สารสกัดจากดอกไม้เป็นสีย้อมอเนกประสงค์ในอุตสาหกรรมเครื่องสำอาง ตอนที่ 2

โปรดติดต่อoscar.xiao@wecistanche.comสำหรับข้อมูลเพิ่มเติม

ผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติหลายชนิดถูกนำมาใช้ในระบบการแพทย์แผนโบราณเพื่อรักษาอาการเจ็บปวดและการอักเสบ [61] ดังนั้นจึงได้ทำการศึกษาผลของสารสกัดที่วิเคราะห์ต่อการยับยั้งการทำงานของไลพอกซีเจเนสและโปรตีเอส ในช่วงความเข้มข้นที่วิเคราะห์ (100-500 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) สารสกัดจากน้ำ CTE แสดงความสามารถที่แข็งแกร่งที่สุดในการยับยั้งโปรตีเอส (รูปที่ 4) (ที่ 57 เปอร์เซ็นต์สำหรับความเข้มข้น 500 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) กิจกรรมนี้ถูกเปรียบเทียบกับไดโคลฟีแนคตัวยับยั้งโปรตีเอสที่รู้จักกันดี ซึ่งใช้เป็นตัวควบคุม (การยับยั้งประมาณ 89 เปอร์เซ็นต์ที่ความเข้มข้นสูงสุดที่ทดสอบ) อย่างไรก็ตาม ได้ผลลัพธ์ที่คล้ายกันสำหรับสารสกัด GGE และ KTE (ประมาณ 56 เปอร์เซ็นต์ และ 53 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ สำหรับความเข้มข้นสูงสุด) มีการสังเกตการยับยั้งโปรตีเอสที่ต่ำกว่าสำหรับสารสกัด PRE และ PGE ในการทดสอบเพิ่มเติมเพื่อวัดความสามารถในการยับยั้ง lipoxygenase สารสกัดที่เป็นน้ำจาก KTE และ CTE จะแสดงค่าสูงสุด (การยับยั้งประมาณ 67 เปอร์เซ็นต์และ 64 เปอร์เซ็นต์ตามลำดับสำหรับความเข้มข้น 500 ug/mL) Diclofenac ยังถูกใช้เป็นตัวควบคุม สารสกัด GGE, PGE และ PRE ยังมีค่าสูงอย่างมีนัยสำคัญ (60 เปอร์เซ็นต์ ,57 เปอร์เซ็นต์ และ 54 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ) นอกจากนี้ยังตั้งข้อสังเกตว่าความสามารถในการยับยั้งเอนไซม์ LOX และโปรตีเอสขึ้นอยู่กับความเข้มข้นของสารสกัด (รูปที่ 5)

การศึกษาก่อนหน้านี้ระบุว่าสารประกอบโพลีฟีนอลหลายชนิดมีส่วนสำคัญต่อฤทธิ์ต้านการอักเสบของสารสกัดจากพืชหลายชนิด[62] การศึกษาแสดงให้เห็นการมีส่วนร่วมของ ROS ในกระบวนการอักเสบ และสารประกอบฟีนอลิก เช่น กรดแกลลิกและกรดควินิก อาจขัดขวางการเผาผลาญกรดอาราคิโดนิก โดยการยับยั้งการทำงานของกิจกรรมของลิพอกซีเจเนส หรืออาจทำหน้าที่เป็นสารอนุมูลอิสระซึ่งผลิตขึ้นระหว่างกรดอาราคิโดนิก [63]. ผลลัพธ์ที่ได้จาก BenSaad และคณะ บ่งชี้ว่ากรดเอลลาจิก กรดแกลลิก และปุนิคาลาจิน A&B ที่แยกได้จาก P. granatum ยับยั้งการผลิตไนตริกออกไซด์ (NO) โพรสตาแกลนดิน E2 (PGE2) และอินเตอร์ลิวคิน 6 (IL-6) ในไลโปโพลีแซคคาไรด์ (LPS) RAW 267.4 มาโครฟาจ สารประกอบเหล่านี้ทำงานเป็นตัวแทน แต่เพียงผู้เดียวหรือมีผลเสริมฤทธิ์กันยังคงเป็นคำถาม [64] เนื่องจากฟลาโวนอยด์หลายชนิดแสดงคุณสมบัติต้านการอักเสบ เนื่องจากพฤติกรรมของสารต้านอนุมูลอิสระที่แท้จริง จึงมีส่วนเกี่ยวข้องกับความผิดปกติของการอักเสบต่างๆวิธีการสกัดฟลาโวนอยด์ pdf,โดยเฉพาะอย่างยิ่ง เควอซิทินเป็นโมเลกุลที่น่าสนใจที่สุด เพราะมันรบกวนวิถีทางชีววิทยาที่เฉพาะเจาะจง นอกจากนี้ การศึกษายังแนะนำว่าสามารถลดกระบวนการอักเสบที่เกี่ยวข้องกับแบบจำลองต่างๆ ได้โดยใช้กลไกต่างๆ[65] โดยเฉพาะอย่างยิ่ง โปรตีนไคเนสที่กระตุ้นด้วย AMP และวิถีทางฮิสโตน/โปรตีน ดีอะซิติเลส (AMPK/SIRT1) ส่งผลให้เกิดการจัดการการอักเสบที่น่าสนใจยิ่งขึ้น ดังนั้นตัวกระตุ้น AMPK สามารถลดการอักเสบของมาโครฟาจได้ เควอซิตินและฟลาโวนอยด์อื่นๆ ที่เป็นตัวกระตุ้นของ AMPK และ SIRT1 อาจลดการอักเสบโดยการรบกวนเส้นทางนี้ [66] นอกจากนี้ยังแสดงให้เห็นอีกด้วยว่า quercetin และ quercetin monoglucosides มีฤทธิ์ในการยับยั้ง LOX ที่สูงขึ้น [67]Nair et al ได้แสดงให้เห็นคุณสมบัติต้านการอักเสบของสารสกัด KTE โดยการประเมินการมีอยู่ของฟลาโวนอลที่มีเควอซิทินมอยอิตีเช่นมังกาสลิน Qu 3-[2G] rhamnosylrutinoside, Qu 3-O-dirhamnoside และ rutin โมเลกุลเหล่านี้ได้แสดงให้เห็นการยับยั้งที่แข็งแกร่งของกิจกรรม COX-2 และการปราบปราม ROS บางส่วน โดยทั่วไป โพลีฟีนอลที่มีอยู่ใน CTE แสดงคุณสมบัติต้านการอักเสบในการอักเสบที่เกิดจาก LPS ในเซลล์มาโครฟาจ RAW 264.7[68]

กรุณาคลิกที่นี่เพื่อทราบข้อมูลเพิ่มเติม

2.5.การประเมินความเป็นพิษต่อเซลล์

ในการสร้างวัตถุดิบเครื่องสำอางใหม่ หนึ่งในคุณสมบัติที่สำคัญที่สุดคือความปลอดภัยในการใช้งาน สารเฉพาะสำหรับใช้ในเครื่องสำอางต้องไม่เป็นพิษ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในส่วนที่เกี่ยวข้องกับเซลล์ผิว เช่น keratinocytes และไฟโบรบลาสต์ มีการใช้การทดสอบสองประเภทเพื่อระบุความเป็นพิษของสารสกัดที่วิเคราะห์บนเซลล์ HaCaT และ BJฟลาโวนอยด์การศึกษาครั้งแรกโดยใช้การทดสอบการดูดซึมสีแดงที่เป็นกลาง ช่วยให้เราสามารถประเมินความมีชีวิตของเซลล์ที่บำบัดด้วยสารสกัดที่วิเคราะห์ได้ สีย้อมนี้เข้าสู่ไลโซโซมของเซลล์ที่มีชีวิตและถูกปล่อยเข้าสู่ไซโตพลาสซึมของเซลล์ที่ตายแล้ว สังเกตได้ (รูปที่ 6) ว่าสารสกัด CTE มีความสามารถสูงสุดในการเพิ่มจำนวนเซลล์ HaCaT และ BJ เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม สารสกัดนี้มีค่าสูงกว่าพารามิเตอร์ที่ทดสอบประมาณ 20 เปอร์เซ็นต์และ 40 เปอร์เซ็นต์ที่ความเข้มข้น 250 ไมโครลิตร/มิลลิลิตร (HaCaT และ B]) และ 500 ไมโครลิตร/มิลลิลิตร (เซลล์ BJ) ตามลำดับ สารสกัด GGE ที่ความเข้มข้น 100 และ 250 ไมโครลิตร/มล. และสารสกัด KTE ที่ความเข้มข้น 500 ไมโครลิตร/มล. มีลักษณะพิเศษที่เป็นพิษเล็กน้อยต่อเซลล์ BJ สารสกัดอื่นๆ มีผลในเชิงบวกต่อความมีชีวิตของเซลล์เหล่านี้ สารสกัด PRE และ PGE ที่ความเข้มข้น 100 ไมโครลิตร/มิลลิลิตรไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญจากกลุ่มควบคุม และเพิ่มการเพิ่มจำนวนของเซลล์ BJ ประมาณ 10-15 เปอร์เซ็นต์เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมที่ความเข้มข้น 250 และ 500 ไมโครลิตร/ มล. ในกรณีของ keratinocytes ไม่พบการลดลงของความมีชีวิตของเซลล์ สำหรับสารสกัด PGE, PRE และ CTE พบว่าการเพิ่มจำนวนเพิ่มขึ้นด้วยความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้น ในขณะที่ความอยู่รอดของเซลล์ลดลงด้วยความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นของสารสกัด KTE และ GGE

การทดสอบครั้งที่สองดำเนินการเพื่อตรวจสอบความเป็นพิษต่อเซลล์ของสารสกัดที่ทดสอบคือการทดสอบ resazurin (Alamar Blue) มีการแสดง (รูปที่ 7) ว่าความมีชีวิตของเซลล์ขึ้นอยู่กับความเข้มข้นของสารสกัดที่เซลล์ถูกฟักไข่ ในกรณีของไฟโบรบลาสต์ สารสกัด PRE, PGE และ CTE ทำให้เกิดการงอกขยายของเซลล์สูงขึ้นด้วยความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้น ที่ความเข้มข้นสูงสุดที่วิเคราะห์ (500 ไมโครลิตร/มล.) พบการเพิ่มจำนวนเพิ่มขึ้นประมาณ 20 เปอร์เซ็นต์เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมเฮสเพอริดินใช้ในกรณีของสารสกัด KTE และ GGE พบว่าความสามารถในการมีชีวิตของเซลล์ลดลงเมื่อความเข้มข้นของสารสกัดเพิ่มขึ้น สารสกัดเหล่านี้แสดงความเป็นพิษเล็กน้อยต่อ BJ ที่ความเข้มข้น 250 และ 500 ไมโครลิตร/มล. ในกรณีของ keratinocytes พบว่าสารสกัดที่วิเคราะห์มีผลคล้ายคลึงกันในเซลล์ผิวหนัง แต่ความสามารถในการเพิ่มจำนวนไม่รุนแรงเท่าในกรณีของไฟโบรบลาสต์ ความสามารถสูงสุดในการเพิ่มการเพิ่มจำนวนเคราติโนไซต์ถูกสังเกตพบสำหรับสารสกัด CTE ในช่วงความเข้มข้นที่วิเคราะห์ทั้งหมด ได้ค่าที่คล้ายกันสำหรับสารสกัด PRE ที่ความเข้มข้น 250 ไมโครลิตร/มล. และสำหรับสารสกัด PGE ที่ความเข้มข้น 500 ไมโครลิตร/มล. สารสกัด KTE แสดงความเป็นพิษต่อเซลล์ HaCa สูงกว่าสารสกัด GGE อย่างมีนัยสำคัญ

สารสกัดที่วิเคราะห์ยังไม่ได้รับการทดสอบอย่างกว้างขวางถึงความเป็นพิษต่อเซลล์ผิวมาก่อน มีการศึกษาเกี่ยวกับความเป็นพิษต่อเซลล์เพียงเล็กน้อยในสารสกัดหรือสารออกฤทธิ์หลัก โดยเฉพาะอย่างยิ่งต่อเซลล์มะเร็ง ผู้เขียนของการศึกษาก่อนหน้านี้ระบุว่าสารสกัดเหล่านี้โดยทั่วไปไม่มีผลที่เป็นพิษต่อเซลล์ผิวหนัง และความสามารถในการเพิ่มการงอกขยายของเซลล์มักเกิดจากโพลีฟีนอล แอนโธไซยานิน และฟลาโวนอยด์ที่มีปริมาณสูง [45,69-73 ]. ผู้เขียนบางคนยังระบุด้วยว่าส่วนประกอบแต่ละส่วนที่มีอยู่ในสารสกัดอาจเป็นพิษต่อเซลล์ผิว ในขณะที่สารสกัดโดยรวมไม่แสดง อาลี ฮิจาซี และคณะ [69] แสดงให้เห็นว่าอัลคาลอยด์ที่สกัดจาก Punica granatum เป็นพิษต่อเซลล์ปกติและเซลล์มะเร็ง ในขณะที่สารสกัดทั้งหมดมีพิษน้อยกว่า การศึกษาของ Nasiri et al. [70] ระบุว่าสารสกัดจากดอก Punica Granatum อาจมีประโยชน์ในการเร่งกระบวนการสมานแผลอันเนื่องมาจากความสามารถในการเพิ่มการงอกของเซลล์ผิว ในงานวิจัยก่อนหน้านี้ [45] แสดงให้เห็นว่าสารสกัดเอธานอลจากน้ำที่ได้จากพืชที่วิเคราะห์มีลักษณะเฉพาะด้วยความสามารถที่สูงขึ้นในการเพิ่มการเพิ่มจำนวนของเซลล์ BJ และสารสกัด KTE และ GGE มีผลเป็นพิษต่อเซลล์เหล่านี้น้อยลง .อาณาจักรที่สาบสูญ cistancheผลของสารสกัดเอทานอลในน้ำต่อเซลล์ HaCaT นั้นคล้ายคลึงกับสารสกัดที่เป็นน้ำบริสุทธิ์ แต่ในกรณีของสารสกัดที่ได้จากเอทานอล จะสังเกตเห็นคุณสมบัติการงอกขยายที่ดีกว่าเล็กน้อยในกรณีของสารสกัดที่เป็นน้ำ ความแตกต่างระหว่างองค์ประกอบของสารสกัดที่วิเคราะห์ทั้งสองประเภทอาจทำให้เกิดความเป็นพิษต่างกัน ดังที่แสดง สารสกัดจากน้ำไม่อุดมไปด้วยสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพเท่ากับสารสกัดจากเอทานอลน้ำ ความแตกต่างที่ยิ่งใหญ่ที่สุดคือเนื้อหาของรูตินและไอโซเควอซิทริน

Cistanche สามารถต่อต้านริ้วรอย

2.6.การกำหนดปัจจัยป้องกันแสงแดด

ผลกระทบที่ไม่พึงประสงค์ของรังสี UV ต่อผิวหนังอาจถูกเปิดเผยทั้งหลังการสัมผัสไม่นานและในอีกหลายปีต่อมา การแผ่รังสีจากดวงอาทิตย์มีผลกดภูมิคุ้มกันซึ่งเร่งกระบวนการชราของผิวหนังด้วยผลกระทบทั้งหมดที่เกี่ยวข้อง รวมถึงการก่อมะเร็งที่เพิ่มขึ้น[74] แนวโน้มที่สังเกตได้ในปัจจุบันบ่งชี้ถึงความต้องการที่เพิ่มขึ้นในการพัฒนาผลิตภัณฑ์ซึ่งไม่เพียงแค่มีความปลอดภัยในการใช้งานในระดับสูงมากเท่านั้น แต่ยังรวมถึงคุณสมบัติมัลติฟังก์ชั่นในแง่ที่ว่าผลิตภัณฑ์จะมีคุณลักษณะการป้องกันการแผ่รังสีของผิวหนังด้วยขอบเขตการดำเนินการที่กว้างกว่าที่เคยใช้มาจนถึงปัจจุบัน สารจากพืชบางชนิดมีบทบาทอันล้ำค่าในด้านนี้ ซึ่งไม่เพียงแต่สามารถให้การปกป้องแสงแดดเท่านั้น แต่ยังช่วยต่อต้านผลกระทบด้านลบที่มีอยู่แล้วของรังสีดวงอาทิตย์ที่ผิวหนัง [75-77] การวิจัยที่ดำเนินการแสดงให้เห็นว่าสารสกัดจากพืชที่วิเคราะห์คือ PRE, PGE, KTE, CTE และ GGE มีลักษณะพิเศษโดยมีค่าสัมประสิทธิ์ SPF สูง

วิเคราะห์ค่าสัมประสิทธิ์ (SPF) สำหรับสารสกัดน้ำที่ได้รับจากพืชดังกล่าวที่ความเข้มข้น 10 และ 50 มก./มล. สำหรับพืชแต่ละชนิดที่ตรวจสอบความเข้มข้นของสารสกัดที่สูงขึ้นส่งผลให้ค่า SPF สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเศษฟลาโวนอยด์บริสุทธิ์ micronized 1000 มก. ใช้การเปรียบเทียบระหว่างสารสกัดแสดงให้เห็นว่าค่า SPF สูงสุดถูกสังเกตพบสำหรับสารสกัด KTE ซึ่งคงไว้สำหรับความเข้มข้นที่ตรวจสอบทั้งสอง ข้อสังเกตที่น่าสนใจอีกประการหนึ่งคือ แม้ในความเข้มข้นที่ต่ำกว่าที่ตรวจสอบ สารสกัด KTE ก็ยังคงมีค่า SPF สูง ในขณะที่ค่าของสารสกัดอื่นๆ ลดลงอย่างเห็นได้ชัด สิ่งนี้ชัดเจนเมื่อเราวิเคราะห์ว่าผลลัพธ์ของ KTE นั้นสูงกว่าสารสกัดอื่นๆ มากน้อยเพียงใด สำหรับความเข้มข้น 50 มก./มล. ค่า SPF สูงกว่า 1.2 (เมื่อเปรียบเทียบกับ PGE, CTE) ถึงเกือบ 1.9 (เมื่อเปรียบเทียบกับ PRE, GE) การคำนวณเดียวกันสำหรับความเข้มข้น 10 มก./มล. จะให้ปัจจัยตั้งแต่ 1.4 (เมื่อเปรียบเทียบกับ PGE) กับปัจจัยของช่วง 2-3 (เมื่อเปรียบเทียบกับ CTE, GGE) แม้กระทั่งปัจจัยอย่างเช่น 10 เมื่อเปรียบเทียบกับ พ.ศ. เมื่อเน้นไปที่สารสกัด KTE จะสังเกตได้ว่าความเข้มข้นของสารสกัดที่ลดลงตามปัจจัย 5 (จากค่า 50 มก./มล. เป็น 10 มล./มล.) ส่งผลให้ค่า SPF ลดลงตามแฟคเตอร์3.4 ซึ่งหมายความว่า SPF ลดลงช้ากว่าความเข้มข้น ข้างต้นแสดงให้เห็นว่าสารสกัด KTE มีประสิทธิภาพแม้ในความเข้มข้นต่ำ (รูปที่ 8)

2.7.การวัดการสูญเสียน้ำผ่านผิวหนัง (TEWL) และการวัดความชุ่มชื้นของผิวหนัง

เนื่องจากกิจกรรมทางชีวภาพและทางเภสัชวิทยาที่หลากหลายของวัตถุดิบจากพืช สารจากพืชที่มีอยู่ในสารสกัดจึงส่งผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อสภาพของผิวหนัง โดยเฉพาะอย่างยิ่ง เรากำลังพูดถึงที่นี่เกี่ยวกับอิทธิพลของสารทุติยภูมิต่อสภาพผิวของเรา [78,79]

ในขั้นต่อไปของการวิจัย ได้ทำการวิเคราะห์ความชุ่มชื้นและ TEWL ประเมินผลของสารสกัดที่ทดสอบกับผิวหนัง ทำการวัดที่ช่วงเวลาสองครั้งที่ 60 และ 360 นาทีสำหรับความเข้มข้นของสารสกัดที่ 10 มก./มล. สำหรับการวัด TEWL แสดงการลดลงเป็นเปอร์เซ็นต์สูงสุดสำหรับสารสกัด PGE โดยที่ค่าควบคุม 13.9 ลดลงเหลือ 8.71 ส่งผลให้เปอร์เซ็นต์ลดลง 37 เปอร์เซ็นต์ นอกจากนี้ยังควรค่าแก่การวิเคราะห์สารสกัด KTE จากมุมมองดังกล่าว เนื่องจากเป็นค่าที่แสดงค่า SPF สูงสุด สำหรับสารสกัด KTE ค่าควบคุม TEWL ลดลงเป็น 10.22 ซึ่งหมายความว่าลดลง 26 เปอร์เซ็นต์ (รูปที่ 9A)

อย่างไรก็ตาม ในกรณีของการวัดด้วยเครื่องมือที่สอง พบว่าสารสกัดที่วิเคราะห์ทำให้เกิดความชุ่มชื้นเพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับตัวอย่างควบคุม ทั้งหลังจาก 60 และหลังจาก 360 นาที

จากผลการวิเคราะห์พบว่าสารสกัด PRE, PGE, KTE, CTE และ GGE ที่วิเคราะห์ช่วยเพิ่มความชุ่มชื้นของผิว (รูปที่ 9B) พบว่ามีคุณสมบัติในการให้ความชุ่มชื้นเพิ่มขึ้นพร้อมกับความเข้มข้นของสารสกัดในการเตรียมการที่เพิ่มขึ้น คุณสมบัติในการให้ความชุ่มชื้นที่แข็งแกร่งที่สุดได้รับการสังเกตสำหรับสารสกัด PRE และ PGE เท่ากับ 32 เปอร์เซ็นต์และ 29 เปอร์เซ็นต์หลังจาก 60 นาทีและเท่ากับ 21 เปอร์เซ็นต์และ 22 เปอร์เซ็นต์หลังจาก 360 นาที ระดับความชุ่มชื้นต่ำสุดของผิวได้รับการค้นพบสำหรับสารสกัด KTE เท่ากับ 18 เปอร์เซ็นต์หลังจาก 60 นาทีและใกล้ถึง 3 เปอร์เซ็นต์หลังจาก 360 นาที

2.8. การวิเคราะห์แอปพลิเคชัน

2.8.1. การกำหนดพารามิเตอร์สีของสารสกัด

เนื่องจากสีตามธรรมชาติ สารออกฤทธิ์ของดอกไม้จากพืชจึงสามารถใช้เป็นสีย้อมธรรมชาติในผลิตภัณฑ์เชิงพาณิชย์มากมาย เช่น เครื่องสำอางและอาหาร วิเคราะห์สีสำหรับสารสกัดที่ได้รับ (ตารางที่ 5)

พบว่าสารสกัด PRE, KTE และ CTE มีศักยภาพสูงสุดในฐานะเม็ดสีเครื่องสำอางจากธรรมชาติ อย่างไรก็ตาม ค่าโครมาสูงสุด (C*) ถูกสังเกตพบสำหรับ CTE จากค่าพารามิเตอร์ h องศา พบว่าเป็นสีเหลืองของสารสกัดนี้ที่สังเกตได้ด้วยตาเปล่า ในกรณีของสารสกัด KTE และ PRE แม้จะมีค่า C* ต่ำ (2.8) ก็ตาม สีของสารสกัดเหล่านี้ก็สามารถมองเห็นได้ชัดเจนด้วยตาเปล่า และถูกกำหนดให้เป็นสีม่วงแดงสำหรับ PRE และสีน้ำเงิน-ม่วงสำหรับสารสกัด KTE สารสกัดจากน้ำของ PGE และ GGE มีสีแดงและสีส้มเล็กน้อย และค่าโครมาที่ได้รับอยู่ที่ระดับ 1.3 สำหรับสีนี้ ค่าเหล่านี้ไม่สามารถมองเห็นได้ด้วยตาเปล่าอย่างมีนัยสำคัญ

2.8.2. การกำหนดพารามิเตอร์สีของเครื่องสำอางตามสารสกัด

ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา มีความจำเป็นต้องพัฒนาสีย้อมใหม่ที่มาจากธรรมชาติ โดยเฉพาะอย่างยิ่งในอุตสาหกรรมอาหารและเครื่องสำอาง เมื่อเทียบกับสีย้อมที่ได้จากการสังเคราะห์ อาจส่งผลเสียต่อสุขภาพของมนุษย์และสิ่งแวดล้อมน้อยกว่า [80] สารสกัดที่ได้รับถูกใช้ในการกำหนดสูตรของน้ำยาล้างเครื่องสำอางที่เป็นแบบจำลองของไมเซลลาร์ ในแต่ละสูตรผสม พวกมันถูกใช้ในความเข้มข้น 1 เปอร์เซ็นต์ ผลลัพธ์ของพารามิเตอร์สีของเครื่องสำอางรุ่นแสดงไว้ในตารางที่ 6

สังเกตได้ว่าการเติมสารสกัดน้ำ 1 เปอร์เซ็นต์จาก PRE, PGE, CTE และ GGE มีผลต่อสีของเมคอัพรีมูฟเวอร์อย่างมีนัยสำคัญ ตัวอย่างแต่ละสีสามารถมองเห็นได้ด้วยตาเปล่าอย่างชัดเจน สารสกัด PRE เปลี่ยนสีเครื่องสำอางเป็นสีส้ม และสารสกัด PGE, CTE และ GGE เปลี่ยนเป็นสีเหลือง

ความเป็นไปได้ของการใช้สารสกัดที่วิเคราะห์เป็นสีย้อมที่เป็นไปได้นั้นได้รับการยืนยันโดยค่าที่ค่อนข้างสูงของ △Make-up remover with extract/base make-up remover ซึ่งบ่งชี้ถึงการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญในสีของโมเดลเครื่องสำอางด้วยการเพิ่มสารสกัดเปรียบเทียบ ไปยังตัวอย่างฐาน (โดยไม่ต้องเพิ่มสารสกัด) ข้อมูลวรรณกรรม [73] แสดงให้เห็นว่าถ้าค่า AE สูงกว่า 5 สีจะถูกรับรู้โดยคืนที่เปลือยเปล่าและถูกมองว่าเป็นเอฟเฟกต์สี สำหรับน้ำยาล้างเครื่องสำอางที่มีสารสกัด PRE, KTE และ CTE จะได้รับค่า AE 8.83,9.17 และ 8.14 ตามลำดับ ในกรณีของผลิตภัณฑ์ที่มีสารสกัดจาก PGE และ GGE ไม่พบอิทธิพลอย่างมีนัยสำคัญในสารสกัดที่มีต่อสีของสารเตรียม ค่าของ AE อยู่ในช่วง 2.51-2.82 ซึ่งหมายความว่าความแตกต่างของสีจะมองเห็นได้เฉพาะผู้สังเกตการณ์ที่มีประสบการณ์เท่านั้น [80,81]

3. วัสดุและวิธีการ

3.1. วัสดุพืชและขั้นตอนการสกัด

วัสดุจากพืชที่ใช้ในการวิจัย ได้แก่ ดอกไม้แห้งของ P. rhoeas L., P.granatum L., C.ternatea L., C.tinctorius L. และ G.globosa L. ซึ่งได้มาจากร้านขายสมุนไพรในท้องถิ่น . กระบวนการสกัดได้ดำเนินการในอ่างอัลตราโซนิก (Digital Mgtrasonic Cleaner, Berlin, Germany) ซึ่งดำเนินการโดยใช้วิธีการที่อธิบายโดย Yang และคณะ[82] ใช้ดอกไม้แห้ง 10 กรัม และน้ำ 100 กรัม เพื่อเตรียมน้ำสกัดจากพืชที่ทดสอบ กระบวนการนี้ดำเนินการเป็นเวลา 20 นาทีที่อุณหภูมิห้อง สารสกัดที่ได้รับจะถูกรวบรวมและกรองสามครั้งผ่านกระดาษกรอง Whatman No. 1 หลังจากการกรอง สารสกัดถูกระเหยภายใต้แรงดันที่ลดลงที่ 40 องศา สารละลายสต็อคที่ความเข้มข้น 100 มก./มล. ถูกเตรียมจากสารสกัดแห้ง และถูกเก็บไว้ในที่มืดที่ 4 องศา จนกระทั่งมีการวิเคราะห์เพิ่มเติม ใช้ตัวย่อต่อไปนี้: PRE—สารสกัด Papaver rhoeas, PGE—สารสกัด Punica granatum, GGE— สารสกัด Gomphrena globosa, CTE— สารสกัด Carthamus tinctorius, KTE— สารสกัด Clitoria ternatea

3.2. การหาค่าสารประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพโดย HPLC-UV-ESI-MS

สารสกัดที่ได้รับถูกวิเคราะห์เพื่อหาสารประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพหลักของพวกมันโดยใช้ HPLC(DionexUltiMate 300{{0}} RS Thermo Fisher Scientific, Sunnyvale, CA, USA) ควบคู่กัน ด้วยแมสสเปกโตรมิเตอร์ (4000 QTRAP, AB Sciex, Concord, ON, Canada) พร้อมกับแหล่งไอออนไนซ์ของสเปรย์ด้วยไฟฟ้า (ESI) และมวลดักจับไอออนสี่เท่า เครื่องวิเคราะห์ การแยกโครมาโตกราฟีทำได้ด้วยระบบเกรเดียนต์เฟสย้อนกลับ นอกจากนี้ คอลัมน์โครมาโตกราฟีขนาด 100×4.6 มม. Kinetex 3.5 µm XB-C18 100 A ที่มีโซ่ด้านข้างแบบไอโซ-บิวทิลและด้วยเฟสคงที่ที่ปิดปลายด้วย TMS ที่ใช้กับคอลัมน์ป้องกันองค์ประกอบที่คล้ายกันถูกซื้อจาก Phenomenex และคงไว้ที่ 30 องศา . ระบบตัวทำละลายแบบไบนารีที่ประกอบรวมด้วยกรดฟอร์มิกในน้ำ 0.1 เปอร์เซ็นต์ (o/v) เป็นตัวทำละลาย A และเมทานอลในฐานะตัวทำละลาย B ถูกใช้ภายใต้โหมดเกรเดียนต์ระหว่าง 19.1 นาทีของเวลาการทำงาน เงื่อนไขการชะที่ใช้มีดังนี้:0.0-15.0 นาที 25-100 เปอร์เซ็นต์ B,15.0-17.0 ต่ำสุด 100 เปอร์เซ็นต์ B,170-17.1 นาที 100-25 เปอร์เซ็นต์ B,17.1-19.1 นาที 25 เปอร์เซ็นต์ B. อัตราการไหลของเฟสเคลื่อนที่คือ 0.6 มล./นาที และปริมาตรการฉีดคือ 10 ไมโครลิตร สารชะถูกเฝ้าติดตามโดยอิเล็กโตรสเปรย์ไอออนแมสสเปกโตรมิเตอร์ (ESI-MS) ภายใต้โหมดไอออนลบและสแกนจาก m/z 20 ถึง 1000 Da สำหรับการวิเคราะห์เชิงปริมาณ เครื่องตรวจจับ MS แบบสี่เท่าสามขั้วทำงานในโหมดสแกนการตรวจสอบปฏิกิริยาหลายรายการ (MRM) สภาวะที่เหมาะสมของเครื่องวิเคราะห์มวลและการเลือกไอออนของผลิตภัณฑ์สำหรับสารประกอบแต่ละชนิดถูกกำหนดหาในการทดลอง เพื่อจุดประสงค์นี้ สารละลายมาตรฐานของสารประกอบที่ตรวจสอบแล้ว (1 นาโนกรัม/มิลลิลิตร) ในองค์ประกอบเฟสเคลื่อนที่ถูกแนะนำโดยใช้ปั๊มแช่ที่ทำงานในการนำส่งตัวอย่างคงที่ หลังจากตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้เลือกไอออนของสารตั้งต้นที่ถูกต้องแล้ว ศักยภาพในการลดความทึบ (DP) ศักยภาพในการเข้า (EP) ศักยภาพในการออกจากเซลล์การชน (CXP) และพลังงานการชน (CE) ได้รับการปรับให้เหมาะสมสำหรับการเปลี่ยน MRM แต่ละครั้ง (ตาราง S1) มีการตรวจสอบการเปลี่ยนแปลง MRM สองครั้ง หนึ่งรายการสำหรับการวัดปริมาณ และอีกรายการสำหรับการยืนยัน พารามิเตอร์ MS ถูกตั้งค่าดังนี้: อุณหภูมิของเส้นเลือดฝอยที่ 600 C, แก๊สม่านที่ 35 psi, แก๊สเครื่องพ่นยาขยายหลอดลมที่ 60 psi และก๊าซที่ทำให้แห้งที่ 50 psi แรงดันแหล่งกำเนิดของโหมดไอออนไนซ์เชิงลบ -4500 V ถูกใช้สำหรับการกำหนดหาสารประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพ ใช้ไนโตรเจนเป็นม่านและแก๊สชน การวิเคราะห์ข้อมูลได้รับการประมวลผลด้วยซอฟต์แวร์ Analyst 1.5.1 การระบุสารประกอบที่เลือกทำได้โดยมวลโมเลกุลและชิ้นส่วนของรายการแอนไอออนของสารประกอบแต่ละชนิดและยืนยันโดยการกระจายตัวของ MS2 การระบุตัวตนของสารประกอบเก้าชนิดถูกกำหนดหาพร้อมกับสูตรทางเคมีของพวกมัน ไอออนของโมเลกุลที่ลดโปรตอน และไอออนของชิ้นส่วนที่มีลักษณะเฉพาะสำหรับพีคแต่ละพีค สารประกอบหกชนิดถูกหาปริมาณโดยอิงจากกราฟการปรับเทียบที่สร้างขึ้นโดยใช้พื้นที่พีคของการเปลี่ยนแปลง MRM ที่เข้มข้นที่สุดของมาตรฐานการวิเคราะห์ ความเป็นเส้นตรงของการตอบสนองของตัวตรวจวัดสำหรับสารประกอบเชิงปริมาณถูกแสดงให้เห็นโดยการฉีดสารมาตรฐานการสอบเทียบที่ระดับความเข้มข้นแปดระดับตั้งแต่ 0.01 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรถึง 2 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร เส้นโค้งการสอบเทียบเป็นแบบเส้นตรงโดยมีค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ (R) มากกว่า 0.99 ในกรณีที่ตัวอย่างไม่ตกอยู่ในช่วงเชิงเส้นของตัวตรวจวัด CMS ตัวอย่างจะถูกเจือจาง

มาตรฐานการวิเคราะห์ของกรดควินิก, กรดแกลลิก, กรดคาเฟอีน, กรดคาเฟโออิลควินิก(CQA, สองไอโซเมอร์:3- และ 5-CQA) และเควอซิทินซื้อมาจากซิกมา-อัลดริช, เซนต์หลุยส์ รัฐมิสซูรี สหรัฐอเมริกา ). มาตรฐานทั้งหมดที่ใช้เป็นเกรดวิเคราะห์ (2 มากกว่าหรือเท่ากับความบริสุทธิ์ 99 เปอร์เซ็นต์)

สารละลายสต็อคมาตรฐานถูกเตรียมโดยการชั่งน้ำหนักและละลายอย่างแม่นยำ 20 มก. ของแต่ละมาตรฐานในเมทานอลเกรด LC-MS 10 มล. เพื่อให้ความเข้มข้น 2 มก./มล. การเจือจางแบบอนุกรมของ 2.{{10}} ไมโครกรัม/มิลลิลิตร, 1.5 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร,1.0 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร, 0.5 กรัม/มิลลิลิตร,0 .1 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร, 0.05 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร,0.02 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร, และ 0.01 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรถูกทำขึ้นโดยใช้สารละลายเมทานอลเกรด LC-MS ขีดจำกัดของการหาปริมาณ (LOQ) ถูกกำหนดเป็น 0.01 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร

การสอบวิเคราะห์ LC-MS/MS ถูกดำเนินการเป็นสามเท่า ข้อมูลที่ได้มาถูกนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน

3.3. การกำหนดคุณสมบัติของสารต้านอนุมูลอิสระ

3.3.1.ABTS·บวกการทดสอบการกวาดล้าง

ขั้นแรก สารละลาย ABTS ถูกเตรียมโดยการผสม ABTS 19.5 มก. และโพแทสเซียม เพอร์ซัลเฟต 3.3 มก. กับบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 7 มล. (pH=7.4) และละลายเป็นเวลา 16 ชั่วโมงในความมืด จากนั้น สารละลายถูกเจือจางจนถึงการดูดกลืนแสงที่ระดับประมาณ 10 วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่น 入=734 นาโนเมตร ถัดไป 20 มล. ของสารสกัด KTE, PGE, PRE, CTE และ GGE (10,100,250,500 ไมโครกรัม/มล.) ถูกผสมกับสารละลาย ABTSe ​​บวก เจือจาง 980 มล. แล้วบ่มเป็นเวลา 10 นาทีในความมืด ในขั้นตอนต่อไป การดูดกลืนแสงของตัวอย่างที่เตรียมไว้ถูกวัดที่ 入=734 นาโนเมตร โดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV/VIS Aquamate Helion (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) ใช้น้ำกลั่นเป็นน้ำเปล่า ABTS บวก scavenging คำนวณจากสมการ (1):

โดยที่: As—การดูดซับของตัวอย่าง; Ac—การดูดกลืนของตัวอย่างควบคุม การวัดถูกดำเนินการเป็นสามเท่าสำหรับตัวอย่างที่สกัดได้แต่ละตัวอย่าง ขั้นตอนนี้อธิบายโดย Gawel-Beben และคณะ [83].

3.3.2.DPPH Radical Scavenging Assay

ความสามารถของสารสกัดในการไล่อนุมูลอิสระได้ดำเนินการโดยใช้วิธีการที่อธิบายไว้โดย Brand-Williams et al. [84]. มันขึ้นอยู่กับการใช้ 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl （DPPH） radical อย่างแรก สารละลายที่เป็นน้ำ 33 ไมโครลิตรของสารสกัดที่ความเข้มข้น 100ug/mL ถูกผสมกับสารละลายเมทานอล 167 ไมโครลิตรของ DPPH (4 มิลลิโมลาร์) และถ่ายโอนไปยังจานหลุม 96-หลุม จากนั้นผสมด้วยการเขย่า หลังจากนั้น วัดค่าการดูดกลืนแสงของตัวอย่างที่ความยาวคลื่น 517 นาโนเมตร ทำการวัดทุกๆ 5 นาที เป็นเวลา 30 นาทีบนเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV-VIS Filter Max入=5 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) ทำการจำลองแบบอิสระสามครั้งสำหรับแต่ละสารสกัด น้ำที่มีสารละลาย DPPH ถูกใช้เป็นตัวควบคุม ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระถูกแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ของการยับยั้ง DPPH โดยใช้สมการ (2):

โดยที่: As—การดูดซับของตัวอย่าง; Ac—การดูดกลืนของตัวอย่างควบคุม การวัดถูกดำเนินการเป็นสามเท่าสำหรับตัวอย่างที่สกัดได้แต่ละตัวอย่าง

3.3.3.การตรวจจับระดับภายในเซลล์ของชนิดออกซิเจนที่เกิดปฏิกิริยา (ROS)

เพื่อตรวจสอบความสามารถของสารสกัดที่วิเคราะห์เพื่อสร้างการผลิตภายในเซลล์ของสปีชีส์ออกซิเจนปฏิกิริยาในเซลล์ HaCaT และ BJ จะใช้สีย้อมฟลูออโรเจนิก H และ DCFDA สารประกอบนี้มีความสามารถในการเข้าสู่เซลล์โดยการแพร่กระจายแบบพาสซีฟ โดยที่มันถูกดีอะซีไทเลตโดยเอสเทอเรสภายในเซลล์ไปเป็นสารประกอบที่ไม่เรืองแสง ถ้ามีออกซิเจนชนิดปฏิกิริยาอยู่ในเซลล์ สารประกอบนี้จะถูกแปลงเป็น DCF ที่มีฟลูออเรสเซนต์สูง เพื่อกำหนดหาระดับภายในเซลล์ของ ROS ใน HaCaT และ BJ เซลล์ถูกเพาะในเพลต 96-หลุม จากนั้น เพาะเลี้ยงเซลล์ในตู้ฟักเป็นเวลา 24 ชั่วโมง สื่อ DMEM ถูกเอาออกและแทนที่ด้วย 10 μM H2DCFDA（Sigma Aldrich, St.Louis, MO, USA） ที่ละลายในตัวกลาง DMEM ที่ปราศจากซีรัม เซลล์ HaCaT และ BJ ถูกบ่มใน H, DCFDA เป็นเวลา 45 นาที จากนั้นจึงบ่มด้วยสารสกัดที่ความเข้มข้น∶ 100, 250 และ 500 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร เซลล์ที่บำบัดด้วยไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 1 มิลลิโมลาร์ (H2O2) ถูกใช้เป็นกลุ่มควบคุมเชิงบวก ตัวอย่างกลุ่มควบคุมคือเซลล์ที่ไม่ผ่านการบำบัดด้วยสารสกัดที่ทดสอบ การเรืองแสง DCF ถูกวัดทุกๆ 90 นาทีโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท FilterMax F5 (Thermo Fisher Scientific) ที่การกระตุ้นสูงสุด 485 นาโนเมตร และสเปกตรัมการแผ่รังสี 530 นาโนเมตร [85]

3.4. การประเมินการยับยั้งเมทริกซ์ Metallopeptidases

3.4.1.การกำหนดฤทธิ์ต้านอีลาสเทส

เพื่อตรวจสอบความเป็นไปได้ของการยับยั้งเมทริกซ์เมทัลโลโปรตีน, นิวโทรฟิลอีลาสเทส (NE), ชุดฟลูออโรเมตริก (Abcam, ab118971) ถูกนำมาใช้ การทดสอบดำเนินการตามคำแนะนำที่แนบมากับชุดอุปกรณ์และตามขั้นตอนที่อธิบายไว้โดย Niziol-Lukaszewska et al [86]. การวิเคราะห์ดำเนินการในเพลตมาตรฐานของ96-ที่มีก้นแบนที่ชัดเจน สำหรับการวิเคราะห์ ใช้สารสกัดจากพืชที่ความเข้มข้น 100 และ 250 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร เริ่มแรก สารละลายเอนไซม์ NE สารตั้งต้น NE และสารควบคุมสารยับยั้ง (SPCK) ถูกเตรียมตามคำแนะนำ สารละลาย NE ที่เจือจางถูกเติมลงในหลุมทั้งหมด จากนั้นจึงเติมตัวอย่างทดสอบ ตัวควบคุมตัวยับยั้ง และตัวควบคุมเอนไซม์ (Assay Buffer) ลงในหลุมที่ตามมา จากนั้นนำตัวอย่างมาผสมและฟักที่อุณหภูมิ 37 องศาเป็นเวลา 5 นาที ในระหว่างนี้ ส่วนผสมของปฏิกิริยาถูกเตรียมโดยการผสม Assay Buffer และซับสเตรต NE ของผสมถูกเติมลงในแต่ละหลุมและผสมให้ละเอียด การเรืองแสงถูกวัดทันทีที่ความยาวคลื่นกระตุ้น 入=400 นาโนเมตร และการปล่อย 入=505 นาโนเมตร โดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท (FilterMax F5, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) ความสามารถในการยับยั้งกิจกรรม NE ของการวิเคราะห์ ตัวอย่างคำนวณจากสมการ (3):

ผลลัพธ์สุดท้ายคือค่าเฉลี่ยเลขคณิตของการวัดอิสระสามค่า

3.4.2. ความมุ่งมั่นของกิจกรรมต่อต้านคอลลาเจน

เพื่อประเมินความสามารถของสารสกัดที่ได้รับในการยับยั้งการทำงานของคอลลาเจนเนส ได้ใช้ชุดวัดฟลูออโรเมตริก (Abcam, Cambridge, UK, ab211108) การทดสอบดำเนินการตามคำแนะนำที่แนบมากับชุดอุปกรณ์และตามขั้นตอนที่อธิบายไว้โดย Niziol-Lukaszewska et al [86]. การวิเคราะห์ดำเนินการในเพลตมาตรฐาน96-ที่มีก้นแบนที่ชัดเจน สำหรับการวิเคราะห์ ใช้สารสกัดจากพืชที่ความเข้มข้น 100 และ 250 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร อย่างแรก คอลลาเจนเนส (COL) ถูกละลายในบัฟเฟอร์สำหรับการวิเคราะห์คอลลาเจน (CAB) จากนั้น เติมตัวอย่างที่วิเคราะห์ไปยัง COL และ CAB ตัวอย่างกลุ่มควบคุมสารยับยั้งถูกเตรียมโดยการผสมตัวยับยั้งคอลลาเจนเนส (1,10-ฟีแนนโทรลีน(80 มิลลิโมลาร์)กับคอลลาเจนเนสและบัฟเฟอร์ CAB เตรียมบ่อควบคุมเอนไซม์โดยการผสม COL ที่เจือจางกับ CAB บัฟเฟอร์ CAB ถูกใช้เป็นตัวควบคุมเบื้องหลัง จากนั้น บ่มตัวอย่างที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที เตรียมส่วนผสมของปฏิกิริยาโดยผสมสารตั้งต้นคอลลาเจนกับ CAB ส่วนผสมของปฏิกิริยาที่เตรียมในลักษณะนี้ถูกเติมลงในตัวอย่างที่วิเคราะห์ทั้งหมดและผสมให้ละเอียด หลังจากนั้น วัดการเรืองแสงที่ ความยาวคลื่นกระตุ้น 490 nm และการปล่อย 520 nm การวัดดำเนินการในโหมดจลนศาสตร์เป็นเวลา 60 นาทีที่ 37 C ความสามารถในการยับยั้งการทำงานของ COL ของสารสกัดที่ได้รับคำนวณโดยสมการ (4):

3.5. การกำหนดคุณสมบัติต้านการอักเสบ

3.5.1. การยับยั้งการเสื่อมสภาพของโปรตีน

กิจกรรมการยับยั้งโปรตีนของ PRE, PGE, KTE, CTE และ GGEextracts ดำเนินการตามวิธีการของ Sakat et al. [87] ซึ่งแก้ไขโดย Gunathilake et al. [88] โดยสังเขป สารละลายปฏิกิริยา (2 มล.)ประกอบด้วย 1 มล. ของทริปซิน 1 เปอร์เซ็นต์ใน 2{{10}} มิลลิโมลาร์ Tris-HCl buffer(pH7.4) และ 1 มล. ของตัวอย่างทดสอบ ({{17} }.02 มล. สกัด น้ำ 0.980 มล.). สารละลายถูกบ่ม (37 องศาเป็นเวลา 5 นาที) และจากนั้น 1 มิลลิลิตรของเคซีน 0.8 เปอร์เซ็นต์ (น้ำหนัก/ปริมาตร) ถูกเติมและของผสมถูกบ่มเพิ่มเติมเป็นเวลา 20 นาที ที่ส่วนท้ายของการฟักไข่ 2 มิลลิลิตรของกรดเปอร์คลอริก 70 เปอร์เซ็นต์ถูกเติมเพื่อทำให้ปฏิกิริยาสมบูรณ์ ของผสมถูกหมุนเหวี่ยง, และการดูดกลืนแสงของส่วนลอยเหนือตะกอนถูกวัดที่ 210 นาโนเมตรเทียบกับบัฟเฟอร์ในลักษณะว่างเปล่า สารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟตถูกใช้เป็นสารควบคุม เปอร์เซ็นต์การยับยั้งการเสื่อมสภาพของโปรตีนคำนวณโดยใช้สูตรต่อไปนี้:

โดยที่ A1= การดูดกลืนของตัวอย่างกลุ่มควบคุม และ A2= การดูดกลืนของตัวอย่างทดสอบ

3.5.2. การยับยั้งกิจกรรม Lipoxygenase

ความสามารถของสารสกัดที่ได้รับในการยับยั้งการทำงานของ lipoxygenase ถูกกำหนดโดยใช้วิธีการที่บรรยายโดย Sarvesvaran et al. 【89】. ขั้นแรก ผสมสารสกัดพืช 10 ไมโครลิตรที่ความเข้มข้นต่างกัน (100, 250 และ 500 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ในจานหลุม 96-หลุมที่มี 160 ไมโครลิตรของ 100 มิลลิโมลาร์ PBS และ 20 ไมโครลิตรของสารละลายถั่วเหลืองลิพอกซีเจเนส (167 U/ มล.). ตัวอย่างถูกบ่มที่ 25 องศาเป็นเวลา 10 นาที และหลังจากเวลานี้ 10 ไมโครลิตรของกรดโซเดียมไลโนเลอิกถูกเติมเพื่อเริ่มต้นปฏิกิริยา จากนั้น วัดค่าการดูดกลืนแสงของตัวอย่างที่ 234 นาโนเมตร ในช่วงเวลา 3 นาทีในทุกนาทีโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท FilterMax F5 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) Diclofenac ถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวก เปอร์เซ็นต์ของการยับยั้งการออกฤทธิ์ของลิพอกซีเจเนสคำนวณจากสมการ (6):

โดยที่: เช่นเดียวกับค่าการดูดกลืนแสงของตัวอย่างที่ทดสอบ Ac คือการดูดกลืนแสงของกลุ่มควบคุมเชิงลบ

ผลลัพธ์สุดท้ายคือค่าเฉลี่ยเลขคณิตของการวัดอิสระสามค่า

3.6. การวิเคราะห์ความเป็นพิษต่อเซลล์

3.6.1. การเพาะเลี้ยงเซลล์

ในการศึกษานี้ ใช้เซลล์ผิวสองสาย: keratinocytes ของมนุษย์ปกติ (HaCaT) และไฟโบรบลาสต์ (BJ) HaCaT ได้มาจาก CLSCell Lines Service (CLS Cell Lines Service GmbH, Eppelheim ประเทศเยอรมนี) และ BJ จาก American Type Culture Collection ( มานาสซาส, เวอร์จิเนีย, สหรัฐอเมริกา). เซลล์ถูกปลูกใน Dulbecco's Modification of Eagle's Medium (DMEM, Biological Industries, Cromwell, CO, USA) ด้วยโซเดียมไพรูเวต, L-glutamine และปริมาณกลูโคสสูง (4.5g/L) สื่อดังกล่าวยังอุดมไปด้วยซีรั่มโคนมในครรภ์ 10 เปอร์เซ็นต์ (Gibco, Waltham, MA, USA) และ 1 เปอร์เซ็นต์ด้วยยาปฏิชีวนะ (100 U/mL penicillin และ 1000 ug/mL streptomycin, Gibco) เพื่อป้องกันการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ เซลล์เติบโตในตู้ฟักที่อุณหภูมิ 37 องศาในบรรยากาศที่มีความชื้นในอากาศ 95 เปอร์เซ็นต์และคาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์

3.6.2.Alamar Blue Assay

หลังจากที่เซลล์เพาะเลี้ยง (HaCaT และ BJ) ถึงจุดบรรจบกันที่ต้องการแล้ว ตัวกลาง DMEM ถูกสำลักในขวดเพาะเลี้ยง เซลล์ที่ติดอยู่ด้านล่างถูกล้างสองครั้งด้วยน้ำเกลือที่บัฟเฟอร์ด้วยฟอสเฟตที่ปราศจากเชื้อ ชั้นเซลล์ถูกแยกออกด้วยทริปซิน จากนั้นเซลล์ถูกวางในตัวกลาง DMEM ที่สดใหม่ เซลล์ถูกชุบในเพลตก้นแบน96-หลุม (VWR, Radnor, PE, USA) และหลังจากติดเข้ากับด้านล่างของเพลต เซลล์ถูกบำบัดด้วยสารสกัด（100, 250 และ 500 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร） เซลล์ถูกบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมง

การทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์ดำเนินการด้วยการทดสอบ Alamar Blue (Sigma, R7017, Life Technologies, Bleiswijk, The Netherlands) หลังจากการฟักไข่ สารละลายเรซาซูรินที่ความเข้มข้น 60 uM ถูกเติมลงในหลุม จากนั้นเพลตถูกวางในตู้ฟักที่ 37 องศาเป็นเวลา 2 ชั่วโมง หลังจากเวลานี้ วัดแสงเรืองแสงแล้ว（入=570นาโนเมตร） ความเข้มข้นของสารสกัดแต่ละชนิดถูกดำเนินการในการจำลองแบบสามครั้ง

3.6.3. การทดสอบการดูดซึมสีแดงที่เป็นกลาง

การทดสอบการดูดซึมด้วยสีแดงที่เป็นกลางเป็นการทดสอบครั้งที่สองที่ใช้ในการกำหนดความเป็นพิษต่อเซลล์ของ PRE, PGE, KTE, CTE และ GGE อย่างแรก 96-เพลตก้นแบนหลุมถูกเตรียมตามที่อธิบายไว้ในส่วนก่อนหน้า หลังจากผ่านไป 24 ชั่วโมงของการให้เซลล์สัมผัสกับสารสกัด พวกเขาถูกสำลักและแทนที่ด้วยสีย้อมสีแดงที่เป็นกลาง (40 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) และบ่มเป็นเวลา 2 ชั่วโมง หลังจากเวลานี้ เซลล์ถูกล้างด้วยน้ำเกลือที่มีบัฟเฟอร์ฟอสเฟต ในขั้นตอนต่อไป บัฟเฟอร์สำหรับกำจัดสี (150 ไมโครลิตร) ถูกเติมลงในหลุม จากนั้น การดูดซึมของ dve สีแดงที่เป็นกลางถูกกำหนดโดยการวัดความหนาแน่นของแสง (OD) ที่ 540 นาโนเมตร ความเข้มข้นของสารสกัดแต่ละชนิดถูกดำเนินการในการจำลองแบบสามครั้ง

3.7. การกำหนดปัจจัยป้องกันแสงแดด (ในหลอดทดลอง)

ปัจจัยการป้องกันแสงแดด (SPF) ถูกกำหนดหาโดยการวัดค่าการดูดกลืนแสงของสารละลายในน้ำของสารสกัดที่มีความเข้มข้น 10 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรและ 50 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร ภายในช่วงความยาวคลื่นตั้งแต่ 290 ถึง 320 นาโนเมตรที่ช่วง 5-นาโนเมตร จากผลลัพธ์ที่ได้ ค่า SPF คำนวณจากสมการ Mansur [90]: โดยที่∶ EE（λ）—สเปกตรัมของการเกิดเม็ดเลือดแดง, I（入）—สเปกตรัมความเข้มของแสงอาทิตย์, ABS（入）—การดูดซับของผลิตภัณฑ์ครีมกันแดด, CF— ตัวประกอบการแก้ไข（=10）, E（N）×I（λ）—ค่าที่กำหนดโดย Sayre ถูกใช้ [91]

3.8. การสูญเสียน้ำผ่านผิวหนัง (TEWL) และการวัดความชุ่มชื้นของผิวหนัง

การวัด TEWL และความชุ่มชื้นของผิวดำเนินการโดยใช้โพรบ TEWAmeter TM 300 และโพรบ Corneometer CM 825 ที่เชื่อมต่อกับอะแดปเตอร์ MPA (Courage plus Khazaka Electronic, Köln, Germany) มีอาสาสมัครห้าคนเข้าร่วมการศึกษานี้ ทำเครื่องหมายผิวหนังหกส่วน (ขนาด 2 × 2 ซม.) ใช้สารสกัดจากพืชที่ทดสอบจำนวน 0.2 มล. ในห้าแห่งสถานที่ที่หกคือกลุ่มควบคุม , ระดับความชุ่มชื้นและการวัด TEWL ถูกนำมา ผลลัพธ์สุดท้ายคือค่าเฉลี่ยเลขคณิต (จากอาสาสมัครแต่ละคน) ของการวัดอิสระห้าครั้ง

3.9.การเตรียมนางแบบเครื่องสำอาง (เมคอัพ รีมูฟเวอร์)ที่มีส่วนผสมของสารสกัด

เตรียมหุ่นจำลอง (เมคอัพ รีมูฟเวอร์) ส่วนประกอบทั้งหมดที่ใช้เป็นไปตามข้อกำหนดของ EcoCert และ COSMOS สูตรแสดงไว้ในตารางที่ 7

ผลิตภัณฑ์ถูกผลิตขึ้นโดยผสมส่วนผสม (ตั้งแต่ข้อ 1 ถึงข้อ 6) ที่อุณหภูมิห้องจนได้ของเหลวที่เป็นเนื้อเดียวกัน ในขั้นตอนสุดท้าย pH ของสูตรถูกปรับ น้ำยาล้างเครื่องสำอางถูกแบ่งออกเป็นส่วนๆ เติมสารละลายสต็อกของสารสกัดจำนวน 1 เปอร์เซ็นต์ในแต่ละส่วนและผสมให้ละเอียด

3.10.การกำหนดพารามิเตอร์สีของสารสกัดและเครื่องสำอาง(เมคอัพรีมูฟเวอร์)ที่มีสารสกัด

ตัวอย่างสารสกัดและเครื่องสำอางที่มีสารสกัดถูกทดสอบที่อุณหภูมิห้อง 48 ชั่วโมงหลังการเตรียม มีการใช้ CHROMA METER CR-400(Konica Minolta, Sensing Inc., Tokyo, Japan) เพื่อประเมินพารามิเตอร์สี (พิกัด CIELAB) ระบบ CIELAB ถูกกำหนดโดยคณะกรรมาธิการระหว่างประเทศว่าด้วยการให้แสงสว่างในปี 1978 โดยอิงตามคุณลักษณะสามสี ได้แก่ L*, a*,b โดยที่ L* เป็นตัวแปรความสว่างตามสัดส่วนของค่าในระบบ Munsell และ a* และ b* คือพิกัดสี พิกัด a* และ b* ระบุตำแหน่งบนแกนสีแดง/เขียว และเหลือง/น้ำเงิน ตามลำดับ ( บวก a=สีแดง, -a=สีเขียว; บวก b=สีเหลือง, - ข =สีน้ำเงิน)

จากข้อมูลที่ได้รับ: L*, a* และ b* พารามิเตอร์สีต่อไปนี้ถูกคำนวณ: chroma (C*) และ hue (h) ใช้สมการต่อไปนี้:

4. บทสรุป

จากผลที่ได้รับ สามารถสรุปได้ว่าสารสกัดจากพืชที่ทดสอบแล้วมีคุณสมบัติเชิงบวกหลายประการ ซึ่งสามารถนำมาใช้ในการผลิตเครื่องสำอางเป็นส่วนผสมที่ปลอดภัยและออกฤทธิ์ทางชีวภาพได้ มันแสดงให้เห็นว่าพืชเหล่านี้เป็นแหล่งที่อุดมไปด้วยโพลีฟีนอลซึ่งให้คุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระ PRE แสดงให้เห็นความสามารถที่ดีที่สุดในการขับอนุมูลอิสระ ซึ่งอาจเป็นเพราะว่ามีโพลีฟีนอลมากที่สุดเมื่อเทียบกับพืชชนิดอื่น PGE และ PRE แสดงให้เห็นถึงความสามารถที่ดีที่สุดในการลดการผลิต ROS ในเซลล์ นอกจากนี้ พืชไม่แสดงกิจกรรมที่เป็นพิษต่อเซลล์ สารสกัดที่ผ่านการทดสอบทั้งหมดแสดงผลการยับยั้งเอนไซม์อีลาสเทสและคอลลาเจนเนส โดย P. granatum และ GGE มีฤทธิ์ยับยั้งได้ดีที่สุด ซึ่งอาจบ่งชี้ว่าพืชเหล่านี้สามารถนำมาใช้ในเครื่องสำอางเป็นสารที่ช่วยชะลอกระบวนการชราได้ นอกจากนี้ ผลที่ได้บ่งชี้ว่าพืชเหล่านี้มีคุณสมบัติต้านการอักเสบ ในกรณีนี้ CTE และ KTE ดูเหมือนจะดีที่สุด KTE และ PGE แสดงผลการป้องกันรังสี UV แม้ในระดับความเข้มข้นต่ำ ที่ความเข้มข้นสูง พืชทั้งหมดมีผลป้องกันรังสียูวี นอกจากนี้ พืชยังส่งผลดีต่อความชุ่มชื้นของผิว และลดการสูญเสียน้ำในผิวหนัง สารสกัด PRE, KTE และ CTE อาจใช้เป็นสีที่มีประสิทธิภาพในผลิตภัณฑ์เครื่องสำอาง ของเหลวแบบจำลองสำหรับการลบเครื่องสำอางที่มีสารสกัดดังกล่าวมีลักษณะเฉพาะด้วยสีที่เข้มข้นและคงตัวตลอดเวลา สีของเครื่องสำอางที่มีสารสกัด PGE และ GGE นั้นสามารถสังเกตได้โดยผู้สังเกตการณ์ที่มีประสบการณ์เท่านั้น และไม่แตกต่างจากตัวอย่างเครื่องสำอางเปล่าอย่างมีนัยสำคัญ หากไม่มีการเพิ่มสารสกัด เมื่อพิจารณาจากผลลัพธ์ทั้งหมดแล้ว สรุปได้ว่า Papaver rhoeas, Clitoria ternatea และ Carthamus tinctorius สามารถใช้เป็นแหล่งสีย้อมสีเหลือง สีส้ม สีฟ้า และสีม่วงในการผลิตเครื่องสำอางได้อย่างปลอดภัยและ ยิ่งไปกว่านั้นจะส่งผลดีต่อผิว

บทความนี้คัดลอกมาจาก Molecules 2022, 27, 922 https://doi.org/10.3390/molecules27030922 https://www.mdpi.com/journal/molecules