ผลของสารสกัดน้ำ Cistanche Tubulosa ต่อจุลินทรีย์ในลำไส้ของหนูเมาส์ที่มีความผิดปกติของลำไส้

Xiaowei Bao, Dongwen Bai, Xiaolu Liu, Ying Wang, Lanjun Zeng, Chenye Wei และ Weiquan Jin

College of Food Science and Pharmacy, Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830052, ประเทศจีน

ควรส่งจดหมายโต้ตอบถึง Xiaowei Bao; xiaoweibao0723@xjau.edu.cn

ได้รับ 29 เมษายน 2564; ยอมรับ 30 มิถุนายน 2564; เผยแพร่ 14 กรกฎาคม 2021

นี่เป็นบทความที่เข้าถึงได้ซึ่งเผยแพร่ภายใต้ Creative Commons Attribution License ซึ่งอนุญาตให้ใช้ แจกจ่าย และทำซ้ำได้ไม่จำกัดในสื่อใดๆ หากมีการอ้างถึงงานต้นฉบับอย่างเหมาะสม

ติดต่อ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

เชิงนามธรรม

ความผิดปกติของจุลินทรีย์ในลำไส้มีความเกี่ยวข้องกับโรคต่างๆ สารสกัดที่เป็นน้ำจากCistanchetubulosaมีรายงานว่า (CT) ซึ่งเป็นสมุนไพรจีนโบราณมีบทบาทในการปกป้องลำไส้ของมนุษย์ อย่างไรก็ตาม ไม่ค่อยมีใครทราบเกี่ยวกับผลกระทบต่อจุลินทรีย์ในลำไส้ การศึกษาครั้งนี้ได้ดำเนินการเพื่อตรวจสอบว่าCistancheTubulosaสารสกัดที่เป็นน้ำสามารถปรับเปลี่ยน microbiome ในลำไส้ในหนูที่มีความผิดปกติของลำไส้ได้ เราพบว่าสัณฐานวิทยาของลำไส้ที่เสียหายที่เกิดจากการรักษาด้วยเซฟิซิมสามารถช่วยชีวิตได้โดยใช้CistancheTubulosaสารสกัดจากน้ำ การเปรียบเทียบความหลากหลายของจุลินทรีย์ระหว่างหนูทดลองที่ได้รับสารสกัดจาก Cistanche Tubulosa และหนูควบคุมยังชี้ให้เห็นว่าความผิดปกติในชุมชนไมโครไบโอมของกลุ่มแบบจำลองสามารถฟื้นฟูได้ด้วยการบำบัดด้วยความเข้มข้นสูงและปานกลางของCistancheTubulosaสารสกัดจากน้ำ การรักษาด้วยเซฟิซิมทำให้แบคทีเรียกรดแลคติกลดลงอย่างมีนัยสำคัญ อย่างไรก็ตามการเสริมของCistancheTubulosaสารสกัดจากน้ำช่วยฟื้นฟูการเจริญเติบโตของแบคทีเรียกรดแลคติกเหล่านี้ นอกจากนี้CistancheTubulosaสารสกัดที่เป็นน้ำสามารถลดการเปลี่ยนแปลงอย่างมากในวิถีการเผาผลาญของไมโครไบโอมในลำไส้ที่เกิดจากเซฟซิซิม การค้นพบนี้ให้ข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับผลประโยชน์ของสารสกัดจากน้ำ Cistanche Tubulosa ที่มีต่อจุลินทรีย์ในลำไส้ และยังให้ข้อมูลอ้างอิงที่สำคัญสำหรับการพัฒนายาที่เกี่ยวข้องในอนาคต

Cistanchetubulosaมีเอฟเฟกต์มากมาย คลิกที่นี่เพื่อทราบข้อมูลเพิ่มเติม

1. บทนำ

จุลินทรีย์ในลำไส้มักตั้งรกรากในลำไส้เล็กและชั้นเยื่อเมือก และรวมตัวกับโฮสต์ผ่านการแลกเปลี่ยนวัสดุและพลังงาน การเปลี่ยนแปลง และกระบวนการอื่นๆ [1] *ey เป็นศูนย์กลางการส่งสัญญาณที่รวมข้อความด้านสิ่งแวดล้อม เช่น อาหาร กับสัญญาณทางพันธุกรรมและภูมิคุ้มกัน ซึ่งส่งผลต่อการเผาผลาญของร่างกาย ภูมิคุ้มกัน ระบบประสาท และการตอบสนองต่อการติดเชื้อ [2] โดยปกติจะมีความสมดุลแบบไดนามิกระหว่างพืชในลำไส้และโฮสต์ อย่างไรก็ตาม โรค dysbiosis ในลำไส้อาจส่งผลให้เกิดการเปลี่ยนแปลงในด้านสุขภาพ/ความสมดุลของโรค ความผิดปกติของภูมิคุ้มกัน และโรคต่างๆ มากมาย [3] การเปลี่ยนแปลงในระดับปานกลางในจุลินทรีย์ในลำไส้เป็นที่ยอมรับได้สำหรับโฮสต์ อย่างไรก็ตาม สิ่งนี้ยังคงให้โอกาสในการขยายการเปลี่ยนแปลงในปัจจัยที่ทำให้รุนแรงขึ้นอื่นๆ เช่น แบคเทอริโอฟาจ แบคเทอริโอซิน และความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน [4]

การศึกษาก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่าสารสกัดจากเอทานอลของ Cistanche tubulosa (CT) ซึ่งเป็นสูตรสมุนไพรจีนโบราณ สามารถควบคุมองค์ประกอบของจุลินทรีย์ในลำไส้ในหนูทดลอง [5] และไกลโคไซด์ทั้งหมดของ Cistanche Tubulosa ได้ปรับจุลินทรีย์ในลำไส้ที่ไม่เป็นระเบียบ [6] สายพันธุ์ Cistanche ซึ่งส่วนใหญ่เป็นปรสิตบนรากของสายพันธุ์ Tamarix เรียกอีกอย่างว่า "โสมแห่งทะเลทราย" และยาชูกำลังที่ประกอบด้วยลำต้นของ Cistanche deserticola (CD) และ Cistanche tubulosa (CT) ใช้เป็นยาสมุนไพร [7 ]. ส่วนประกอบทางเคมีหลักของ Cistanche Tubulosa phenylethanol glycosides (PHGs) ซึ่งเป็นสารต้านอนุมูลอิสระ [8, 9] พบว่าช่วยปรับปรุงการทำงานของระบบสืบพันธุ์ [10] ยับยั้งการกระตุ้นเซลล์ตับ stellate ขัดขวางการนำวิถีการส่งสัญญาณใน TGF{{6 }}/SMAD [11] และป้องกันพังผืดในตับที่เกิดจากอัลบูมินในซีรัมของวัวในหนูแรท [12] ในบรรดาส่วนประกอบมากกว่า 100 ชนิดใน Cistanche Tubulosa โพลีแซ็กคาไรด์ยังเป็นหนึ่งในสารสำคัญที่มีเนื้อหามากมาย [13, 14] การศึกษาก่อนหน้านี้ได้แสดงให้เห็นว่า C. deserticola polysaccharides กระตุ้นการสร้างเมลาโนเจเนซิสในเมลาโนไซต์, ลดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน[15], บรรเทาความผิดปกติของความรู้ความเข้าใจโดยการควบคุมสารต้านอนุมูลอิสระและกระบวนการต้านการอักเสบในหนูแรท [16], ปกป้องเซลล์ PC12 ต่อการบาดเจ็บที่เกิดจาก OGD/RP [17] , เพิ่มการดูดซึม echinacoside ในร่างกาย และส่งผลต่อ microbiota ในลำไส้ [18]

โปรไบโอติกเป็นจุลินทรีย์ที่ไม่ก่อให้เกิดโรคที่มีชีวิตซึ่งมีประโยชน์ต่อสุขภาพและให้ความสมดุลของจุลินทรีย์ในทางเดินอาหารเมื่อให้ในปริมาณที่เพียงพอ [19] *ey สามารถเพิ่มการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของเซลล์ที่ไม่เฉพาะเจาะจงโดยการกระตุ้นของมาโครฟาจ เซลล์นักฆ่าตามธรรมชาติ (NK) และความจำเพาะของแอนติเจนต่อ T lymphocytes ที่เป็นพิษและการปล่อยไซโตไคน์ต่างๆ ในลักษณะจำเพาะต่อสายพันธุ์และขึ้นกับขนาดยา [20 ]. สายพันธุ์โปรไบโอติกปรับปรุงคุณสมบัติของเยื่อบุผิวในลำไส้ผ่านการมอดูเลต TJ และได้แสดงให้เห็นสายพันธุ์โปรไบโอติกเฉพาะเพื่อควบคุมการแสดงออกของเมือก ซึ่งส่งผลต่อคุณสมบัติของชั้นเมือกและควบคุมโดยอ้อมต่อระบบภูมิคุ้มกันของลำไส้ [21] สายพันธุ์ของแบคทีเรียกรดแลคติก (LAB) และ Bifidobacterium เป็นโปรไบโอติกหลักที่ใช้กันในหลายสาขา [22-26] ประโยชน์ต่อสุขภาพมีมากมาย โดยความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระเป็นปัจจัยสำคัญในการทำงานที่เกี่ยวข้องกับสุขภาพ[27] โปรไบโอติกสามารถคีเลตไอออนของโลหะเพื่อป้องกันไม่ให้เร่งปฏิกิริยาออกซิเดชัน [28, 29]; พวกเขายังสามารถเพิ่มการแสดงออกของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระ [30, 31] ผลิตสารเมตาโบไลต์ต่าง ๆ ที่มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ [32, 33] เป็นสื่อกลางในการส่งสัญญาณของสารต้านอนุมูลอิสระ [34–36] และควบคุมเอนไซม์ที่ผลิตออกซิเจนปฏิกิริยา (ROS) และ การตอบสนองของจุลินทรีย์ในลำไส้ต่อความเครียดออกซิเดชัน[37]

ดอกชบา

ผลการศึกษาล่าสุดแสดงให้เห็นว่าพอลิแซ็กคาไรด์ของ Cistanche Deserticola สามารถกระตุ้นการเจริญเติบโตของแบคทีเรียกรดแลคติกบางชนิด ซึ่งอาจเป็นประโยชน์ต่อสุขภาพของมนุษย์ [38] อย่างไรก็ตาม เนื้อหาของโพลีแซ็กคาไรด์ใน Cistanche Deserticola นั้นแตกต่างจากใน Cistanche Tubulosa [7, 39] และความแตกต่างนี้อาจนำไปสู่ผลกระทบที่แตกต่างกันต่อจุลินทรีย์ในลำไส้ นอกจากนี้ แม้ว่าโพลีแซ็กคาไรด์ของ Cistanche Deserticola สามารถลดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันได้โดยการกระตุ้นวิถี NRF2/HO-1 [15] แต่ผลของโพลีแซ็กคาไรด์เพียงตัวเดียวอาจแตกต่างไปจากผลกระทบโดยรวมขององค์ประกอบหลายอย่างใน Cistanche Tubulosa ดังนั้นจึงจำเป็นต้องกำหนดผลกระทบของสารสกัดน้ำ Cistanche Tubulosa ที่มีต่อจุลินทรีย์ในลำไส้อย่างแม่นยำ นอกจากนี้ PHGs ยังสามารถต้านทานความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน [40] และยับยั้งการตอบสนองการอักเสบที่อาศัยไลโปโพลีแซ็กคาไรด์โดยการเปิดใช้งานวิถี Keap1/Nrf2/HO-1 [41] ดังนั้น การพิจารณาผลของสารสกัดที่เป็นน้ำ Cistanche Tubulosa จึงคุ้มค่าอย่างยิ่ง นอกจากนี้ ผลขององค์ประกอบบางอย่างของสารสกัด Cistanche Deserticola ที่เป็นน้ำต่อความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและพืชในลำไส้แนะนำว่าความต้านทานต่อความเครียดออกซิเดชันอาจสัมพันธ์กับการเปลี่ยนแปลงของพืชในลำไส้

เพื่อเติมเต็มช่องว่างในความรู้ในหัวข้อที่กล่าวถึงข้างต้น เราได้ตรวจสอบผลของสารสกัดจากน้ำ Cistanche Tubulosa ต่อจุลินทรีย์ในลำไส้ของหนูที่มีความผิดปกติของพืชในลำไส้ ผลลัพธ์เหล่านี้จะให้ข้อมูลที่มีค่าเกี่ยวกับกลไกที่เป็นไปได้ซึ่ง Cistanche Tubulosa เปลี่ยนพืชในลำไส้และให้ความต้านทานต่อลำไส้ต่อความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน

2. วัสดุและวิธีการ

2.1. สัตว์ทดลอง.

หนูเมาส์ C57BL/6J เพศผู้คลาส SPF จำนวน 18 ตัว ซึ่งมีน้ำหนัก 18–22 กรัม ถูกซื้อจากศูนย์สัตว์ทดลองของมหาวิทยาลัยการแพทย์ซินเจียงซึ่งมีหมายเลขใบอนุญาต SCXK (ใหม่) 2018-0003 พวกเขาถูกขังอยู่ในกรงภายใต้สภาวะมาตรฐาน: ช่วงแสง/มืด 12 ชม. อุณหภูมิ 23 ± 2 องศา และความชื้น 55 ± 5 เปอร์เซ็นต์ * สัตว์ e ได้รับอาหารเชิงพาณิชย์ (สารสกัดปราศจากไนโตรเจน 51 เปอร์เซ็นต์ โปรตีนหยาบ 25 เปอร์เซ็นต์ ไขมันดิบ 4.6 เปอร์เซ็นต์ เถ้าดิบ 6.5 เปอร์เซ็นต์ เส้นใยหยาบ 4.0 เปอร์เซ็นต์ และความชื้น 8.9 เปอร์เซ็นต์) และน้ำประปา . * สัตว์ e ได้รับการรักษาตามคำแนะนำที่อธิบายไว้ในคู่มือการดูแลและการใช้สัตว์ทดลองของสถาบันสุขภาพแห่งชาติ

2.2. การสกัดสารสกัดที่เป็นน้ำ

ค. ชิ้นแห้ง tubulosa ที่จัดหาโดย Hotan Dichen PharmaceuticalBiotechnology Co., Ltd. ถูกบดเป็นผง และเลือกเม็ดที่มีขนาดอนุภาคระหว่าง 20 และ 40 ตาข่าย เงื่อนไขการสกัดมีดังนี้: อัตราส่วนของแข็งและของเหลว 1:19, อุณหภูมิ 80 องศา , เวลาไมโครเวฟ 6 นาที, เวลาอัลตราโซนิก 16 นาที, กำลังไมโครเวฟ 400 W และ พลังอัลตราโซนิก 400 วัตต์ เนื้อหาในส่วนประกอบหลักของสารสกัดที่เป็นน้ำถูกวัดโดย HPLC (Agilent 1260 Infinity II, California, USA) โดยสังเขป สารมาตรฐานของอิชินาโคไซด์ (0.2 มก./มล.) และแอกทิโอไซด์ (0.2 มก./มล.) ถูกละลายในเมทานอล 50 เปอร์เซ็นต์เพื่อใช้เป็นสารละลายของสารอ้างอิง จากนั้น 1 กรัมของสารสกัดที่เป็นน้ำ CT ถูกละลายใน 100 มล. 50 เปอร์เซ็นต์ของเมทานอล และปล่อยให้นั่งเป็นเวลา 30 นาที สารละลายสารสกัดถูกบำบัดด้วยอัลตราซาวนด์ที่ 250 W และ 35 kHz เป็นเวลา 10 นาที และต่อมาหมุนเหวี่ยงที่ 12,{24}} รอบต่อนาที/นาที ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกแทรกซึมโดยเมมเบรนกรองพรุนขนาด 0.45 ไมโครเมตร จากนั้น HPLC ตรวจพบสารละลายของสารอ้างอิงและสารกรองในสภาวะต่อไปนี้: ซิลิกาเจลที่ถูกพันธะออกทาเดซิลเลนเป็นสารตัวเติม เมทานอลในเฟสเคลื่อนที่ A และกรดฟอร์มิก 0.1 เปอร์เซ็นต์เป็นเฟสเคลื่อนที่ B อุณหภูมิของคอลัมน์ถูกกำหนดเป็น 30 องศา ตั้งค่าความยาวคลื่นการตรวจจับเป็น330 นาโนเมตร และปริมาตรการฉีดคือ 10 ไมโครลิตร

2.3. การทดลอง

หลังจากปรับตัวได้หนึ่งสัปดาห์ หนูทั้ง 18 ตัวถูกสุ่มแบ่งออกเป็น 6 กลุ่ม: A (ปกติที่เติมสารสกัดน้ำ Cistanche Tubulosa ขนาดกลาง), B (ปกติที่ไม่มีสารสกัดน้ำ Cistanche Tubulosa), C (รุ่นที่ไม่มีสารสกัดที่เป็นน้ำ), D (รุ่นที่เติมสารสกัดน้ำ Cistanche Tubulosa ขนาดสูง), E (รุ่นที่เติมสารสกัดน้ำ Cistanche Tubulosa ในปริมาณปานกลาง) และ F (รุ่นที่เติมสารสกัดน้ำ Cistanche Tubulosa ขนาดต่ำ) กลุ่มที่ได้รับการปฏิบัติดังนี้ กลุ่มปกติถูกชุบด้วยน้ำเกลือปกติ กลุ่มแบบจำลองถูกแช่ด้วยเซฟิกซิม (30 มก./กก. Shiyao Group OuyiPharmaceutical Co., Ltd., ฉือเจียจวง ประเทศจีน) และสารละลายน้ำเกลือปกติ สูง - กลุ่มขนาดยาเปียกโชกโดยเซฟิซิมและ 221.14 มก./กก. ของสารสกัดที่เป็นน้ำ Cistanche Tubulosa กลุ่มที่ได้รับยาขนาดกลางถูกชุบด้วยเซฟิซิมและ 165.54 มก./กก. ของสารสกัดที่เป็นน้ำ และกลุ่มที่ได้รับยาขนาดต่ำถูกชุบด้วยเซฟฟิซิมและ 110.57 มก./กก. ของสารสกัดที่เป็นน้ำ กลุ่ม A เปียกโชกด้วยสารสกัดที่เป็นน้ำ 165.54 มก./กก. และไม่มีการเติมเซฟซิซิม Cefixime ถูกบริหารให้ทุกวันที่ 12:{18}} ชั่วโมง และสารอื่นๆ ถูกบริหารให้ทุกวันที่ 15:00 ชั่วโมง ในระหว่างการทดลอง กลุ่ม C, D, E และ F ถูกเก็บไว้ในสถานะแบบจำลองของความผิดปกติของลำไส้ * อุจจาระ e ถูกเก็บรวบรวมทุก ๆ เจ็ดวันบนโต๊ะที่ผ่าตัดได้ปลอดเชื้อและเก็บไว้ที่ -20 องศา

2.4. การสังเกตทางจุลพยาธิวิทยาของหนูโคลอน

ในตอนท้ายของการทดลอง หนูถูกฆ่าโดยปากมดลูกเคลื่อน และเนื้อหาในลำไส้ของพวกมันถูกรวบรวมบนโต๊ะที่ผ่าตัดได้ปลอดเชื้อและเก็บไว้ที่ −80 องศา ; ในเวลาเดียวกัน ตัวอย่างเนื้อเยื่อลำไส้ใหญ่ได้รับการแก้ไขในฟอร์มาลินที่เป็นกลาง 10 เปอร์เซ็นต์ จากนั้น ตัวอย่างถูกทำให้แห้งโดยใช้ความเข้มข้นแบบเกรเดียนต์ของเอทานอล ถูกไฮยาลินโดยใช้ไซลีน ฝังในพาราฟิน แบ่งส่วน และย้อมด้วยฮีมาทอกซิลิน-อีโอซิน สังเกตการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาในเยื่อบุลำไส้และเปรียบเทียบโดยใช้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง วัดความยาว Villus และความลึกของ crypt ในโคลอน และคำนวณอัตราส่วนของความยาว villus ต่อความลึกของ crypt (ค่า V/C) (51)

2.5. การสกัดดีเอ็นเอและการสร้างห้องสมุด DNA ถูกสกัดจากอุจจาระโดยใช้ EZNA ®Soil DNA Kit (Omega Bio-Tek, Norcross, GA, USA) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต ตรวจสอบคุณภาพดีเอ็นเอโดยใช้ฟลูออโรมิเตอร์ (QuantiFluor™–ST, Promega Corporation, USA) ไพรเมอร์ที่จับคู่กันในบริเวณ V3-V4 ของ 16s rDNA ได้รับการออกแบบมาเพื่อขยายขอบเขตและผลิตชิ้นส่วนดีเอ็นเอ 466 bp *ไพรเมอร์ไปข้างหน้าคือ 341F (-5-CCTACGGGNGGCWGCAG-3-) และไพรเมอร์แบบย้อนกลับคือ 806R (-5-GGACTACHVGGGGTATCTAAT-3-) ปริมาตร PCR แต่ละรายการคือ 25 ไมโครลิตร ประกอบด้วย 2.5 ไมโครลิตรของ 10 × บัฟเฟอร์ PCR, 2 ไมโครลิตรของ dNTPs, 1 ไมโครลิตรของไพรเมอร์แต่ละชนิด และ DNA แม่แบบ 20–30 นาโนกรัม *en อะแด็ปเตอร์ที่ทำดัชนีถูกต่อเข้ากับส่วนท้ายของแอมพลิคอนเพื่อสร้างไลบรารีลำดับ ห้องสมุดได้รับการตรวจสอบโดยใช้ฟลูออโรมิเตอร์ QuantiFluor™ และหาปริมาณเป็น 10 นาโนโมล

แอคทีโอไซด์ในซิสแทนเช่สามารถกระตุ้นระบบภูมิคุ้มกันได้

2.6. ลำดับยีน rRNA 16s และการวิเคราะห์ชุมชนจุลินทรีย์

แพลตฟอร์ม Illumina (Illumina MiSeq) ถูกใช้เพื่อรับข้อมูลปลายทางที่จับคู่ 2 × 250 bp หน่วยอนุกรมวิธานในการปฏิบัติงาน (OTU) ได้มาโดยใช้ซอฟต์แวร์ Uparse ผ่านการทำคลัสเตอร์มาตรฐานที่มีความคล้ายคลึงกัน 97 เปอร์เซ็นต์ อัลกอริธึมการกำหนด Bayesian ที่ไร้เดียงสาของตัวแยกประเภท RDP ถูกใช้เพื่อจัดตำแหน่ง OTU กับฐานข้อมูล Greengene รีลีส 13.5 และดำเนินการคำอธิบายประกอบของสปีชีส์ ความหลากหลายอัลฟาของจุลินทรีย์ในลำไส้คำนวณโดยใช้ดัชนีแชนนอนและซิมป์สัน และความแตกต่างระหว่างกลุ่มถูกวิเคราะห์โดยขนาดผลการวิเคราะห์จำแนกเชิงเส้น (LEfSe) ความหลากหลายเบตาได้รับการวิเคราะห์โดยการวิเคราะห์พิกัดหลัก (PCoA) ของความแตกต่างของเบรดี–เคอร์ติส PICRUSt2 ใช้เพื่อประเมินความสามารถในการเผาผลาญของจุลินทรีย์ในลำไส้เล็ก [42]

2.7. การวิเคราะห์ข้อมูลทางสถิติ

SPSS 20 ใช้สำหรับ ANOVA ทางเดียว และข้อมูลการทดลองแสดงเป็น X ± S; X หมายถึงค่าเฉลี่ย และ S หมายถึงส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน

3. ผลลัพธ์

3.1. ผลของสารสกัดน้ำ Cistanche Tubulosa ต่อสัณฐานวิทยาของลำไส้ใหญ่.

สารประกอบที่เป็นตัวแทน (เอไคนาโคไซด์และแอกทิโอไซด์) และความเข้มข้นของสารสกัด Cistanche Tubulosa ของพวกมันถูกตรวจสอบความถูกต้องโดย HPLC (รูปที่ S1) เพื่อตรวจสอบผลของสารสกัดที่เป็นน้ำในลำไส้ เราได้ตรวจสอบความยาวของวิลลี่ลำไส้ใหญ่และความลึกของช่องหลังการบำบัดด้วยสารสกัดน้ำ Cistanche Tubulosa วิลไลลำไส้ใหญ่ในกลุ่มปกติและกลุ่มที่ได้รับยาขนาดสูง (A, B และ D) นั้นยาวกว่าและเหมือนนิ้ว ในขณะที่วิลลี่ลำไส้ใหญ่ในแบบจำลองและกลุ่มที่ให้ขนาดยาต่ำ (C และ F) นั้นสั้น และส่วนปลายของลำไส้ใหญ่ วิลลี่หัก (รูปที่ 1) ดังนั้น สารสกัดน้ำ Cistanche Tubulosa ในปริมาณสูงจึงเพิ่มความยาวของวิลลี่ลำไส้ใหญ่อย่างมีนัยสำคัญ และลดความลึกของช่องในหนูที่มีความผิดปกติของลำไส้เมื่อเปรียบเทียบกับหนูในกลุ่มแบบจำลอง (P < 0.01)="" ในทางตรงกันข้าม="" ความลึกของช่องไม่แตกต่างกันระหว่างกลุ่มที่ได้รับยาขนาดสูงกับกลุ่มปกติ="" (p=""> 0.05) (ตารางที่ S1) ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่าปริมาณที่สูงของสารสกัดจากน้ำ Cistanche Tubulosa สามารถปรับปรุงลักษณะทางสัณฐานวิทยาภายในลำไส้ใหญ่ของหนูที่มีความผิดปกติของลำไส้

3.2. ผลของสารสกัดน้ำ Cistanche Tubulosa ต่อความหลากหลายของจุลินทรีย์ในลำไส้

เราทำการจัดลำดับยีน rRNA 16s เพื่อตรวจสอบสาเหตุที่เป็นไปได้ของการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาภายในลำไส้ใหญ่ และตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงของจุลินทรีย์ในลำไส้หลังการรักษาด้วยสารสกัดจากน้ำ CT แท็กที่มีประสิทธิภาพเฉลี่ย 100,553 แท็ก ตั้งแต่ 77,734 ถึง 125,144 ได้รับจากข้อมูลดิบ (ตาราง S2) แท็กเหล่านี้ถูกจัดกลุ่มเป็น 4932 OTU (ตาราง S3) จากนั้นเราวิเคราะห์ความหลากหลายของจุลินทรีย์ในลำไส้โดยอ้างอิงจากเธเซอุส ดัชนีแชนนอนและซิมป์สันไม่พบความแตกต่างระหว่างกลุ่ม A (ปกติกับสารสกัดน้ำ Cistanche Tubulosa) และกลุ่ม B (ปกติที่ไม่มีสารสกัดน้ำ CT) (รูปที่ 2(a)) *มีการบ่งชี้ว่าในหนูที่ไม่ได้รับการรักษาด้วยเซฟิซิม สารสกัดน้ำ CT อาจไม่มีผลดีหรืออันตรายเพิ่มเติมต่อ -ความหลากหลายของจุลินทรีย์ในลำไส้ อย่างไรก็ตาม -diversity ในกลุ่มตัวอย่าง (C) มีแนวโน้มลดลงเมื่อเทียบกับในกลุ่มปกติ *หนูทดลองที่ได้รับการบำบัดด้วยสารสกัดที่เป็นน้ำ CT ในขนาดสูงและปานกลางแสดงสัญญาณของการฟื้นตัวของความหลากหลาย ในขณะที่ปรากฏการณ์ดังกล่าวไม่ได้ถูกสังเกตพบในหนูที่ได้รับการบำบัดด้วยสารสกัดจากน้ำ CT ในขนาดต่ำ (รูปที่ 2 (a)) ในขณะเดียวกัน PCoA เปิดเผยว่าสารสกัด CTaqueous ในกลุ่มปกติ (A และ B) และโรคลำไส้แปรปรวนกลุ่มที่ได้รับยาในปริมาณสูง (D) และปริมาณปานกลาง (E) มีแนวโน้มที่จะมีระยะห่างระหว่างตัวอย่างสั้นกว่าในกลุ่มแบบจำลองและในกลุ่มตัวอย่าง กลุ่มอาหารเสริมสารสกัด CTaqueous ขนาดต่ำ (F) (รูปที่ 2 (b)) ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่าสารสกัดจากน้ำ CT สามารถช่วยปรับปรุงความหลากหลายของจุลินทรีย์ในลำไส้ในหนูที่มีความผิดปกติของลำไส้

3.3. การเปลี่ยนแปลงองค์ประกอบของจุลินทรีย์ในลำไส้ที่ได้รับการบำบัดด้วยสารสกัดจากน้ำ Cistanche Tubulosa

โพรไฟล์องค์ประกอบไมโครไบโอตาถูกเปรียบเทียบระหว่างกลุ่มต่างๆ ในระดับไฟลัม ความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ของ Proteobacteria ในกลุ่มแบบจำลองนั้นสูงกว่าในกลุ่มอื่นๆ (รูปที่ 3(a)) การเพิ่มขึ้นของ Proteobacteria ชี้ให้เห็นว่า microbiome ของหนูทดลองมีการเปลี่ยนแปลงโดย cefixime และสารสกัด CT ในน้ำอาจเป็นประโยชน์ต่อ microbiota ในลำไส้เนื่องจากความชุกของ Proteobacteria ที่เพิ่มขึ้นเป็นจุดศูนย์กลางของลำไส้แปรปรวน [43–45] นอกจากนี้ ในระดับสกุล ความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ของแลคโตบาซิลลัสในกลุ่มแบบจำลองลดลงเมื่อเทียบกับในกลุ่มปกติและปริมาณสูง อย่างไรก็ตาม เพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับในกลุ่มที่ได้รับยาขนาดกลางและขนาดต่ำ (รูปที่ 3(b)) ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่าสารสกัด CTaqueous ปริมาณสูงอาจส่งเสริมการเจริญเติบโตของแบคทีเรียบางชนิดจากสกุลแลคโตบาซิลลัส

จุลินทรีย์ที่แตกต่างกันระหว่างกลุ่มที่ศึกษาถูกกำหนดหาเพิ่มเติมตามการวิเคราะห์ LEfSe การวิเคราะห์นี้แสดงให้เห็นว่าหลังจากการรักษาด้วยเซฟิซิซิม ปริมาณสัมพัทธ์ของ Turicibacter, Alphaproteobacteria, Acidobacteria, Betaproteobacteriales และ Chloroflflexi เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ ในขณะที่ปริมาณสัมพัทธ์ของแลคโตบาซิลลัส, Eubacterium_nodatum_group, Pseudano หัวใจและกลุ่ม Christensenellaceae_R-7_ลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่มปกติ (รูปที่ 4(a)) ที่น่าสนใจคือ เมื่อเสริมกลุ่มแบบจำลองด้วยสารสกัด CT ในปริมาณสูง ความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ของ Muribaculaceae, Lactobacillus, Kineosporiaceae, Eubacterium no datum group และ Pedobacter เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่มตัวอย่าง ในขณะเดียวกัน ความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ของ Rhodobacter, Ruminococcaceae UCG_013, Roseburia, Ruminiclostridium_9 และ Candidatus Stoquefifichus ลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่มแบบจำลอง (รูปที่ 4(b))

3.4. หน้าที่ของจุลินทรีย์ในลำไส้ที่เกี่ยวข้องกับการบำบัดด้วยสารสกัดจากน้ำ Cistanche Tubulosa

เราใช้ซอฟต์แวร์ PICRUSt2 เพื่อทำนายเส้นทางการเผาผลาญของจุลินทรีย์ในลำไส้ และใช้กลุ่มปกติเป็นข้อมูลอ้างอิงในการวิเคราะห์การเปลี่ยนแปลงในกลุ่มอื่นๆ ภายใต้การรักษาเซฟซิซิม ความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ของการย่อยสลายเอทิลเบนซีน การสังเคราะห์ทางชีวภาพของเปปไทด์ nonribosomal กลุ่ม siderophore และเมแทบอลิซึมของซีโนไบโอติกโดยวิถีไซโตโครม P450 เพิ่มขึ้น หลังจากการรักษาด้วยสารสกัดน้ำ Cistanche Tubulosa ในปริมาณสูงและปานกลาง ความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ของพวกมันกลับคืนสู่ระดับปกติ ในขณะเดียวกัน ความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ของวิถีเมแทบอลิซึมของกรดอะมิโนไซยาโนลดลงภายใต้การรักษาด้วยเซฟซิซิม อย่างไรก็ตาม มันเพิ่มขึ้นหลังการรักษาด้วยสารสกัดน้ำ CT ปริมาณสูง นอกจากนี้ โดยทั่วไป การเปลี่ยนแปลงในวิถีเมแทบอไลต์ที่แตกต่างกันหลังการรักษาด้วยเซฟิซิมมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มปกติ อย่างไรก็ตาม การเพิ่มสารสกัดที่เป็นน้ำ Cistanche Tubulosa สามารถป้องกันการเปลี่ยนแปลงที่มากเกินไปได้(รูปที่ 5)

4. การอภิปราย

สัณฐานวิทยาของลำไส้ใหญ่สามารถเปลี่ยนแปลงได้โดยการเจริญเติบโต การย่อยอาหารและการดูดซึม การควบคุมภูมิคุ้มกัน และการซ่อมแซมอาการบาดเจ็บที่ลำไส้[46–50] อัตราส่วน V/C สามารถสะท้อนสถานะการย่อยอาหารของลำไส้ได้อย่างครอบคลุมและเป็นสัดส่วนโดยตรงกับความสามารถในการย่อยอาหารและการดูดซึมของลำไส้ [51, 52] ในการศึกษานี้ ข้อมูล villi และ recessusbiopsy และข้อมูลทางสถิติแสดงให้เห็นว่าสารสกัดที่มีน้ำในปริมาณสูงสามารถช่วยปรับปรุงรูปร่างที่บกพร่องภายในลำไส้ใหญ่ได้บางส่วน ในการตรวจสอบว่าสารสกัดที่เป็นน้ำเปลี่ยนแปลงลักษณะทางสัณฐานวิทยาของลำไส้และส่งผลต่อจุลินทรีย์ในลำไส้อย่างไร เราได้ดำเนินการย้อนกลับจากการเปลี่ยนแปลงในพืชในลำไส้ เราพบว่า Proteobacteria ที่สัมพันธ์กันจำนวนมากซึ่งเป็นเครื่องหมายศูนย์กลางของลำไส้แปรปรวนเพิ่มขึ้นภายใต้การรักษาด้วยเซฟิซิมเมื่อเทียบกับที่ไม่มีการรักษาด้วยเซฟิกซิม * ความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ของเครื่องหมายศูนย์กลางอื่น ๆ แบคเทอรอยเดเตสและเฟิร์มิคิวต์ไม่มีการเปลี่ยนแปลงที่มีนัยสำคัญ แม้ว่ากิจกรรมการต้านอนุมูลอิสระเหล่านี้ ในหลอดทดลอง [56] และสามารถส่งเสริมการเจริญเติบโตของแบคทีเรียกรดแลคติกบางชนิด ซึ่งอาจเป็นประโยชน์ต่อสุขภาพของเจ้าบ้าน [43] ในลักษณะคู่ขนาน Muribaculaceae เป็นสิ่งมีชีวิตโปรไบโอติกที่เชื่อมโยงกับอายุขัย [57] สิ่งเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่ากลไกที่สารสกัดจากน้ำ CT ช่วยเพิ่มจุลินทรีย์ในลำไส้อาจเป็นการส่งเสริมหรือป้องกันการเจริญเติบโตของสิ่งมีชีวิตโปรไบโอติก แบคทีเรียอีกชนิดที่น่าสังเกตคือแบคทีเรีย YE57 แม้ว่าสารสกัด CTaqueous ปริมาณสูงจะส่งเสริมความอุดมสมบูรณ์สัมพัทธ์ของแบคทีเรีย YE57 ในการศึกษานี้ (รูปที่ 4) การศึกษาก่อนหน้านี้พบว่ามีความอุดมสมบูรณ์ในลำไส้ปกติมากกว่าในลำไส้ที่ได้รับสารตกค้างจากชาสมุนไพรที่มีความเข้มข้นสูง [ 58] และความอุดมสมบูรณ์ของมันลดลงหลังจากการแทรกแซงของ Bacillus licheniformis ร่วมกับ XOS (xylooligosaccharides) [59] ดังนั้น บทบาทของแบคทีเรียนี้ในจุลินทรีย์ในลำไส้จึงสมควรได้รับการศึกษาเพิ่มเติม นอกจากนี้ จำนวนตัวอย่างที่ค่อนข้างน้อยในการศึกษานี้อาจทำให้เกิดการวัดผลบวกลวงและลบลวง และแนะนำให้ศึกษาตัวอย่างขนาดใหญ่ในอนาคตเพื่อตรวจสอบเครื่องหมายของแบคทีเรียที่ระบุ

ส่วนประกอบของสารสกัดจากน้ำ Cistanche Tubulosa อาจมีความสำคัญสำหรับผลกระทบต่อองค์ประกอบและการเปลี่ยนแปลงการทำงานใน microbiota ในลำไส้ของหนูที่มีความผิดปกติของลำไส้ PHGs เป็นส่วนประกอบที่ใช้งานทั่วไปที่พบใน Cistanche Deserticola และ Cistacnche Tubulosa และ echinacoside ถูกระบุว่าเป็น PNG ที่สำคัญใน Cistache ทูบูโลซ่า [60]. ในทศวรรษที่ผ่านมา echinacoside แสดงให้เห็นว่ามีกิจกรรมทางเภสัชวิทยาหลายอย่าง เช่น การต่อต้านวัยและผลต่อระบบประสาท การปรับปรุงการทำงานของหัวใจ การลดไขมันในเลือดสูงและน้ำตาลในเลือดสูง และการป้องกันโรคเบาหวานที่เกิดจากโรคอ้วนและกลุ่มอาการเมตาบอลิซึม [53, 61–65] . อันที่จริง เราตรวจพบการเปลี่ยนแปลงในวิถีการเผาผลาญของจุลินทรีย์ในลำไส้* การรักษาด้วยเซฟิซิมทำให้เกิดการเสริมสร้างแบคทีเรียที่เกี่ยวข้องกับการเสื่อมสภาพของเอทิลเบนซีนและการสังเคราะห์ทางชีวภาพของเปปไทด์ nonribosomal ในกลุ่ม siderophore ในขณะที่การรักษาด้วย Cistanche ในปริมาณสูงและปานกลาง สารสกัดจากน้ำ Tubulosa สามารถบรรเทาการเปลี่ยนแปลงเหล่านี้ได้ ซึ่งบ่งชี้ว่าสารสกัดนี้ช่วยควบคุมการทำงานของชุมชนแบคทีเรียที่เกี่ยวข้องกับการทำงานเหล่านี้ นอกจากนี้ การเพิ่มคุณค่าของแบคทีเรียที่เกี่ยวข้องกับวิถีการเผาผลาญของกรดไซยาโนอะมิโนภายใต้การบำบัดด้วยสารสกัดที่มีน้ำในปริมาณสูงและการเสริมคุณค่าที่ลดลงในหนูแบบจำลองแสดงให้เห็นว่าสารสกัดจากน้ำ Cistanche Tubulosa สามารถส่งเสริมการเผาผลาญของกรดไซยาโนอะมิโน * การเปลี่ยนแปลงของเมตาโบไลต์ที่เกี่ยวข้องอาจทำให้สารสกัดที่เป็นน้ำนี้มีฤทธิ์ทางเภสัชวิทยา

สมุนไพรซิสแทนเช่

แม้ว่ากลไกที่สารสกัดจากน้ำ Cistanche Tubulosa จะเปลี่ยนองค์ประกอบและหน้าที่ของจุลินทรีย์ในลำไส้นั้นซับซ้อน แต่ก็มีเงื่อนงำบางอย่างที่จะคาดเดาเกี่ยวกับกลไกที่อาจเกิดขึ้นได้ มีรายงานว่าทั้งแบคทีเรียกรดแลคติกและสารสกัดจากน้ำ Cistanche Tubulosa สามารถต้านความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันได้ ความเครียดที่เกิดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันที่เกิดขึ้นระหว่างการอักเสบเป็นปัจจัยทั่วไปที่ทำให้ความผิดปกติของลำไส้รุนแรงขึ้นโดยการลดความหลากหลายของจุลินทรีย์ในลำไส้ลงอย่างมากและส่งเสริมการหลั่งไหลของแบคทีเรียที่เฉพาะเจาะจง (4) ในทางกลับกัน ออกซิเจนชนิดปฏิกิริยายังส่งเสริมการเจริญเติบโตที่เลือกของกลุ่มแบคทีเรียผ่านการหายใจด้วยไนเตรตและเตตระไธโอเนต [66–68]; ตัวอย่างเช่น แบคทีเรียจากตระกูล Enterobacteriaceae สามารถเติบโตอย่างรวดเร็วอันเป็นผลมาจากการเปลี่ยนแปลงในองค์ประกอบของพืชในลำไส้ภายใต้สภาวะออกซิเดชันระหว่างการอักเสบ [69, 70] สิ่งมีชีวิตส่วนใหญ่วิวัฒนาการการป้องกันด้วยเอนไซม์ การป้องกันสารต้านอนุมูลอิสระที่ไม่มีเอนไซม์ และกลไกการซ่อมแซมเพื่อขจัดอนุมูลออกซิเจน [71] อย่างไรก็ตาม ระบบต้านอนุมูลอิสระตามธรรมชาติเหล่านี้มักไม่เพียงพอที่จะป้องกันความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชันในสิ่งมีชีวิต สารต้านอนุมูลอิสระสังเคราะห์อื่นๆ อีกหลายชนิด รวมทั้งบิวทิเลตไฮดรอกซีอะนิโซลและบิวทิเลเตดไฮดรอกซีโทลูอีน ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายเพื่อลดการเกิดออกซิเดชัน แต่ยังมีข้อสงสัยเกี่ยวกับความปลอดภัย [72, 73] ดังนั้น นักวิจัยจึงหันไปหาสารต้านอนุมูลอิสระที่ปลอดภัยและเป็นธรรมชาติมากขึ้น ซึ่งได้จากสารที่เกิดขึ้นตามธรรมชาติ เนื่องจากความสามารถของทั้งโพลีแซ็กคาไรด์และแบคทีเรียกรดแลคติกในการกำจัดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน การพิจารณากลไกการต้านอนุมูลอิสระที่แม่นยำของสารสกัดจากน้ำ Cistanche Tubulosa ในจุลินทรีย์ในลำไส้จึงจำเป็นต้องมีการตรวจสอบเพิ่มเติมในอนาคต

โดยสรุป เราพบว่าสารสกัดจากน้ำ Cistanche Tubulosa สามารถปรับปรุง microbiota ในลำไส้เล็กในหนูที่มีความผิดปกติของลำไส้โดยการส่งเสริมความหลากหลาย ควบคุมการเปลี่ยนแปลงทางเมตาบอลิซึม และปรับปรุงโครงสร้างของจุลินทรีย์ในลำไส้ และผลลัพธ์เหล่านี้อาจเป็นข้อมูลอ้างอิงสำหรับการพัฒนา ของยาที่เกี่ยวข้องในอนาคต

ความพร้อมใช้งานของข้อมูล

สถิติของหน่วยอนุกรมวิธานในการปฏิบัติงานในแต่ละข้อมูลตัวอย่างที่ใช้เพื่อสนับสนุนข้อค้นพบของการศึกษานี้รวมอยู่ในไฟล์ข้อมูลเพิ่มเติม และข้อมูลการจัดลำดับ 16s rRNA ที่ใช้เพื่อสนับสนุนการค้นพบของการศึกษานี้จะได้รับการเผยแพร่เมื่อตีพิมพ์

ผลประโยชน์ทับซ้อน

ผู้เขียนประกาศว่าพวกเขาไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์

รับทราบ

การศึกษานี้ได้รับการสนับสนุนทางการเงินโดยทุนจากมูลนิธิวิทยาศาสตร์ธรรมชาติแห่งชาติของจีน (81860766)

วัสดุเสริม

รูปที่ S1: การตรวจหา HPLC ของสารสกัดที่เป็นน้ำ Cistanche tubulosa (a) จุดสูงสุดของเอไคนาโคไซด์และแอกทิโอไซด์ในวัสดุอ้างอิงปรากฏที่ 5.066 นาที และ 9.988 นาที แยกกัน (b) *e จุดสูงสุดของ echinacoside และ acteoside ในสารสกัดที่เป็นน้ำปรากฏที่ 5.097 นาทีและ 10.076 นาทีแยกกัน และความเข้มข้นคือ 236 มก./กรัม และ 12.7 มก./กรัม แยกกัน ตารางที่ S1: ความยาวของวิลลี่ลำไส้ใหญ่และความลึกของช่อง ตารางที่ S2: ข้อมูลทางสถิติของข้อมูลการจัดลำดับ 16S rRNA ตาราง S3: สถิติของหน่วยอนุกรมวิธานการปฏิบัติงานในแต่ละกลุ่มตัวอย่าง (วัสดุเสริม).

อ้างอิง

[1] A. Heintz-Butchart และ P. Wilmes, "Human gut microbiome: function matters," Trends in Microbiology, vol. 26 ไม่ 7, หน้า 563–574, 2018.

[2] CA Thaiss, N. Zmora, M. Levy และ E. Elinav "ไมโครไบโอมและภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติ" Nature, vol. 535 ไม่ใช่ 7610, หน้า 65–74, 2016.

[3] G. Quaranta, M. Sanguinetti และ L. Masucci, "การปลูกถ่ายจุลินทรีย์ในอุจจาระ: เครื่องมือที่มีศักยภาพสำหรับการรักษาโรคของระบบสืบพันธุ์เพศหญิง" Frontier in Immunology, vol. 10, น. 2653, 2562.

[4] GA Weiss และ T. Hennet "กลไกและผลที่ตามมาของ dysbiosis ในลำไส้" Cellular and Molecular Life Sciences, vol. 74 หมายเลข 16, น. 2959–2977, 2017.

[5] Y. Li, Y. Peng, P. Ma et al., "ฤทธิ์ต้านอาการซึมเศร้าของสารสกัด Cistanche tubulosa ต่อหนูที่มีความเครียดเรื้อรังที่คาดเดาไม่ได้ผ่านการฟื้นฟูสภาวะสมดุลของจุลินทรีย์ในลำไส้" Frontier in Pharmacology, vol. 9, น. 967, 2018.

[6] L. Fan, Y. Peng, J. Wang, P. Ma, L. Zhao และ X. Li "Totalglycosides จากลำต้นของ Cistanche tubulosa บรรเทาพฤติกรรมที่คล้ายภาวะซึมเศร้า: ปฏิสัมพันธ์แบบสองทิศทางของไฟโตเคมิคอลและจุลินทรีย์ในลำไส้ ไฟโตเมดิซีน, เล่ม. 83,รหัสบทความ 153471, 2021.

[7] Y. Li, Y. Peng, M. Wang, P. Tu และ X. Li, "การเผาผลาญอาหารในทางเดินอาหารของมนุษย์ของสารสกัดจากน้ำ cistanche herba: การอธิบายรายละเอียดการเผาผลาญตามการระบุเมตาโบไลต์ที่ครอบคลุมในน้ำย่อย น้ำในลำไส้ แบคทีเรียในลำไส้ของมนุษย์ และไมโครโซมในลำไส้" วารสารเคมีเกษตรและอาหาร เล่ม 2 65 ไม่ 34, หน้า 7447–7456, 2017.

[8] H. Wang, Y. Sun, W.-C. Ye et al. "Antioxidative phenylethanoid และ phenolic glycosides จากพืช Picrorhiza Scrophularia" Chemical and Pharmaceutical Bulletin ฉบับที่. 52 หมายเลข 5, หน้า 615–617, 2004.

[9] ส.-ล. จิ,ก.-เค. เฉา, X.-X. Zhao et al., "ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ phenylethanoid glycosides ต่อความเป็นพิษต่อระบบประสาทที่เกิดจากกลูตาเมต" วิทยาศาสตร์ชีวภาพ เทคโนโลยีชีวภาพ และชีวเคมี เล่ม 1 83 หมายเลข 11, pp. 2016–2026, 2019.

[10] Q. Wang, J. Dong, W. Lu et al., "Phenylethanol glycosides จาก Cistanche tubulosa ปรับปรุงความผิดปกติของระบบสืบพันธุ์โดยการควบคุมอัณฑะเตียรอยด์ผ่าน CYP450-3 -HSDpathway," Journal of Ethnopharmacology, vol. 251, บทความ ID112500, 2020.

[11] ส.-ป. คุณ L. Ma, J. Zhao, S.-L. Zhang และ T. Liu "Phenylethanol glycosides จาก Cistanche tubulosa ยับยั้งการกระตุ้นเซลล์ hepatic stellate และปิดกั้นการนำวิถีการส่งสัญญาณใน TGF- 1/smad เป็นสารต้านการเกิดพังผืดของตับ" Molecules, vol. 21 ไม่ 1, น. 102, 2016.

[12] ส.-ป. คุณ, J. Zhao, L. Ma, M. Tudimat, S.-L. Zhang และ T. Liu "ผลการป้องกันของ phenylethanoid glycosides จาก Cistanche tubulosa ต่อการเกิดพังผืดของตับที่เกิดจากตับในหนูในซีรัมในหนู" DARU Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 23 ไม่ 1, น. 52, 2015.

[13] T. Morikawa, H. Xie, Y. Pan, et al., "การทบทวนผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพจากพืชทะเลทราย Cistanche tubulosa" Chemical and Pharmaceutical Bulletin, vol. 67 ไม่ใช่ 7, หน้า 675–689, 2019.

[14] J. Li, J. Li, A. Aspire, et al., "Phenylethanoid glycosides จาก Cistanche tubulosa ยับยั้งการเจริญเติบโตของเซลล์ B16-F10 ทั้งในหลอดทดลองและในร่างกายโดยการเหนี่ยวนำของอะพอพโทซิสผ่านทางไมโตคอนเดรีย วิถีทางพึ่ง" วารสารโรคมะเร็ง ฉบับที่. 7 ไม่ใช่ 13 น. น. 1877–1887, 2559.

[15] Y. Hu, J. Huang, Y. Li et al., "Cistanche deserticola polysaccharide induces melanogenesis in melanocytes และลดความเครียดออกซิเดชันผ่านการกระตุ้นวิถี NRF2/HO-1" Journal of Cellular and Molecular Medicine, ฉบับ 24 ไม่ 7, หน้า 4023–4035, 2020.

[16] S. Peng, P. Li, P. Liu, et al., "Cistanches บรรเทาความผิดปกติของความรู้ความเข้าใจที่เกิดจาก sevoflurane โดยการควบคุมสารต้านอนุมูลอิสระที่ขึ้นกับ PPAR-c และต้านการอักเสบในหนู" Journal of Cellular and Molecular Medicine, ฉบับ 24 ไม่ 2, หน้า 1345–1359, 2020.

[17] Y. Liu, H. Wang, M. Yang, et al., "Cistanche deserticola polysaccharides ปกป้องเซลล์ PC12 จากการบาดเจ็บที่เกิดจาก OGD/RP" Biomedicine & Pharmacotherapy, vol. 99 น. 671–680,2018.

[18] Z. Fu, L. Han, P. Zhang, et al., "Cistanche polysaccharides ช่วยเพิ่มการดูดซึม echinacoside ในร่างกาย และส่งผลต่อ microbiota ในลำไส้" International Journal of Biological Macromolecules, vol. 149 หน้า 732–740, 2020.

[19] NT Williams, "Probiotics", วารสาร American Journal of Health-System Pharmacy, vol. 67 ไม่ใช่ 6, หน้า 449–458, 2010.

[20] R. Ashraf และ NP Shah, "การกระตุ้นระบบภูมิคุ้มกันโดยจุลินทรีย์โปรไบโอติก" Critical Reviews in Food Science and Nutrition, vol. 54 หมายเลข 7, pp. 938–956, 2014.

[21] G. La Fata, P. Weber และ MH Mohajeri, "โปรไบโอติกและระบบภูมิคุ้มกันของลำไส้: การควบคุมทางอ้อม" โปรไบโอติกและโปรตีนต้านจุลชีพ, ฉบับที่. 10 ไม่ 1 น. 11–21, 2018.

[22] MA Zocco, LZ dal Verme, F. Cremonini, et al., "ประสิทธิภาพของแลคโตบาซิลลัส GG ในการรักษาการบรรเทาอาการลำไส้ใหญ่บวมเป็นแผล" เภสัชวิทยาทางเดินอาหารและ 8erapeutics, vol. 2 23 ไม่ 11 หน้า 1567–1574, 2549.

[23] MJ Saez-Lara, C. Gomez-Llorente, J. Plaza-Diaz และ A. Gil,"*บทบาทของแบคทีเรียกรดแลคติกโปรไบโอติกและไบฟิโดแบคทีเรียในการป้องกันและรักษาโรคลำไส้อักเสบและโรคอื่นๆ ที่เกี่ยวข้อง: การทบทวนอย่างเป็นระบบของการทดลองทางคลินิกในมนุษย์แบบสุ่ม" BioMed Research International, vol. 2015, รหัสบทความ 505878, 15 หน้า, 2015.

[24] MAO Dawood, S. Koshio, M. Ishikawa, et al., "ผลของการเสริมอาหารของ Lactobacillus rhamnosus หรือ/และ lactococcus lactis ต่อการเจริญเติบโต microbiota ในลำไส้และการตอบสนองภูมิคุ้มกันของปลาทรายแดงทะเลแดง Pagrus major" Fish & ShellfifishImmunology, ฉบับที่. 49, น. 275–285, 2016.

[25] A. Sivan, L. Corrales, N. Hubert, et al., "Commensal bifidobacterium ส่งเสริมภูมิคุ้มกันต้านเนื้องอกและอำนวยความสะดวกในการต่อต้าน PD-L1 ประสิทธิภาพ" Science, vol. 350 ไม่ 6264 น. 1084–1089,2015.

[26] PJ Whorwell, L. Altringer, J. Morel, et al., "ประสิทธิภาพของทารก Bifidobacterium โปรไบโอติกที่ห่อหุ้มอยู่ในแคปซูลคือ 35624 ในสตรีที่มีอาการลำไส้แปรปรวน" 8e American Journal of Gastroenterology, vol. 101 ไม่ใช่ 7, หน้า 1581–1590, 2549.

[27] Y. Wang, Y. Wu, Y. Wang et al., "คุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระของแบคทีเรียโปรไบโอติก" Nutrients, vol. 9 ไม่ใช่ 5, น. 521, 2017.

[28] JMC Gutteridge, R. Richmond และ B. Halliwell "การยับยั้งการก่อตัวของอนุมูลไฮดรอกซิลจาก superoxide และ lipid peroxidation โดย desferrioxamine" Biochemical Journal, vol. 184 หมายเลข 2, หน้า 469–472, 1979.

[29] E. Deriu, JZ Liu, M. Pezeshki, et al., "แบคทีเรียโปรไบโอติกช่วยลดการตั้งรกรากในลำไส้ของเชื้อ Salmonella Typhimurium โดยการแข่งขันเพื่อธาตุเหล็ก" Cell Host & Microbe, vol. 14, ไม่ 1 น. 26–37, 2556.

[30] T. Kullisaar, M. Zilmer, M. Mikelsaar, et al., "สองสายพันธุ์แลคโตบาซิลลัสต้านอนุมูลอิสระเป็นโปรไบโอติกที่มีแนวโน้ม" วารสารจุลชีววิทยาอาหารนานาชาติฉบับที่. 72, ไม่ 3 หน้า 215–224, 2002.

[31] JG LeBlanc, S. del Carmen, A. Miyoshi, et al., "การใช้ superoxide dismutase และ catalase ที่ผลิตแบคทีเรียแลคติกใน TNBS ทำให้เกิดโรค Crohn ในหนู" Journal of Biotechnology, vol. 151 หมายเลข 3, หน้า 287–293, 2011.

[32] M. Rossi, A. Amaretti และ S. Raimondi, "การผลิตโฟเลตโดยแบคทีเรียโปรไบโอติก" Nutrients, vol. 3 ไม่ 1, หน้า 118–134,2011.

[33] A. Pompei, L. Cordisco, A. Amaretti, et al., "การบริหาร bifidobacteria ที่ผลิตโฟเลตช่วยเพิ่มสถานะโฟเลตในหนู Wistar" 8e Journal of Nutrition, vol. 137 หมายเลข 12, หน้า 2742–2746, 2550.

[34] ล.-เอ็กซ์. Wang, K. Liu, DW Gao และ JK Hao "ผลการป้องกันของสองสายพันธุ์ Lactobacillus Plantarum ในหนูที่มีไขมันในเลือดสูง" World Journal of Gastroenterology, vol. 19 ไม่ 20, pp. 3150–3156, 2013.

[35] EO Petrof, K. Kojima, MJ Ropeleski, et al., "โปรไบโอติกยับยั้งปัจจัยนิวเคลียร์-κBและกระตุ้นโปรตีนช็อตจากความร้อนในเซลล์เยื่อบุผิวลำไส้ใหญ่ผ่านการยับยั้ง proteasome" Gastroenterology, vol. 127 ไม่ใช่ 5 หน้า 1474–1487, 2004

[36] A. Seth, F. Yan, DB Polk และ RK Rao "โปรไบโอติกช่วยปรับปรุงการหยุดชะงักของเยื่อบุผิวที่เกิดจากไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์โดยกลไกที่ขึ้นกับไคเนสของ PKC และ MAP" American Journal of Physiology-Gastrointestinal and liver Physiology ฉบับที่ 294 ไม่ใช่ 4, หน้า G1060–G1069, 2008.

[37] M. G´omezGuzm´an, M. Toral, M. Romero, et al., "ฤทธิ์ลดความดันโลหิตของโปรไบโอติกสายพันธุ์แลคโตบาซิลลัสในหนูที่มีความดันโลหิตสูงตามธรรมชาติ" Molecular Nutrition & FoodResearch, vol. 59 เลขที่ 11, หน้า 2326–2336, 2015.

[38] H. Zeng, L. Huang, L. Zhou, P. Wang, X. Chen, andK. Ding "กาแลคโตกลูแคนที่แยกได้จาก Cistanchedeserticola YC Ma. และฤทธิ์ทางชีวภาพของมันต่อสายพันธุ์แบคทีเรียในลำไส้" Carbohydrate Polymers, vol. 223, รหัสบทความ 115038, 2019.

[39] S. Zheng, X. Jiang, L. Wu, Z. Wang และ L. Huang, "การเลือกปฏิบัติทางเคมีและพันธุกรรมของ cistanche herba ตาม UPC-QTOF/MS และบาร์โค้ดของ DNA" PLoS One, vol. 9 ไม่ใช่ 5, รหัสบทความ e98061, 2014.

[40] M. Li, T. Xu, F. Zhou, et al., "ผลทางประสาทของสี่ phenylethanoid glycosides ต่อ H2O2- ทำให้เกิด apoptosis ในเซลล์ PC12 ผ่านทาง Nrf2 / ARE pathway" International Journal of Molecular Sciences ฉบับที่ 19 ไม่ 4 หน้า 1135, 2018.

[41] A. Wu, Z. Yang, Y. Huang, et al., "phenylethanoid glycosides ธรรมชาติที่แยกได้จาก Callicarpa kwangtungensis sup กดการตอบสนองการอักเสบที่อาศัย lipopolysaccharide-mediated ผ่านการเปิดใช้งานเส้นทาง Keap1 / Nrf2 / HO-1 ใน RAW 264.7 เซลล์แมคโครฟาจ" Journal of Ethnopharmacology, vol. 258,รหัสบทความ 112857, 2020.

[42] GM Douglas, VJ Maffffei, JR Zaneveld, et al., "PICRUSt2for การทำนายฟังก์ชัน metagenome" Nature Biotechnology, vol. 38, ไม่ 6, น. 685–688, 2020.

[43] ส.-ล. Li, L. Lu, X.-S. Wang et al., "การเปลี่ยนแปลงของ microbiota ในลำไส้และโปรไฟล์ของ cytokine/chemokine ที่มีการอักเสบใน 5-fluorouracil ที่เหนี่ยวนำให้เกิดเยื่อบุลำไส้อักเสบ" Frontier in Cellular and infection Microbiology, vol. 7, น. 455, 2017.

[44] M. Pammi, J. Cope, PI Tarr, et al., "ลำไส้ dysbiosis ในทารกคลอดก่อนกำหนดก่อน necrotizing enterocolitis: การทบทวนอย่างเป็นระบบและการวิเคราะห์อภิมาน" Microbiome, vol. 5 ไม่ 1,หน้า 31, 2017.

[45] น.-ร. Shin, TW When และ J.-W. Bae, "Proteobacteria: microbial signature of dysbiosis in gut microbiota", แนวโน้มในเทคโนโลยีชีวภาพ, ฉบับที่. 33 หมายเลข 9, หน้า 496–503, 2015.

[46] M. de Oliveira Bel´em, CP Cirilo, AP de Santi-Rampazzoet al., "การปรับสัณฐานวิทยาของลำไส้ที่เกิดจากการจำกัดอาหารช่วยเพิ่มสถานะทางโภชนาการในระหว่างกระบวนการชราของหนู" Experimental Gerontology, vol. 69, หน้า 85–93,2015.

[47] B. Potsic, N. Holliday, P. Lewis, D. Samuelson, V. DeMarco และ J. Neu, "การเสริมและการกีดกันกลูตามีน: ผลต่อสัณฐานวิทยาลำไส้เล็กของหนูที่ได้รับการเลี้ยงดูเทียม" Pediatric Research, vol. 52 หมายเลข 3, หน้า 430–436, 2002.

[48] ​​JL Daniels, RJ Bloomer, M. van der Merwe, SL Davis, KK Buddington และ RK Buddington, "การปรับลำไส้ให้เข้ากับการผสมผสานของอาหารที่แตกต่างกันทั้งที่มีและไม่มีการออกกำลังกายที่มีความอดทน" Journal of the International Society of Sports Nutrition, ฉบับ 13 ไม่ 1, น. 35, 2016.

[49] L. Muñoz, MJ Borrero, M. ´Ubeda et al., "การควบคุมภูมิคุ้มกันบกพร่องในลำไส้โดย dysbiosis ส่งเสริมการหยุดชะงักของสิ่งกีดขวางและการเคลื่อนย้ายแบคทีเรียในหนูที่เป็นโรคตับแข็ง" Hepatology, vol. 70, ไม่ 3, หน้า 925–938, 2019.

[50] X. Li, Y. Wu, Z. Xu et al., "ผลของยาต้ม hetiao Jianping ต่อการบาดเจ็บของลำไส้และการซ่อมแซมในหนูที่มีอาการท้องเสียจากยาปฏิชีวนะ" Medical Science Monitor, vol. 26, บทความ ID921745, 2020.

[51] Y. Xie, F. Ding, W. Di et al., "ผลกระทบของอาหารที่มีไขมันสูงต่อเซลล์ต้นกำเนิดในลำไส้และการทำงานของเยื่อบุผิวในหนูเพศเมียวัยกลางคน" รายงานการแพทย์ระดับโมเลกุล vol. 21 ไม่ 3, หน้า 1133–1144, 2020.

[52] BL Bivolarski และ EG Vachkova "เหตุการณ์ทางสัณฐานวิทยาและการทำงานที่เกี่ยวข้องกับการหย่านมในกระต่าย" Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition, vol. 98 ไม่ใช่ 1 น. 9–18, 2014.

[53] H. Shimoda, J. Tanaka, Y. Takahara, K. Takemoto, S.-J. Shan และ M.-H. Su, "*e ผล hypocholesterolemic ของสารสกัด Cistanchetubulosa, ยาแผนโบราณแบบจีน, ในหนู," 8e American Journal of Chinese Medicine, vol. 37, ไม่ 6, หน้า 1125–1138, 2009.

[54] RE Ley, PJ Turnbaugh, S. Klein และ JI Gordon, "จุลินทรีย์ในลำไส้ของมนุษย์ที่เกี่ยวข้องกับโรคอ้วน" Nature, vol. 444 ไม่ใช่ 7122, หน้า 1022-1023, 2006.

[55] เจ.-วาย. คิม, วายเอ็ม ควอน, ไอ.-เอส. Kim et al. "ผลของการเสริมสาหร่ายสีน้ำตาล laminaria japonica ต่อความเข้มข้นของ IgG ไตรกลีเซอไรด์และโคเลสเตอรอลในเลือดในซีรัมและองค์ประกอบของจุลินทรีย์ในลำไส้ในหนู" Frontier in Nutrition, vol. 5, น. 23, 2018.

[56] W. Zhang, J. Huang, W. Wang, et al., "การสกัด, การทำให้บริสุทธิ์, ลักษณะเฉพาะและกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระของโพลีแซ็กคาไรด์จาก Cistanche tubulosa" วารสารนานาชาติของ BiologicalMacromolecules, vol. 93 น. 448–458, 2559.

[57] M. Sibai, E. Altuntas¸, B. Yıldırım, G. ¨Ozt¨urk, S. Yıldırım, และT. Demircan, "จุลชีววิทยาและอายุขัย: ความอุดมสมบูรณ์สูงของ Muribaculaceae ที่เชื่อมโยงกับอายุขัยในลำไส้ของ Spalax leucodon หนูอายุยืน" OMICS: A Journal of IntegrativeBiology, vol. 24 ไม่ 10, น. 592–601, 2020.

[58] Y. Xie, Z. Chen, D. Wang, et al., "ผลของชาสมุนไพรหมักที่ตกค้างต่อลักษณะจุลชีววิทยาในลำไส้ของวัวสาวโฮลสไตน์ภายใต้ความเครียดจากความร้อน" Frontier in Microbiology, vol. 11, น. 1014, 2020.

[59] Y. Li, M. Liu, H. Liu, et al., "ผลิตภัณฑ์เสริมอาหารในช่องปากของ Bacillus licheniformis zhengchangsheng และ xylooligosaccharides ที่รวมกันช่วยเพิ่มโรคอ้วนที่เกิดจากอาหารที่มีไขมันสูงและปรับ microbiota ในลำไส้ในหนู" BioMed Research International, vol . 2020, Article ID 9067821, 17 หน้า, 2020.

[60] Y. Jiang และ P.-F. ตู "การวิเคราะห์องค์ประกอบทางเคมีในสายพันธุ์ cistanche" Journal of Chromatography A, vol. 1216 เลขที่ 11 หน้า 2513-2522 2552

[61] F. Li, Y. Yang, P. Zhu, et al., "Echinacoside ส่งเสริมการสร้างกระดูกใหม่โดยการเพิ่มอัตราส่วน OPG/RANKL ใน MC3T3-E1cells" Fitoterapia, vol. 83 หมายเลข 8, pp. 1443–1450, 2012.

[62] F. Tang, Y. Hao, X. Zhang และ J. Qin, "ผลของ echinacoside ต่อการเกิดพังผืดของไตโดยการยับยั้ง TGF- 1/เส้นทางการส่งสัญญาณ Smads ในรูปแบบหนู DB/DB ของโรคไตจากเบาหวาน ," การออกแบบ พัฒนายา และ 8erapy, vol. 11 น. 2813–2826, 2017.

[63] ว.-ที. Xiong, L. Gu, C. Wang, H.-X. Sun และ X. Liu "ฤทธิ์ต้านน้ำตาลในเลือดและภาวะไขมันในเลือดต่ำของ Cistanche tubulosa ในหนู DB/DB ที่เป็นเบาหวานชนิดที่ 2" Journal of Ethnopharmacology, vol. 150 ไม่ 3, หน้า 935–945, 2013.

[64] X.-x. เป่า, H.-h. หม่า, เอช. ดิง, ว.-ว. Li และ M. Zhu "การเพิ่มประสิทธิภาพเบื้องต้นของสูตรยาสมุนไพรจีนโดยอิงจากผลกระทบต่อระบบประสาทในรูปแบบหนูของโรคพาร์กินสันที่เกิดจากโรทีโนน" Journal of IntegrativeMedicine, vol. 16 ไม่ 4 น. 290–296, 2018.

[65] Y. Chen, Y.-Q. ลี่, เจ.-วาย. Fang, P. Li และ F. Li "การสร้างแบบจำลองการทดลองร่วมกันของโรคกระดูกพรุนร่วมกับโรคอัลไซเมอร์ในหนูและผลคู่ของ echinacoside และ acteoside จาก Cistanche tubulosa" Journal of Ethnopharmacology, vol. 257, รหัสบทความ 112834, 2020.

[66] M. Hensel, AP Hinsley, T. Nikolaus, G. Sawers, และB. C. Berks, "*e พื้นฐานทางพันธุกรรมของการหายใจแบบเตตระไธโอเนตในเชื้อ Salmonella Typhimurium" จุลชีววิทยาระดับโมเลกุล, ฉบับที่. 32 ไม่ 2, หน้า 275–287, 1999.

[67] SE Winter, P. Thiennimitr, MG Winter, et al., "การอักเสบของลำไส้ให้ตัวรับอิเล็กตรอนทางเดินหายใจสำหรับเชื้อ Salmonella" Nature, vol. 467 ไม่ใช่ 7314, pp. 426–429, 2010.

[68] SE Winter, MG Winter, MN Xavier, et al., "ไนเตรตที่มาจากโฮสต์ช่วยเพิ่มการเติบโตของ E. coli ในลำไส้อักเสบ" Science, vol. 339 ไม่ใช่ 6120 น. 708–711, 2556.

[69] C. Lupp, ML Robertson, ME Wickham, et al., "การอักเสบที่เกิดจากโฮสต์ขัดขวางจุลินทรีย์ในลำไส้และส่งเสริมการเจริญเติบโตของ Enterobacteriaceae" Cell Host &Microbe, vol. 2 ไม่ 2, หน้า 119–129, 2550.

[70] B. Stecher, R. Robbiani, AW Walker, et al., "Salmonellaenterica serovar Typhimurium ใช้ประโยชน์จากการอักเสบเพื่อแข่งขันกับจุลินทรีย์ในลำไส้" PLoS Biology, vol. 5 ไม่ 10, หน้า e244–2189, 2007.

[71] V. Mishra, C. Shah, N. Mokashe, R. Chavan, H. Yadav และJ. ประชาบดี, "โปรไบโอติกเป็นสารต้านอนุมูลอิสระที่มีศักยภาพ: การทบทวนอย่างเป็นระบบ" วารสารเคมีเกษตรและอาหาร, ฉบับที่. 63 ไม่ใช่ 14, หน้า 3615–3626, 2015.

[72] JMP Mart´ın, PF Freire, L. Daimiel, et al., "สารต้านอนุมูลอิสระ butylated hydroxyanisole potentiates พิษของ propylparaben ในเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่เพาะเลี้ยง" Food andChemical Toxicology, vol. 72, pp. 195–203, 2014.

[73] RS Lanigan และ TA Yamarik "รายงานขั้นสุดท้ายเกี่ยวกับการประเมินความปลอดภัยของ BHT" International Journal of Toxicology, vol. 21 ไม่ 2, หน้า 19–94, 2002.