กฎระเบียบที่เป็นสื่อกลางของ HDAC1- ของการส่งสัญญาณ GABA ภายในผนังกั้นด้านข้างช่วยให้การสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคมในระยะยาวในหนูตัวผู้

โรควิตกกังวลทางสังคม (SAD) เกิดจากประสบการณ์ทางสังคมที่กระทบกระเทือนจิตใจ ลักษณะพิเศษคือความกลัวอย่างรุนแรงและการหลีกเลี่ยงบริบททางสังคม ซึ่งสามารถเลียนแบบได้อย่างแข็งแกร่งด้วยกระบวนทัศน์การปรับสภาพความกลัวทางสังคม (SFC) ระยะการสูญพันธุ์ของกระบวนทัศน์ SFC นั้นคล้ายกับการบำบัดแบบเปิดเผยสำหรับ SAD และจำเป็นต้องเรียนรู้ที่จะแยกความบอบช้ำทางจิตใจออกจากบริบททางสังคม อะซิติเลชั่นที่เกิดจากการเรียนรู้ของฮิสโตนมีความสำคัญอย่างยิ่งต่อการสร้างความทรงจำที่สูญพันธุ์และความอดทน แม้ว่าคลาส I ฮิสโตนดีอะเซติเลส (HDACs) จะควบคุมกระบวนการเรียนรู้ดังกล่าวข้างต้น แต่ก็ยังขาดความชัดเจนในไอโซฟอร์มและความจำเพาะเชิงพื้นที่ในฟังก์ชัน HDAC ในการเรียนรู้ทางสังคม ด้วยการใช้กระบวนทัศน์ SFC เรากำหนดลักษณะการทำงานของ HDAC1 โดยเฉพาะในผนังกั้นด้านข้าง (LS) ในการควบคุมการก่อตัวของความทรงจำการสูญเสียความกลัวทางสังคมในระยะยาว

การปฐมนิเทศมีความสำคัญมากในการเรียนรู้ การปฐมนิเทศที่เหมาะสมสามารถช่วยให้นักเรียนยอมรับความรู้อย่างมีสติมากขึ้น และเข้าใจและจดจำเนื้อหาการเรียนรู้ได้ลึกซึ้งยิ่งขึ้น เนื่องจากความทรงจำของผู้คนเป็นกิจกรรมทางจิตและเป็นการแสดงออกถึงสติปัญญา การปฐมนิเทศเป็นกิจกรรมการรับรู้เชิงบวกและสร้างสรรค์ ซึ่งสามารถกระตุ้นและชี้นำการคิดและจินตนาการของผู้คนในระหว่างกระบวนการรับรู้ ซึ่งจะช่วยเสริมสร้างความจำ

การเหนี่ยวนำสามารถทำได้หลายวิธี ตัวอย่างเช่น ครูสามารถตั้งปัญหาในระหว่างการบรรยายและให้นักเรียนคิดวิธีแก้ปัญหาด้วยตนเอง ซึ่งสามารถช่วยนักเรียนพัฒนาความสามารถในการวิเคราะห์ปัญหาและความจำอย่างครอบคลุม นอกจากนี้ ครูยังสามารถใช้ทรัพยากรการสอนที่หลากหลาย เช่น รูปภาพ เสียง วิดีโอ และวิธีการอื่นๆ เพื่อส่งเสริมการดูดซึมและความทรงจำของนักเรียน

ด้วยเหตุนี้จึงมีความสัมพันธ์ใกล้ชิดระหว่างการเหนี่ยวนำและหน่วยความจำ ด้วยการปฐมนิเทศที่เหมาะสม ผู้เรียนสามารถเข้าใจความรู้ได้ลึกซึ้งยิ่งขึ้นและเชี่ยวชาญเนื้อหาการเรียนรู้ได้ดีขึ้น ความเข้าใจอย่างลึกซึ้งนี้จะช่วยให้ผู้เรียนคงความรู้ไว้เป็นระยะเวลานานขึ้น และอำนวยความสะดวกในการประยุกต์สิ่งที่ได้เรียนรู้อย่างยืดหยุ่นในการเรียนรู้และการปฏิบัติในภายหลัง

กล่าวโดยสรุป การเหนี่ยวนำและหน่วยความจำแยกจากกันไม่ได้ เราจำเป็นต้องค้นหาวิธีการเรียนรู้และวิธีการปฐมนิเทศที่เหมาะสมผ่านการสำรวจและฝึกฝนอย่างต่อเนื่อง และปรับปรุงความจำและระดับการเรียนรู้ของเราอย่างต่อเนื่อง ด้วยวิธีนี้เท่านั้นที่เราจะสามารถแสดงความสามารถของเราอย่างเต็มที่ในชีวิตอนาคตได้ จะเห็นได้ว่าเราต้องปรับปรุงความจำของเรา Cistanche สามารถปรับปรุงความจำได้เนื่องจาก Cistanche เป็นสมุนไพรจีนโบราณที่มีลักษณะพิเศษมากมาย หนึ่งในนั้นคือการปรับปรุงความจำ ประสิทธิภาพของเนื้อสับมาจากส่วนผสมออกฤทธิ์หลายชนิดในเนื้อสับ เช่น กรดคาร์บอกซิลิก โพลีแซ็กคาไรด์ ฟลาโวนอยด์ ฯลฯ ส่วนผสมเหล่านี้สามารถส่งเสริมสุขภาพของสมองผ่านช่องทางต่างๆ

คลิกรู้อาหารเสริมเพื่อเพิ่มความจำ

เราวัดการเพิ่มขึ้นของฟอสโฟรีเลชั่น HDAC1 ที่กระตุ้นกิจกรรมในท้องถิ่นที่ซีรีนที่ตกค้างของหนูที่มีเงื่อนไขความกลัวทางสังคมและหนู d (SFC +) เพื่อตอบสนองต่อการสูญเสียความกลัวทางสังคม นอกจากนี้เรายังพบว่าฟังก์ชัน LS-HDAC1 มีความสัมพันธ์เชิงลบกับการเรียนรู้การสูญเสียความกลัวทางสังคมแบบเฉียบพลันโดยใช้วิธีทางเภสัชวิทยาและไวรัส นอกจากนี้ การยับยั้ง LS-HDAC1 ช่วยเพิ่มการแสดงออกของหน่วยย่อย GABA-A receptor 1 (Gabrb1) ในหนู SFC+ และการกระตุ้นการทำงานของตัวรับ GABA-A ช่วยอำนวยความสะดวกในการเรียนรู้การสูญพันธุ์แบบเฉียบพลัน ในที่สุด การอำนวยความสะดวกในการเรียนรู้การสูญพันธุ์โดยการยับยั้ง HDAC1 หรือการกระตุ้นตัวรับ GABA-A ภายใน LS ทำให้เกิดการก่อตัวของหน่วยความจำการสูญพันธุ์ที่ยาวนาน ซึ่งคงอยู่แม้กระทั่ง 30 วันหลังจากการสูญพันธุ์ ผลลัพธ์ของเราแสดงให้เห็นว่าการควบคุม GABA ที่เป็นสื่อกลางของ HDAC{17}} และการส่งสัญญาณใน LS มีความสำคัญอย่างยิ่งต่อการก่อตัวของความทรงจำที่ทำให้เกิดความกลัวทางสังคม การสูญพันธุ์ของความทรงจำ

การแนะนำ

โรควิตกกังวลทางสังคม (SAD) ที่เกิดจากประสบการณ์ทางสังคมที่เกลียดชังมีลักษณะเฉพาะคือความกลัวอย่างรุนแรงและการหลีกเลี่ยงสถานการณ์ทางสังคม [1, 2] การรักษา SAD ประกอบด้วยการบำบัดด้วยความรู้ความเข้าใจและพฤติกรรมโดยอาศัยการสัมผัส (CBT) ซึ่งสร้างความทรงจำ "ความปลอดภัย" ที่มีอยู่ร่วมกับความทรงจำที่เกลียดชังดั้งเดิม [3, 4] เนื่องจากสัญญาณเดียวกันสามารถกระตุ้นทั้งความทรงจำที่เกลียดชังและความปลอดภัยได้ พวกมันจะแข่งขันกันเมื่อถูกเรียกคืนด้วยสิ่งเร้าที่เกี่ยวข้อง และการติดตามความทรงจำที่โดดเด่นจะเป็นตัวกำหนดผลลัพธ์ของพฤติกรรม เป็นที่ทราบกันว่าความทรงจำด้านความปลอดภัยที่สร้างขึ้นโดย CBT แบบสัมผัสนั้นจะลดลงเมื่อเวลาผ่านไป ซึ่งนำไปสู่การตอบสนองต่อความกลัวที่หายไปก่อนหน้านี้ในผู้ป่วย SAD [5–7] ดังนั้นจึงจำเป็นที่จะต้องเข้าใจกลไกที่เป็นพื้นฐานของความทรงจำที่สูญพันธุ์อย่างยั่งยืนเพื่อพัฒนากลยุทธ์การรักษาที่นำไปสู่การบรรเทาอาการจาก SAD ที่สมบูรณ์และแข็งแกร่งยิ่งขึ้น

ด้วยเหตุนี้ เราจึงได้กำหนดกระบวนทัศน์การปรับสภาพความกลัวทางสังคม (SFC) ของผู้ดำเนินการ ซึ่งสร้างความกลัวที่รุนแรงและการหลีกเลี่ยงการสมรู้ร่วมคิดในหนู [8] ในกระบวนทัศน์นี้ การสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคมและการก่อตัวของความทรงจำการสูญเสียเกิดขึ้นจากการนำเสนอสิ่งเร้าทางสังคมต่างๆ ติดต่อกัน (สิ่งที่ไม่ทราบแน่ชัด) ส่งผลให้เกิดการสูญเสียความกลัวอย่างค่อยเป็นค่อยไปและเพิ่มการสืบสวนทางสังคมมากขึ้น [9] การศึกษาก่อนหน้านี้จากห้องปฏิบัติการของเราได้แสดงให้เห็นถึงการมีส่วนร่วมของกะบังด้านข้าง (LS) ในการสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคมที่เกิดจาก SFC ในหนู [10, 11] เป็นที่รู้กันว่า LS ควบคุมพฤติกรรมทางสังคมต่างๆ [12] ซึ่งได้รับการสนับสนุนโดยกลไกอีพีเจเนติกส์ที่ซับซ้อน [13] อย่างไรก็ตาม กลไกของ epigenetic ภายใน LS ที่ควบคุมการสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคม และการก่อตัวของความทรงจำการสูญพันธุ์ในระยะยาวยังไม่เป็นที่ทราบแน่ชัด

หลักฐานที่เห็นพ้องต้องกันชี้ให้เห็นถึงความสำคัญของอะซิติเลชั่นหลังการแปลความหมายของส่วนหางของฮิสโตนที่ตกค้างที่ปลาย N-terminal ในการรวมตัวกันและการบำรุงรักษาความทรงจำเกี่ยวกับความกลัว [14] Class I histone deacetylases (HDACs) ซึ่งกระตุ้นการกำจัดกลุ่ม acetyl ออกจากหางของ histone ที่ปลาย N เหล่านี้เป็นตัวควบคุมสำคัญของการแสดงออกของยีนที่เป็นพื้นฐานการเรียนรู้และความจำ [15] HDAC คลาส I เหล่านี้รวมถึง HDAC1, HDAC2, HDAC3 และ HDAC8 แสดงการพึ่งพาเชิงพื้นที่และบริบทที่น่าทึ่งในการทำงานของพวกเขา

ตัวอย่างเช่น พบว่า hippocampal HDAC1 ช่วยเพิ่มความจำแบบเชื่อมโยงในกระบวนทัศน์การปรับสภาพความกลัวตามบริบท ในขณะที่ hippocampal HDAC2 มีการเชื่อมโยงเชิงหน้าที่กับการด้อยค่าของวัตถุระยะยาวและการสร้างความจำเชิงพื้นที่ [17, 18] ในทำนองเดียวกัน กิจกรรม HDAC1 ได้รับการควบคุม ในขณะที่กิจกรรม HDAC2 ได้รับการควบคุมภายในต่อมทอนซิลและเยื่อหุ้มสมองส่วนหน้า ตามลำดับ ตามการปรับสภาพความกลัวตามสัญญาณ [19] การศึกษายังเกี่ยวข้องกับการมีส่วนร่วมที่แตกต่างกันของ HDAC3 ในการสร้างความทรงจำความกลัวตามบริบทและความกลัวที่หลีกเลี่ยงไม่ได้ในฮิบโปแคมปัสและต่อมทอนซิลฐานตามลำดับ [20]

เมื่อพิจารณาถึงการทำงานที่หลากหลายและซับซ้อนของคลาส I HDAC ในการควบคุมการเรียนรู้และความจำ สารยับยั้ง HDAC มักถูกใช้เป็นสารเพิ่มประสิทธิภาพการรับรู้ในการศึกษาก่อนคลินิกหลายครั้ง [21] อย่างไรก็ตาม การมีส่วนร่วมของ HDAC เฉพาะในการควบคุมความอดทนของความทรงจำที่สูญพันธุ์จากความกลัวทางสังคมยังคงเป็นเรื่องที่เข้าใจยาก

ดังนั้นในการศึกษานี้ เราตรวจสอบกฎระเบียบของ HDAC คลาส I ในบริบทของกระบวนทัศน์ SFC จากการเพิ่มขึ้นหลังการสูญพันธุ์ในซีรีนฟอสโฟรีเลชั่นที่กระตุ้นกิจกรรมของ HDAC1 เราได้จัดการฟังก์ชัน LS-HDAC1 โดยใช้การยับยั้งทางเภสัชวิทยาและการแสดงออกของไวรัสมากเกินไป นอกจากนี้ จากการติดตามการเพิ่มขึ้นของการแสดงออกของยีนที่เข้ารหัสสำหรับหน่วยย่อย 1 ของกรดแกมมา-อะมิโนบิวทีริก (GABA) ตัวรับ A (Gabrb1) เพื่อตอบสนองต่อการรวมกันของการปิดล้อม HDAC1 และการฝึกการสูญพันธุ์ เราได้เปิดใช้งานตัวรับ GABA-A การส่งสัญญาณภายใน LS ในที่สุด เราได้ทดสอบผลของการยับยั้ง LS-HDAC1 และการเปิดใช้งานตัวรับ LSGABA-A ต่อการสร้างหน่วยความจำการสูญพันธุ์ในระยะยาว ผลลัพธ์ของเราระบุว่า LS-HDAC1 ควบคุมการเรียนรู้การสูญเสียความกลัวทางสังคมในเชิงลบ และการเรียนรู้การสูญเสียความกลัวทางสังคมในระยะยาวผ่านการส่งสัญญาณ GABA-A

วัสดุและวิธีการ

สัตว์

หนู CD1 เพศผู้ (แม่น้ำชาร์ลส์เยอรมนี อายุ 8–11 สัปดาห์เมื่อเริ่มการทดลอง) ถูกเลี้ยงไว้เป็นกลุ่มภายใต้สภาวะห้องปฏิบัติการมาตรฐาน (รอบแสง/มืด 12/12 ชั่วโมง เปิดไฟที่ 06:00 22 องศา ความชื้น 60% อาหาร และน้ำ โดยไม่จำกัด) ในกรงโพลีคาร์บอเนต (16 × 22 × 14 ซม.) จนกระทั่งผ่าตัดหรือ 3 วันก่อนการทดลองเชิงพฤติกรรมแต่ละครั้ง หนู CD1 เพศผู้ที่จับคู่อายุและน้ำหนักถูกนำมาใช้เป็นสิ่งเร้าทางสังคมในกระบวนทัศน์ SFC ขั้นตอนการทดลองทั้งหมดดำเนินการระหว่าง 08:00 ถึง 12:00 ชม. โดยแนวทางการดูแลและการใช้สัตว์ทดลองของรัฐบาลแห่งอุนเทอร์แฟรงเกน แนวปฏิบัติ ARRIVE [22] และแนวปฏิบัติของ NIH.

กระบวนทัศน์ SFC

SFC ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [8] โดยมีการแก้ไขเล็กน้อยเพื่อวิเคราะห์การสูญพันธุ์ในระยะยาว:

การได้มาซึ่งความกลัวทางสังคม (วันที่ 1) หนูถูกวางไว้ในห้องปรับความกลัวและปล่อยให้คุ้นเคยเป็นเวลา 30 วินาทีก่อนที่จะสัมผัสกับกรงลวดตาข่ายที่ว่างเปล่าเป็นเวลา 3 นาที ซึ่งในระหว่างนั้นพวกมันสามารถตรวจสอบวัตถุได้อย่างอิสระ จากนั้นกรงเปล่าก็ถูกแทนที่ด้วยกรงที่เหมือนกันซึ่งมีอายุและน้ำหนักที่เหมือนกัน (สิ่งกระตุ้นแบบมีเงื่อนไข: CS) หนูปรับอากาศ (SFC+) ได้รับการกระแทกที่เท้าเล็กน้อย (สิ่งกระตุ้นที่ไม่มีเงื่อนไข: US; 0.7 mA, 1 วินาที) แต่ละครั้งที่พวกเขาตรวจสอบการสมรู้ร่วมคิด หนูที่ไม่มีเงื่อนไข (SFC−) ได้รับอนุญาตให้โต้ตอบกับกลุ่มตัวอย่างได้อย่างอิสระเป็นเวลา 3 นาที โดยปกติแล้ว หนู SFC+ จะหลีกเลี่ยงการเข้าใกล้หรือมีปฏิสัมพันธ์กับกลุ่มหลังการจับคู่ CS-US 1–3 ครั้ง ซึ่ง ณ จุดนี้ถือว่าหนูได้รับความกลัวทางสังคมและกลับคืนสู่กรงบ้าน

การสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคม (วันที่ 2) การสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคมเกิดขึ้นเหมือนกันในกรงบ้านของหนู SFC+ และ SFC− หนูบ้านเดี่ยวแต่ละตัวถูกสัมผัสสามครั้งในกรงลวดตาข่ายที่ว่างเปล่า จากนั้นสัมผัสหนูรุ่นอายุและน้ำหนักที่ต่างกันหกตัวเป็นเวลา 3 นาทีต่อตัว โดยมีช่วงระยะห่างระหว่างการกระตุ้น 3- นาที เวลาที่ใช้ในการตรวจสอบสิ่งกระตุ้นทางสังคมถูกวัดว่าเป็นตัวบ่งชี้ความกลัวทางสังคม

เรียกคืนความกลัวทางสังคม (วันที่ 3, วันที่ 32) สำหรับการเรียกคืนการสูญเสียความกลัวทางสังคมในระยะสั้น หนูได้สัมผัสกับสิ่งเร้าทางสังคมที่แตกต่างกัน 6 ชนิดในกรงที่บ้านเป็นเวลา 3 นาที โดยมีการแทรกแซงระหว่างการกระตุ้นขั้นต่ำ 3- นาที สำหรับการเรียกคืนการสูญพันธุ์จากความกลัวทางสังคมในระยะยาว หนูจะถูกทดสอบในกรงที่บ้านของพวกเขา 30 วันหลังจากการสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคม อายุที่เท่ากันกับน้ำหนักที่เท่ากันนั้นได้สัมผัสกับสิ่งเร้าทางสังคมที่แตกต่างกันสองครั้ง เป็นเวลา 3 นาทีต่อครั้ง โดยมีช่วงเวลาคั่นกลาง 3- นาที

การฝัง Stereotaxic

คู่มือ cannulbygth; Injecta GmbH) สำหรับการแช่ยาทวิภาคีเข้าไปใน LS ได้รับการปลูกถ่ายแบบสเตอริโอแทกซีโดยให้ปลายวางอยู่เหนือบริเวณเป้าหมาย LS 2 มม. (จาก bregma: ด้านหน้า–ด้านหลัง: −0.3 มม., ด้านข้างปานกลาง: ±0 .5 มม., บริเวณด้านหลัง: −1.6 มม. [23]) ภายใต้การดมยาสลบแบบไอโซฟลูเรน (Forene, Abbott GmbH) [10, 24] หนูทุกตัวได้รับการฉีดยาปฏิชีวนะใต้ผิวหนัง (10 มก. / กก. Baytril, Bayer GmbH) และยาแก้ปวด (0.05 มก. / กก. Buprenorphine, Bayer) เพื่อหลีกเลี่ยงการติดเชื้อและความเจ็บปวดหลังการผ่าตัด เพื่อลดความเครียดหลังการผ่าตัด หนูทุกตัวได้รับการจัดการวันละครั้งเป็นเวลาอย่างน้อย 5 วันก่อนการทดลอง โดยที่ท่อส่งจำลองที่ปิดท่อนำนั้นถูกฆ่าเชื้อ

การฉีดยาเข้าช่องท้อง

หนูได้รับการฉีด MS275 ในระดับทวิภาคี (ตัวยับยั้งโมเลกุลขนาดเล็กแบบออร์โธ-อะมิโนคอนสเปคทีฟที่มีความสัมพันธ์สูงสำหรับ HDAC1; 375 ng/0.2 µl/ ซีกโลก) [16, 25], มัสซิมอล (Muc; GABA-A แบบคัดเลือก ตัวเอกของตัวรับ; 0.2 µg/0.2 µl/ซีกโลก) [26, 27] หรือกระสายยา (Veh; 0.2 µl/ซีกโลก; 0 DMSO 5% ในริงเกอร์ปลอดเชื้อ) ลงใน LS ผ่านทางแคนนูลาสำหรับการแช่ 27 G ที่สอดเข้าไปในแคนนูลานำทางที่เชื่อมต่อกับกระบอกฉีดแฮมิลตัน 10-µl การเติม MS275 และ Muc ดำเนินการ 120 นาทีหรือ 10 นาทีก่อนการฝึกการสูญพันธุ์ของ SFC ตามลำดับ มีเพียงสัตว์ที่มีตำแหน่งการฉีดยาที่ถูกต้องและผ่านการตรวจสอบทางจุลพยาธิวิทยาเท่านั้นที่จะรวมอยู่ในการวิเคราะห์ทางสถิติ

การฉีดยาจากไวรัสในช่องท้อง

ไวรัสที่เกี่ยวข้องกับ Adeno (AAV; Vector Biolabs) สำหรับการแสดงออกมากเกินไปของ HDAC1 เช่น AAV-hSyn-HDAC1-GFP-WPRE (HDAC1-OE; 2.5 × 1013 GC /ml;) หรือเวกเตอร์ควบคุม เช่น AAV-hSyn-GFP-WPRE (GFP; 2.5 × 1,013 GC/ml) ถูกฉีดทั้งสองข้างเข้าไปใน LS (ด้านหน้า – หลังจาก bregma +0.3 มม. , ด้านข้าง ±0.5 มม.; ดอร์โซเวนทรัล −3.8 มม., −3.4 มม., −3.1 มม., −2.8 มม.) โดยมี 70-nl ไหลเข้า/ซีกโลกสี่ครั้ง ดำเนินการฉีดยาเป็นเวลา 3 สัปดาห์โดยเริ่มการทดลองเชิงพฤติกรรมตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [11]

การวิเคราะห์การแสดงออกของยีน

หนูจะสูญพันธุ์จากความกลัวทางสังคม และถูกทิ้งไว้ในกรงบ้านโดยไม่ถูกรบกวนเป็นเวลา 90 นาทีหลังการฝึกพฤติกรรม จากนั้นหนูก็ถูกสังเวยภายใต้การดมยาสลบด้วย CO2 สมองของพวกมันถูกเอาออกอย่างรวดเร็ว และส่วนหน้า-หลังหรือ-หลังจาก bregma 0.1 มม. ถึง −0.10 มม.) ถูกผ่า

การแยก RNA และอาร์เรย์ PCR

การสกัดและการวิเคราะห์โปรตีน

สกัดโปรตีนนิวเคลียร์โดยใช้ชุดสกัดนิวเคลียร์ EpiQuick (Epigentek) ตามระเบียบการของผู้ผลิต การวิเคราะห์ Western blot ใช้เพื่อตรวจจับระดับการแสดงออกของ HDAC1Toorylation โปรตีน 15 ไมโครกรัมได้รับการแก้ไขบนเจลไร้คราบ TGX 12% (Bio-Rad) และถ่ายโอนไปยังเยื่อหุ้มไนโตรเซลลูโลส เมมเบรนถูกปิดกั้นด้วยนม 5%, 1% Tween-20 ในน้ำเกลือที่มีบัฟเฟอร์ทริส ตามด้วยการฟักตัวข้ามคืนด้วย antibanilide-basedt-anti-HDAC1 ต่อไปนี้ (เทอร์โม ฟิชเชอร์; PA1-860; 1:2000) , ฟอสโฟรีเลชั่น HDAC1 บนเรซิดิวซีรีน 421 (rabbit-anti-pHDAC1(S421); Thermo Fisher; PA5-36810; 1:2000) รวมถึงฟอสโฟรีเลชั่นบนซีรีน 421 และ 423 (rabbit-anti-pHDAC1(S421, S423), เทอร์โม ฟิชเชอร์; PA5-36911; 1:2000) ตรวจพบแถบที่ติดฉลากภูมิคุ้มกันโดยใช้แอนติบอดีต่อต้านกระต่ายแพะที่ผันด้วย HRP (การส่งสัญญาณเซลล์; # 7074; 1:1000) ตามระบบเคมีบำบัดที่ได้รับการปรับปรุง (SuperSignal West Dura, Thermo Fisher) โปรตีนทั้งหมดถูกใช้เป็นตัวควบคุมการโหลดภายใน

การให้คะแนนพฤติกรรมและการวิเคราะห์ทางสถิติ

เวลาในการสืบสวนทางสังคมซึ่งเป็นตัวบ่งชี้ความกลัวทางสังคมนั้นให้คะแนนด้วยตนเองโดยผู้สังเกตการณ์ที่ตาบอดในการรักษาโดยใช้ JWatcher (1.0, มหาวิทยาลัย Macquarie และ UCLA) GraphPad Prism เวอร์ชัน 9.0 สำหรับ Windows (ซอฟต์แวร์ GraphPad) ใช้สำหรับการวิเคราะห์ทางสถิติ รายงานการวิเคราะห์ล่วงหน้า – หลังโดยละเอียดมีอยู่ในตารางเสริม S2 ตัวเลขทั้งหมดถูกสร้างขึ้นโดยใช้การออกแบบ Affinity

ผลลัพธ์

การสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคมทำให้กิจกรรม-การชักนำก่อนฟอสโฟรีเลชั่นในผนังกั้นของหนู SFC+ ขั้นแรก เราวิเคราะห์ระดับโปรตีน HDAC1 ในเนื้อเยื่อผนังกั้นห้องที่ได้รับจากหนู SFC+ และ SFC− 90 นาทีหลังจากสัมผัสกับสิ่งกระตุ้นทางสังคมเพียงครั้งเดียว กล่าวคือ การสูญพันธุ์แบบย่อ (SFC+/1ss และ SFC−/1ss) หรือสิ่งเร้าทางสังคมหกประการ กล่าวคือ ด้วยการสูญพันธุ์โดยสมบูรณ์ (posterior–posterior6ss) (รูปที่ 1A) จำนวนการจับคู่ CS-US ระหว่างการได้มาซึ่งความกลัวทางสังคมในวันที่ 1 (รูปที่ 1B) มีความคล้ายคลึงกันระหว่างหนู SFC+ ทั้งสองกลุ่ม ตามที่คาดไว้ หนู SFC + ใช้เวลาน้อยลงอย่างมากในการตรวจสอบสิ่งเร้าทางสังคมครั้งแรก (หรือต่อไปนี้) เมื่อเปรียบเทียบกับหนู SFC− ( P <0.05; รูปที่ 1C) ซึ่งบ่งบอกถึงระดับความกลัวทางสังคมที่สูงขึ้น อย่างไรก็ตาม ในตอนท้ายของโปรโตคอลการสูญพันธุ์โดยสมบูรณ์ เวลาในการสอบสวนของการกระตุ้นทางสังคมครั้งที่ 6 โดยหนู SFC + / 6ss นั้นใกล้เคียงกับเวลาของ SFC - / 6ss คู่หูของพวกเขา (รูปที่ 1C) ซึ่งบ่งบอกถึงการสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคมที่ประสบความสำเร็จ

การวิเคราะห์แบบ Western blot ไม่ได้เปิดเผยความแตกต่างในระดับผนัง HDAC1 ระหว่างสี่กลุ่มที่ทดสอบ เช่น ระหว่าง SFC+/1ss, SFC+/6ss, SFC−/1ss และ SFC−/6ss ระหว่างการสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคม (รูปที่ 1D) เป็นที่รู้กันว่าฟอสโฟรีเลชั่นหลังการแปลของ HDAC1 บน ser421 (pHDAC1) และฟอสโฟรีเลชั่นสองเท่าที่ ser421 และ ser423 (ppHDAC1) เป็นที่รู้กันว่าเพิ่มกิจกรรม deacetylase ของ HDAC1 [28] ดังนั้นเราจึงวัดปริมาณระดับ pHDAC1 และ ppHDAC1 ภายในกะบังเพื่อประเมินการเปิดใช้งาน HDAC1 ระหว่างการสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคม ทั้งระดับ pHDAC1 และ ppHDAC1 เพิ่มขึ้นใน SFC+/6ss เมื่อเปรียบเทียบกับหนู SFC+/1ss (รูปที่ 1E; P < 0.05 สำหรับ pHDAC1 และรูปที่ 1F; P < 0.05 สำหรับ ppHDAC1) แนะนำให้มีกิจกรรม HDAC1 เพิ่มขึ้นระหว่างการสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคม

การปรับแบบสองทิศทางของ LS-HDAC1 ควบคุมการเรียนรู้การสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคม

ต่อไป เรามุ่งหวังที่จะสร้างความสัมพันธ์เชิงสาเหตุระหว่างฟังก์ชัน LSHDAC1 และการสูญเสียความกลัวทางสังคมโดยการปรับแบบสองทิศทางของฟังก์ชัน LS-HDAC1 โดยใช้การปิดล้อมทางเภสัชวิทยา (การสูญเสียการทำงาน) หรือการแสดงออกที่มากเกินไปโดยอาศัย AAV (การได้รับฟังก์ชัน) ในหนูสองกลุ่มที่แยกจากกัน .

สำหรับการปิดกั้นทางเภสัชวิทยาของไมโครพันช์ S275 หรือ Veh ถูกฉีดเข้าไปใน LS ทั้งสองข้างก่อนการฝึกสูญพันธุ์ซึ่งนำไปสู่กลุ่มต่อไปนี้: SFC+/Veh, SFC+/MS275, SFC−/Veh และ SFC−/MS275 (รูปที่ 2A) จำนวนการจับคู่ CS-US ไม่แตกต่างกันระหว่างกลุ่ม SFC + ในระหว่างการได้มาซึ่งความกลัวทางสังคม (รูปที่ 2B) ในระหว่างการสูญเสียความกลัวทางสังคมในวันที่ 2 หนู SFC+ ทุกตัวแสดงความกลัวทางสังคมในระดับสูงในระหว่างการนำเสนอสิ่งกระตุ้นทางสังคมครั้งแรก โดยไม่ขึ้นอยู่กับการรักษาของพวกเขา ซึ่งสะท้อนให้เห็นจากระยะเวลาการสืบสวนทางสังคมที่ต่ำ อย่างไรก็ตาม การยับยั้ง HDAC1 เร่งการสูญพันธุ์ เนื่องจากกลุ่ม SFC+/MS275 ได้แสดงการตรวจสอบทางสังคมระดับสูงแล้วในระหว่างการสัมผัสกับการกระตุ้นทางสังคมครั้งที่ 2 และ 3 (P < 0.05 เทียบกับ SFC+/Veh; รูปที่ 2C) การรักษาด้วย MS275 ไม่ส่งผลกระทบต่อเวลาในการตรวจสอบทางสังคมในหนู SFC− (รูปที่ 2C, D) ทุกกลุ่มแสดงการสอบสวนทางสังคมในระดับสูงในทำนองเดียวกันในระหว่างการเรียกคืนระยะสั้น (รูปที่ 2D) ซึ่งบ่งชี้ถึงการสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคมได้สำเร็จ

ประการที่สอง เราทำการทดลองแบบเกนออฟฟังก์ชันโดยใช้ AAV-mediated overexpression ของ HDAC1 (AAV-hSyn-HDAC1-GFPWPRE; HDAC1-OE) หรือไวรัสควบคุม (AAV-hSyn-GFP- WPRE; GFP) ภายในกะบังของ SFC+ และ SFC− หนูที่นำไปสู่กลุ่มต่อไปนี้: SFC+/GFP, SFC+/HDAC-OE, SFC−/GFP และ SFC−/HDAC-OE (รูปที่ 2E) หนู SFC + ทุกกลุ่มได้รับการจับคู่ CSUS จำนวนเท่ากันในระหว่างการได้มาสามสัปดาห์หลังจากการถ่ายไวรัส (รูปที่ 2F) ซึ่งบ่งชี้ว่าการแสดงออกที่มากเกินไปของ LS-HDAC1 ไม่ได้เปลี่ยนการเรียนรู้ความกลัวทางสังคม หนู SFC + ทั้งหมดที่ไม่ขึ้นอยู่กับการรักษาแสดงความกลัวทางสังคมในระดับสูงในระหว่างการนำเสนอการกระตุ้นทางสังคมครั้งแรก ซึ่งสะท้อนให้เห็นจากการสอบสวนทางสังคมที่ลดลงเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม SFC− ที่เกี่ยวข้อง (รูปที่ 2G) อย่างไรก็ตาม การสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคมได้รับความเสียหายอย่างมีนัยสำคัญจากการแสดงออกที่มากเกินไปของ LS-HDAC1 เนื่องจากกลุ่ม SFC+/HDAC1-OE แสดงการตรวจสอบทางสังคมที่ต่ำกว่าในระหว่างการสัมผัสสิ่งเร้าทางสังคมครั้งที่ 2 ถึง 6 เมื่อเทียบกับหนู SFC+/GFP ที่แสดงสิ่งที่คาดหวัง การสูญพันธุ์ (P < 0.05 เทียบกับ SFC+/GFP; รูปที่ 2G) ก่อนหนู การแสดงออกมากเกินไปของ LS-HDAC1 ไม่ส่งผลกระทบต่อเวลาในการสืบสวนทางสังคม (รูปที่ 2G, H) ในระหว่างการเรียกคืนระยะสั้น หนูทุกกลุ่มมีการตรวจสอบทางสังคมในระดับที่ใกล้เคียงกัน (รูปที่ 2H) การแสดงออกที่มากเกินไปของ HDAC1 ได้รับการยืนยันโดยการวิเคราะห์แบบ Western blot (รูปที่ S1 เพิ่มเติม)

การยับยั้งก่อนสูญพันธุ์ของ LS-HDAC1 นำไปสู่การเปลี่ยนแปลงแบบไดนามิกในการแสดงออกของยีน

เพื่อระบุเป้าหมายดาวน์สตรีมที่เป็นไปได้ของ LS-HDAC1 หนู SFC+ ได้รับการฉีด Veh หรือ MS275 120 นาทีทั้งสองข้างก่อนที่ความกลัวทางสังคมจะสูญพันธุ์ และถูกสังเวย 90 นาทีหลังจากได้รับสัมผัสกับประการที่ 1 (Veh /1ss และ MS275/1ss) หรือการกระตุ้นทางสังคมครั้งที่ 6 (Veh/6ss และ MS275/6ss) (รูปที่ 3A) ได้รับและประมวลผลไมโครเจาะเนื้อเยื่อผนังกั้นโดยใช้อาร์เรย์ PCR สำหรับการส่งสัญญาณ GABA และกลูตาเมต (ดู "วัสดุและวิธีการ") กลุ่ม SFC+ ทั้งหมดได้รับการจับคู่ CS-US ในจำนวนที่ใกล้เคียงกันระหว่างการได้มาซึ่งความกลัวทางสังคม (รูปที่ 3B) ในระหว่างการสูญพันธุ์ หนู SFC+ ทุกกลุ่มแสดงการตรวจสอบทางสังคมในระดับต่ำในระหว่างการสัมผัสกับสิ่งกระตุ้นทางสังคมครั้งแรก อย่างไรก็ตาม ในระหว่างการสูญพันธุ์ หนู SFC+ ที่เสียสละหลังจากการกระตุ้นทางสังคมครั้งที่ 6 แสดงให้เห็นถึงการติดต่อทางสังคมที่เพิ่มขึ้นทุกครั้งที่สัมผัส ซึ่งบ่งบอกถึงการสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคมที่เหมาะสม (รูปที่ 3C) ในการยืนยันผลลัพธ์ในรูปที่ 2C การสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคมถูกเร่งใน MS275/6ss เมื่อเปรียบเทียบกับหนู Veh/6ss ซึ่งเห็นได้จากเวลาในการตรวจสอบทางสังคมที่สูงขึ้นในระหว่างการนำเสนอต่อการกระตุ้นทางสังคมครั้งที่ 2 และ 3 (P < 0 05 เทียบกับ Veh/ 6ss; รูปที่ 3C) การวิเคราะห์อาร์เรย์ PCR สำหรับยีนที่เกี่ยวข้องกับการส่งสัญญาณ GABA และกลูตาเมตเผยให้เห็นการเปลี่ยนแปลงแบบไดนามิกในยีนจำนวนมาก ดังแสดงในแผนที่ความร้อน (รูปที่ 3 มิติ) ทำ PCR Array ทั่วไปให้สมบูรณ์พร้อมกับการเปลี่ยนแปลงการพับตามลำดับและค่า P มีอยู่ในตารางเสริม S3 อย่างไรก็ตาม ยีนหนึ่งที่ได้รับการควบคุมอย่างชัดเจนในหนูที่ได้รับ MS275- หลังจากการฝึกสูญพันธุ์อย่างสมบูรณ์คือ Gabrb1 (P < 0.05 เทียบกับกลุ่มอื่นๆ ทั้งหมด; รูปที่ 3E) ในขณะที่ยีน Gabrb3 ที่เกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดยังคงไม่เปลี่ยนแปลง (รูปที่ 3F ).

การกระตุ้นทางเภสัชวิทยาของตัวรับ LS-GABA-A เอื้อต่อการเรียนรู้การสูญพันธุ์

จากผลลัพธ์ของระดับความสูงหลังการสูญพันธุ์ที่เกิดจากการยับยั้ง HDAC {{0}} ในการแสดงออกของ Gabrb1 เราตั้งสมมติฐานว่าการส่งสัญญาณ GABAergic อาจอยู่ภายใต้ผลการเร่งการสูญพันธุ์ของการยับยั้ง LSHDAC เพื่อทดสอบแนวคิดนี้ เราได้เปิดใช้งานการส่งสัญญาณ LSGABA-A ในพื้นที่โดยการผสม Muc ซึ่งเป็นตัวเอก GABA-A ที่เฉพาะเจาะจง [25] หรือ Veh ซึ่งนำไปสู่กลุ่มต่อไปนี้: SFC+/Veh และ SFC+/Muc, SFC−/Veh และ SFC−/Muc (รูปที่ 4A) หนู SFC+ ที่ถูกผสมด้วย Muc หรือ Veh ต้องการการจับคู่ CS-US จำนวนเท่ากันจึงจะได้รับความกลัวทางสังคม (รูปที่ 4B) ในช่วงที่ความกลัวสูญพันธุ์ หนู SFC+ ทุกตัวใช้เวลาที่มีนัยสำคัญในการตรวจสอบการกระตุ้นทางสังคมระหว่างการสัมผัสการกระตุ้นทางสังคมครั้งที่ 1 มากกว่าหนู SFC− (P < 0.05 เทียบกับ SFC−/Veh และ SFC−/Muc; 4C) ซึ่งชี้ให้เห็นถึงความสำเร็จในการได้มาซึ่งความกลัวทางสังคม อย่างไรก็ตาม หนู SFC+/Muc แสดงการสูญพันธุ์ที่รวดเร็วยิ่งขึ้น โดยเฉพาะอย่างยิ่ง พวกเขาแสดงระดับการตรวจสอบทางสังคมที่คล้ายคลึงกับของหนู SFC− ซึ่งสูงกว่าหนู SFC+/Veh อย่างมีนัยสำคัญในขณะที่ได้รับการสัมผัสกับการกระตุ้นทางสังคมครั้งที่ 2 (P <0.05 เทียบกับ SFC+/Veh: รูปที่ 4C) . ในระหว่างการเรียกคืนระยะสั้น หนูทุกกลุ่มแสดงให้เห็นการตรวจสอบทางสังคมที่คล้ายคลึงกัน (รูปที่ 4D) ซึ่งบ่งบอกถึงการสูญพันธุ์ได้สำเร็จ

การยับยั้งทางเภสัชวิทยาของ LS-HDAC1 หรือการเปิดใช้งานการส่งสัญญาณ LS-GABA นำไปสู่การสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคมที่ยั่งยืน

จากการเรียนรู้การสูญพันธุ์ที่ดีขึ้นที่เราสังเกตทั้งหลังจากการยับยั้ง LS-HDAC1 และการเปิดใช้งานการส่งสัญญาณ LS-GABA เราได้ศึกษาธรรมชาติที่ยั่งยืนของการเปลี่ยนแปลงทางเภสัชวิทยาเหล่านี้ (รูปที่ 5A)

ในการทดลองแรก เราได้ทดสอบผลกระทบของการปิดกั้น HDAC1 ต่อการก่อตัวของหน่วยความจำการสูญพันธุ์ที่ยั่งยืนในหนู SFC+/Veh และ SFC+/ MS275 ทั้งหนู Veh และ MS275- ผสม SFC+ ได้รับการจับคู่ CS-US จำนวนเท่ากันระหว่างเกิดความกลัวทางสังคม (รูปที่ 5B) เพื่อยืนยันข้อสังเกตก่อนหน้านี้ของเรา (รูปที่ 2C และ 3C) หนู SFC+ ที่ได้รับ MS275 แสดงให้เห็นการตรวจสอบทางสังคมที่เพิ่มขึ้นในระหว่างการสัมผัสกับสิ่งเร้าทางสังคมครั้งที่ 2 และ 3 ในระหว่างการฝึกขจัดความกลัวทางสังคม (P < 0.05 เทียบกับ SFC+/Veh; รูปที่ 5C) ด้วยเหตุนี้ ทั้งสองกลุ่มจึงมีระดับการตรวจสอบทางสังคมที่ใกล้เคียงกันระหว่างการสัมผัสสิ่งกระตุ้นทางสังคมครั้งที่ 6 ซึ่งบ่งบอกถึงการสูญพันธุ์ได้สำเร็จ แม้จะสูญพันธุ์ได้สำเร็จ ในระหว่างการเรียกคืนระยะยาวดำเนินการ 30 วันหลังจากการฝึกฝนการสูญพันธุ์ หนู SFC+/MS275 แสดงการสอบสวนทางสังคมในระดับที่สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (P < 0.05 เทียบกับ SFC+/ Veh; รูปที่ 5D) แสดงให้เห็นถึงหน่วยความจำการสูญพันธุ์ที่ยาวนานขึ้นหลังจาก การยับยั้ง HDAC1

การทดลองเดียวกันถูกดำเนินการในชุดที่แยกกันของหนู SFC+ ที่ถูกผสมเฉพาะที่ด้วย Muc หรือ Veh (หมู่ SFC+/Veh และ SFC+/Muc) ทั้งสองกลุ่มได้รับการจับคู่ CS-US ที่คล้ายกัน ซึ่งบ่งชี้ถึงการได้มาที่เท่าเทียมกัน (รูปที่ 5E) และแสดงการสอบสวนทางสังคมที่ต่ำในทำนองเดียวกันในระหว่างการสัมผัสกับสิ่งกระตุ้นทางสังคมครั้งที่ 1 ในระหว่างการฝึกสูญพันธุ์ (รูปที่ 5F) อย่างไรก็ตาม เช่นเดียวกับในการทดลองครั้งก่อน (รูปที่ 4C) กลุ่ม SFC+/Muc มีการสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคมอย่างรวดเร็ว (P < 0.05 เทียบกับ SFC+/Veh; รูปที่ 5F) สิ่งที่น่าสนใจในระหว่างการเรียกคืนระยะยาวในวันที่ 32 หนู SFC+/Muc แสดงการสอบสวนทางสังคมเพิ่มขึ้นเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม SFC+/Veh (P <0.05 เทียบกับ SFC+/Veh; รูปที่ 5G) ซึ่งบ่งชี้ว่าการเปิดใช้งาน LS-GABA-A เช่นกัน ส่งผลให้มีความจำการสูญพันธุ์ที่ยาวนานขึ้น

การอภิปราย

กระบวนการที่ควบคุมการเปลี่ยนผ่านจากความจำระยะสั้นไปสู่ความจำระยะยาวในบริบทของพฤติกรรมที่เกี่ยวข้องกับความกลัว โดยเฉพาะ SAD นั้นยังไม่เป็นที่เข้าใจกันดีนัก ในการศึกษานี้ โดยใช้กระบวนทัศน์ SFC รวมกับวิธีทางเภสัชวิทยาและไวรัส เราอธิบายกลไก epigenetic ใหม่ที่เป็นสื่อกลางโดย HDAC1 ภายใน LS ที่ควบคุมความทรงจำการสูญเสียความกลัวทางสังคมที่ยาวนานในหนูตัวผู้ โดยเฉพาะอย่างยิ่งเราสังเกตเห็น (i) เพิ่มกิจกรรมที่กระตุ้นฟอสโฟรีเลชั่นของ HDAC1 ภายในกะบังของหนู SFC + ในระหว่างการสูญเสียความกลัวทางสังคม (ii) การควบคุมเชิงลบของการแสดงออกความกลัวทางสังคมโดย HDAC1 ภายใน LS (iii) การแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของ Gabrb1 ใน กะบังเพื่อตอบสนองต่อการรวมกันของการยับยั้งและการสูญพันธุ์ HDAC1 (iv) การอำนวยความสะดวกของการสูญพันธุ์ด้วยความกลัวโดยการเปิดใช้งานตัวรับ GABA-A และ (iv) การรวมหน่วยความจำการสูญพันธุ์ที่ยาวนานหลังจากการยับยั้งทางเภสัชวิทยาของ HDAC1 หรือการเปิดใช้งานตัวรับ GABA-A ภายใน LS .

HDAC ระดับ 1 ก่อนหน้านี้เกี่ยวข้องกับการขาดพฤติกรรมทางสังคม [29–31] และการเรียนรู้แบบเชื่อมโยง [16, 17, 20, 32] เมื่อพิจารณาถึงสมมติฐานนี้ เราได้ทดสอบการเปลี่ยนแปลงของโปรตีนในผนังกั้น HDAC1 ในระหว่างการสูญเสียความกลัวทางสังคม และพบว่าการสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคมในหนู SFC + เพิ่ม pHDAC1 และ ppHDAC1 (รูปที่ 1E, F) แม้ว่าระดับโปรตีน HDAC1 ยังคงไม่เปลี่ยนแปลง (รูปที่ 1D) Casein kinase 2-เป็นสื่อกลางหลังการแปลฟอสโฟรีเลชั่นของ HDAC1 ที่ ser421 และ ser423 เป็นที่ทราบกันดีว่าเพิ่มฤทธิ์ในการเร่งปฏิกิริยา (เช่น deacetylase) และการเชื่อมโยงกับสารเชิงซ้อนรีเพรสเซอร์ขนาดใหญ่ เช่น สารเชิงซ้อน Sin3A และ CoREST [33] ฟอสโฟรีเลชั่นที่เพิ่มขึ้นในบริเวณเหล่านี้เป็นผลมาจากการสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคม ซึ่งบ่งชี้ว่าการฝึกการสูญพันธุ์จะเพิ่มกิจกรรม HDAC1 ในหนู SFC+ เท่านั้น การปรับปรุงนี้ไม่พบในหนู SFC− หรือหนู SFC+ ผ่านการสูญพันธุ์แบบย่อ โดยบอกว่าการฝึกการสูญพันธุ์อย่างสมบูรณ์ในหนูที่หวาดกลัวสังคมเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการเพิ่มฟอสโฟรีเลชั่น HDAC1

เรายังเปิดเผยเพิ่มเติมถึงความเชื่อมโยงเชิงสาเหตุระหว่างกิจกรรม HDAC1 ที่ได้รับการยกระดับภายใน LS และความกลัวทางสังคม (i) การปิดล้อมทางเภสัชวิทยาของ LS-HDAC 1 120 นาทีก่อนการสูญพันธุ์ของความกลัวช่วยให้การสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคมสะดวกขึ้น (รูปที่ 2C) (ii) ในทางกลับกันการแสดงออกที่มากเกินไปของ HDAC1 ที่ใช้สื่อกลาง AAV ภายใน LS ทำให้การสูญเสียความกลัวทางสังคมลดลง (รูปที่ 2G) ดังที่ได้กล่าวไว้ก่อนหน้านี้ HDAC1 และ HDAC คลาส I อื่นๆ ได้รับการอธิบายว่าเป็นตัวควบคุมที่สำคัญของความทรงจำเกี่ยวกับความกลัว [16] ตัวอย่างเช่น การลดลงของ HDAC3 ที่โปรโมเตอร์ cFos ใน dorsal hippocampus และ basolateral amygdala มีความสัมพันธ์กับการสร้างความทรงจำเกี่ยวกับความกลัวตามบริบทโดยไม่ส่งผลต่อความกลัวคิว [20] ในการศึกษาอื่น RGFP963 ซึ่งเป็นตัวยับยั้งโมเลกุลขนาดเล็กของคลาส I HDACs ช่วยเพิ่มการรวมตัวของความกลัวที่เป็นสัญญาณ [34] เมื่อพิจารณาว่า LS มีความสำคัญอย่างยิ่งในการประมวลผลสัญญาณทางสังคมในระหว่างการก่อตัวของความทรงจำที่เชื่อมโยง [12] ผลลัพธ์ของเราแนะนำฟังก์ชันใหม่สำหรับ LS-HDAC1 ในฐานะตัวควบคุมเชิงลบของการเรียนรู้การสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคม

ในการเปิดเผยเป้าหมายดาวน์สตรีมสำหรับ HDAC1 ซึ่งอาจไกล่เกลี่ยผลกระทบต่อการเรียนรู้การสูญพันธุ์ เราได้ดำเนินการอาร์เรย์ PCR สำหรับ GABA และยีนที่เกี่ยวข้องกับการส่งสัญญาณกลูตาเมตในหนู SFC + ที่มีหรือไม่มีการยับยั้ง HDAC1 เราพบว่าการแสดงออกของ Gabrb1 จะเพิ่มขึ้นในเนื้อเยื่อผนังกั้นของหนูที่ได้รับ [37] การเปิดใช้งานการส่งสัญญาณ GABA-A ที่ใช้ Muc-mediated กับภูมิภาค hippocampal CA1 ช่วยเพิ่มการสูญเสียความกลัวตามบริบท [38] ในขณะที่การจัดการที่คล้ายกันภายในเยื่อหุ้มสมองส่วนหน้า infralimbic หรือ ต่อมทอนซิล basolateral ช่วยเพิ่มการสูญเสียความกลัวที่ส่งสัญญาณ [39] การศึกษาแสดงให้เห็นว่าการลดลงของการทำงานของตัวรับ GABA-A ซึ่งเป็นผลมาจากการแสดงออกของ downregulationsuggestinga1 เนื่องจากการลดอะซิติเลชั่นของโปรโมเตอร์ H3 นั้นถูกสื่อกลางโดย HDAC2 และ HDAC3 ภายใต้เงื่อนไขของการสัมผัสกับเอธานอลเรื้อรัง [40] กลไกที่คล้ายกันอาจรองรับผลลัพธ์ของเรา ดังนั้นการยับยั้ง HDAC1 อาจส่งผลให้เกิดอะซิติเลชั่น H3 และ H4 ที่ได้รับการปรับปรุง และส่งผลให้การแสดงออกของ Gabrb1 และการส่งสัญญาณ GABA ที่ได้รับการปรับปรุงภายใน LS นำไปสู่การเรียนรู้การสูญพันธุ์ที่เพิ่มขึ้นในบริบททางสังคม ในการยืนยันสมมติฐานนี้ การเปิดใช้งานก่อนตัวรับ LS-GABA-A โดยใช้ Muc ช่วยให้การเรียนรู้การสูญพันธุ์คล้ายกับผลที่สังเกตได้ของการยับยั้ง LS-HDAC1 (รูปที่ 4C) LS ส่วนใหญ่เป็น GABAergic และเป็นที่รู้จักในการควบคุมพฤติกรรมที่มีแรงบันดาลใจ [12] นอกจากนี้ LS ยังได้รับข้อมูลกลูตามาเทอจิคจากบริเวณฮิปโปแคมปัส CA2 ซึ่งเป็นรหัสสำหรับหน่วยความจำทางสังคม [41, 42] อย่างไรก็ตาม อินพุตกลูตามาเทอจิคเหล่านี้มีการจัดระเบียบเชิงพื้นที่ที่กำหนดไว้ และกระตุ้นกลุ่มเซลล์ประสาทเฉพาะภายใน LS [12, 43] ซึ่งนำไปสู่ผลกระทบต่อพฤติกรรมดาวน์สตรีมที่เฉพาะเจาะจง ในบริบทของการสูญเสียความกลัวทางสังคม ข้อมูลดังกล่าวอาจสื่อสารถึงความจุเชิงลบของการกระตุ้นทางสังคมในหนู SFC+ ซึ่งทำให้เกิดการหลีกเลี่ยงทางสังคมและความกลัวทางสังคม อย่างไรก็ตาม การยับยั้งโดยรวมของ LS ที่เกิดจากการส่งสัญญาณ GABAergic ในท้องถิ่นที่ได้รับการปรับปรุงมีแนวโน้มที่จะยับยั้งแนวทางทางสังคมในการเรียนรู้เพื่อสังคม

ดังที่ได้กล่าวไว้ก่อนหน้านี้ การกลับเป็นซ้ำและการกลับเป็นซ้ำของ SAD ในผู้ป่วยที่ได้รับการบรรเทาอาการอย่างสมบูรณ์จะสูงมาก [44–46] ดังนั้นเราจึงทดสอบหน่วยความจำการสูญเสียความกลัวในระยะยาวหลังจากการยับยั้ง LS-HDAC1 หรือการเปิดใช้งาน LS-GABA-A โดยเฉพาะอย่างยิ่งทั้งการยับยั้ง HDAC1 และการเปิดใช้งานตัวรับ GABA-A ภายใน LS เพิ่มความอดทนของการสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคมอย่างเพียงพอ และป้องกันการกลับเป็นซ้ำของความทรงจำทางสังคมที่น่ารังเกียจดังที่พบในการควบคุมที่ได้รับการรักษาด้วยยานพาหนะ 30 วันหลังจากการสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคม (รูปที่ 5D, G) . ข้อมูลเหล่านี้แสดงให้เห็นว่าการโน้มตัวแบบเร่งที่สังเกตได้เฉียบพลันโดยการยับยั้ง HDAC1 และการกระตุ้นตัวรับ GABA-A นำไปสู่การรวมตัวของหน่วยความจำที่สูญพันธุ์อย่างมีนัยสำคัญมากขึ้น ทำให้มีความทนทานสูง สิ่งนี้ยืนยันแนวคิดที่ว่าสารยับยั้ง HDAC เป็นสารเพิ่มประสิทธิภาพการรับรู้ที่มีประสิทธิภาพ [21, 47] เป็นที่ทราบกันว่า SAD มีความชุกสูงกว่าในตัวเมีย [48] และเรายังได้สร้างกระบวนทัศน์ SFC ในหนูตัวเมียด้วย [11] ยิ่งไปกว่านั้น มีผลกระทบที่ตรงกันข้ามของการยับยั้ง HDAC ต่อการรับรู้ในหนูตัวเมีย ขึ้นอยู่กับชนิดย่อย HDAC และบริบทเฉพาะที่กำลังตรวจสอบ [49, 50] ดังนั้นเราอาจพิจารณาศึกษากลไกดังกล่าวข้างต้นในหนูตัวเมีย อย่างไรก็ตาม การตรวจสอบนี้อยู่นอกขอบเขตและควรเป็นการศึกษาติดตามผลที่น่าสนใจ

โดยสรุป การศึกษาของเราให้ข้อมูลเชิงลึกที่สำคัญเกี่ยวกับกลไกระดับโมเลกุลที่เกี่ยวข้องกับการควบคุมการสูญพันธุ์ของความกลัวทางสังคม และบอกเป็นนัยว่าการยับยั้งการส่งสัญญาณ GABAergic ที่เป็นสื่อกลางของ HDAC1- ภายใน LS นั้นเป็นตัวควบคุมเชิงลบของการสูญเสียความกลัวทางสังคมทั้งแบบเฉียบพลันและระยะยาวใน หนู เท่าที่เราทราบ นี่คือการศึกษาครั้งแรกที่เชื่อมโยง HDAC1 อย่างมีเหตุผลกับการควบคุมความทรงจำทางสังคมที่ไม่พึงปรารถนา การศึกษาครั้งนี้เป็นการเพิ่มหลักฐานที่เพิ่มมากขึ้น ซึ่งระบุว่า HDAC เป็นตัวควบคุมที่มีศักยภาพของหน่วยความจำแบบเชื่อมโยง และเสนอให้ HDAC1 เป็นเป้าหมายในการรักษาสำหรับ SAD โดยเฉพาะ

ข้อมูลอ้างอิง

dsDemyttenaere K, Bruffaerts R, Posada-Villa J, Gasquet I, Kovess V, Lepine JP, และคณะ ความชุก ความรุนแรง และความจำเป็นที่ไม่ได้รับการตอบสนองในการรักษาความผิดปกติทางจิตในการสำรวจสุขภาพจิตโลกขององค์การอนามัยโลก รศ. เจ แอม เมด 2004;291:2581–90.

2. บลังโก ซี, แบร็กดอน แอลบี, ชไนเออร์ FR, ลีโบวิตซ์ MR. เภสัชบำบัดตามหลักฐานเชิงประจักษ์ของโรควิตกกังวลทางสังคม Int J Neuropsychopharmacol. 2013;16:235–49.

3. Scholten WD, Batelaan NM, van Balkom AJ, Wjh Penninx B, Smit JH, van Oppen P. การกลับเป็นซ้ำของความผิดปกติของความวิตกกังวลและผู้ทำนาย J ส่งผลต่อความไม่ลงรอยกัน 2013;147:180–5.

4. บูตอง มี. การดึงบริบท เวลา และความทรงจำในกระบวนทัศน์การแทรกแซงของการเรียนรู้แบบพาฟโลเวียน ไซโคล บูลล์. 1993;114:80–99.

5. Bruce SE, Yonkers KA, Otto MW, Eisen JL, Weisberg RB, Pagano M และคณะ อิทธิพลของอาการป่วยทางจิตเวชต่อการฟื้นตัวและการกลับเป็นซ้ำของโรควิตกกังวลทั่วไป โรคกลัวการเข้าสังคม และโรคตื่นตระหนก: การศึกษาวิจัยแบบมุ่งหวัง 12- ปี ฉันจิตเวชศาสตร์เจ 2005;162:1179–87.

6. บอชเชน เอ็มเจ, นอยมันน์ ดีแอล, วอเตอร์ส (สมัครเล่น) การกำเริบของความวิตกกังวลและความกลัวที่รักษาได้สำเร็จ: ประเด็นทางทฤษฎีและคำแนะนำสำหรับการปฏิบัติทางคลินิก จิตเวชศาสตร์ Aust NZJ 2009;43:89–100.

7. เหลียง HT, เวสต์บรูก RF. การฟื้นตัวของการตอบสนองต่อความกลัวที่ดับลงได้เองจะทำให้การสูญพันธุ์รุนแรงขึ้น: บทบาทของกลไกการแก้ไขข้อผิดพลาด กระบวนการ J Exp Psychol Anim Behav 2008;34:461–74.

8. Toth I, Neumann ID, Slattery DA การปรับสภาพความกลัวทางสังคม: แบบจำลองสัตว์ที่แปลกใหม่และเฉพาะเจาะจงเพื่อศึกษาโรควิตกกังวลทางสังคม เภสัชวิทยาประสาทวิทยา. 2012;37:1433–43.

9. Toth I, Neumann ID, Slattery DA การปรับสภาพความกลัวทางสังคมเป็นรูปแบบสัตว์ของโรควิตกกังวลทางสังคม Curr Protoc Neurosci. 2013;63:9–42.

10. โซอิคาส ไอ, สแลตเทรี ดา, นอยมันน์ ไอดี ออกซิโตซินในสมองในการปรับสภาพความกลัวทางสังคมและการสูญพันธุ์: การมีส่วนร่วมของกะบังด้านข้าง เภสัชวิทยาประสาทวิทยา. 2014;39:3027–35.

11. Menon R, Grund T, Zoicas I, Althammer F, Fiedler D, Biermeier V, และคณะ การส่งสัญญาณออกซิโตซินในผนังกั้นด้านข้างช่วยป้องกันความกลัวทางสังคมในระหว่างการให้นมบุตร เคอร์ไบโอล 2018;28:1066–78.e1066.

12 Menon R, Suss T, Oliveira VEM, Neumann ID, Bludau A. ชีววิทยาของกะบังด้านข้าง: การควบคุมพฤติกรรมทางสังคม เทรนด์ประสาทวิทยา 2022;45:27–40. 13. Bludau A, Royer M, Meister G, Neumann ID, Menon R. การควบคุม Epigenetic ของสมองสังคม เทรนด์ประสาทวิทยา 2019;42:471–84.

14. เลเวนสัน เจเอ็ม, สเวทท์ เจดี. กลไกอีพีเจเนติกส์ในการสร้างความจำ แนท เรฟ นิวโรไซ 2005;6:108–18.

15. มาห์กูบ เอ็ม, มอนเตเกีย แอลเอ็ม. บทบาทของฮิสโตน ดีอะเซติเลสในกลไกของเซลล์และพฤติกรรมที่เป็นพื้นฐานของการเรียนรู้และความทรงจำ เรียนรู้เมม 2014;21:564–8.

For more information:1950477648nn@gmail.com