การศึกษาเชิงทดลองเกี่ยวกับผลการป้องกันของการปรับสภาพ Cistanche Glycosides ต่อการบาดเจ็บที่ไต

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม:ali.ma@wecistanche.com

จูจุน จ้าวซีหมิน

(แผนกศัลยกรรม โรงพยาบาลเขตเป่าซาน การแพทย์แผนจีนผสมผสานและตะวันตก เซี่ยงไฮ้ 201900)

【เชิงนามธรรม】วัตถุประสงค์ เพื่อสร้างแบบจำลองการช่วยชีวิตภาวะช็อกจากเลือดออกในหนูและสังเกตผลการป้องกันของCistancheรวม glycosides (CTG) ต่อการบาดเจ็บของไตขาดเลือด - กลับ วิธีการ SD หนูแรทถูกสุ่มออกเป็น 3 กลุ่ม: กลุ่มปฏิบัติการหลอก, กลุ่มทดลอง (กลุ่มช่วยชีวิตด้วยช็อก), กลุ่มบำบัด CTG, หนู 10 ตัวในแต่ละกลุ่ม กลุ่มทดลองและกลุ่มบำบัด CTG ได้สร้างแบบจำลองภาวะขาดเลือดในไต หนูในกลุ่มบำบัดถูกฉีดด้วย CTG 400 มก./กก. ในช่องท้อง และกลุ่มทดลองและกลุ่มปฏิบัติการหลอกถูกฉีดด้วยน้ำเกลือ ปริมาณของกล้ามเนื้อหัวใจในเลือด ปริมาณยูเรียไนโตรเจน และ cystatin C ของแต่ละกลุ่มถูกตรวจพบเพื่อกำหนดการทำงานของไต การวิเคราะห์ flow cytometry ถูกใช้เพื่อตรวจหาอัตราการตายของเซลล์ไต อิมมูโนแอสเซย์ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ (ELISA) ใช้เพื่อตรวจหาการเชื่อมโยงโครโมโซมเอ็กซ์ในหนูแรทไตการแสดงออกของเนื้อเยื่อของตัวยับยั้ง X-linked ของโปรตีนอะพอพโทซิส (XIAP) ผลลัพธ์ การเปรียบเทียบกลุ่ม CTG กับกลุ่มทดลอง Cr เลือด BUN และ Cystatin C ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (P<0.01), renal="" cell="" apoptosis="" was="" reduced=""><0.05), ctg="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). conclusion="" the="" total="" glycosides="" of="">cistancheมีผลในการป้องกันการบาดเจ็บของไตขาดเลือด-กลับในหนู ซึ่งอาจเกี่ยวข้องกับการส่งเสริมการแสดงออกของ XIAP

[คำหลัก] ไต; การขาดเลือดขาดเลือด - การบาดเจ็บซ้ำ; ไกลโคไซด์ทั้งหมดของ cistanche; ตัวยับยั้งโครโมโซมที่เชื่อมโยงกับโปรตีนอะพอพโทซิส อะพอพโทซิส; หนู

[หมายเลขการจำแนกห้องสมุดจีน] R692 [รหัสการทำเครื่องหมายเอกสาร] A [หมายเลขบทความ] 1008 -0392 (2015) 02-0037 -04

คลิกเพื่อ Cistanche EXTRACT POWDER สำหรับไต

Ischemia-reperfusion (I/R) บาดเจ็บเป็นปรากฏการณ์ทางพยาธิสรีรวิทยาที่พบบ่อยของความเสียหายของไตในกระบวนการช็อกเลือดออก, การบาดเจ็บรุนแรง,ไตการปลูกถ่ายและไตการผ่าตัดเนื้องอก การศึกษาพบว่าการตายของเซลล์เป็นส่วนสำคัญของความเสียหายของการทำงานของไตที่เกิดจากการบาดเจ็บของ I/R (1) X-linked inhibitor ของโปรตีนอะพอพโทซิส (XIAP) เป็นหนึ่งในสารยับยั้งการตายของเซลล์อะพอพโทซิสภายในร่างกายที่แข็งแกร่งที่สุดที่พบ (2) มีการศึกษาเพียงเล็กน้อยเกี่ยวกับฤทธิ์ต้านอะพอพโทซิสของ XIAP ในเนื้อเยื่อไตหลังการบาดเจ็บของ I/RCistancheโททัลไกลโคไซด์ (CTG) เป็นสารประกอบฟีนิลทานอยด์โททัลไกลโคไซด์ที่สกัดจากCistancheซึ่งมีหน้าที่ทางชีวภาพที่หลากหลาย มีการศึกษาเพียงเล็กน้อยเกี่ยวกับการป้องกันไตหลังจากได้รับบาดเจ็บที่ I/R . การศึกษานี้ได้สร้างแบบจำลองการช่วยชีวิตด้วยภาวะช็อกจากเลือดออกในหนู และสร้างแบบจำลองการบาดเจ็บของ I/R ทั่วร่างกายเพื่อสำรวจผลการป้องกันของไส้เลื่อนเนื้อในสารไกลโคไซด์ไตจากการบาดเจ็บของ I/R และสำรวจกลไกที่เป็นไปได้

1วัสดุและวิธีการ

1.1 สัตว์และการจัดกลุ่ม

มีหนูเพศผู้ที่สะอาดและแข็งแรงจำนวน 30 ตัวให้บริการโดยศูนย์ทดลองของมหาวิทยาลัยการแพทย์แผนจีนแห่งมหาวิทยาลัยเซี่ยงไฮ้ มีน้ำหนัก (320 ± 30) กรัม สุ่มแบ่งเป็น 3 กลุ่ม คือ กลุ่มปฏิบัติการหลอก กลุ่มทดลอง (กลุ่มช่วยฟื้นคืนชีพ) กลุ่ม CTG แต่ละกลุ่มมีหนู 10 ตัว

1.2 น้ำยาและเครื่องมือหลัก

ไกลโคไซด์ทั้งหมดของข้าวเหนียว (หมายเลขรุ่น: 20081516) ถูกซื้อจาก Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd.; sodium pentobarbital, Hoechst 33258 และ propionyl iodide ซื้อจาก Sigma ประเทศสหรัฐอเมริกา ตัวยับยั้งการตายของเซลล์โครโมโซม X ที่เชื่อมโยงกับโครโมโซมของเมาส์ X ชุดทดสอบโปรตีน (XIAP) และ ELISA Kit ถูกซื้อจาก Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd.; เครื่องอ่านไมโครเพลทซื้อจาก Thermo Company ประเทศสหรัฐอเมริกา ซื้อเครื่องตรวจจับทางสรีรวิทยาแบบหลายพารามิเตอร์จาก Nihon Kohden Company ประเทศญี่ปุ่น flow cytometer BDFACSAria ถูกซื้อจาก Becton, USA -Dickinson Company; trocar 24G ถูกซื้อจาก Shandong Jierui Medical Devices Company

1.3 วิธีการทดลอง

1.3.1 การเตรียมหนูแรท SD แบบจำลองสัตว์ถูกอดอาหาร 12 ชั่วโมงก่อนการทดลองและให้ยาสลบโดยการฉีดโซเดียม เพนโทบาร์บิทัล (50 มก./กก.) ในช่องท้อง (50 มก./กก.)

หนูถูกตรึงในตำแหน่งหงาย มีการทำแผล 3 ซม. ที่ช่องท้องส่วนล่างด้านซ้าย หลอดเลือดแดงตีบแยกออก ใส่โทรคาร์ 24G และเชื่อมต่อเครื่องตรวจจับทางสรีรวิทยาแบบหลายพารามิเตอร์ ความดันโลหิตเฉลี่ยของหนูวัดเป็น (113 ± 15) mmHg, 20 ml syringe heparin ความดันโลหิตลดลงเหลือ 40 mmHg (l mmHg=0. 133 kPa) ด้วยอุปกรณ์สามทางที่เชื่อมต่อทางเคมี ถือว่าการช็อคได้เริ่มขึ้นแล้ว และความดันโลหิตยังคงอยู่เป็นเวลา 90 นาที ปริมาณการถ่ายเลือดคือ (13 ± 3) มล. จากนั้นเลือดอัตโนมัติในหลอดฉีดยาฉีดซ้ำอย่างช้าๆ ใช้เวลาประมาณ 30 นาที และความดันโลหิตกลับคืนสู่ระดับมากกว่า 90 เปอร์เซ็นต์ของค่าพื้นฐาน และถือว่าการช่วยชีวิตสำเร็จ (3) . ดึงโทรคาร์ออก หลอดเลือดแดงตีบตัน และเย็บแผล หลังจากที่หนูตื่นแล้ว พวกมันก็กลับไปที่กรงเพื่อสังเกตการณ์ และพวกมันก็มีอิสระที่จะกินและดื่ม 24 ชม. หลังจากการช่วยชีวิต การฉีดโซเดียม เพนโทบาร์บิทัล (50 มก./กก.) เข้าช่องท้อง (50 มก./กก.) ใช้ในการระงับความรู้สึก การผ่าตัดเปิดช่องท้อง เก็บเลือด 5 มล. จาก Vena Cava ที่ด้อยกว่า หนูถูกสังเวยทันที และนำไตซ้ายและขวาออก ใช้.

1.3.2 วิธีการใช้ยา กลุ่มบำบัด CTG ได้รับ CTG 2 ชั่วโมงก่อนการปล่อยเลือดของหนูและฉีดเข้าไปในช่องท้องที่ขนาด 400 มก./กก. กลุ่มทดลองถูกฉีดเข้าช่องท้องด้วยน้ำเกลือปกติ 3 มล. 2 ชั่วโมงก่อนปล่อยเลือด กลุ่มปฏิบัติการเสแสร้งได้รับการดมยาสลบ การผ่าตัดส่องกล้อง และการแยกหลอดเลือดแดงตีบ ตำแหน่งของโทรคาร์ และการเย็บแผล แต่ไม่มีเลือดออกหรือช่วยชีวิต ที่เหลือก็เหมือนกับกลุ่มทดลอง

1. 4 ตัวบ่งชี้และวิธีการตรวจจับ

1.4.1 การกำหนดปริมาณ BUN, Cr และ cystatin C ในเลือด Cystatin C เป็นตัวบ่งชี้ภายในของการเปลี่ยนแปลงในอัตราการกรองของไต เมื่อการทำงานของไตบกพร่อง อัตราการกรองของไตจะลดลง ความเข้มข้นของ cystatin C ในเลือดจะเพิ่มขึ้น 10 เท่า และความแม่นยำในการวินิจฉัยของ cystatin C นั้นดีกว่าความเป็นพิษของกล้ามเนื้อในซีรัมอย่างมีนัยสำคัญ เนื้อหา BUN, Cr และ Cystatin C ในเลือดถูกส่งไปยังห้องปฏิบัติการของโรงพยาบาลของเราเพื่อตรวจสอบ

1.4.2 การหาอัตราการตายของเซลล์แบบอะพอพโทซิส Flow cytometry ถูกใช้เพื่อตรวจหาอัตราการตายของเซลล์ไต นำไตมาสับด้วยใบมีด เพิ่ม PBS เล็กน้อยแล้วโอนไปยังหลอดทดลอง เพิ่มทริปซิน 0.3 เปอร์เซ็นต์เพื่อย่อยในอ่างน้ำ 37 P ฟักเป็นเวลา 20 นาที เมื่อเนื้อหาในหลอดทดลองขุ่น ให้เติม PBS 2 ครั้งเพื่อหยุดการย่อยอาหาร กรองด้วย ตาข่ายไนลอน 300 ตาข่าย ทิ้งสิ่งสกปรก และเครื่องหมุนเหวี่ยงในเครื่องหมุนเหวี่ยงที่อุณหภูมิต่ำ รัศมีการหมุนเหวี่ยง 8 ซม., 12,000 รอบ/นาที, ปั่นแยกเป็นเวลา 5 นาที, ทิ้งส่วนลอยเหนือตะกอน, ปรับความเข้มข้นของเซลล์เป็น 1 ~ 1.5 x 106/มล., ใช้สารแขวนลอยเซลล์ด้านบน 0.4 มล. และเพิ่ม 1.2 ml Hoechst 33258 (10 pil/ml), dark 37 t: incubate in a water bath, cap the test tube, wash with PBS after 5 min, centrifuge radius 8 cm, 12 000 r/min, centrifuge for 5 min , ทิ้ง supernatant, ล้างอีกครั้งในลักษณะเดียวกัน. เติม PI 0.4 มล. ย้อมเป็นเวลา 5 นาที และตรวจหาเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ปกติ เซลล์ตาย และเซลล์ apoptotic ในไต จากความสัมพันธ์ของสีย้อมทั้งสองชนิดของเซลล์ชนิดต่างๆ เป็นที่ทราบกันดีว่ามีเพียงเซลล์สี PI เท่านั้นที่เป็นเซลล์ที่ตายแล้ว มีเพียงเซลล์สี Hoechst 33258 เท่านั้นที่เป็นเซลล์ apoptotic และทั้งสองเซลล์ไม่มีสีเป็นเซลล์ที่มีชีวิตปกติ

1.4.3 Enzyme-linked immunoassay (ELISA) เพื่อตรวจหาการแสดงออกของ XIAP ในเนื้อเยื่อไตของหนู นำไตแต่ละกลุ่มไปรักษาเนื้อเยื่อไตใหม่ด้วยเนื้อเยื่อไลเสต ปั่นเหวี่ยงในเครื่องหมุนเหวี่ยงที่อุณหภูมิต่ำที่ 12 000 รอบ/นาที เป็นเวลา 5 นาที ใช้ supernatant และดำเนินการตามคำแนะนำของชุด XIAP ELISA Kit Shanghai Jiaotong University Fenghe Technology Co. , Ltd. รับผิดชอบการทดสอบ

1.5 การประมวลผลทางสถิติ

ข้อมูลการทดลองของแต่ละกลุ่มแสดงด้วยดินหยวน และ SPSS 17 ซอฟต์แวร์ 0 ใช้สำหรับการวิเคราะห์ทางสถิติ พี<0.05 indicates="" that="" the="" difference="" is="" statistically="">

Cistanche สามารถปรับปรุงสมรรถภาพทางเพศได้

2 ผลลัพธ์

ดัชนีการทำงานของไต ค่า Cr, BUN และ Cystatin C มีนัยสำคัญทางสถิติ (F<0.01); the="" experimental="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" sham="" operation="" group="" (p=""><0.01), indicating="" that="" the="" rat="" the="" kidney="" i/r="" model="" was="" successfully="" prepared;="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" values="" of="" cr,="" bun="" and="" cystatin="" c="" in="" the="" ctg="" group="" were="" significantly="" reduced=""><0.01). renal="" cell="" apoptosis="" rate:="" in="" the="" sham-operated="" group,="" only="" a="" few="" cells="" in="" the="" kidney="" tissue="" experienced="" apoptosis.="" apoptotic="" cells="" accounted="" for="" 0.42%="" ±="" 0.08%,="" and="" the="" experimental="" group="" had="" a="" significant="" increase="" in="" apoptosis,="" accounting="" for="" 18.="" 22%="" ±="" 5.="" 32%="" (p=""><0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" showed="" apoptosis="" the="" number="" decreased="" to="" 12.71%="" ±="" 3.81%="">< 0.01).="" the="" effect="" of="" ctg="" on="" the="" expression="" of="" xiap="" in="" i/r="" injured="" renal="" tissue:="" the="" sham="" operation="" group="" only="" had="" weak="" xiap="" expression,="" while="" the="" experimental="" group="" xiap="" expression="" increased="" significantly,="">< 0.01).="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap="" (f=""><0.05), see="" table="">

ตารางที่ 1 ดัชนีการทำงานของไต ค่า Cr, BUN และ Cystatin-C ของหนูในแต่ละกลุ่ม Tab 1 ดัชนีการทำงานของไตในสามกลุ่ม

เปรียบเทียบกับกลุ่มปฏิบัติการเสแสร้ง *P<0.01; compared="" with="" the="" experimental="" group,=""><0.05><>

กลไกของการบาดเจ็บที่ไตกลับขาดเลือดขาดเลือดนั้นซับซ้อนมาก เป็นกระบวนการทางพยาธิวิทยาที่เกิดขึ้นได้หลายวิธีภายใต้การกระทำของปัจจัยต่างๆ เช่น แคลเซียมไอออนเกิน ความเสียหายของลิพิดเปอร์ออกซิเดชัน การตายของเซลล์และเนื้อร้าย โดยที่เซลล์อะพอพโทซิสที่ขึ้นกับแคสเปสเป็นหนึ่งในรูปแบบหลักของเซลล์เยื่อบุผิวท่อไต ความเสียหายที่เกิดจากการบาดเจ็บของไต I/R (4) ตัวยับยั้งของตระกูล apoptosis protein (IAP) เป็นตัวยับยั้ง caspase ภายในตัวเพียงตัวเดียวที่พบในเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ซึ่งสามารถป้องกันการตายของเซลล์ได้อย่างมีประสิทธิภาพ XIAP เป็นสมาชิกที่มีผลยับยั้ง caspase มากที่สุดในตระกูล IAP สามารถยับยั้งการตายของเซลล์ที่เกิดจากสิ่งเร้าทางพยาธิวิทยาที่หลากหลายและป้องกันอวัยวะที่เสียหาย (5)

ในปัจจุบัน วิธีการส่วนใหญ่ในการสร้างแบบจำลองของการบาดเจ็บของ I/R ของไตในสัตว์คือเอาไตข้างหนึ่งออกแล้วหนีบอีกด้านหนึ่งของขั้วไตหรือหลอดเลือดแดงไต ⑹ เพื่อจำลองสถานะของการปลูกถ่ายไต การศึกษานี้ใช้แบบจำลองการช็อก/การช่วยชีวิตด้วยการตกเลือดซึ่งใกล้เคียงกับกระบวนการทางพยาธิสรีรวิทยาของการกลับเป็นเลือดขาดเลือดจากระบบที่เกิดขึ้นในภาวะช็อกจากบาดแผลทางคลินิก ในการทดลองนี้ ระดับ BUN, Cr และ cystatin C ในเลือดของหนูแรท SD การปรับปรุงอย่างมีนัยสำคัญ การทำงานของไตบกพร่องอย่างรุนแรง เป็นแบบจำลองสัตว์ในอุดมคติสำหรับการศึกษาการบาดเจ็บของไตด้วย I/R

CTG เป็นส่วนผสมทางยาที่สำคัญของเนื้อเสาวรสยาจีนโบราณ มะเขือเปราะซึ่งให้ความอบอุ่นในธรรมชาติ มีรสหวานและเค็ม กลับคืนสู่เส้นเมอริเดียนของไตและลำไส้ใหญ่ และเดิมบรรจุอยู่ใน Materia Medica ของ Shennong "เบ็นสูตร": ห้างานหลักและบาดเจ็บเจ็ดคน บำรุงกลาง บำรุงห้าอวัยวะภายใน เสริมหยิน บำรุงแก่นแท้และฉีCistancheใช้ในประเทศของฉันมาสองพันปีแล้ว เป็นอันดับที่ 1 ในสูตรเพิ่มความแข็งแรงในอดีตและอันดับที่ 2 ในสูตรบำรุงหลังโสม จากการศึกษาพบว่าCistancheสามารถปรับปรุงสมรรถภาพทางเพศ, ควบคุมระบบประสาท, และปรับปรุงการทำงานของภูมิคุ้มกัน. , สารต้านอนุมูลอิสระส่งเสริมการเผาผลาญของวัสดุ ปกป้องกล้ามเนื้อหัวใจขาดเลือดและการทำงานอื่นๆ ในฐานะที่เป็นส่วนผสมหลักของยาในตระกูลเนื้อสัตว์ CTG มีหน้าที่มากมาย การวิจัยเกี่ยวกับแบบจำลองการขาดเลือดขาดเลือดในสมองพบว่า CTG สามารถลดกรดอะมิโนที่ถูกกระตุ้นในเนื้อเยื่อสมองหลังขาดเลือดกลับคืนมา และปกป้องเนื้อเยื่อสมองของหนูแรท SD (7) CTG มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระบนเนื้อเยื่อของเมาส์และมีผลในการป้องกันภาวะขาดออกซิเจนในสมองเฉียบพลันในหนูและความเสียหายของกล้ามเนื้อหัวใจในหนู (9) CTG สามารถปรับปรุงการทำงานของระบบประสาทของ .ได้อย่างมีนัยสำคัญพาร์กินสันหนูจำลองและยับยั้งการลดจำนวนของเซลล์ประสาทโดปามีนใน substantia nigra (9) โดยการเพิ่มการทำงานของเอ็นไซม์กำจัดอนุมูลอิสระ ป้องกัน lipid peroxidation ยับยั้งการสะสมของ B-amyloid peptide ในสมอง และยับยั้งการตายของเซลล์สมอง CTG ช่วยเพิ่มการเรียนรู้ของโรคอัลไซเมอร์หนูที่เกิดจาก B-amyloid peptide ความสามารถในการจำ w. การศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าหลังจากใช้การปรับสภาพ CTG เลือด BUN, Cr และ cystatin C ในหนูลดลงอย่างมีนัยสำคัญและความเสียหายของไตลดลง CTG เพิ่มโปรตีน XIAP ที่ยับยั้งการตายของเซลล์ในเนื้อเยื่อไตที่ได้รับบาดเจ็บของ I/R และยับยั้งการตายของเซลล์ การเสียชีวิตมีผลป้องกันความเสียหายต่อไต