ติดต่อ:jerry.he@wecistanche.com

Vinita D. Apraj1, Nancy S. Pandita2

1ภาควิชาชีววิทยา, 2ภาควิชาเคมี, Sunandan Divatia School of Science, SVKM's NMIMS, Vile-Parle (W), Mumbai, Maharashtra, India

Cistanche มีฤทธิ์ต่อต้านริ้วรอย

บทคัดย่อ

ความเป็นมา: เปลือกของ Citrus reticulata Blanco มักใช้เป็นยาชูกำลัง แก้ท้องอืด ยาสมานแผล และขับลม ยังมีประโยชน์ในการบำรุงผิวอีกด้วย วัตถุประสงค์: เพื่อศึกษาต่อต้านริ้วรอยศักยภาพของสารสกัดแอลกอฮอล์ของเปลือก C. reticulata Blanco โดยใช้สารต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลองและการทดสอบการต่อต้านเอนไซม์

วัสดุและวิธีการ: ได้สารสกัดจากพืชโดย Soxhlation (CR HAE‑ Hot Alcoholic Extract of Citrus reticulata) และวิธี maceration (CR CAE‑ Cold Alcoholic Extract of Citrus reticulata) วิเคราะห์ไฟโตเคมีเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณ นอกจากนี้ ในหลอดทดลองสารต้านอนุมูลอิสระวิเคราะห์แอนติ-เอนไซม์ และแก๊สโครมาโตกราฟี-แมสสเปกโตรเมทรี (GC‑MS) ผลลัพธ์: ปริมาณฟีนอลิกและฟลาโวนอยด์ทั้งหมดของ CR HAE พบว่าสูงกว่า CR CAE ค่า EC50 ของ CR HAE และ CR CAE สำหรับการสอบวิเคราะห์ 1,1‑Diphenyl‑2‑picrylhydrazyl, Superoxide anion และ 2, 2'‑azino‑bis (3‑ethylbenzothiazoline‑6‑sulfonic acid) เท่ากับ 25{ {55}}.33 ± 40.16 µg/ml และ 254.73 ± 15.78 µg/ml, 221.27 ± 11.25 µg/ml และ 354.20 ± 23.79 µg/ml และ 59.16 ± 2.17 µg/ml และ 59.12 ± 6.21 µg/ml ตามลำดับ ค่าความจุการดูดกลืนแสงอนุมูลอิสระของออกซิเจนสำหรับ CR HAE และ CR CAE มีค่าเท่ากับ 1243 และ 1063 µmoles 6‑hydroxy‑2,5,7,8‑tetra methylchromane‑2‑carboxylic acid เทียบเท่า/กรัมของสารตามลำดับ ฤทธิ์ต้านคอลลาเจนและต่อต้านอีลาสเทสถูกประเมินสำหรับทั้ง CR HAE และ CR CAE ค่า EC50 ของ CR HAE และ CR CAE สำหรับแอนติ-collagenase และ anti-elastase คือ 329.33 ± 6.38 µg/ml, 466.93 ± 8.04 µg/ml และ 3.22 ± 0.24 มก./มล., 5.09 ± 0.30 มก./มล. ตามลำดับ CR HAE มีฤทธิ์ต้านคอลลาเจนและต่อต้านอีลาสเทสที่แข็งแกร่งกว่า CR CAE การวิเคราะห์ GC‑MS ของ CR HAE ดำเนินการเนื่องจาก CR HAE มีค่าสูงกว่าสารต้านอนุมูลอิสระและมีฤทธิ์ต้านเอนไซม์มากกว่า CR CAE สรุป: เปลือก C. reticulata สามารถนำมาใช้ในต่อต้านริ้วรอยสูตรบำรุงผิว

คำสำคัญ: 1,1‑Diphenyl‑2‑picrylhydrazyl, 2, 2'‑azino‑bis (3‑ethylbenzothiazoline‑6‑sulfonic acid), ต่อต้านริ้วรอย, อีลาสเทส, gas chromatography‑mass spectrometry, ความสามารถในการดูดกลืนอนุมูลอิสระของออกซิเจน

สรุป

• ประเมินศักยภาพการต่อต้านริ้วรอยของผิวของเปลือก Citrus reticulata Blanco โดยผ่าน

• ในหลอดทดลองสารต้านอนุมูลอิสระและการตรวจต้านเอนไซม์

• ทำการสกัดสองประเภทและสารสกัดได้รับการวิเคราะห์ทางพฤกษเคมีเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณ สารสกัดที่ได้จาก Soxhlation (CR HAE) มีปริมาณฟีนอลิกและฟลาโวนอยด์รวมสูงกว่าสารสกัดที่ได้จากการทำ maceration (CR CAE)

• CR HAE แสดงให้เห็นฤทธิ์การขับของอนุมูลอิสระ DPPH และซูเปอร์ออกไซด์ที่แข็งแกร่ง ในขณะที่พบว่ากิจกรรมการขับ ABTS ของสารสกัดทั้งสองมีความคล้ายคลึงกัน Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC) ของ CR HAE พบว่ามีมากกว่า บ่งบอกถึงศักยภาพในการต้านอนุมูลอิสระที่แข็งแกร่ง

• กิจกรรมการยับยั้งเอนไซม์คอลลาเจนในหลอดทดลองและอีลาสเทสได้รับการประเมินสำหรับทั้งสารสกัด และ CR HAE แสดงให้เห็นศักยภาพในการต่อต้านคอลลาเจนและอีลาสเทสที่แข็งแกร่งซึ่งบ่งชี้ถึงความสามารถในการต่อต้านริ้วรอย

• การวิเคราะห์ GC‑ MS ของ CR HAE เผยให้เห็นการมีอยู่ของสารประกอบต่างๆ

ส่วนใหญ่รวมถึง Polymethoxyflavones CR HAE แสดงฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระและฤทธิ์ต้านเอนไซม์ที่มีแนวโน้มดี และสามารถใช้เป็นศักยภาพได้ต่อต้านริ้วรอยตัวแทนในต่อต้านริ้วรอยสูตรการดูแลผิว

ตัวย่อที่ใช้: ECM: Extracellular matrix, UV: Ultra violet, ROS: Reactive Oxygen Species, MMP: Matrix metalloproteinase, Chc: Clostridium histolyticum collagenase, DPPH: 2, 2‑diphenyl‑ 1‑picrylhydrazyl, GC‑MS: Gas Chromatography‑ Mass Spectroscopy, RT: อุณหภูมิห้อง, µg GAE/ mg: ไมโครกรัมเทียบเท่ากรดแกลลิก / มิลลิกรัม, W/V: น้ำหนักตามปริมาตร, µg QE/

mg: เทียบเท่าไมโครแกรม Quercetin / มิลลิกรัม CR HAE: Hot Alcoholic Extract of Citrus reticulata Blanco, CR CAE: Cold Alcoholic Extract of Citrus reticulata Blanco, EC50: ความเข้มข้นครึ่งหนึ่งที่มีประสิทธิผลสูงสุด PMS NADH: Phenazine methosulfate nicotinamide adenine dinucleotide blueet, NBT: Nitroolium , DMSO: Dimethyl sulfoxide,APS:Ammonium Persulphate, AAPH: 2,2 ‑azobis(2‑amidino‑propane) dihydrochloride,TROLOX: (±) 6‑hydroxy‑2,5,7,8‑ tetramethyl chromane‑2‑carboxylic กรด, ORAC: ความจุการดูดกลืนแสงจากอนุมูลออกซิเจน, FALGPA: N‑[3‑(2‑Furyl) อะคริโลอิล)]‑Leu‑Gly‑Pro‑Ala, SANA: Succinyl‑Ala‑ Ala‑Ala‑p‑nitroanilide, Rf: การหน่วง แฟคเตอร์, MSD: Mass Selective Detector

การแนะนำ

บทบาทที่สำคัญที่สุดของผิวหนังสำหรับมนุษย์คือการสร้างเกราะป้องกันระหว่างสภาพแวดล้อมภายในและภายนอกร่างกาย ภายในผิวหนังปกป้องและปกป้องปรากฏการณ์กายภาพเคมีทั้งหมดที่จำเป็นสำหรับชีวิต ภายนอกเป็นอุปสรรคต่อแรงทางกล ผิวหนังเป็นอวัยวะที่ใหญ่ที่สุดของร่างกาย [1] เป็นอวัยวะที่บอบบางมากและอาจได้รับความเสียหายจากการติดเชื้อและโรคต่างๆ ได้ง่าย

นี่เป็นบทความแบบเปิดที่เผยแพร่ภายใต้เงื่อนไขของสัญญาอนุญาต Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 3.0 ซึ่งช่วยให้ผู้อื่นสามารถรีมิกซ์ ปรับแต่ง และสร้างจากงานที่ไม่ใช่เชิงพาณิชย์ได้ ตราบใดที่ ผู้เขียนได้รับเครดิตและการสร้างสรรค์ใหม่ได้รับอนุญาตภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน

ปัญหาผิวอาจเกิดขึ้นได้จากปัจจัยต่างๆ เช่น มลภาวะต่อสิ่งแวดล้อม การได้รับรังสีอัลตราไวโอเลตมากเกินไป อายุของบุคคล จุลินทรีย์ที่เป็นอันตราย นิสัยการกิน ความเครียด และสารเคมี การรักษาและดูแลผิวเป็นสิ่งสำคัญไม่เพียงแต่ต้องมีสุขภาพผิวที่ดี แต่ยังรวมถึงความเป็นอยู่ที่ดีโดยรวมของบุคคลด้วย[2]

ปัญหาผิวที่สำคัญอย่างหนึ่งในโลกปัจจุบันคือการแก่ก่อนวัยของผิว กระบวนการชราของผิวแบ่งออกเป็น 2 ประเภท คือ การแก่ก่อนวัยจากภายในและภายนอก ความชราของผิวที่แท้จริงหรือริ้วรอยตามธรรมชาติเกิดจากการเปลี่ยนแปลงความยืดหยุ่นของผิวเมื่อเวลาผ่านไป ความชราของผิวภายนอกนั้นเป็นผลมาจากการได้รับรังสีดวงอาทิตย์ อนุมูลอิสระที่เกิดขึ้นจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน มีบทบาทสำคัญในกระบวนการชราภาพทั้งภายในและภายนอก ผิวหนังประกอบด้วยสามชั้นหลัก หนังกำพร้า, หนังแท้และ subcutis ส่วนประกอบหลักของหนังแท้คือเส้นใยคอลลาเจนและอีลาสติน คอลลาเจนและอีลาสตินที่ลดลงทำให้ริ้วรอยการก่อตัว[4] สาเหตุหลักที่ผิวเริ่มหย่อนคล้อยและก่อตัวขึ้นริ้วรอยคือการสลายตัวของอีลาสตินและคอลลาเจน เอนไซม์คอลลาเจนเนสและอีลาสเทสมีหน้าที่ในการสลายส่วนประกอบต่างๆ ของเมทริกซ์นอกเซลล์ (ECM) เช่น คอลลาเจนและอีลาสติน อีลาสตินเป็นโปรตีนที่ช่วยให้ผิวนุ่มและเต่งตึง เมื่อผิวหนังของคุณถูกยืดออก อีลาสตินจะคืนสู่ตำแหน่งปกติ คอลลาเจนเป็นโปรตีนเส้นใย คอลลาเจนเป็นโปรตีนชนิดพิเศษ เพราะมีความต้านทานแรงดึงสูง ทำให้ผิวเต่งตึงริ้วรอยเป็นผลมาจากการรวมกันของความชราภายในและภายนอกตลอดจนระดับที่เพิ่มขึ้นของเอนไซม์คอลลาเจนเนสและอีลาสเทส[5]

เครื่องสำอางใช้เป็นประจำและทั่วถึงในรูปแบบต่างๆ เพื่อเสริมความงาม เครื่องสำอางบำรุงผิวรักษาชั้นผิวของผิวหนังโดยให้การปกป้องสิ่งแวดล้อมได้ดีกว่าผิวหนังที่ไม่ได้รับการรักษา[6] มีความต้องการเครื่องสำอางบำรุงผิวหน้าเพิ่มขึ้น ตามการมอนิเตอร์ข้อมูล การใช้จ่ายทั่วโลกสำหรับผลิตภัณฑ์ดูแลผิวในปี 2555 อยู่ที่ 82 พันล้านดอลลาร์ โดย 2 ใน 3 ของการใช้จ่ายประกอบด้วยการดูแลผิวหน้า รายงานจากการวิจัยและการตลาดคาดว่ารายรับจากอุตสาหกรรมผลิตภัณฑ์ดูแลผิวทั่วโลกจะทะลุ 100 พันล้านดอลลาร์ในปี 2561 ส่วนการดูแลผิวหน้าคาดว่าจะยังคงครองตลาดต่อไป ความต้องการที่เพิ่มขึ้นสำหรับต่อต้านริ้วรอยผลิตภัณฑ์และความกังวลที่เพิ่มขึ้นสำหรับการใช้ผลิตภัณฑ์ดูแลผิวจากธรรมชาติและออร์แกนิกเป็นปัจจัยสำคัญที่ขับเคลื่อนอุตสาหกรรมการดูแลผิว[7] เครื่องสำอางเพียงอย่างเดียวไม่เพียงพอต่อการดูแลผิวและส่วนต่างๆ ของร่างกาย ต้องใช้ส่วนผสมของสารออกฤทธิ์เพื่อตรวจสอบความเสียหายและความชราของผิว สารออกฤทธิ์จากสมุนไพรเหล่านี้ซึ่งมีส่วนประกอบสำคัญมีความสำคัญมากในการรักษาสุขภาพผิว เครื่องสำอางที่มีส่วนผสมของสมุนไพรกำลังกลายเป็นวิธีแก้ปัญหาที่เหมาะสมกับปัญหาในปัจจุบัน[8] ในการศึกษาปัจจุบัน ผิวหนังต่อต้านริ้วรอยศักยภาพของสารสกัดแอลกอฮอล์ของเปลือก Citrus reticulata Blanco ได้รับการประเมินโดยการทดสอบสารต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลอง การต่อต้านคอลลาเจน และการทดสอบการต่อต้านอีลาสเทส C. reticulata Blanco (Rutaceae) เป็นที่รู้จักกันทั่วไปว่า Narangi หรือ Santra (Orange) ผลไม้เป็นยาระบาย ยาโป๊ ยาสมานแผล ยาชูกำลัง และบรรเทาอาการอาเจียน[9] เปลือกผลไม้มักใช้เป็นยาชูกำลัง ยาขับปัสสาวะ ยาสมานแผล ยาขับลม และยาแก้โรคคอตีบ เปลือกส้มถือได้ว่าเป็นผลพลอยได้จากอุตสาหกรรมผลไม้รสเปรี้ยว แต่มีรายงานว่ามีส่วนประกอบออกฤทธิ์หลายอย่างที่มีความเข้มข้นสูงกว่าเนื้อผลมาก[10] เปลือกผลไม้ยังมีประโยชน์ในการดูแลผิว

วัสดุและวิธีการ

เคมีภัณฑ์และรีเอเจนต์

กรดแอสคอร์บิก, เควอซิทิน, เฟอริกคลอไรด์, โซเดียมคาร์บอเนต (Na2CO3), โซเดียมไนไตรท์ (NaNO2), โซเดียมไฮดรอกไซด์ (NaOH), อะลูมิเนียมคลอไรด์ (AlCl3), 1,1‑Diphenyl‑2‑picrylhydrazyl (DPPH), อีลาสเทสตับอ่อนสุกร (EC) .3.4.21.36), Succinyl‑Ala‑Ala‑Ala‑p‑nitroanilide (SANA), Clostridium histolyticum collagenase (ChC) (EC.3.4.23.3), N‑(3‑[2‑Furyl]acryIoyl)‑Leu‑ ซื้อ Gly‑Pro‑Ala (FALGPA), เกลือโซเดียมฟลูออเรสซิน, 2,2‑azobis (2‑methyl propionamidine) dihydrochloride (AAPH) และกรดแกลลิกจาก Sigma Chemical Co. (St. Louis, USA.) 2, 2 '‑azino‑bis (3‑ethylbenzothiazoline‑6‑sulfonic acid) ไดแอมโมเนียม

เกลือ (ABTS), (±) 6‑hydroxy‑2,5,7,8‑tetra methylchromane‑2‑carboxylic acid (TROLOX) ที่ได้มาจาก Fluka ประเทศสหรัฐอเมริกา Nitro blue tetrazolium (NBT), phenazine methosulfate (PMS) และ nicotinamide adenine dinucleotide ‑redred disodium salt (NADH) ได้จาก SRL Pvt. Ltd. เมืองมุมไบ ประเทศอินเดีย ซื้อแอมโมเนียมต่อซัลเฟต (APS) จาก Rankem ประเทศอินเดีย

การรวบรวมวัสดุจากพืช

ผลไม้ของ C. reticulata Blanco, Rutaceae ได้รับในเดือนมกราคม 2013 จากมุมไบ (อินเดีย) การระบุอนุกรมวิธานของวัสดุจากพืชได้รับการยืนยันโดย Dr. CS Latto มหาวิทยาลัยมุมไบ การรับรองความถูกต้องเสร็จสิ้นที่ Agharkar Research Institute, Pune

การสกัดวัสดุจากพืช

ผลไม้ถูกล้างให้สะอาดใต้น้ำ ปอกเปลือกผลไม้และตากให้แห้งในที่ร่ม จากนั้น นำวัสดุที่แห้งไปอยู่ในรูปแบบผงและเก็บไว้ในภาชนะที่มีอากาศถ่ายเทที่อุณหภูมิห้อง สกัดผงแห้งประมาณ 50 กรัมด้วยเมทานอล 300 มล. สารสกัดจากพืชได้มาจาก Soxhlation (CR HAE‑ Hot Alcoholic Extract of Citrus reticulata) และวิธี maceration (CR CAE‑ Cold Alcoholic Extract of Citrus reticulata) ทำการสกัดแบบ Soxhlet ที่ 65 องศา เป็นเวลา 10–12 ชั่วโมง การทำให้เย็นลงโดยการเขย่าอย่างต่อเนื่อง โดยที่ส่วนผสมของผงพืชและเมทานอลถูกเก็บไว้ในเครื่องปั่นแบบหมุน (REMI CIS‑24 PLUS) และตั้งค่าไว้ที่ 100 รอบต่อนาทีที่ RT เป็นเวลา 72 ชั่วโมง สารสกัดถูกกรองโดยใช้กระดาษกรอง Whatman no. 1 จากนั้นกรองระเหยภายใต้แรงดันที่ลดลงและทำให้แห้งโดยใช้เครื่องระเหยแบบหมุน (R‑205, Buchi Laboratory Equipment, Flawil, Switzerland) ที่ 50 องศา สารสกัดแห้งถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศา ในขวดปิดฝาที่ปิดฉลาก ปลอดเชื้อ จนกว่าจะนำไปใช้ต่อไป

การวิเคราะห์ไฟโตเคมิคอลเบื้องต้นของสารสกัด

สารสกัดดังกล่าวต้องผ่านการทดสอบพฤกษเคมีเชิงคุณภาพต่างๆ เพื่อระบุองค์ประกอบทางเคมีที่มีอยู่ในวัสดุจากพืชตามวิธีการที่อธิบายไว้ [11]

การหาปริมาณฟีนอลิกทั้งหมด

ปริมาณฟีนอลิกทั้งหมด (TPC) ถูกกำหนดด้วยน้ำยา Folin - Ciocalteu โดยใช้วิธีที่กำหนด[12] ในแต่ละตัวอย่าง 0.5 มล. การเจือจาง Folin ‑ Ciocalteau's reagent 2.5 มล. 1:10 และ Na2CO3 2 มล. (7.5 เปอร์เซ็นต์โดยน้ำหนัก/ปริมาตร) ถูกเติมและบ่มที่ 765 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ที่มองเห็นด้วยรังสีอัลตราไวโอเลต ผลลัพธ์ถูกแสดงเป็นไมโครกรัมของเทียบเท่ากรดแกลลิกต่อมิลลิกรัมของสารสกัด (ไมโครกรัม GAE/สารสกัดมิลลิกรัม)

การหาปริมาณฟลาโวนอยด์ทั้งหมด

ปริมาณฟลาโวนอยด์ทั้งหมด (TFC) วัดโดยการวิเคราะห์สี AlCl3 [13]

สารสกัดส่วนลิควอต (1 มล.) หรือสารละลายมาตรฐานของเควอซิทิน (20, 40, 60, 80 และ 100 ไมโครกรัม/มล.) ถูกเติมลงในขวดปริมาตร 10 มล. ที่ประกอบด้วย 4 มล. น้ำกลั่น. เติม NaNO2 ร้อยละ 0.30 มล. 0.30 มล. และหลังจาก 5 นาที เติม AlCl3 10 เปอร์เซ็นต์ 0.3 มล. หลังจากผ่านไป 5 นาที เติม NaOH 1 โมลาร์ 2 มล. และปริมาตรถูกทำให้เกิน 10 มล. ด้วยน้ำกลั่น สารละลายถูกผสมและวัดค่าการดูดกลืนแสงเทียบกับช่องว่างที่ 510 นาโนเมตร TFC ถูกแสดงออกเป็น µg ของเทียบเท่ากับเควอซิทินต่อมิลลิกรัมของสารสกัด (µg QE/มิลลิกรัมสารสกัด)

การตรวจสารต้านอนุมูลอิสระ

1, 1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl free radical scavenging assay

กิจกรรมการไล่อนุมูลอิสระถูกประเมินโดยวิธีการที่กำหนดด้วยการดัดแปลงบางอย่าง[14] ฤทธิ์กำจัดอนุมูลอิสระถูกประเมินโดยวิธีการที่ให้ไว้ด้วยการดัดแปลงบางอย่าง ปริมาตร 1 มิลลิลิตรของความเข้มข้นต่างกัน (100–800 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ของตัวอย่างทดสอบถูกผสมกับสารละลาย DPPH เมทานอล 200 ไมโครลิตร (0.36 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร) หลังจากการเขย่า ของผสมถูกบ่มในที่มืดที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที และจากนั้นวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 517 นาโนเมตร กรดแอสคอร์บิกถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวก

Phenazine เมโธซัลเฟต-NADHsystem superoxide anion scavenging assay

กิจกรรมการขับซูเปอร์ออกไซด์ถูกประเมินโดยวิธีการที่ให้ไว้[15] บัฟเฟอร์ Tris HCl (3 มล., 16 mM, pH 8.0) ที่มีสารละลาย 0.75 มล. NBT (50 µM), 0.75 มล. NADH ( สารละลาย 78 ไมโครโมลาร์) และ 0.3 มิลลิลิตรของตัวอย่างสารละลายของสารสกัด (50–350 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ในเมทานอลถูกผสม ปฏิกิริยาเริ่มต้นเมื่อเติมสารละลาย PMS 0.75 มิลลิลิตร (10 ไมโครโมลาร์) ลงในของผสม ของผสมของปฏิกิริยาถูกบ่มที่ 25 องศาเป็นเวลา 5 นาที และการดูดกลืนแสงถูกอ่านที่ 560 นาโนเมตรเทียบกับตัวอย่างเปล่าที่สอดคล้องกัน ใช้กรดแอสคอร์บิกเป็นมาตรฐาน

2, 2'-azino-bis (3-เอทิลเบนโซไทอะโซลีน-6-กรดซัลโฟนิก) การหาปริมาณสารกำจัดอนุมูลอิสระ

การทดสอบจะดำเนินการตามวิธีการที่กำหนด[16] ไอออนอนุมูลอิสระของ ABTS เกิดจากปฏิกิริยา ABTS และ APS และบ่มส่วนผสมที่อุณหภูมิห้องในที่มืดเป็นเวลา 16 ชั่วโมง โดยสรุป ปริมาตรของปฏิกิริยาทั้งหมดประกอบด้วย 10 mM PBS pH 7.4 (กลุ่มควบคุมเชิงบวกหรือสารละลายทดสอบ) ที่มีความเข้มข้นต่างๆ สารละลายเรดิคัล ABTS ถูกเติมไปยังความเข้มข้นสุดท้ายที่ 0.219 มิลลิโมลาร์ ของผสมของปฏิกิริยาถูกผสมและอ่านทันทีที่ 734 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท (VERSA max, อุปกรณ์ระดับโมเลกุล, สหรัฐอเมริกา) ปฏิกิริยากลุ่มควบคุมถูกดำเนินการโดยไม่มีตัวอย่างทดสอบ กรดแกลลิกถูกใช้เป็นสารควบคุมเชิงบวก

ความสามารถของสารสกัดในการขจัดอนุมูลอิสระ DPPH, PMS‑NADH และอนุมูลอิสระ ABTS คำนวณโดยสูตรต่อไปนี้:

Radical scavenging activity ( เปอร์เซ็นต์ )=([Abs of control − Abs of sample]/Abs of control) ×100 โดยที่ Abs คือการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่นที่กล่าวถึงโดยมีหรือไม่มีสารสกัดจากการทดสอบ

การทดสอบความสามารถในการดูดกลืนอนุมูลอิสระของออกซิเจน

การทดสอบนี้ดำเนินการตามวิธีการที่อธิบายไว้[17] ของผสมก่อนการฟักไข่ที่ 140 ไมโครลิตร ประกอบด้วย − 20 ไมโครลิตรของสารละลายทดสอบหรือ TROLOX ที่ความเข้มข้นต่างๆ บัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟต 75 มิลลิโมลาร์, pH 7.4; โซเดียมฟลูออเรสซีน 120 ไมโครลิตร (117 นาโนโมลาร์) ผสมและบ่มที่ 37 องศาเป็นเวลา 10 นาที หลังจากการบ่มล่วงหน้า 60 ไมโครลิตรของ AAPH (40 มิลลิโมลาร์) ถูกเติมและผสมเป็นเวลา 15 วินาที ปฏิกิริยาถูกดำเนินการเป็นเวลา 90 นาที ที่ 37 องศา การวัดค่าการเรืองแสงถูกถ่ายที่การกระตุ้น 485 นาโนเมตรและตัวกรองการแผ่รังสี 520 นาโนเมตร

การตรวจเอนไซม์

การทดสอบต่อต้านคอลลาเจน

การทดสอบการยับยั้งคอลลาเจนเนสดำเนินการโดยวิธีการที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [18] ซึ่งอิงจากการไฮโดรไลซิสของ FALGPA โดยคอลลาเจนเนสเพื่อผลิต FA-Leu และ Gly-Pro-Ala การสอบวิเคราะห์ถูกดำเนินการในบัฟเฟอร์ทริซีน 50 มิลลิโมลาร์ (400 มิลลิโมลาร์ NaCl และ 10 มิลลิโมลาร์ CaCl2, pH 7.5) ChC ถูกละลายในบัฟเฟอร์สำหรับใช้ที่ความเข้มข้นเริ่มต้นที่ 0.8 หน่วย/มล. ซับสเตรตสังเคราะห์ FALGPA ถูกละลายในบัฟเฟอร์ทริซีนถึง 2 มิลลิโมลาร์ สารสกัดตัวอย่างถูกบ่มด้วยเอนไซม์ในบัฟเฟอร์เป็นเวลา 15 นาทีก่อนเติมซับสเตรตเพื่อเริ่มปฏิกิริยา ของผสมของปฏิกิริยาสุดท้าย (ปริมาตรทั้งหมด 75 ไมโครลิตร) ประกอบด้วยบัฟเฟอร์ทริซีน 50 ไมโครลิตร 25 ไมโครลิตร, สารสกัดทดสอบ 25 ไมโครลิตร (250–4000 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) และ 25 ไมโครลิตรของเอนไซม์ ChC 0.1 หน่วย การควบคุมที่ดำเนินการด้วยบัฟเฟอร์ทริซีน 50 มิลลิโมลาร์ ในขณะที่สารสกัดทดสอบถูกละลายในบัฟเฟอร์ทริซีน (50 มิลลิโมลาร์) ในขณะที่คาเทชินถูกใช้เป็นกลุ่มควบคุมเชิงบวก หลังจากเติม 50 µl ของซับสเตรต FALGPA 2 mM กิจกรรมของ collagenase ถูกวัดทันทีที่ 340 nm เป็นเวลา 20 นาทีโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท 96 หลุม (Bio‑Tek M Quant, FLX 800)

การทดสอบการต่อต้านอีลาสเทส

การทดสอบที่ใช้ขึ้นอยู่กับวิธีการจากวรรณคดี[19] การทดสอบนี้ดำเนินการในบัฟเฟอร์ 0.2 mM Tris‑HCL (pH 8.0) อีลาสเทสตับอ่อนของสุกร (PE – EC 3.4.21.36) ถูกละลายเพื่อทำสารละลายสต็อก 1 มก./มล. ใน {{10}}.2 มิลลิโมลาร์ Tris‑HCL บัฟเฟอร์ ซับสเตรต N‑Succinyl‑Ala‑Ala‑Ala‑p‑nitroanilide (SANA) ถูกละลายในบัฟเฟอร์ที่ 0.8 มิลลิโมลาร์ สารสกัดทดสอบ (0.156–10 มก./มล.) ถูกบ่มด้วยเอนไซม์เป็นเวลา 20 นาทีก่อนเติมซับสเตรตเพื่อเริ่มปฏิกิริยา ของผสมของปฏิกิริยาสุดท้าย (รวม 250 ไมโครลิตร) มีสารสกัดจากพืช 50 ไมโครลิตร, บัฟเฟอร์ 160 ไมโครลิตร, เอนไซม์ 20 ไมโครลิตร และซับสเตรต 20 ไมโครลิตร ใช้คาเทชินเป็นตัวควบคุมเชิงบวก การควบคุมเชิงลบดำเนินการโดยใช้บัฟเฟอร์ Tris‑HCL วัดค่าการดูดกลืนทันทีที่ 410 นาโนเมตร จากนั้นทำต่อเนื่องเป็นเวลา 20 นาทีโดยใช้เครื่องอ่านเพลทไมโคร 96 หลุม (Bio‑Tek M Quant, FLX 800) เปอร์เซ็นต์การยับยั้งสำหรับการทดสอบทั้งสองนี้คำนวณโดย: กิจกรรมการยับยั้งเอนไซม์ ( เปอร์เซ็นต์ )=(1− [B/A]) ×100

โดยที่ A=กิจกรรมของเอนไซม์โดยไม่มีตัวอย่าง B=กิจกรรมต่อหน้าตัวอย่าง

Gas chromatography‑mass spectrometry analysis

เงื่อนไขต่อไปนี้ถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ gas chromatography‑mass spectrometry(GC‑MS)[20]Thecomponentidentification wasdone using Agilent 7890 A gas chromatograph ร่วมกับ 5975 C inert Mass Selective Detector (MSD)กับTripleAxis Detector ตัวอย่างที่ฉีดโดย Agilent 7693 สุ่มตัวอย่างอัตโนมัติลงใน Agilent 19091S‑433: คอลัมน์ HP‑5MS (30 ม. × 250 µm × 0.25 µm) ฮีเลียมถูกใช้เป็นก๊าซพาหะ (1 มล./นาที) อุณหภูมิหัวฉีดและเครื่องตรวจจับถูกเก็บไว้ที่ 250 องศา อุณหภูมิคอลัมน์ถูกตั้งโปรแกรมไว้ที่ 60 องศาเป็นเวลา 3 นาที แล้วเพิ่มเป็น 160 องศาเป็นเวลา 2 นาทีที่ 10 องศา / นาที อุณหภูมิเพิ่มขึ้นถึง 300 องศา (ที่ 15 องศา / นาที) สเปกตรัมมวลได้รับช่วง 40–500 amu ในโหมด EI สารประกอบที่ถูกชะถูกระบุโดยการเปรียบเทียบข้อมูลมวลสารกับข้อมูลมาตรฐานที่มีอยู่ในห้องสมุดของสถาบันมาตรฐานและเทคโนโลยีแห่งชาติ ส่วนประกอบหลักจากสารสกัด Soxhlet methanolic ของเปลือก C. reticulata Blanco (CR HAE) ถูกระบุโดยการวิเคราะห์ GC‑MS

การวิเคราะห์ทางสถิติ

ค่า EC50 ถูกแสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน การวิเคราะห์ทางสถิติดำเนินการโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียวตามด้วยการทดสอบเปรียบเทียบแบบพหุคูณของ Tukey (P < 0.05)="" โดยที่="" ตัวอย่างทั้งหมด="" กล่าวคือ="" สารสกัดทดสอบ="" และเปรียบเทียบมาตรฐานเชิงบวกซึ่งกันและกัน="" การคำนวณทั้งหมดดำเนินการโดยใช้="" graphpad="" prism="" (เวอร์ชัน="" 5.0,="" graphpad="" software,="">

ผลลัพธ์และการอภิปราย

การวิเคราะห์ไฟโตเคมิคอลเบื้องต้นของสารสกัด

การวิเคราะห์ทางพฤกษเคมีเบื้องต้นของสารสกัดเมทานอลของ C. reticulata Blanco บ่งชี้ว่ามีคาร์โบไฮเดรต กรดอะมิโน ฟลาโวนอยด์ แทนนินและอนุพันธ์ฟีนอล สเตียรอยด์ ฯลฯ [ตารางที่ 1]

ตารางที่ 1: การวิเคราะห์พฤกษเคมีเบื้องต้นของสารสกัดเมทานอลของเปลือก Citrus reticulata Blanco

FeCl3 : เฟอริกคลอไรด์; CR HAE: สารสกัดแอลกอฮอล์ร้อนของ Citrus reticulata Blanco; CR CAE: Cold Alcoholic Extract ของ Citrus reticulata Blanco

การหาปริมาณฟีนอลิกทั้งหมด

ฟีนอล โดยเฉพาะอย่างยิ่งโพลีฟีนอลแสดงกิจกรรมทางชีวภาพที่เป็นประโยชน์มากมายในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม รวมทั้งการต้านไวรัส ต้านแบคทีเรีย กระตุ้นภูมิคุ้มกัน ต้านภูมิแพ้ ต้านความดันโลหิตสูง ฤทธิ์ต้านตับ ต้านการอักเสบ และต้านการก่อมะเร็ง[21,22] งานวิจัยหลายชิ้นแสดงให้เห็นว่าฟลาโวนอยด์ทำหน้าที่เป็นตัวกำจัด superoxide anion, singlet oxygen, hydroxyl radicals และ lipid peroxyl radicals[23,24] TPC และ TFC ถูกกำหนดหาสำหรับสารสกัดทั้งสองโดยใช้เส้นโค้งมาตรฐาน [รูปที่ 1] CR HAE แสดงเนื้อหาฟีนอลิกที่สูงขึ้น กล่าวคือ สารสกัด 187.93 ± 4.69 µg GAE/มก. มากกว่า CR CAE คือ 58.66 ± 2.40 ไมโครกรัม GAE/สารสกัด พบว่า TFC สำหรับ CR HAE และ CR CAE ใกล้เคียงกัน กล่าวคือ สารสกัด 171.72 ± 4.13 µg QE/mg และสารสกัด 169.88 ± 9.79 µg QE/mg ตามลำดับ

การหาปริมาณฟลาโวนอยด์ทั้งหมด

ไม่ควรสรุปกิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระโดยอิงจากตัวเดียวสารต้านอนุมูลอิสระแบบทดสอบ ในทางปฏิบัติ มีการดำเนินการขั้นตอนการทดสอบในหลอดทดลองหลายขั้นตอนเพื่อการประเมินสารต้านอนุมูลอิสระกิจกรรมพร้อมตัวอย่างที่น่าสนใจ[25] ในการศึกษานี้เราได้ประเมินสารต้านอนุมูลอิสระศักยภาพของ CR HAE และ CR CAE โดยต่างๆสารต้านอนุมูลอิสระการทดสอบซึ่งรวมถึงการทดสอบการขับอนุมูลอิสระ DPPH การทดสอบการขจัดสารอนุมูลอิสระของซูเปอร์ออกไซด์ การทดสอบการดูดกลืนอนุมูลอิสระของ ABTS และการทดสอบความสามารถในการดูดซับอนุมูลอิสระของออกซิเจน (ORAC)

การตรวจสารต้านอนุมูลอิสระ

1, 1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl free radical scavenging assay

DPPHfree radical scavengingassay เป็นหนึ่งในวิธีที่ใช้กันมากที่สุดการทดสอบสำหรับการทดสอบกิจกรรมการไล่อนุมูลอิสระเบื้องต้นของสารสกัดจากพืช ดิสารต้านอนุมูลอิสระกิจกรรมของสารสกัดจากพืชที่มีส่วนประกอบของโพลีฟีนอลเนื่องมาจากความสามารถในการบริจาคอะตอมไฮโดรเจนหรืออิเล็กตรอนและเพื่อขจัดอนุมูลอิสระ ดังนั้นสีม่วงของ DPPH จะลดลงเป็น , ไดฟีนิล ‑พิคริลไฮดราซีน (สีเหลือง) ผลลัพธ์ระบุว่า CR HAE และ CR CAE แสดงการขับอนุมูลอิสระ DPPH มากถึง 85 เปอร์เซ็นต์ [รูปที่ 2] กรดแอสคอร์บิกถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวก และแสดงฤทธิ์การไล่ออกสูงถึง 92 เปอร์เซ็นต์ CR HAE สูงขึ้นเล็กน้อยสารต้านอนุมูลอิสระกิจกรรมมากกว่า CR CAE ค่า EC50 (ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ถูกแสดงออกในตารางที่ 2

Phenazine metosulfate-NADHsystem superoxide anion scavenging assay แม้ว่า superoxide anion จะเป็นสารออกซิแดนท์ที่อ่อนแอ

ตารางที่ 2: ค่า EC ของสารสกัดเมทานอลของ Citrus reticulata Blanco Peel สำหรับการทดสอบ DPPH, superoxide, ABTS, anti-collagenase และ anti-elastase

อนุมูลไฮดรอกซิลที่เป็นอันตรายและทรงพลังรวมทั้งออกซิเจนเดี่ยว ซึ่งทั้งสองอย่างนี้มีส่วนทำให้เกิดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน อนุมูลซุปเปอร์ออกไซด์ที่เกิดจากออกซิเจนละลายน้ำโดยข้อต่อ PMS‑NADH และสามารถวัดได้โดยความสามารถในการลด NBT การดูดกลืนแสงที่ลดลงที่ 560 นาโนเมตรด้วยสารสกัดจากพืชบ่งชี้ถึงความสามารถในการดับอนุมูลซูเปอร์ออกไซด์ในส่วนผสมของปฏิกิริยา CR HAE แสดงกิจกรรมการขับซูเปอร์ออกไซด์ที่แรงกว่า CR CAE [รูปที่ 3] กรดแอสคอร์บิกถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวกและกำจัดซูเปอร์ออกไซด์แอนไอออนได้มากถึง 52 เปอร์เซ็นต์ ค่า EC50 (ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ถูกคำนวณและแสดงออกในตารางที่ 2 พบว่า CR HAE มีประสิทธิผล (P < 0.05)="" มากกว่า="" cr="" cae="" เนื่องจากมีค่า="" ec50="" น้อยกว่า="" (ไมโครกรัม/มิลลิลิตร)="">สารต้านอนุมูลอิสระกิจกรรม.

2, 2'-azino-bis (3-เอทิลเบนโซไทอะโซลีน-6-กรดซัลโฟนิก) การหาปริมาณสารกำจัดอนุมูลอิสระ

การทดสอบ ABTS อาศัยการขับของแสงโดยอนุมูล ABTS หนึ่งสารต้านอนุมูลอิสระด้วยความสามารถในการบริจาคอะตอมไฮโดรเจนจะดับสารอนุมูลอิสระที่เสถียร ซึ่งเป็นกระบวนการที่เกี่ยวข้องกับการเปลี่ยนแปลงการดูดกลืน ซึ่งสามารถติดตามด้วยสเปกโตรโฟโตเมตริก กิจกรรมของ ABTS ถูกหาปริมาณในแง่ของเปอร์เซ็นต์การยับยั้งของไอออนบวกของ ABTS โดยสารต้านอนุมูลอิสระในแต่ละตัวอย่าง ค่า ABTS ของ CR HAE, CR CAE และกรดแกลลิกถูกนำเสนอในตารางที่ 2 CR HAE และ CR CAE แสดงกิจกรรมการขจัดอนุมูลอิสระของ ABTS ในลักษณะที่ขึ้นกับความเข้มข้นและสังเกตได้ถึง 59 เปอร์เซ็นต์ กรดแกลลิกมีความสามารถในการกำจัด ABTS ถึง 79 เปอร์เซ็นต์ [รูปที่ 4] ค่า EC50 (ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ที่ได้รับสำหรับ CR HAE และ CR CAE ระบุว่าไม่มีความแตกต่างที่มีนัยสำคัญ (P < 0.05)="" และแนะนำว่าสารสกัดทั้งสองมีศักยภาพในการกำจัด="" abts="">

การทดสอบความสามารถในการดูดกลืนอนุมูลอิสระของออกซิเจน

การทดสอบ ORAC ถือเป็นการทดสอบที่เกี่ยวข้องทางชีวภาพมากกว่าวิธีการวัดแบบอื่นสารต้านอนุมูลอิสระความแรงเพราะมันวัดปฏิกิริยาการถ่ายโอนไฮโดรเจน-อะตอมและจำลองในร่างกายสารต้านอนุมูลอิสระการกระทำ[29] นอกจากนี้ยังวัดว่าส่วนประกอบที่ละลายน้ำได้และละลายในไขมันของสารธรรมชาติปกป้องเป้าหมายที่เป็นมาตรฐานจากการเกิดออกซิเดชันโดยเปอร์ออกซิลไนไตรต์ อนุมูลไฮดรอกซิล ซูเปอร์ออกไซด์แอนไอออน และ

ออกซิเจน singlet และสร้างคะแนนตามการเปรียบเทียบกับ anสารต้านอนุมูลอิสระกลุ่มควบคุม [30] ในการศึกษานี้ เราได้วัดค่า ORAC สำหรับ CR HAE และ CR CAE และแสดงในรูปของ TROLOX (มิลลิโมล TROLOX เทียบเท่า/กรัมของสาร) [รูปที่ 5] CR HAE แสดงค่า ORAC สูงกว่า (1243 มิลลิโมล TROLOX เทียบเท่า/กรัมของสาร) มากกว่า CR CAE (1063 ไมโครโมล TROLOX เทียบเท่า/กรัมของสาร) [ตารางที่ 2]

การตรวจเอนไซม์

การทดสอบต่อต้านคอลลาเจน

เมทริกซ์เมทัลโลโปรตีน (MMPs) เป็นตระกูลของเอนไซม์สลายโปรตีนที่ย่อยสลายส่วนประกอบต่างๆ ของ ECM Collagenase เป็นหนึ่งในสมาชิกของตระกูล MMP และมีหน้าที่ในการย่อยสลายคอลลาเจน คอลลาเจนจากแบคทีเรีย C. histolyticum (ChC) (C 3.4.24.3) เป็นหนึ่งในโปรตีเอสไม่กี่ชนิดที่สามารถย่อยสลายบริเวณสามเกลียวของคอลลาเจนพื้นเมืองภายใต้สภาวะทางสรีรวิทยาและในหลอดทดลองโดยใช้เปปไทด์สังเคราะห์เป็นสารตั้งต้น สามารถศึกษาฤทธิ์ป้องกันของสารสกัดจากพืชต่อเอนไซม์คอลลาเจนเนสโดยใช้ ChC และสารตั้งต้นสังเคราะห์ FALGPA [31] ในการศึกษานี้ กิจกรรมการยับยั้งคอลลาเจนเนสได้รับการประเมินสำหรับ CR HAE และ CR CAE ใช้คาเทชินเป็นตัวควบคุมเชิงบวก ผลการศึกษาพบว่าสารสกัด CR HAE มีประสิทธิภาพในการยับยั้งเอนไซม์คอลลาเจนเนสมากกว่า CR CAE และแสดงการยับยั้งได้ถึง 76 เปอร์เซ็นต์ [ภาพที่ 6] ประสิทธิภาพถูกวัดในรูปของค่า EC50 (ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) และแสดงออกในตารางที่ 2

การทดสอบการต่อต้านอีลาสเทส

อีลาสเทสเป็นเอนไซม์เดียวที่สามารถย่อยสลายอีลาสตินได้ การยับยั้งเอนไซม์อีลาสเทสสามารถคงความยืดหยุ่นและความอ่อนนุ่มของผิวไว้ได้ [32] ในแง่ของต่อต้านริ้วรอย, การหาสารยับยั้งเอนไซม์อีลาสเทสมีประโยชน์

เพื่อป้องกันการสูญเสียความยืดหยุ่นของผิวและทำให้ผิวหย่อนคล้อย ในการทดสอบการต่อต้านอีลาสเทส อีลาสเทสตับอ่อนของสุกรได้รับการทดสอบด้วยสเปกโตรโฟโตเมตรีโดยใช้ [N‑Succ‑(Ala) 3-p‑nitroanilide] เป็นซับสเตรต และกำหนดปริมาณของ p‑nitroaniline โดยการวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 41{{ 6}} นาโนเมตร ศึกษาผลการยับยั้งของ CR HAE และ CR CAE ต่อการทำงานของอีลาสเทส ใช้คาเทชินเป็นตัวควบคุมเชิงบวก CR HAE แสดงฤทธิ์การยับยั้งอีลาสเทสที่แรงเป็นเปอร์เซ็นต์ที่แข็งแกร่งเมื่อเปรียบเทียบกับ CR CAE และสังเกตการยับยั้งสูงถึง 80 เปอร์เซ็นต์ [รูปที่ 7] ค่า EC50 (มก./มล.) ถูกแสดงออกในตารางที่ 2 และสังเกตว่า CR HAE มีศักยภาพมากกว่า CR CAE (P < 0.05)="" พบว่าค่า="" ec50="" ที่ได้รับจากคาเทชินนั้นน้อยมาก="">ต่อต้านริ้วรอยส่วนประกอบ. Kim et al., 2004 แสดงให้เห็นว่า catechin และ epigallocatechin gallate ที่แยกได้จากชาเขียว (Camellia sinensis) เป็นสารยับยั้งการต่อต้านอีลาสเทสที่มีศักยภาพ

Gas chromatography‑mass spectrometry analysis

CR HAE สูงขึ้นสารต้านอนุมูลอิสระและความสามารถในการต่อต้านริ้วรอยเมื่อเปรียบเทียบกับ CR CAE ดังนั้น การวิเคราะห์ GC‑MS ของ CR HAE จึงถูกดำเนินการเพื่อทำความเข้าใจองค์ประกอบที่มีอยู่ในนั้น ระบุสารประกอบที่แตกต่างกัน 20 ชนิดและนำเสนอในตารางที่ 3 โครมาโตแกรมแสดง 20 พีคในช่วงเวลาการกักเก็บอยู่ในช่วงตั้งแต่ 2.95 นาทีถึง 44.45 นาที [รูปที่ 8] พีคที่ใหญ่ที่สุดที่ 44.11 นาทีโดยมีพื้นที่ 44.37 เปอร์เซ็นต์ถูกระบุว่าเป็นกรดบิวทิลฟอสโฟนิก, เพนทิล 4‑(2‑ฟีนิลโพร-2‑อิล) ฟีนิลเอสเทอร์ Zab et al., 2012[33] รายงานว่าสารต้านอนุมูลอิสระและฤทธิ์ต้านเนื้องอกของกรดบิวทิลฟอสโฟนิก, เพนทิล 4‑(2‑ฟีนิลโพร‑2‑อิล) ฟีนิลเอสเทอร์ที่มีอยู่ในสารสกัดเอธานอลของ ไดไฮโดร) หรือ 4-โครมาโนน (พื้นที่ร้อยละ 21.43) ซึ่งเป็นชนิด

ฟลาโวน Di Majo et al., 2005[34] แยก flavanones ออกจากผลส้มและพบว่าขึ้นอยู่กับโครงสร้างสารต้านอนุมูลอิสระกิจกรรม. สารประกอบอื่นๆ 3', 4', 5, 7, 8‑Pentamethoxyflavone และ 4', 5, 7, 8‑Tetramethoxyflavone เป็นชนิดของพอลิเมทอกซีฟลาโวน (PMF) PMF จัดแสดงกิจกรรมทางชีวภาพที่หลากหลาย เมื่อเร็ว ๆ นี้ Ho et al., 2012 [35] แยกและระบุ PMFs ที่ถูกไฮดรอกซิเลตจากเปลือกส้มและตรวจสอบกิจกรรมทางชีวภาพของพวกมัน รวมถึงการต่อต้านการอักเสบและคุณสมบัติในการป้องกันมะเร็งด้วยเคมี สารประกอบอื่นๆ ที่ระบุรวมถึง D‑Limonene (พื้นที่ 1.46 เปอร์เซ็นต์), 4H‑Pyran‑4‑one, 2, 3-dihydro‑3, 5-dihydroxy‑6‑methyl (พื้นที่ 1.46 เปอร์เซ็นต์), 2-Methoxy‑4‑vinylphenol ( พื้นที่ร้อยละ 1.67) และกรด n‑Hexadecanoic (บริเวณร้อยละ 2.51) และอาจเกี่ยวข้องกับต่อต้านริ้วรอยศักยภาพของเปลือก C. reticulata Blanco โครงสร้างของสารประกอบที่ระบุทั้งหมดถูกนำเสนอในรูปที่ 9

บทสรุป

สารสกัด C. reticulata Blanco ถูกประเมินต่อต้านริ้วรอยของผิวผ่านหลอดทดลองสารต้านอนุมูลอิสระ, การทดสอบต่อต้านคอลลาเจนและต่อต้านอีลาสเทส จากการศึกษาพบว่าสารสกัดเมทานอล (Soxhlation) มีแนวโน้มดีขึ้นสารต้านอนุมูลอิสระและฤทธิ์ต้านเอนไซม์และสามารถใช้เป็นสารออกฤทธิ์ได้ต่อต้านริ้วรอยตัวแทนในต่อต้านริ้วรอยสูตรบำรุงผิว

การรับทราบ

ผู้เขียนรู้สึกขอบคุณ Underwriters Lab (UL) บังกาลอร์ ประเทศอินเดีย สำหรับการวิเคราะห์ GC‑MS และการเยียวยาธรรมชาติ เมืองบังกาลอร์ ประเทศอินเดีย สำหรับการวิเคราะห์ ORAC

การสนับสนุนทางการเงินและการอุปถัมภ์

ไม่มี

ผลประโยชน์ทับซ้อน

ไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์