พารามิเตอร์การสกัดและวิธีการทำให้แห้งของ Cistanche Deserticola

Cistanche คือ Cistanche Deserticola YC Ma หรือCistanche tubulosa (Schenk) ไวท์ลำต้นเนื้อแห้งมีใบเป็นสะเก็ดของพืช OrobanchiaceaeCistanche Deserticola YC มา[1]. สารออกฤทธิ์หลักของ Cistanche Deserticola คือ ฟีนิลเอทานอลไกลโคไซด์ [2-4] การศึกษาทางเภสัชวิทยาได้แสดงให้เห็นว่ามันมีหน้าที่ของยาโป๊, ปรับปรุงภูมิคุ้มกัน, และเสริมสร้างความจำ[4-9].

ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา วิธีการพื้นผิวการตอบสนองถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการสกัดยาจีนโบราณ [{{0}}] วิธีพื้นผิวการตอบสนองมีข้อได้เปรียบโดยธรรมชาติคือความแม่นยำในการตรวจจับสูง จำนวนการทดลองที่น้อยกว่า การทำนายโมเดลฟังก์ชันที่แม่นยำ และความสามารถในการสะท้อนความสัมพันธ์ระหว่างปัจจัยและค่าที่คาดการณ์ไว้ [15-17] ดังนั้น การทดลองนี้จึงใช้คะแนนที่ครอบคลุมของเนื้อหาของฟีนิลเอทานอลไกลโคไซด์ทั้ง 5 ชนิดเป็นค่าตอบสนอง และใช้ซอฟต์แวร์ Design-Expert 8.0.6.1 เพื่อออกแบบการทดลอง เพิ่มประสิทธิภาพกระบวนการสกัดของ Cistanche Deserticola และให้ข้อมูลสำหรับการระบุตัวตนและ การจัดตั้งมาตรฐานคุณภาพของซิสตานเช่ เดซินิโกลา.

ปัจจุบันดัชนีส่วนประกอบเอ็กไคนาเซียไซด์และเวอร์บาสโคไซด์เป็นหัวข้อวิจัยที่กำลังมาแรงในด้านเทคโนโลยีการสกัดและแปรรูปของซิสตานเช่ เดซินิโกลา- เภสัชตำรับจีนฉบับปี 2015 กำหนดว่าวิธีการประมวลผลของ Cistanche Deserticola คือ "ขจัดสิ่งสกปรก ล้าง ทำให้เปียก หั่นเป็นชิ้นหนา แล้วตากให้แห้ง" [1] ไม่มีกฎระเบียบที่ชัดเจนเกี่ยวกับวิธีการทำให้แห้ง ดังนั้น การทดลองนี้จึงใช้วิธีการทำให้แห้งที่แตกต่างกัน 8 วิธี ได้แก่ การตากแดด การตากในที่ร่ม การอบแห้งด้วยเตาอบ (40, 60, 80, 100, 120 องศา) และการทำแห้งแบบเยือกแข็ง เพื่อแปรรูป Cistanche Deserticola [18] ซึ่งเป็นพื้นฐานทางทฤษฎีสำหรับ กระบวนการอบแห้ง Cistanche Deserticola

เกี่ยวกับคำแนะนำ

สารสกัดจากถังที่มีเอชินคาโอไซด์ 30%

1 วัสดุและเครื่องมือ

Cistanche Deserticola สดเก็บเกี่ยวในเดือนตุลาคม 2018 สถานที่กำเนิดคือเมือง Mitan เทศมณฑล Minqin ไป๋หยิน มณฑลกานซู รองศาสตราจารย์ Guo Yehong จากมหาวิทยาลัยเกษตรกานซู ระบุว่ามันคือ Cistanche Deserticola YC Ma ซึ่งเป็นลำต้นที่มีเนื้อและมีใบเกล็ด สารอ้างอิง echinaceaside (หมายเลขแบทช์ 82854-37-3, เศษส่วนมวลมากกว่าหรือเท่ากับ 98%), ซิสแทนเชียไซด์ A (หมายเลขแบทช์ 93236-42-1, เศษส่วนมวลมากกว่าหรือเท่ากับ 95%), เวอร์บาสโคไซด์ (หมายเลขแบทช์ { {5}}, เศษส่วนของมวลมากกว่าหรือเท่ากับ 98%), ไอโซมูราบาซิน (หมายเลขแบทช์ 61303-13-7, เศษส่วนของมวลมากกว่าหรือเท่ากับ 98%), 2′-อะซิติลเวอร์บาสโคไซด์ (หมายเลขแบทช์ 94492-24-7 เศษส่วนมวลมากกว่าหรือเท่ากับ 95%) ถูกซื้อจากเฉิงตูผู่ บริษัท เฟเด้ ไบโอเทคโนโลยี จำกัด; กรดฟอร์มิกและเมทานอลเป็นเกรดโครมาโตกราฟี บริษัทเมอร์คแห่งประเทศเยอรมนี น้ำเป็นน้ำบริสุทธิ์ และรีเอเจนต์อื่นๆ เป็นเกรดวิเคราะห์

โครมาโตกราฟีของเหลว Waters Acquity, เครื่องตรวจจับ PDA, เวิร์คสเตชั่น Empower chromatography และระบบการจัดการตัวทำละลายควอเทอร์นารี KQ-100E เครื่องทำความสะอาดอัลตราโซนิก, Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.

บริษัท; เครื่องชั่งเชิงวิเคราะห์ AL104, Mettler-Toledo Instruments Co., Ltd.; เครื่องอบแช่แข็ง LyoQuest-85, Telstar, สเปน

2 วิธีการและผลลัพธ์

2.1 การเตรียมสารละลายอ้างอิง

ชั่งน้ำหนักในปริมาณที่เหมาะสมได้อย่างแม่นยำเอชินาเซียไซด์, ซิสแทนชีโอไซด์เอ, เวอร์บาสโคไซด์, ไอซอร์บาสโคไซด์และมาตรฐานอ้างอิง 2'-อะซิติลเวอร์บาสโคไซด์ และเพิ่มเมทานอล 70% เพื่อทำให้ความเข้มข้นของมวลเป็น 1.04, 0.61, 0.63, 0.39 และ 0.48 มก./ มล. ของสารละลายอ้างอิงแบบผสม

2.2 สภาวะทางโครมาโตกราฟีของ Cistanche Deserticola

สมมาตรของน้ำ C18 (250 มม. × 4.6 มม., 5 ไมโครเมตร); อุณหภูมิคอลัมน์ 30 องศา ปริมาตรการไหล 1.0 มล./นาที; เฟสเคลื่อนที่คือเมทานอล-0.1% สารละลายน้ำกรดฟอร์มิก, การไล่ระดับการชะ: 0~12 นาที, 29%~34% เมทานอล; 12-40 นาที, 34%-40% เมทานอล; 30-35 นาที, 40%-35% เมทานอล; 35-40 นาที, 30% เมทานอล;

1-เอชินาโคไซด์ 2-ซิสตานเช เอ 3-เวอร์บาสโคไซด์ 4-ไอโซแอคทีโอไซด์ 5-2′-อะซิติแลคเตโอไซด์

รูปที่ 1 HPLC ของตัวอย่างอ้างอิงแบบผสม (A) และ C. Deserticola (B)

2.3 การเตรียมสารละลายทดสอบ

ชั่งน้ำหนักผง Cistanche Deserticola แห้ง 1 กรัมอย่างแม่นยำลงในขวด Erlenmeyer (ผ่านตะแกรงตาข่าย 65-) เติมเมทานอล 50% 50 มล. ชั่งน้ำหนักมวล อัลตราโซนิคที่ 40 kHz ที่ 150 W ทำให้เย็นจนถึงอุณหภูมิห้อง และประกอบมวลเพื่อให้ได้มันมา

2.4 การตรวจสอบความสัมพันธ์เชิงเส้น

นำสารละลายอ้างอิงแบบผสมข้างต้นจำนวน {{0}}.1, {{20}}.5, 1, 2, 4 และ 8 มิลลิลิตรไปใส่ในขนาด 10 มิลลิลิตร ขวดวัดปริมาตร และเติมเมทานอล 70% ให้กับเครื่องหมาย วาดปริมาณ 10 ไมโครลิตรอย่างแม่นยำ และวัดตามเงื่อนไขโครมาโทกราฟีที่ "2.2" ความเข้มข้นของมวลคือแอบซิสซา (X) และพื้นที่พีคคือพิกัด (Y) ดำเนินการการถดถอยเชิงเส้นและสมการการถดถอยคือ: Echinacea Y=128 049 X -830 189, r=0.999 5, ช่วงเชิงเส้น 10.4~832.0 ug/mL; ซิสแทนชีไซด์ AY=87 980 -447 963, r＝0.999 8, ช่วงเชิงเส้น 6.3-504.0 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร; ไอโซมูราบาซิน Y＝92 831 ไกลโคไซด์ Y=79 207 X-304 428, r=0.999 4, ช่วงเชิงเส้น 4.8~384.0 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร

2.5 การทบทวนระเบียบวิธี

2.5.1 การตรวจสอบความแม่นยำ

ใช้สารละลายอ้างอิงแบบผสม 20 ไมโครลิตรในรายการ "2.1" และฉีดอย่างต่อเนื่อง 6 ครั้งเพื่อวัดพื้นที่พีคของเอ็กไคนาซีไซด์, ซิสแทนเชียไซด์ A, เวอร์บาสโคไซด์, ไอโซเรบาสโคไซด์ และ 2'-อะซิติลเวอร์บาสโคไซด์ RSD อยู่ที่ 0.23% ตามลำดับ , {{10}}.71%, 0.59%, 0.41%, 0.29% ซึ่งบ่งชี้ว่าเครื่องมือมีความแม่นยำดี

2.5.2 การทดสอบความสามารถในการทำซ้ำ

นำตัวอย่าง Cistanche Deserticola เดียวกันจำนวน 6 ส่วน เตรียมสารละลายทดสอบตามรายการ "2.3" ฉีดตัวอย่างภายใต้สภาวะโครมาโตกราฟีของรายการ "2.2" และวัดพื้นที่พีค ผลลัพธ์ เศษส่วนมวลเฉลี่ยของเอ็กไคนาเซียไซด์, ซิสแทนชีโอไซด์ A, เวอร์บาสโคไซด์, ไอโซเรบาสโคไซด์ และ 2′-อะซิติล เวอร์บาสโคไซด์ อยู่ที่ 1.83%, 0.21%, 2.34%, 0.13% และ {{15 }}.68% ตามลำดับ และ RSD คือ 1.32 ตามลำดับ %, 0.83%, 1.24%, 2.19%,

0.78% ซึ่งบ่งชี้ว่าวิธีการนี้มีความสามารถในการทำซ้ำได้ดี

2.5.3 การทดสอบความเสถียร

ตรวจสอบความคงตัวของสารละลายทดสอบเดียวกัน (จัดเตรียมตาม "2.3") ที่ 0, 2, 4, 8, 12, 24 และ 48 ชั่วโมงเพื่อให้ได้เอ็กไคนาซีไซด์, ซิสแทนชีโอไซด์ A, เวอร์บาสโคไซด์ และไอโซเลบาสโคไซด์ , 2′-พื้นที่พีคของเวอร์บาสโคไซด์, RSD อยู่ที่ 0.58%, 0.21%, 1.58%, 1.46%, 2.19% ตามลำดับ ซึ่งบ่งชี้ว่าสารละลายทดสอบมีเสถียรภาพภายใน 48 ชั่วโมง

2.5.4 การทดสอบการกู้คืนตัวอย่าง

นำตัวอย่าง Cistanche Deserticola 1 กรัมที่มีปริมาณที่ทราบ และเติมสารละลายอ้างอิงแบบผสมจำนวนหนึ่งอย่างถูกต้อง (Echinaceaside 1.06 มก./มล., Cistancheoside A 0.86 มก. /มล., เวอร์บาสโคไซด์ 2.17 มก./มล., ไอโซเลบาสโคไซด์ 0.79 มก. /มล., 2′-อะซิติล เวอร์บาสโคไซด์ 0.91 มก./มล.) เติมเมทานอล 70% เพื่อให้ได้สูงถึง 50 มล. และ ฉีดตัวอย่างตามเงื่อนไขโครมาโทกราฟีที่ "2.2" อัตราฟื้นตัวเฉลี่ยที่วัดได้คือ 101.52%, 99.21% และ 102.62% ตามลำดับ , 98.62%, 97.36%, RSD คือ 1.64%, 1.95%, 0.87%, 1.59%, 1.13% ตามลำดับ และอัตราการฟื้นตัวของตัวอย่างอยู่ในเกณฑ์ดี

Cistanche เป็นสมุนไพรโทนิคที่รู้จักกันดีซึ่งสามารถบำรุงและปกป้องไต ตามทฤษฎีการแพทย์แผนจีน Cistanche เป็นสมุนไพรที่ดีที่สุดสำหรับไต Cistanche อุดมไปด้วย echinacoside, acteoside และ flavonoids ส่วนผสมที่มีประสิทธิภาพเหล่านี้ใน Cistanche สามารถลดการตายของเซลล์ไตและเพิ่มการแพร่กระจายของเซลล์ไต ดังนั้น Cistanche จึงเป็นอาหารเสริมไตตามธรรมชาติ