายามพิสูจน์ผลของสารสกัดที่เป็นน้ำของ HerbaCistanche(AEHC) กับการบำบัดด้วย STC และเพื่อกำหนดกลไกที่เป็นไปได้โดยแบบจำลองอาการท้องผูกในการขนส่งช้า (STC) ที่เกิดจากโลเพอราไมด์ HPLC ถูกดำเนินการเพื่อระบุและยืนยันส่วนประกอบที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพใน AEHC พบว่า AEHC ลดการตอบสนองของ STC โดยพิจารณาจากปริมาณอุจจาระที่เพิ่มขึ้น ปริมาณความชื้น และอัตราการขนส่งในลำไส้ ตลอดจนระดับ GAS, MTL, SS และ CGRP ในซีรัม ระดับโปรตีนและ mRNA ของ c-kit การติดฉลากของเซลล์คั่นระหว่างหน้าของ Cajal (ICC) ก็เพิ่มขึ้นเช่นกัน ในขณะเดียวกัน เฉพาะระดับโปรตีนของ SCF ซึ่งเป็นลิแกนด์ของ ckit เพิ่มขึ้นเท่านั้น การวิเคราะห์ข้อมูลของเราชี้ให้เห็นว่า AEHC สามารถปรับปรุงการทำงานของ ICC ได้อย่างชัดเจนผ่านเส้นทางการส่งสัญญาณที่เกี่ยวข้องกับ PI3K, SCF และ c-kit และปรับปรุงดัชนีการเคลื่อนที่ของลำไส้ เช่น GAS, MTL, SS และ CGRP เป็นที่น่าสนใจที่จะสังเกตว่า AEHC ดูเหมือนจะมีผลกับอาการท้องผูก ดังนั้นจึงจำเป็นต้องมีการทดลองเพิ่มเติมเพื่อทำให้กลไกที่เกี่ยวข้องชัดเจนขึ้น

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติมกรุณาติดต่อ:Joanna.jia@wecistanche.com

acteoside ใน cistanche มีผลดีต่อสารต้านอนุมูลอิสระ

1. บทนำ

อาการท้องผูกเป็นโรคเกี่ยวกับระบบทางเดินอาหารที่พบได้บ่อยและมีปัญหาด้านสาธารณสุข โดยมีอาการถ่ายอุจจาระยากอย่างต่อเนื่อง ไม่บ่อย หรือไม่สมบูรณ์ [1] ความชุกของอาการท้องผูกแตกต่างกันไปตั้งแต่ 0.7 เปอร์เซ็นต์ ถึง 81 เปอร์เซ็นต์ทั่วโลก โดยเฉพาะในผู้สูงอายุ [2, 3] อาการท้องผูกในการขนส่งช้า (STC) เป็นปัญหาทางเดินอาหารที่พบบ่อยในผู้ป่วย 13–37 เปอร์เซ็นต์ที่มีอาการท้องผูกที่ดื้อต่อการรักษาเรื้อรัง [4, 5] ข้อมูลทางระบาดวิทยาระบุอุบัติการณ์ของ STC ในหญิงสาวสูงกว่าเพศชาย [6] STC ทำให้เกิดอาการท้องผูกที่รักษายาก โดยแสดงการตอบสนองเพียงเล็กน้อยต่อการรักษาแบบอนุรักษ์นิยมและแนวโน้มของความผิดปกติของระบบประสาท ไม่ง่ายเหมือนโรคที่ใช้งานได้ แต่เรียกร้องให้มีการรักษาที่รุกรานและก้าวร้าว [7]

ยาเคมีในปัจจุบันจำนวนหนึ่ง เช่น ยาระบาย ยาระบายและสารคัดหลั่ง ถูกนำมาใช้อย่างทั่วถึง

รักษาอาการท้องผูก [8] แม้ว่าการใช้ยาจะถูกจำกัดเนื่องจากมีค่าใช้จ่ายสูงและผลข้างเคียงของช่องท้อง เช่น ปวด ตะคริว และท้องอืด [9] ในปัจจุบัน การควบคุมระบบทางเดินอาหารเป็นจุดสนใจหลักของการรักษาอาการท้องผูก Cisapride ถูกสร้างขึ้นครั้งแรกในฐานะสารส่งเสริมในการรักษาโรคกระเพาะ แต่ถูกถอนออกในภายหลังเนื่องจากความเสี่ยงของภาวะหัวใจเต้นผิดจังหวะ [10]

Tegaserod เป็น 5-hydroxytryptamine receptor antagonist แบบเลือกเฟ้นที่สามารถกระตุ้นการบีบตัวของลำไส้และการคัดหลั่ง [11, 12] Prucalopride เป็นอนุพันธ์ของ dihydro benzofuran carboxamide และ 5-HT receptor agonist ที่มีความเฉพาะเจาะจงและความจำเพาะสูง ซึ่งสามารถปรับปรุงกระเพาะอาหาร ลำไส้เล็ก และการเคลื่อนไหวของลำไส้ และทำงานได้เร็วขึ้นในการเปลี่ยนแปลง [13–15] ในฐานะที่เป็นอนุพันธ์ของ prostaglandin E1 lubiprostone สามารถเลือกเปิดใช้งานช่อง CIC เพื่อส่งเสริมการหลั่งในทางเดินอาหารและเพิ่มผลกระทบของการส่งผ่านลำไส้ [16]

การเคลื่อนไหวของอาการท้องผูกเป็นปัญหาที่แพร่หลาย แต่สาเหตุของอาการท้องผูกยังไม่ชัดเจน อย่างไรก็ตาม หลักฐานที่น่าเชื่อถือได้แสดงให้เห็นการมีส่วนร่วมของเซลล์คั่นระหว่างหน้าของ Cajal (ICC) ต่อการเกิดโรคของอาการท้องผูก [17] พบ ICC ระหว่างปลายประสาทและเซลล์กล้ามเนื้อเรียบในทางเดินอาหาร โดยทั่วไปแล้ว ICC ได้รับการยอมรับว่าเป็นเซลล์เครื่องกระตุ้นหัวใจสำหรับการทำงานของระบบทางเดินอาหารและเป็นตัวกลางในการส่งผ่านประสาทและกล้ามเนื้อ [18] จากการศึกษาพบว่าความหนาแน่นของ ICC ในลำไส้ใหญ่ของผู้ป่วยที่มีอาการท้องผูกในการขนส่งช้านั้นต่ำกว่ามากเมื่อเทียบกับผู้ป่วยปกติ [19] ดังนั้น จำนวน ICC ที่ลดลงอาจนำไปสู่การขาดแคลนกิจกรรมคลื่นช้า ซึ่งส่งผลต่อการตอบสนองต่อการหดตัวและกระตุ้นการขนส่งที่ล่าช้าในผู้ป่วยที่มีอาการท้องผูกที่เดินทางช้า สำหรับประเด็นนี้ การใช้ ICC ให้หายขาดโดยการใช้ยาอาจมีความสำคัญต่อการรักษาอาการท้องผูกในการขนส่งช้า

ยาสมุนไพรหลายชนิดและยาจีนโบราณ Mula เพิ่งได้รับความสนใจในฐานะยารักษาโรคแบบใหม่สำหรับการรักษาอาการท้องผูกเรื้อรังอันเป็นผลมาจากการผลิตอุจจาระที่ดีขึ้น [20, 21] เฮอร์บาCistancheเป็นยาสมุนไพรแผนโบราณที่ใช้รักษาโรคไตเรื้อรัง ภาวะมีบุตรยากของสตรี ภาวะมีประจำเดือนมาก และภาวะไร้สมรรถภาพทางเพศ [22, 23] เฮอร์บาCistancheป้องกันการตายของเซลล์ประสาทในสมองโดยการแสดงปัจจัยที่เกี่ยวข้องกับการตายของเซลล์และปัจจัยเกี่ยวกับระบบประสาทในเซลล์ MES23.5 [24] Herba Cistanche ยังได้แสดงให้เห็นถึงศักยภาพทางเภสัชกรรมในการรักษาโรคไต Yang-Qi Kidney-Yang Deficiency Syndrome ผลการศึกษาล่าสุดพบว่า HerbaCistancheเพิ่มระดับการหายใจของไมโตคอนเดรียและสถานะสารต้านอนุมูลอิสระของกลูตาไธโอนใน H9c2 cardiomyocytes [25]

TCM เชื่อว่าอาการท้องผูกมีความสัมพันธ์ใกล้ชิดกับไต เปิดที่อวัยวะเพศภายนอกและทวารหนัก ไตควบคุมการถ่ายปัสสาวะและการถ่ายอุจจาระ การขนส่งของเสียขึ้นอยู่กับการส่งเสริมพลังชี่ของไตและการบำรุงของหยินไต ถ้าไตหยางขาดหรือไฟประตูแห่งชีวิตดับลง ความแออัดของลำไส้ใหญ่ที่เย็นจัดจะส่งผลให้เกิดการชะงักงันของของเสีย อาการท้องผูกยังเกิดจากการเคลื่อนไหวของลำไส้แห้งเนื่องจากการขาดสาระสำคัญของไตไม่สามารถสร้างของเหลวได้เพียงพอ [26]

เฮอร์บาCistancheเป็นสมุนไพรรวมที่มีรสหวานและเค็มและอบอุ่นในธรรมชาติ เนื่องมาจากลำไส้ใหญ่และเส้นเมอริเดียนของไต มันสามารถบำรุงไตหยางและทำให้ลำไส้ชุ่มชื้นเพื่อบรรเทาอาการท้องผูก สมุนไพรเดี่ยวนี้และการเตรียมยาจีนที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการรักษาอาการท้องผูกด้วยประสิทธิภาพที่โดดเด่น [27]

ในประเทศจีน ผลกระทบของ HerbaCistancheรากของอาการท้องผูกได้รับการบันทึกไว้ [28, 29] และอ้างถึงใน Chinese Materia Medica ของ Shen Nong ว่า "ลำต้นแห้งฉ่ำของCistancheสายพันธุ์" [30] อย่างไรก็ตาม หลักฐานทางวิทยาศาสตร์เกี่ยวกับผลกระทบของ HerbaCistancheจนถึงตอนนี้ยังไม่มีรากของอาการท้องผูก ปริมาณยาที่มีประสิทธิภาพทางคลินิกคือ 20 กรัมต่อวันในตำรับยาจีน และผลทางคลินิกจะไม่เพิ่มขึ้นอีกเมื่อเพิ่มขนาดยา

ตั้งแต่ HerbaCistancheมีน้อยมาก [31] การกำหนดมาตรฐานขนาดยาทางคลินิกสำหรับการรักษา STC โดยการศึกษาทดลองไม่เพียงแต่ป้องกันการรักษาที่ล้มเหลวเนื่องจากปริมาณที่ไม่เพียงพอ แต่ยังช่วยให้ผู้ป่วยอยู่ห่างจากการสูญเสียทางเศรษฐกิจและแม้กระทั่งการใช้ยาเกินขนาด เราหวังว่า

ผลลัพธ์สามารถวางรากฐานทางวิทยาศาสตร์สำหรับยาใหม่สำหรับอาการท้องผูก ดังนั้น การตรวจสอบ Herba . ที่เป็นน้ำจึงเป็นสิ่งสำคัญCistanche'sหน้าที่ของการส่งเสริมลำไส้และการกระทำต่อ ICC ในการศึกษานี้

2. วัสดุและวิธีการ

2.1. การเตรียมสารสกัดน้ำของ Herba Cistanche

ทั้งหมด HerbaCistancheถูกซื้อจาก Nanjing Haichang Chinese Medicine Group Co., Ltd. (หนานจิง ประเทศจีน) ซึ่งเก็บเกี่ยว รวบรวม และแปรรูปตามหลักปฏิบัติทางชาติพันธุ์วิทยามาตรฐานจากสวนในพื้นที่ Sinkiang ของจีน ศาสตราจารย์ทู หลิน ลู่ จากมหาวิทยาลัยการแพทย์จีนนานกิง เมืองหนานจิง ประเทศจีน ยืนยันถึงเอกลักษณ์ของพืชได้ทางสัณฐานวิทยา ตัวอย่างใบสำคัญ (NUCMCHS-2015628) ถูกฝากไว้ที่วิทยาลัยวิทยาศาสตร์สุขภาพ มหาวิทยาลัยการแพทย์จีนนานกิง เมืองหนานจิง ประเทศจีน

สไลซ์เฮอร์บาCistancheชั่งน้ำหนัก 500 กรัม บดโดยใช้เครื่องปั่นไฟฟ้าและสกัดในน้ำกลั่นขนาด 5,000 มล. หลังจากนั้นสารสกัดที่เป็นน้ำถูกทำให้บริสุทธิ์ที่ 100 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 2 ชั่วโมง โดยใช้อุปกรณ์สกัดแบบหมุนเวียน

รูขุมขนเมมเบรน (Millipore, Billerica, MA, USA) และสารตกค้างที่ได้จากสารสกัดถูกละลายในน้ำ 4000 มล. หลังจากการสกัดกรดไหลย้อน สารสกัดจะถูกรวบรวมและระเหยเพื่อให้ได้ผลิตภัณฑ์ตัวอย่างสุดท้าย สารสกัดที่เป็นน้ำถูกทำให้เข้มข้นจนเป็นเม็ดแห้ง (1 กรัม/มล.) โดยใช้a

สำหรับการใช้งานในภายหลัง ตัวอย่างที่เป็นของแข็งถูกสร้างใหม่ในน้ำกลั่นเพื่อให้ปริมาณที่ต้องการคือ 10, 20 และ 40 มก./กก. ของน้ำหนักตัวสำหรับการทดลอง

2.2. สัตว์.

โปรโตคอลการทดลองที่ใช้ในการศึกษานี้ได้รับการตรวจสอบและอนุมัติตามขั้นตอนทางจริยธรรมและการดูแลทางวิทยาศาสตร์โดยคณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ประจำสถาบันการแพทย์แผนจีนแห่งโรงพยาบาลซูโจว เมืองซูโจว ประเทศจีน (SHTCM-IACUC; หมายเลขอนุมัติ: PNU{{2} }) หนูทุกตัว (สายพันธุ์ Sprague Dawley) ที่มี ag ถูกซื้อมาจากศูนย์วิจัยสัตว์ทดลองแห่งเซี่ยงไฮ้ตามแนวทางของสถาบันสุขภาพแห่งชาติ สัตว์เหล่านี้เข้าถึงอาหารมาตรฐานได้ฟรี (AIN-93 M) และน้ำประปาโดยอิสระ และถูกเลี้ยงแยกกันในความชื้นสัมพัทธ์ที่เป็นเปอร์เซ็นต์ของเหล็กกล้าไร้สนิม และสัมผัสกับแสงธรรมชาติ 12 ชั่วโมงและความมืด 12 ชั่วโมงทุกวัน

2.3 การออกแบบทดลอง

loperamide ถูกใช้เพื่อทำให้เกิดอาการท้องผูกในหนูตามการศึกษาก่อนหน้านี้ [32, 33] สุ่มหนูทั้งหมด 60 ตัว แบ่งเป็น 5 กลุ่ม (ต่อกลุ่ม): A: กลุ่มปกติ (NG), B: กลุ่มรุ่น (Lop plus กลุ่มที่บำบัดด้วยกระสายยา), C: กลุ่มหนูท้องผูกที่บำบัดด้วยสารสกัดที่เป็นน้ำต่ำของ Herba Cistanche (กลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย Lop plus LAEHC), D: กลุ่มของหนูที่ท้องผูกที่รักษาด้วยสารสกัดที่มีน้ำปานกลางของ Herba Cistanche (Lop plus MAEHC-treated group) และ E: กลุ่มของหนูที่ท้องผูกที่รักษาด้วยสารสกัดจาก Herba Cistanche (กลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย Lop plus HAEHC) กลุ่ม A ถูกบำบัดด้วยน้ำเกลือปกติ (10 มล./กก.); กลุ่ม B ได้รับการรักษาด้วยโลเพอราไมด์

(4 มก./กก.); กลุ่ม C ถูกบำบัดด้วยโลเพอราไมด์ (4 มก./กก.) และสารสกัดที่มีน้ำต่ำของ Herba Cistanche (1 ก./กก.); กลุ่ม D ถูกบำบัดด้วยโลเพอราไมด์ (4 มก./กก.) และสารสกัดน้ำปานกลางของ Herba Cistanche (2 ก./กก.) และกลุ่ม E ถูกบำบัดด้วยโลเพอราไมด์ (4 มก./กก.) และสารสกัดที่เป็นน้ำสูงของ Herba Cistanche (4 ก./กก.) กิโลกรัม). หนูทั้งหมดจากกลุ่มปกติถูกฉีดด้วยโซเดียมคลอไรด์ 0.9 เปอร์เซ็นต์ ในขณะที่หนูตัวอื่นๆ ถูกฉีดด้วยโลเพอราไมด์ในโซเดียมคลอไรด์ 0.9 เปอร์เซ็นต์ วันละสองครั้งเป็นเวลา 3 วันติดต่อกันเพื่อทำให้เกิดอาการท้องผูก สารสกัดที่เป็นน้ำของ Herba Cistanche ถูกระงับในน้ำและถูกบริหารให้รับประทานวันละครั้งตั้งแต่วันที่ 4 ถึงวันที่ 18 ในกลุ่ม C, กลุ่ม D และกลุ่ม E ในขณะที่กลุ่ม A และ B ได้รับปริมาณน้ำที่สม่ำเสมอผ่านทางสายน้ำ

2.4. สภาพโครมาโตกราฟี

การทำโปรไฟล์ HPLC ดำเนินการในระบบ Shimadzu Liquid Chromatographic System (โตเกียว ประเทศญี่ปุ่น) ซึ่งประกอบด้วยปั๊ม LC-20AT และ

ถูกเฝ้าติดตามที่ 330 นาโนเมตร ที่ 30 C. เฟสเคลื่อนที่แบบไอโซเครติกประกอบด้วยเมทานอล 0.1 เปอร์เซ็นต์ กรดฟอร์มิก (80: 20, v/v) และวิ่งที่อัตราการไหล 1.0 มล./นาที . การแยกโครมาโตกราฟีคือ

ขนาดอนุภาค 5 ม., Beijing Dikma Science and Technology Co., Ltd., ปักกิ่ง, จีน)

2.5. การวิเคราะห์การออกกำลังกาย การรับประทานอาหาร การดื่มน้ำ ร่างกาย

กัมที่เหมาะแก่การเพาะปลูก (สารแขวนลอยในน้ำของถ่าน 20 เปอร์เซ็นต์และกัม 10 เปอร์เซ็นต์ที่เหมาะแก่การเพาะปลูก) ถูกบริหารให้ทางปากที่ปริมาตร 25 มล./กก. ของสัตว์แต่ละตัว หลังจากผ่านไป 30 นาที สัตว์เหล่านี้ได้รับการสังเวยอย่างมนุษย์โดยการเคลื่อนของปากมดลูกและผ่าออก ลำไส้เล็กจากไพโลเรอสไปยังลำไส้ใหญ่ส่วนต้นถูกสำรวจและวัดระยะทางที่ปกคลุมด้วยถ่านป่นและความยาวรวมของลำไส้เล็ก สำหรับหนูแต่ละตัว เปอร์เซ็นต์ของการขนส่งในลำไส้คำนวณเป็นเปอร์เซ็นต์ของระยะทางที่อาหารถ่านเดินทางสัมพันธ์กับความยาวทั้งหมดของลำไส้เล็ก สมการต่อไปนี้คำนวณอัตราการขนส่งของลำไส้ (เปอร์เซ็นต์): ระยะทางที่ถ่านเคลื่อนที่/ระยะทางจากไพโลรัสไปยังลำไส้ใหญ่ส่วนต้น 100 เปอร์เซ็นต์

2.6. ตัวอย่างเลือดและการเก็บเนื้อเยื่อ เมื่อสิ้นสุดระยะเวลาทดลอง หนูต้องอดอาหารเป็นเวลา 12 ชั่วโมง แต่ได้รับอนุญาตให้เข้าถึงน้ำได้ฟรี จากนั้นหนูทุกตัวได้รับการดมยาสลบ 30 นาทีต่อมาโดยการฉีดโซเดียม เพนโทบาร์บิทัล (50 มก./กก.) เข้าช่องท้อง และวางไว้บนโต๊ะที่มีการควบคุมอุณหภูมิ ตัวอย่างเลือดถูกรวบรวมและหมุนเหวี่ยงที่ 3500 รอบต่อนาที เป็นเวลา 15 นาทีเพื่อให้ได้ซีรัม ลำไส้ใหญ่ถูกแยกออกทันทีและล้างด้วยน้ำเกลือปกติที่ 4 C แล้วแบ่งเป็นสองส่วน ชิ้นส่วนหนึ่งได้รับการแก้ไขในฟอร์มาลิน 10 เปอร์เซ็นต์และแปรรูปในพาราฟินแยกส่วนสำหรับการวิเคราะห์อิมมูโนฮิสโตเคมี (IHC) ที่ตามมา ในขณะที่อีกชิ้นคือน้ำหนักและผม การเปลี่ยนแปลงในการออกกำลังกาย การรับประทานอาหาร การดื่มน้ำ

เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 80 องศาเซลเซียส จนกว่าจะได้รับการทดสอบ มีการสังเกตการบริโภค น้ำหนักตัว และเส้นผมทุกวันตลอดช่วงการทดลอง เราสังเกตเห็น "การเปลี่ยนแปลงในการออกกำลังกาย" โดยทำตามขั้นตอนเฉพาะ: กล่องทำเอง (สูง 60 ซม. ยาว 50 ซม. และกว้าง 80 ซม. พร้อมผนังสีเข้ม) ใช้สำหรับการทดสอบภาคสนาม พื้นสีขาวแบ่งออกเป็นเพชร (12 ซม.) โดยเส้นสีดำในห้องมืดและเงียบสงบ หลอดไฟ 100 W แขวนอยู่เหนือกึ่งกลางกล่อง 1 ม. หนูถูกวางไว้ตรงกลางกล่องในวันที่ 4, 6, 12 และ 18 ของการสร้างแบบจำลอง จำนวนช่องสี่เหลี่ยมที่หนูผ่านภายใน 5 นาทีใช้เป็นคะแนนการเคลื่อนที่ในแนวนอน และเวลาตั้งตรงของหนูภายใน 5 นาทีใช้เป็นคะแนนการเคลื่อนที่ในแนวดิ่ง คะแนนแนวนอนและการเคลื่อนไหวบวกคะแนนการเคลื่อนไหวในแนวตั้งระบุจำนวนการออกกำลังกายของหนู หนูแต่ละตัวถูกวัดครั้งเดียว [34, 35]

2.7. การวัดพารามิเตอร์อุจจาระ

ในวันสุดท้ายของการบริหารช่องปาก อุจจาระสดจากหนูแรท SD แต่ละตัวถูกเก็บในหลอดที่มีก้นกลมเป็นเวลา 6 ชั่วโมง และบันทึกน้ำหนักรวมจากแต่ละกลุ่ม ในการกำหนดปริมาณความชื้นในอุจจาระ เราใช้เครื่องชั่งไฟฟ้าเพื่อทำให้อุจจาระแห้งจนได้น้ำหนักคงที่และวัดน้ำหนักแห้ง ปริมาณความชื้น

2.8. การประเมิน GAS, MTL, SS และ CGRP

ความเข้มข้นของ gastrin (GAS), motilin (MTL), somatostatin (SS) และ calcitonin gene-related peptide (CGRP) ในซีรัมประเมินโดย ELISA โดยใช้ชุดเครื่องมือที่มีจำหน่ายทั่วไป

2.9. การวิเคราะห์ทางเนื้อเยื่อวิทยา.

ทวิภาคตามขวางที่เก็บจากหนูแรท SD ถูกตรึงด้วยฟอร์มาลิน 10 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 12 ชั่วโมงฝังตัว

m ชิ้นหนาที่ย้อมด้วย hematoxylin และ eosin (H&E, Sigma- Aldrich, MO, USA) ลักษณะทางสัณฐานวิทยาของส่วนเหล่านี้ถูกสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง หลังจากนั้นจึงวัดความยาววิลลัส ความหนาของคริสตัล และความหนาของกล้ามเนื้อโดยใช้ Leica Application Suite (Leica Microsystems, ประเทศสวิสเซอร์แลนด์)

2.10. การวิเคราะห์อิมมูโนฮิสโตเคมี.

เราปฏิบัติตามวิธีการของ Zhu et al (2016) [36]; ส่วนที่ไม่ย้อมสี 5 ม. คือ

ย้อมด้วย anti-c-kit ของกระต่าย (1: 100) ที่ 4 C ค้างคืน ใช้แอนติบอดีทุติยภูมิและวิธีการที่ซับซ้อนของ avidin-biotin-peroxidase ตามคำแนะนำของผู้ผลิต กลุ่มควบคุมเชิงลบของอิมมูโนโกลบุลินถูกใช้เพื่อกำจัดการจับที่ไม่จำเพาะ ระดับการแสดงออกของ c-kit

2.11. การวิเคราะห์อัตราการขนส่งในลำไส้.

อัตราส่วนการขนส่งลำไส้ดำเนินการตามโปรโตคอลที่รายงานไว้ก่อนหน้านี้ [36]; ในช่วงสั้น ๆ หลังจากการรักษา 14 วัน หนู SD ทั้งหมดต้องอดอาหาร 12 ชั่วโมง แต่ได้รับอนุญาตให้เข้าถึงน้ำได้ฟรี

ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสแบบเรียลไทม์ ระดับการแสดงออกของยีนของ c-kit, SCF และ PI3K mRNAs ในลำไส้ใหญ่ถูกกำหนดโดยใช้ชุดการสกัด RNA ทั้งหมด (TIANGEN Biotech,

ปักกิ่ง ประเทศจีน) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต PCR แบบเรียลไทม์ดำเนินการด้วย ABI StepOnePlus Real-Time PCR System (ABI) SYBR Green I Real-Time PCR Master Mix (QPK201, Toyobo, Japan) ถูกใช้เพื่อตรวจจับผลิตภัณฑ์ PCR ปฏิกิริยาถูกดำเนินการในการดำเนินการสามเท่า ต่อมาเนื้อเยื่อลำไส้ใหญ่ของหนูสดน้ำหนัก 0.5 กรัมถูกโฮโมล็อก-

l) สกัดตามคำแนะนำของผู้ผลิตโดยใช้ TRIzol Reagent (Invitrogen, USA) ชุด Reverse transcription-PCR (Takara Biotechnology Co., Inc.) ถูกใช้เพื่อสังเคราะห์สาย cDNA สายแรกตามโปรโตคอลของผู้ผลิต พารามิเตอร์เป้าหมายทั้งหมดแสดงในตารางที่ 1 โปรโตคอลการปั่นจักรยานอยู่ภายใต้เงื่อนไขต่อไปนี้: 95 C เป็นเวลา 5 นาที (DNA denaturation) ตามด้วย 40 รอบของ 95 C เป็นเวลา 15 วินาที, 60 C เป็นเวลา 20 วินาที และ 72 C สำหรับ 40 วิ การวิเคราะห์เส้นโค้งหลอมเหลวถูกดำเนินการที่จุดสิ้นสุดของรอบการขยายกำลัง

2.12. การวิเคราะห์ Western Blot

ปริมาณโปรตีนของ c-kit และ SCF ในตัวอย่างลำไส้ใหญ่ที่เป็นเนื้อเดียวกันถูกประเมินโดย Western blot โดยสังเขป โปรตีนทั้งหมดของโฮโมจีเนตถูกกำหนดโดยใช้การทดสอบกรดบิซินโชนินิก (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA) เจลโซเดียม dodecyl sulfate-polyacrylamide (SDS-PAGE) ใช้เพื่อแยกตัวอ่อนออกจากระบบอิเล็กโตรโฟรีซิสของ BioRad (BioRad Laboratories, Hercules, CA, USA) จากนั้น โปรตีนถูกถ่ายโอนไปยังเมมเบรนโพลีไวนิลลิดีน ไดฟลูออไรด์ (PVDF) หลังจากการบำบัด 2 ชั่วโมงด้วยบัฟเฟอร์การบล็อกใน TBS ที่มีนมไขมันไม่อิ่มตัวร้อยละ 5 ที่อุณหภูมิห้อง เยื่อ PVDF ถูกฟักในชั่วข้ามคืนด้วย 1 : 1,000 สารต้าน c-kit เจือจาง (ซานตาครูซ แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา), 1 : 500 สารต่อต้านซีเจือจางเจือจาง SCF (ซิกมา, มิสซูรี,

สหรัฐอเมริกา) และแอนติบอดีต่อต้านแอกตินเจือจาง 1: 8000 (คังเฉิน เซี่ยงไฮ้ จีน) ตามลำดับ ตรวจพบการจับของแอนติบอดีปฐมภูมิโดยใช้แอนติบอดีรอง HRP- conjugated ที่สอดคล้องกัน (Beyotime, Jiangsu, China) ชุดเคมีเรืองแสงที่ได้รับการปรับปรุง (Pierce Biotechnology Inc., Rockford, IL, USA) และ Odyssey Infrared Imaging System (Gene Company Ltd., Hong Kong) ถูกนำมาใช้ในการตรวจจับสารเคมี ใช้โปรแลคตินในการดูแลทำความสะอาดเป็นตัวควบคุมการโหลด ปริมาณของการแสดงออกของโปรตีนแสดงโดยสัมพันธ์กับระดับของแอคติน

2.13. การวิเคราะห์ทางสถิติ.

ข้อมูลการวัดถูกรายงานเป็นค่าความคลาดเคลื่อนมาตรฐานเฉลี่ยของค่าเฉลี่ย (SEM) และวิเคราะห์โดยSPSS

16.0 ซอฟต์แวร์ (SPSS, ชิคาโก, อิลลินอยส์, สหรัฐอเมริกา) การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) ตามด้วยการทดสอบหลายช่วงของ Duncan ใช้เพื่อกำหนดความแตกต่างที่มีนัยสำคัญในพารามิเตอร์ทั้งหมด ค่ามีนัยสำคัญทางสถิติที่

3. ผลลัพธ์

3.1. องค์ประกอบและส่วนประกอบเชิงหน้าที่ของ Herba Cistanche

ดังแสดงในรูปที่ 1 รากของ Herba Cistanche มีความเข้มข้นสูงของส่วนประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพหลายอย่างที่เกี่ยวข้องกับฤทธิ์เป็นยาระบาย ความเข้มข้นของอิชินาโคไซด์ทั้งหมดและเวอร์บาโคไซด์ทั้งหมดเท่ากับ 0.64 มก./กรัม และ 0.16 มก./กรัม ตามลำดับ พีคสองพีคซึ่งบ่งชี้ระดับเอไคนาโคไซด์และเวอร์บาสโคไซด์ที่สูงถูกตรวจพบใน LP ที่เวลาการคงอยู่ที่เหมาะสมโดยโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง (HPLC)

3.2. การสังเกตทั่วไป

หนู SP ไม่ตายตลอดการทดลอง แสดงถึงความปลอดภัยและการทำงานของแบบจำลองสัตว์ที่ดีขึ้น เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม A หนูในกลุ่มตัวอย่างมีขนฟู อ่อนแรง อุจจาระแห้ง และ

แย่ลงด้วยการขยายเวลาการสร้างแบบจำลอง

3.3. ผลของ AEHC ต่อจำนวนอุจจาระและปริมาณความชื้นในหนูที่มีอาการท้องผูกที่เกิดจากโลเพอราไมด์

เมื่อเทียบกับอุจจาระปกติ อุจจาระในกลุ่ม B, C, D และ E แห้ง ขนาดเล็ก และแข็ง และไม่มีการปั่นป่วนก่อนการรักษา

หลังจากที่ทุกหนูถูกฉีดด้วย loperamide (การรักษาด้วยยาจะบรรเทาอาการของร่างกายและ 3 (b))

น้ำหนักไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญในทุกกลุ่มทดลอง แม้ว่ากลุ่ม E จะมีน้ำหนักตัวที่ต่ำกว่ากลุ่มทดลองอื่นๆ เล็กน้อย (รูปที่ 2(a)) นอกจากนี้ หนูแรท SD ที่มีอาการท้องผูกกินอาหารน้อยกว่ากลุ่ม A ( ) อย่างมีนัยสำคัญ ในขณะที่ความแตกต่างระหว่างกลุ่ม B, C, D และ E (รูปที่ 2(b)) ไม่มีนัยสำคัญ ปริมาณการใช้น้ำยังไม่เปลี่ยนแปลงระหว่างกลุ่ม A และกลุ่ม B นอกจากนี้ ยังไม่พบการใช้น้ำเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญใน

การรักษาด้วย AEHC นั้นไม่ได้ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงใดๆ แม้ว่าอัตราการถ่ายเทของลำไส้ในกลุ่ม C, D และกลุ่ม C, D และ E ที่สูงกว่าอย่างมีนัยสำคัญก็มีอัตราส่วนที่ต่ำกว่ากลุ่ม A อย่างมีนัยสำคัญ

3.4. ผลของ AEHC ต่ออัตราการส่งผ่านลำไส้เล็กในหนูที่มีอาการท้องผูกที่เกิดจากโลเพอราไมด์

ดังที่เห็นจากรูปที่ 4 ไม่พบความแตกต่างในช่วงเวลาการขนส่งของลำไส้เล็กที่เส้นฐานในห้ากลุ่ม กลุ่ม B มีอัตราส่วนการขับเคลื่อนของผงถ่านที่ต่ำกว่าอย่างเห็นได้ชัดเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม A (𝑃 < 0.01)="" แม้ว่าอัตราการเคลื่อนย้ายของลำไส้ในกลุ่ม="" c,="" d="" และ="" e="" จะสูงกว่าในกลุ่ม="" b="" อย่างมีนัยสำคัญ="" (𝑃="">< 0.05)="" กลุ่ม="" c,="" d="" และ="" e="" มีอัตราส่วนที่ต่ำกว่ากลุ่ม="" a="">

3.5. การแทรกแซงด้วย AEHC ช่วยเพิ่มฟังก์ชันดัชนีการเคลื่อนไหวของลำไส้ใหญ่บางส่วน

ระดับ GAS และ MTL ในซีรัมที่ได้จากหนูกลุ่ม B ลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่ม A (𝑃 < {{0}}.01,="" resp.)="" ในทางกลับกัน="" กลุ่ม="" c,="" d="" และ="" e="" (𝑃="">< 0.05,="" resp.)="" มีระดับ="" gas="" และ="" mtl="" ที่สูงกว่าอย่างมีประสิทธิภาพจากการบริหารสารสกัด="" herba="" cistanche="" เมื่อเทียบกับกลุ่ม="" b="" .="" ค่า="" ss="" ในหนูกลุ่ม="" b="" สูงกว่าเมื่อเทียบกับกลุ่ม="" a="" (𝑃="">< 0.01);="" กลุ่ม="" c,="" d="" และ="" e="" มีระดับ="" ss="" อ่อนลง="" (𝑃="">< 0.05)="" (รูปที่="" 5)="" เมื่อเปรียบเทียบกับหนูที่ท้องผูก="" ระดับ="" cgrp="" ในหนูปกติกลุ่ม="" a="" (𝑃="">< 0.01)="" และในกลุ่มที่บริหารโดย="" herba="" cistanche="" c,="" d="" และ="" e="" มีค่าคงที่="" (𝑃=""> 0.05)

3.6. การเปลี่ยนแปลงทางเนื้อเยื่อวิทยาของโคลอน

เพื่อตรวจสอบว่าการรักษาด้วย AEHC สามารถกระตุ้นการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างของเนื้อเยื่อลำไส้ใหญ่ได้หรือไม่ วัดความยาวของวิลลัส ความหนาของชั้นใต้ดิน และความหนาของกล้ามเนื้อในทวิภาคตามขวางของหนูในห้ากลุ่มหลังการย้อมสี H&E เมื่อเปรียบเทียบพยาธิสภาพของลำไส้ใหญ่ของหนูในทุกกลุ่ม เยื่อบุลำไส้จะเรียบและมีหลอดเลือดแดงขนาดเล็กและหลอดเลือดดำขนาดเล็กใน submucosa และเซลล์ไขมันจำนวนมาก นอกจากนี้ ชั้นกล้ามเนื้อยังประกอบด้วยเซลล์กล้ามเนื้อเรียบ และชั้นใต้ผิวหนังก็สมบูรณ์ ความยาวเฉลี่ยของวิลลัสสั้นกว่าในกลุ่ม A อย่างมีนัยสำคัญ (𝑃 < {0}}.01)="" อย่างไรก็ตาม="" ความยาวเฉลี่ยของวิลลัสในกลุ่ม="" c="" เพิ่มขึ้นมากกว่า="" 30="" เปอร์เซ็นต์อย่างมากเมื่อเทียบกับกลุ่ม="" b="" (รูปที่="" 6="" และ="" 7)="" (𝑃="">< 0.05)="" ในขณะเดียวกัน="" ความยาวเฉลี่ยของวิลลัสจะเพิ่มขึ้นอย่างมากในกลุ่ม="" d="" และ="" e="" เมื่อเทียบกับกลุ่ม="" b="" (รูปที่="" 6(a)="" และ="" 6(b))="" (𝑃="">< 0.01)="" นอกจากนี้="" การเปลี่ยนแปลงความหนาของกล้ามเนื้อมีความคล้ายคลึงกับความยาวของวิลลัสมาก="" ในกลุ่ม="" b="">

มีความบางลงอย่างมากเมื่อเทียบกับกลุ่ม A อย่างไรก็ตาม ระดับความหนาของกล้ามเนื้อในกลุ่ม C, D และ E เพิ่มขึ้น 30–35 เปอร์เซ็นต์เมื่อเทียบกับกลุ่ม B (รูปที่ 6 และ 7) โดยรวมแล้ว การค้นพบนี้บ่งชี้ว่า AEHC อาจเพิ่มความยาวของวิลลัสและความหนาของกล้ามเนื้อในลำไส้ใหญ่ของหนูที่ท้องผูก

3.7. การบริหารการรักษา AHEC เพิ่มการแสดงออกของโปรตีนของ c-Kit และ SCF

ตรวจพบอิมมูโนรีแอคทีฟในลำไส้ใหญ่เนื่องจากเซลล์ในทุกกลุ่มทดสอบเป็นบวกสำหรับ c-kit ดังแสดงในรูปที่ 8 ระดับการแสดงออกของ c-kit ในกลุ่ม B ต่ำกว่าระดับในกลุ่ม A (𝑃 < 0.05)="" ระดับการแสดงออกของ="" c-kit="" ในกลุ่ม="" c="" นั้นสูงกว่าในกลุ่ม="" b="" (𝑃="">< 0.{{20}}5)="" ในขณะที่="" c-kit="" มีมากขึ้นในกลุ่ม="" d="" และ="" e="" มากกว่าในกลุ่ม="" b="" (𝑃="">< 0.05)="" หลังจากการรักษาด้วยสารสกัด="" herba="" cistanche="" ในน้ำที่มีความเข้มข้นต่างกันเป็นเวลา="" 2="" สัปดาห์="" ระดับการแสดงออกของโปรตีนของ="" c-kit="" และ="" scf="" จะถูกตรวจพบโดย="" western="" blot="" analysis="" การวิเคราะห์="" western="" blot="" แสดงให้เห็นว่าระดับการแสดงออกของ="" c-kit="" และ="" scf="" ลดลงอย่างน่าทึ่งหลังการรักษาด้วยโลเพอราไมด์ในโคลอนของหนูแรท="" (รูปที่="" 9)="" รูปที่="" 8(e)="" แสดงให้เห็นว่า="" c-kit="" ที่ลดลงในหนูที่ท้องผูกเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ="" 31.2="" เปอร์เซ็นต์หลังจากรักษาหนูด้วย="" aehc="" 500="" ไมโครกรัม/มิลลิลิตร="" (𝑃="">< 0.05)="" นอกจากนี้="" การบำบัดด้วย="" aehc="" 100="" และ="" 200="" กรัม/มล.="" เพิ่มระดับการแสดงออกของโปรตีน="" c-kit="" การแสดงออกของโปรตีน="" scf="" เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ="" 20.1,="" 24.7="" และ="" 8.4="" เปอร์เซ็นต์ที่การบำบัดด้วย="" aehc="" 100,="" 200="" และ="" 500="" ไมโครกรัม/มิลลิลิตร="" ตามลำดับ="" (รูปที่="" 9)="" 3.8.="" ผลของ="" aehc="" ต่อการแสดงออกของ="" mrna="" ของ="" c-kit,="" scf="" และ="" pi3k="" เพื่อตรวจสอบว่าการรักษาด้วย="" aehc="" สามารถส่งผลต่อการควบคุมของ="" mrna="" ที่เกี่ยวข้องกับการหดตัวของกล้ามเนื้อหรือไม่="" การเปลี่ยนแปลงในระดับการแสดงออกของ="" c-kit,="" scf="" และ="" pi3k="" ถูกสังเกตพบในทวิภาคของหนูท้องผูกโดยใช้ไพรเมอร์จำเพาะ="" ผลการศึกษาพบว่าระดับ="" mrna="" ของ="" c-kit="" ในกลุ่ม="" b="" ต่ำกว่าอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่ม="" a="" (𝑃="">< 0.05)="" ในขณะที่ระดับ="" mrna="" ในกลุ่ม="" c,="" d="" และ="" e="" สูงกว่ากลุ่ม="" b="" (𝑃="">< 0.05)="" (รูปที่="" 10).="" นอกจากนี้เรายังตรวจสอบ="">

การแสดงออกของ SCF ซึ่งเป็นลิแกนด์ของคิท การแสดงออก mRNA ของ SCF ในหนูแรทกลุ่ม B ต่ำกว่าในกลุ่ม A อย่างมีนัยสำคัญ ในขณะที่การบำบัดด้วย AEHC ในกลุ่ม C, D และ E เพิ่มการแสดงออกของ SCF mRNA (รูปที่ 10) นอกจากนี้เรายังตรวจสอบผลกระทบของ AEHC ต่อการแสดงออกของยีน PI3K ในวันที่ 14 ระดับการแสดงออกของยีน PI3K สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม C, D และ E มากกว่าในกลุ่ม B (𝑃 <>

4. การอภิปราย

อาการท้องผูกเป็นความผิดปกติที่พบได้บ่อยมาก โดยมีลักษณะการเคลื่อนไหวของลำไส้ไม่ดี ทำให้คุณภาพชีวิตลดลงอย่างมากและก่อให้เกิดภาระทางเศรษฐกิจมหาศาลต่อทั้งผู้ป่วยและการประกันสุขภาพของประเทศ [32] ผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติและอาหารยาดึงดูดความสนใจเพิ่มมากขึ้นเรื่อยๆ เนื่องจากมีความเป็นไปได้ที่จะเป็นยาชนิดใหม่ที่ใช้รักษาอาการท้องผูก [37, 38] ดังนั้นเราจึงศึกษาผลการรักษาของ AEHC ต่อหนูที่มีอาการท้องผูกที่เกิดจากโลเปราไมด์ Loperamide, atropine-diphenoxylate และ morphine ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายเพื่อทำให้เกิดอาการท้องผูกในสัตว์ทดลอง ในบรรดายาทั้งสามชนิด โลเพอราไมด์ทำให้เกิดการอพยพของอุจจาระเป็นเวลานานและความล่าช้าในการขนส่งลำไส้เล็กส่วนต้น เนื่องจากยานี้ยับยั้งทั้งการหลั่งน้ำและการเคลื่อนไหวที่ราบรื่นในผนังลำไส้ [39] การวิเคราะห์น้ำหนักตัวในการศึกษานี้ไม่พบความแตกต่างในแต่ละกลุ่ม หลังจากการทดลอง ไม่พบความแตกต่างเช่นกัน กลุ่มที่ได้รับยา AEHC ในปริมาณต่ำยังคงมีน้ำหนักตัวต่ำสุด แต่กลุ่มรุ่นและกลุ่มปกติมีน้ำหนักตัวสูงสุด อาการท้องผูกมักเป็นโรคเกี่ยวกับการทำงาน อาการท้องผูกที่เกิดจากการขนส่งช้าในการศึกษานี้ไม่ส่งผลต่อการดูดซึมสารอาหารของหนูและน้ำหนักตัวในระหว่างการทดลอง ความแตกต่างของปริมาณอุจจาระของหนูและความชื้นของหนูไม่มีอยู่จริงระหว่างกลุ่มต่างๆ ก่อนการสร้างแบบจำลอง อย่างไรก็ตาม ทั้งสองลดลงอย่างน่าทึ่งหลังจากการสร้างแบบจำลองและปริมาณความชื้นของอุจจาระเพิ่มขึ้นหลังจากใช้ AEHC ในปริมาณที่แตกต่างกัน หลังจากศึกษาอัตราการขับของผงคาร์บอนในลำไส้แล้ว

ของหนู กลุ่มตัวอย่างเห็นอัตราที่ลดลงอย่างเห็นได้ชัด ในขณะที่ยังคงปกติในกลุ่ม AEHC ที่ให้ยาขนาดต่ำ ปริมาณปานกลาง และขนาดสูง ผลการวิจัยพบว่าอาการท้องผูกที่เกิดจากการขนส่งเรื้อรังที่เกิดจาก loperamide ที่ได้รับการรักษาด้วย Herba Cistanche ขนาดต่างๆ สามารถฟื้นฟูการทำงานของสารขับดันของลำไส้ใหญ่ได้ในระดับต่างๆ ฮอร์โมนในระบบทางเดินอาหารเป็นสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพที่มีประสิทธิภาพสูงที่หลั่งโดยเซลล์ต่อมไร้ท่อของเยื่อบุทางเดินอาหารและตับอ่อน มีผลทั้งความตื่นเต้นและการยับยั้งเพื่อควบคุมการทำงานของระบบทางเดินอาหาร [40, 41] ซึ่ง GAS, MTL และ SS มีผลสำคัญ ฮอร์โมนสองชนิดก่อนหน้านี้กระตุ้นการหลั่งน้ำย่อย บีบกล้ามเนื้อเรียบในทางเดินอาหาร ส่งเสริมการเคลื่อนไหวของเนื้อหาในทางเดินอาหาร และกระตุ้นการเคลื่อนไหวของลำไส้เล็ก ในทางตรงกันข้าม SS ยับยั้งการหลั่งน้ำย่อย การหดตัวของกล้ามเนื้อเรียบในทางเดินอาหาร และการล้างข้อมูลในทางเดินอาหาร [42] ระดับ GAS และ MTL ในเนื้อเยื่อลำไส้ใหญ่ของกลุ่มแบบจำลองพบว่าต่ำที่สุด ซึ่งบ่งชี้ว่าวิธีการสร้างแบบจำลองลดความเข้มข้นของ GAS และ MTL ในเนื้อเยื่อลำไส้ใหญ่อย่างแน่นอน ในฐานะที่เป็นฮอร์โมนหลักของการเคลื่อนไหวของลำไส้ ความเข้มข้นของ GAS และ MTL เพิ่มขึ้นตามโดสต่างๆ ของ AEHC และทำให้การเคลื่อนไหวของลำไส้เพิ่มขึ้น ในทางตรงกันข้าม ระดับ SS ในเนื้อเยื่อลำไส้ใหญ่ของกลุ่มแบบจำลองนั้นสูงที่สุด ซึ่งบ่งชี้ว่าวิธีการสร้างแบบจำลองสามารถส่งเสริมความเข้มข้นของ SS ในเนื้อเยื่อลำไส้ใหญ่ได้ CGRP เป็นหนึ่งในยาขยายหลอดเลือดที่ทรงพลังที่สุด และเอฟเฟกต์การผ่อนคลายนั้นแข็งแกร่งกว่าการหดตัว 10-เท่า ในฐานะที่เป็นสารสื่อประสาทหรือสารสื่อประสาทที่สำคัญที่ควบคุมการทำงานของระบบย่อยอาหาร CGRP สามารถยับยั้งการเคลื่อนไหวของระบบทางเดินอาหารส่วนใหญ่และการหลั่งของน้ำย่อยต่างๆ [43] ความเข้มข้นของ CGRP ในกลุ่มแบบจำลองนั้นสูงกว่ากลุ่ม A ซึ่งบ่งชี้ว่าวิธีการสร้างแบบจำลองสามารถเพิ่มความเข้มข้นของ CGRP ในเนื้อเยื่อลำไส้ใหญ่ ซึ่งอาจเป็นหนึ่งในปัจจัยในการลดการบีบตัวของลำไส้ใหญ่ซึ่งจะทำให้ท้องผูก ความเข้มข้นของ CGRP ในเนื้อเยื่อลำไส้ใหญ่ของกลุ่ม AEHC ต่ำกว่าในกลุ่มแบบจำลอง ซึ่งบ่งชี้ว่า AEHC มีผลในการยับยั้งที่ค่อนข้างอ่อนแอต่อการเคลื่อนไหวของลำไส้ใหญ่ c-Kit เป็นโปรตีนเมมเบรน ปัจจัยเซลล์ต้นกำเนิด (SCF) ของลิแกนด์นั้นผลิตโดยเซลล์ประสาทและเซลล์กล้ามเนื้อเรียบ ส่งเสริมการพัฒนาและการสร้างความแตกต่างของ ICC และรักษาการทำงานทางสรีรวิทยาตามปกติ การติดฉลาก c-Kit สะท้อนถึงปริมาณและความหนาแน่นของ ICC [44, 45] ทางอ้อม นอกจากนี้ เซลล์ ICC ยังมีบทบาทสำคัญในการควบคุมการเคลื่อนไหวของระบบทางเดินอาหารและทำหน้าที่เป็นเครื่องกระตุ้นหัวใจในการเคลื่อนไหวของระบบทางเดินอาหาร ดังนั้นความผิดปกติของการเคลื่อนไหวของลำไส้เล็กส่วนต้นอาจพบว่าปริมาณและการทำงานของเซลล์ ICC ลดลง จากการศึกษาก่อนหน้านี้ จำนวนเซลล์ในลำไส้ใหญ่ของผู้ป่วยที่มีอาการท้องผูกเรื้อรังลดลง ดังนั้นการศึกษาในปัจจุบันจึงสังเกตเซลล์ลำไส้ใหญ่ของหนูโดยใช้การแสดงออกเฉพาะและเทคนิคอิมมูโนฮิสโตเคมี เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มปกติ จำนวนเซลล์ในกลุ่มแบบจำลองลดลงอย่างน่าทึ่ง แต่เพิ่มขึ้นหลังการรักษา การศึกษาแสดงให้เห็นว่าเซลล์ ICC และปัจจัยเซลล์ต้นกำเนิด (SCF) มีความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับเส้นทางสัญญาณ c-kit/SCF SCF เป็นลิแกนด์ตามธรรมชาติของ c-kit ที่แสดงออกในเนื้อเยื่อต่างๆ ของร่างกาย แต่ส่วนใหญ่

ผลิตโดยเซลล์สโตรมอลในไขกระดูก โมโนเมอร์ c-kit ทุกตัวรวมกับ SCF ผ่านโดเมนภายนอกเซลล์ 1–3 หลังจาก SCF dimerization โครงสร้างของ c-kit monomer จะเปลี่ยนแปลงและทำให้เกิด homodimerization ซึ่งส่งผลให้เกิด autophosphorylation ของกรดอะมิโนในเยื่อหุ้มเซลล์และกระตุ้นโมเลกุลสัญญาณที่สองต่างๆ เพื่อควบคุมการทำงานของเซลล์ของ ICC โมเลกุลสัญญาณที่สองคือ phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) ซึ่งเป็น apolipoprotein ที่แปลง 4,5- diphosphoinositide เป็น 3,4,5-triphosphoinositide ผ่านการรวมกันกับ tyrosine 721 ของ c-kit การวิจัยก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่าสารยับยั้ง PI3K Wortmannin และ LY294002 ทำให้เกิดการพัฒนา ICC ที่ผิดปกติโดยการปิดกั้นสัญญาณ [46] การทดลองของเราพบว่าการแสดงออกของโปรตีน c-kit และ SCF และ mRNA ในกลุ่มแบบจำลองลดลงในตอนแรก แต่จากนั้นก็เพิ่มขึ้นในกลุ่ม AEHC ที่มีขนาดยาต่างกัน แม้ว่าจะอยู่ในระดับที่ต่ำกว่าปกติ การแสดงออกของ mRNA ของ PI3K เพิ่มขึ้นอย่างน่าทึ่ง ดังนั้น SCF/c-kit อาจมีผลผ่าน PI3K ผลการวิจัยพบว่า AEHC สามารถควบคุมกล้ามเนื้อเรียบของทางเดินอาหารได้โดยการเพิ่มปริมาณเซลล์ ICC ปริมาณ AEHC ต่ำไม่มีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่ออาการท้องผูก ในขณะที่ปริมาณปานกลางและปริมาณสูงช่วยลดระยะเวลาการถ่ายอุจจาระของหนูในครั้งแรก เพิ่มความชื้นในอุจจาระ อัตราการขับของลำไส้ดีขึ้น ปรับปรุงปริมาณอุจจาระ เพิ่ม GAS ระดับ MTL และ CCK และทำให้การหดตัวของลำไส้ใหญ่แข็งแรงขึ้น ปริมาณ AEHC ที่มีประสิทธิผลในขั้นต้นคือ 20 กรัม/วันหลังการแปลง ซึ่งเทียบเท่ากับขนาดยาปานกลางและปริมาณสูงในการศึกษานี้

5. สรุปผลการวิจัย

AEHC ส่งเสริมการเคลื่อนไหวของลำไส้โดยการปรับปรุงการทำงานของ ICC และควบคุมสารสื่อประสาทในการศึกษานี้ ซึ่งพิสูจน์ว่า AEHC มีศักยภาพในการรักษาและป้องกันอาการท้องผูก สารสกัดปรับปรุงการผลิตคลื่นช้าของลำไส้ใหญ่และควบคุมจังหวะของการหดตัวของกิจกรรม SCF mRNA ปริมาณ PI3K mRNA ปริมาณ c-Kit mRNA ปริมาณ 12 ยาเสริมตามหลักฐานและยาทางเลือกของกล้ามเนื้อเรียบโดยการเพิ่มปริมาณ ICC ผ่าน PI3K/SCF/ ทางเดินสัญญาณ c-kit อย่างไรก็ตาม การศึกษาทดลองที่มีรายละเอียดเพิ่มเติมอาจช่วยเพิ่มความเข้าใจเกี่ยวกับวิถีทางโมเลกุลอื่นๆ ของ AEHC ในการบ่ม STC และช่วยแนะนำการศึกษาทางคลินิกในอนาคตเพื่อประเมินผลกระทบและความปลอดภัย

ผลประโยชน์ทับซ้อน

ผู้เขียนประกาศว่าไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์

ผลงานของผู้เขียน

Shuai Yan และ Yin-Zi Yue มีส่วนร่วมในงานนี้อย่างเท่าเทียมกัน ผู้เขียนทุกคนได้อนุมัติเอกสารฉบับสุดท้ายแล้ว

รับทราบ

งานนี้ได้รับการสนับสนุนโดยทุนจากมูลนิธิวิทยาศาสตร์ธรรมชาติแห่งชาติของจีน (NSFC) และได้รับทุนจากรัฐบาลจีน (81573979) การศึกษายังได้รับการสนับสนุนจากโครงการเทคโนโลยีของ Jiangsu Provincial Administration of Traditional Chinese Medicine, China (no. YB2017061), the Suzhou Scientific and Technological Development Program, China (no. SYSD2015172), Project of Suzhou Industrial Technology Innovation ประเทศจีน ( หมายเลข SYSD2016136 หมายเลข SYS201775 และหมายเลข SYS201776) และโครงการวิทยาลัยของโรงพยาบาล Suzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine ประเทศจีน (YQN2015007) ผู้เขียนขอขอบคุณการสนับสนุนทางการเงินจากโครงการที่ได้รับทุนจากมูลนิธิวิทยาศาสตร์หลังปริญญาเอกแห่งประเทศจีน (2017M620220)

อ้างอิง

[1] JY Chang, GR Locke, MA McNally, et al., "ผลกระทบของความผิดปกติของระบบทางเดินอาหารต่อการอยู่รอดในชุมชน" American Journal of Gastroenterology, vol. 105 หมายเลข 4, pp. 822– 832, 2010. [2] SM Mugie, M. A Bennington, and C. Di Lorenzo, "ระบาดวิทยาของอาการท้องผูกในเด็กและผู้ใหญ่: a systematic review," Best Practice & Research Clinical Gastroenterology, vol. 25 ไม่ 1, น. [3] NC Suares และ AC Ford, "ความชุกของ, และปัจจัยเสี่ยงสำหรับ, อาการท้องผูกไม่ทราบสาเหตุเรื้อรังในชุมชน: การทบทวนอย่างเป็นระบบและการวิเคราะห์อภิมาน" American Journal of Gastroenterology, vol. 106 หมายเลข 9, pp. 1582–1591, 2011. [4] A. Lembo และ M. Camilleri, "อาการท้องผูกเรื้อรัง" The New England Journal of Medicine, vol. 349 เลขที่ 14, pp. 1360–1368, 2003. [5] S. Singh, S. Heady, E. Coss-Adame และ SSC Rao, "อรรถประโยชน์ทางคลินิกของ manometry ลำไส้ใหญ่ในท้องผูกขนส่งช้า" Neurogastroenterology & Motility, vol. 25 ไม่ 6, pp. 487–495, 2013. [6] DM Preston และ JE Lennard-Jones, "อาการท้องผูกเรื้อรังอย่างรุนแรงของหญิงสาว: 'อาการท้องผูกในการขนส่งช้าไม่ทราบสาเหตุ" Gut, vol. 27 ไม่ 1, หน้า 41–48, 1986. [7] P. Kashyap, PJ Gomez-Pinilla, MJ Pozo, et al., "Immunoreactivity for Ano1 ตรวจพบการพร่องของเซลล์คั่นระหว่างหน้า Kit-positive ของ Cajal ในผู้ป่วยที่มีอาการท้องผูกช้า ," Neurogastroenterology & Motility, vol. 23 ไม่ 8, pp. 760–765, 2011. [8] JD Belsey, M. Geraint และ TA Dixon, "การทบทวนอย่างเป็นระบบและการวิเคราะห์อภิมาน: Polyethylene glycol ในผู้ใหญ่ที่มีอาการท้องผูกที่ไม่ใช่อินทรีย์" International Journal of Clinical Practice, vol . 64, ไม่ 7, pp. 944–955, 2010. [9] AC Ford และ NC Suares, "ผลของยาระบายและการรักษาทางเภสัชวิทยาในอาการท้องผูกไม่ทราบสาเหตุเรื้อรัง: การทบทวนอย่างเป็นระบบและการวิเคราะห์อภิมาน" Gut, vol. 60 ไม่ 2, pp. 209–218, 2011. [10] OM Aboumarzouk, T. Agarwal, R. Antakia, U. Shariff, and RL Nelson, "Cisapride forลำไส้ท้องผูก," Cochrane Database of Systematic Reviews, vol. 19 ไม่ 1, น. CD007780, 2011. [11] MA Kamm, S. Muller-Lissner, NJ Talley, et al., "Tegaserod for ¨ การรักษาอาการท้องผูกเรื้อรัง: A randomized, double-blind, placebo-controlled multinational study," American Journal of ระบบทางเดินอาหาร, เล่มที่. 100 ไม่ใช่ 2, pp. 362–372, 2005. [12] A. Shin, M. Camilleri, G. Kolar, P. Erwin, CP West และ MH Murad, "การทบทวนอย่างเป็นระบบด้วยการวิเคราะห์อภิมาน: เลือกสรรอย่างสูง {{80} } ตัวเร่งปฏิกิริยา HT4 (prucalopride, velusetrag หรือ naronapride) ในอาการท้องผูกเรื้อรัง" เภสัชวิทยาและการบำบัดทางเดินอาหาร, เล่มที่. 39 ไม่มี 3, pp. 239–253, 2014. [13] J.-H. Chen, Q. Zhang, Y. Yu et al., "คุณสมบัติทางประสาทและ Myogenic ของรูปแบบ Pan-Colonic Motor และองค์กร Spatiotemporal ในหนู" PLoS ONE, vol. 8 ไม่ 4, รหัสบทความ e60474, 2013. [14] VL Serebruany, ME Mouelhi, H.-J. Pfannkuche, K. Rose, M. Marro และ DJ Angiolillo "การตรวจสอบการแสดงออกของตัวรับ HT4 5- และผลกระทบของ tegaserod ต่อการรวมตัวของเกล็ดเลือดของมนุษย์ในหลอดทดลอง" American Journal of Therapeutics, vol. 17 ไม่ 6, pp. 543–552, 2010. [15] HS Winter, C. Di Lorenzo, MA Benninga, et al., "Oral prucalopride in children with functional diabetes," Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition, vol. 6, pp. 543–552, 2010. 57, ไม่ 2, pp. 197–203, 2013. [16] A. Bove, F. Puccini, M. Bellini, et al., "แถลงการณ์ที่เป็นเอกฉันท์ AIGO/SICCR: การวินิจฉัยและการรักษาอาการท้องผูกเรื้อรังและการถ่ายอุจจาระอุดตัน (ตอนที่ 1: การวินิจฉัย) )," World Journal of Gastroenterology, เล่มที่. 18, ไม่ 14, pp. 1555–1564, 2012. [17] GL Lyford, C.-L. He, E. Soffer, et al., "การลดลง Pan-colonic ในเซลล์คั่นระหว่างหน้าของ Cajal ในผู้ป่วยที่มีอาการท้องผูกช้า" Gut, vol. 51, ไม่ 4, หน้า 496–501, 2002. [18] J.-P. วัง, G.-F. Ding และ Q.-Z. Wang, "เซลล์คั่นระหว่างหน้าของ Cajal ไกล่เกลี่ยสารสื่อประสาทที่เห็นอกเห็นใจในต่อมลูกหมากหนูตะเภา" การวิจัยเซลล์และเนื้อเยื่อ, เล่มที่. 352 ไม่ 3, pp. 479–486, 2013. [19] W.-D. ต๋อง, บ.-ส. หลิว, แอล.-วาย. จาง, S.-B. Zhang และ Y. Lie "เซลล์คั่นระหว่างหน้าของ Cajal ลดลงในลำไส้ใหญ่ sigmoid ของผู้ป่วยที่มีอาการท้องผูกช้า" International Journal of Colorectal Disease, vol. 19 ไม่ 5, หน้า 467–473, 2004. [20] D. Wu, X. Wang, J. Zhou, et al., "สูตรจีนดั้งเดิม, ยาหล่อลื่นลำไส้, ปรับปรุงอาการท้องผูกของหนูที่เกิดจาก loperamide ที่เกี่ยวข้องกับการเสริมสร้าง Cl- การหลั่งทั่วเยื่อบุผิวลำไส้ใหญ่ส่วนปลาย" Journal of Ethnopharmacology, vol. 130 ไม่ใช่ 2, pp. 347–353, 2010. [21] D.-Y. เขาและเอส.เอ็ม. Dai, "ฤทธิ์ต้านการอักเสบและภูมิคุ้มกันของ Paeonia lactiflora Pall. ยาสมุนไพรจีนโบราณ" Frontiers in Pharmacology, vol. 1 2, บทความ 10, 2011. [22] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao และ C.-M. Tzeng, "Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): หนึ่งในของขวัญทางเภสัชกรรมที่ดีที่สุดของการแพทย์แผนจีน" Frontiers in Pharmacology, vol. 7 บทความ 41, 2016.