ผลของส่วนต่าง ๆ ที่สกัดได้ของ Cistanche Deserticola ต่อฤทธิ์ลดน้ำตาลในเลือดของหนูดำ Db / Db Ⅱ

2 วิธีการทดลอง

2.1 การเตรียมผลิตภัณฑ์แปรรูปจาก Cistanche Deserticola Cistanche Deserticola:

นำวัสดุยา Cistanche Deserticola ล้างสิ่งสกปรกออก นึ่งในหม้อด้วยแรงดันปกติเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ตัดเป็นขนาด 6 มม. และแห้งที่อุณหภูมิ 70 องศา Cistanche Deserticola: นำยาต้ม Cistanche Deserticola เติมไวน์ข้าวในปริมาณที่เหมาะสม ผสมให้เข้ากัน ชุบน้ำไว้ 8 ชั่วโมง (ไวน์ข้าวสีเหลือง: น้ำ=1:1) นึ่งด้วยแรงดันสูงเป็นเวลา 4 ชั่วโมง แล้วทำให้แห้งที่ 70 องศา . (ใช้ไวน์ข้าว 30 มล. ต่อ Cistanche Deserticola ทุกๆ 100 กรัม)

สารสกัดจากกระเจี๊ยบออร์แกนิกธรรมชาติ

บริการสนับสนุนของ Wecistanche - ผู้ส่งออก cistanche ที่ใหญ่ที่สุดในประเทศจีน:

อีเมล:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/โทรศัพท์:+86 15292862950

เลือกซื้อรายละเอียดข้อมูลจำเพาะเพิ่มเติม:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-ร้านค้า

2.2 การเพิ่มความเข้มข้นของส่วนต่างๆ ที่สกัดได้ของ Cistanche Deserticola/Cistanche Deserticola

นำผง Cistanche Deserticola/Tamarococcus Deserticola 30 กรัม เติมน้ำ ความร้อน และกรดไหลย้อน 10 เท่า เพื่อสกัด 2 ครั้ง ครั้งละ 2 ชั่วโมง ผสมสารสกัดเข้มข้น เติมเอทานอลจนปริมาณแอลกอฮอล์ถึง 60% ตกตะกอนที่ อุณหภูมิต่ำเป็นเวลา 12 ชั่วโมง และกรองด้วยระบบดูด ตะกอนคือส่วนโพลีแซ็กคาไรด์ดิบ ทำให้ส่วนลอยเหนือตะกอนเข้มข้นขึ้นด้วยความเข้มข้นที่เหมาะสม นำไปใช้กับเรซินดูดซับที่มีรูพรุนขนาดใหญ่ D101 และชะด้วยน้ำและเอทานอลที่มีความเข้มข้นต่างกันตามลำดับ รวบรวมน้ำที่ชะล้างและตั้งสมาธิภายใต้ความดันที่ลดลงจนเป็นเนื้อครีมหนา ซึ่งเป็นเศษส่วนโอลิโกแซ็กคาไรด์ทั้งหมด ล้างด้วยเอทานอล 40% ทำให้บริสุทธิ์ ทำให้เข้มข้น และทำให้แห้งภายใต้ความดันที่ลดลง ซึ่งเป็นเศษส่วนไกลโคไซด์ทั้งหมดของ Cistanche Deserticola

2.3 การกำหนดเนื้อหาของส่วนต่างๆ ที่สกัดได้ของ Cistanche Deserticola/Cistanche Deserticola

2.3.1 การหาปริมาณโพลีแซ็กคาไรด์ทั้งหมดของ Cistanche Deserticola/Cistanche Deserticola

ชั่งน้ำหนักตัวอย่างกลูโคส 20 00 มก. ในขวดวัดปริมาตรขนาด 50 มล. เพื่อสร้าง 0 สำหรับสารละลายมาตรฐานกลูโคส 4 มก.·มล.-1 ให้ปิเปต 3, 4, 5, 6 และ 7 มล. ตามลำดับลงในขวดวัดปริมาตรขนาด 50 มล. เจือจางด้วยน้ำให้ได้ปริมาตร และปิเปต 2.0 มล. สารละลายเกรเดียนต์กลูโคสที่มีความเข้มข้นแต่ละชนิดลงในหลอดทดลอง ใช้น้ำกลั่นอีกจำนวนเท่ากันเป็นตัวควบคุมเปล่า เติมฟีนอล 5% 1 มล. ลงในแต่ละหลอด เขย่าขวดให้เข้ากัน เติมกรดซัลฟิวริกเข้มข้น 5 มล. อย่างรวดเร็ว ทิ้งไว้ 10 นาที ใส่ในอ่างน้ำที่มีอุณหภูมิ 40 องศาเป็นเวลา 15 นาที นำออกมา เย็นลงอย่างรวดเร็วถึงอุณหภูมิห้อง แล้ววัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 490 นาโนเมตร เอาค่าการดูดกลืนแสง (A) เป็นตัวกำหนด และความเข้มข้นของกลูโคส (C) เป็นค่าแอบซิสซา วาดเส้นโค้งมาตรฐาน แล้วได้ สมการการถดถอย Y=8.37X-0.162 8 (R2=0.994 6) ชั่งน้ำหนักผงโพลีแซ็กคาไรด์ทั้งหมดของวัตถุดิบและผลิตภัณฑ์อย่างแม่นยำ 1.0 กรัม ใส่ลงในขวดวัดปริมาตรขนาด 50 มล. ตามลำดับ เติมน้ำเพื่อละลายและปรับปริมาตรให้เป็นเครื่องหมาย ดึง 2.0 มล. ลงในหลอดทดลองอย่างแม่นยำ และวัดในสิ่งเดียวกัน เป็นวิธีการเตรียมเส้นโค้งมาตรฐาน , แค่นั้นแหละ.

2.3.2 การหาปริมาณเบทาอีนใน Cistanche Deserticola/Cistanche Deserticola

2.3.2.1 การเตรียมสารละลายอ้างอิง:

ชั่งน้ำหนักสารละลายอ้างอิงเบทาอีน 1.17 มก. อย่างแม่นยำ ใส่ลงในขวดวัดปริมาตรขนาด 5 มล. เติมเมทานอล 50% เพื่อละลายและเจือจางให้ได้ปริมาตร เท่านี้ก็พร้อมแล้ว

2.3. 2. 2 เงื่อนไขโครมาโตกราฟี

คอลัมน์โครมาโตกราฟีคือ Ecosil {{0}}คอลัมน์โครมาโตกราฟี AMINO (4.6 มม.×250 มม., 5 μm), เฟสเคลื่อนที่: อะซีโตไนไตรล์-น้ำ (99.5 ∶ 0.5) , อุณหภูมิคอลัมน์: 30 องศา , ความยาวคลื่นการตรวจจับ: 194 นาโนเมตร, อัตราการไหล: 0.6 มล.·นาที-1, ปริมาตรการฉีด 10 ไมโครลิตร, โครมาโตแกรมแสดงในรูปที่ 1 2.3.2.3 การเตรียมสารละลายทดสอบอย่างแม่นยำ ชั่งน้ำหนักผงของเศษส่วนโอลิโกแซ็กคาไรด์รวมของผลิตภัณฑ์ดิบและผลิตภัณฑ์สำเร็จรูป 1.0 กรัม ใส่ลงในขวดวัดปริมาตรขนาด 5 มล. ตามลำดับ เติมน้ำกลั่นเพื่อละลายและเจือจางให้ได้ปริมาตร เขย่าให้เข้ากัน ผ่านเมมเบรนกรองที่มีรูพรุนขนาดเล็ก 0.45 μL เท่านี้ก็พร้อมแล้ว

2.3.2.4 การกำหนดเนื้อหาตัวอย่าง

ดูดซับสารละลายทดสอบโอลิโกแซ็กคาไรด์ทั้งหมดได้อย่างแม่นยำใน Cistanche Deserticola ดิบและที่เตรียมไว้ วัดตามเงื่อนไขภายใต้ "2.3.2.2" และคำนวณปริมาณเบทาอีนในตัวอย่าง

2.3.3 การหาปริมาณเอไคนาโคไซด์ เวอร์บาสโคไซด์ และเฮเทอโรไซมิซิฟูการ์รินใน Cistanche Deserticola/Cistanche Deserticola

2.3.3.1 การเตรียมสารละลายอ้างอิง

ชั่งน้ำหนักเอคินาโคไซด์ 4.50 มก., เวอร์บาสโคไซด์ 4.80 มก. และโคมิซินแบบเฮเทอโรโลจีส 5.05 มก. ลงในขวดวัดปริมาตรขนาด 5 มล. เติมเมทานอล 50% เพื่อละลายและเจือจางจนถึงเครื่องหมาย และทำการควบคุมแต่ละครั้ง ใส่สารละลายตัวอย่าง 200 ไมโครลิตรลงในการฉีด เติมเมทานอล 50% 400 ไมโครลิตร และผสมให้เข้ากันเพื่อทำสารละลายอ้างอิงแบบผสม เขย่าให้เข้ากัน แค่นี้ก็พร้อมแล้ว

2.3.3.2 สภาวะโครมาโตกราฟี

คอลัมน์โครมาโตกราฟีคือ Ecosil C18 (4.6 มม.×250 มม., 5 ไมโครเมตร), เมทานอลคือเฟสเคลื่อนที่ A, 0.1% กรดฟอร์มิกคือเฟสเคลื่อนที่ B, การชะล้างแบบเกรเดียนต์, {{ 12}}~45 นาที, 30% A→ 70% A อัตราการไหลคือ 1.0mL·min-1 อุณหภูมิคอลัมน์คือ 30 องศา ความยาวคลื่นการตรวจจับคือ 330 nm ปริมาตรการฉีดคือ 10μL และ โครมาโตกราฟีแสดงในรูปที่ 2

2.3.3.3 การเตรียมสารละลายทดสอบ

ชั่งน้ำหนักอย่างแม่นยำ 1.0 กรัมของผงไกลโคไซด์ทั้งหมดของวัตถุดิบและผลิตภัณฑ์ วางลงในขวดวัดปริมาตร 100 มล. เติมเมทานอล 50% เพื่อละลาย ปรับปริมาตรตามเครื่องหมาย แล้วเขย่า ดี. ตักตัวอย่างแต่ละตัวอย่างปริมาณ 5 มล. ลงในขวดวัดปริมาตรขนาด 10 มล. อย่างแม่นยำ เติมเมทานอล 50% เพื่อสร้างปริมาตร เขย่าให้เข้ากัน และผ่านเมมเบรนกรองที่มีรูพรุนขนาดเล็ก 0.45 ไมโครเมตรเพื่อให้ได้

2.3.3.4 การกำหนดเนื้อหาตัวอย่าง

วาดตัวอย่างไกลโคไซด์รวมของ Cistanche Deserticola อย่างแม่นยำ และวัดตามเงื่อนไขภายใต้ "2.3.3.2" คำนวณเนื้อหาของเอไคนาโคไซด์ เวอร์บาสโคไซด์ และสารเชิงซ้อนแบบเฮเทอโรโลกัสในตัวอย่าง

2.4 การจัดกลุ่มสัตว์ การสร้างแบบจำลอง และการให้ยา

ห้องสำหรับสัตว์มีแสงสว่าง 12 ชั่วโมง และความมืด 12 ชั่วโมง ความชื้นสัมพัทธ์ 50% ถึง 70% และอุณหภูมิห้อง 18 ถึง 22 องศา หนูดำ db/db และหนูดำ db/m (กลุ่มควบคุมปกติ) ได้รับการให้อาหารตามปกติด้วยอาหารธรรมดา และการทดลองเริ่มต้นเมื่ออายุ 9 สัปดาห์ ยกเว้นกลุ่มควบคุมปกติ หนูเมาส์สีดำ db/db ที่เหลือจะถูกสุ่มเลือกตามระดับน้ำตาลในเลือดและน้ำหนักตัว แบ่งออกเป็น 8 กลุ่ม ได้แก่ กลุ่มแบบจำลอง กลุ่มควบคุมเชิงบวก Cistanche Deserticola กลุ่มโพลีแซ็กคาไรด์ทั้งหมด Cistanche Deserticola กลุ่มโอลิโกแซ็กคาไรด์ทั้งหมด Cistanche Deserticola กลุ่มกลูโคไซด์ทั้งหมด Tartschistanche Deserticola กลุ่มโพลีแซ็กคาไรด์ทั้งหมด Tarthouse Deserticola กลุ่มโอลิโกแซ็กคาไรด์ทั้งหมด กลุ่ม Tartschistanche Deserticola กลุ่มกลูโคไซด์ทั้งหมด ยกเว้นการควบคุมตามปกติ

ยกเว้นกลุ่มแบบจำลองและกลุ่มแบบจำลอง หนูในกลุ่มอื่นๆ ได้รับการบริหารให้ในกระเพาะอาหารที่ขนาดยา 2 มล./100 กรัมเป็นเวลา 4 สัปดาห์ติดต่อกัน ความเข้มข้นของของเหลวคือ 4.1 ก.กก.-1 กลุ่มควบคุมปกติและกลุ่มแบบจำลองได้รับการปฏิบัติในลักษณะเดียวกัน ให้น้ำเกลือปริมาณหนึ่งเข้ากระเพาะ

2.5 ผลของสารสกัดส่วนต่างๆ ของ Cistanche Deserticola ต่อระดับน้ำตาลในเลือดของหนูเมาส์ดำ db/db

2.5.1 การทดสอบความทนทานต่อกลูโคสในช่องปาก (OGTT)

หลังจากให้ยา 26 วัน พวกเขาก็อดอาหารเป็นเวลา 12 ชั่วโมง และ 60 นาทีหลังจากให้ยาในวันถัดไป หนูเมาส์ดำในแต่ละกลุ่มได้รับกลูโคส 2.0 ก.กก.-1 ที่ 0, {{10}}.5, 1.0 และ 2 ตามลำดับ .0 h เลือดจากหลอดเลือดดำส่วนหางถูกนำไปใช้เพื่อวัดค่าระดับน้ำตาลในเลือด เมื่อค่าน้ำตาลในเลือดเป็นค่าลำดับและเวลาเป็นค่าแอบซิสซา จึงมีการสร้างแผนภูมิการเปลี่ยนแปลงระดับน้ำตาลในเลือด และพื้นที่ใต้เส้นกราฟระดับน้ำตาลในเลือดของแต่ละกลุ่มการทดลองได้รับการคำนวณตามสูตร (AUC, hmmoL·L{ {13}}) [19] AUC=A × {{20}}.25 + B × 0.50 + C × 0.75 + ง. ในสูตร: A, B, C และ D คือค่าน้ำตาลในเลือดที่ 0, 0.5, 1.0 และ 2.0 ชั่วโมงตามลำดับ

2.5.2 การคำนวณดัชนีความต้านทานต่ออินซูลินและดัชนีภาวะหลอดเลือดแข็งตัว

ดัชนีความต้านทานต่ออินซูลินคำนวณตามวิธีการวรรณกรรม [20]: HOMA-IR=Glucose × Insulin / 22 5. HOMA - =20 × Insulin / (Glucose - 3.5) × 100% IR คือความต้านทานต่ออินซูลินและ (%) คือฟังก์ชัน - เซลล์ หน่วยโมลาร์ของกลูโคสคือ mmoL·L-1

- อินซูลินมีหน่วยเป็น mU·L-1 วัดจำนวนกลูโคสและอินซูลินระหว่างการอดอาหาร ดัชนีภาวะหลอดเลือด (ดัชนี Atherogenic) คำนวณตามวิธีที่อธิบายโดย Zheng และคณะ [21]. วิธีการคำนวณ: Atherogenic i ndex=(TC-HDL-C) / HDL-C

2.5.3 ผลของส่วนต่างๆ ที่สกัดได้ของ Cistanche Deserticola/Cistanche Deserticola ต่อซีรั่ม INS และ HbA1c ของหนูเมาส์สีดำ db/db

นำตัวอย่างซีรั่มแช่แข็งและนำไปไว้ที่อุณหภูมิห้องก่อนนำไปใช้ทดสอบกับชุดตรวจวิเคราะห์ทางอิมมูโนแอสเสย์ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ INS และ HbA1c ปฏิบัติตามวิธีการและขั้นตอนในคำแนะนำของชุดอุปกรณ์อย่างเคร่งครัด

2.6 ผลของสารสกัดส่วนต่างๆ ของ Cistanche Deserticola/Cistanche Deserticola ต่อระดับความเครียดออกซิเดชันของตับของหนูเมาส์ดำ db/db

นำตัวอย่างซีรัมแช่แข็งแล้วนำไปที่อุณหภูมิห้องก่อนนำไปใช้ในการทดสอบด้วยชุดตรวจวิเคราะห์ทางอิมมูโนแอสเสย์ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ MDA และ SOD ปฏิบัติตามวิธีการและขั้นตอนในคำแนะนำของชุดอุปกรณ์อย่างเคร่งครัด

2.7 ผลของสารสกัดส่วนต่างๆ ของ Cistanche Deserticola/Cistanche Deserticola ต่อการเผาผลาญไขมันในตับของหนูเมาส์ดำ db/db

ระดับ TG, TC, HDL-C และ LDL-C ในซีรั่มของหนูถูกวัดโดยใช้ชุดอุปกรณ์ที่เกี่ยวข้อง สำหรับขั้นตอนการวัดเฉพาะ โปรดดูคำแนะนำในชุดอุปกรณ์

2.8 ผลของสารสกัดส่วนต่างๆ ของ Cistanche Deserticola/Ratiana Camphor ต่อ UA, Cr และ mALB ในพลาสมาและปัสสาวะของหนูเมาส์สีดำ db/db

นำตัวอย่างพลาสมาและปัสสาวะแช่แข็งแล้วนำไปที่อุณหภูมิห้องก่อนนำไปใช้ในการทดสอบชุดตรวจอิมมูโนแอสเสย์ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ UA, Cr และ mALB ปฏิบัติตามวิธีการและขั้นตอนในคำแนะนำของชุดอุปกรณ์อย่างเคร่งครัด

2.9 การสังเกตส่วนพยาธิวิทยาของตับอ่อนและไตโดยการย้อมสี HE

เนื้อเยื่อตับอ่อนและไตที่แช่ในสารตรึงพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 10% เป็นเวลา 24 ชั่วโมงถูกเอาออก ล้างด้วยน้ำกลั่น และเก็บไว้ในเอธานอล 70% ตัวอย่างเนื้อเยื่อถูกเอาออก อบแห้งด้วยเอทานอลเกรด ล้าง ฝังในพาราฟิน แบ่งส่วน จากนั้นย้อมด้วยฮีมาทอกซิลินและอีโอซิน (การย้อมสี H&E) หลังจากที่กาวส่วนต่างๆ แห้งแล้ว ให้ใช้ระบบภาพดิจิตอลที่มีความละเอียดสูงเพื่อสังเกตและถ่ายภาพส่วนต่างๆ

2.10 การหาปริมาณคอลลาเจนชนิด IV ของเนื้อเยื่อไตโดยวิธีอิมมูโนฮิสโตเคมี

สำหรับการแสดงออก ส่วนของไตจะถูกล้างขี้ผึ้งลงในน้ำ จากนั้นจึงนำแอนติเจนออกมา พวกมันถูกบล็อกด้วยซีรั่มแพะ 10% และบ่มด้วยแอนติบอดีปฐมภูมิที่ 4 องศาข้ามคืน หลังจากการล้าง แอนติบอดีทุติยภูมิถูกบ่ม วิธีแก้ปัญหาในปัจจุบันคือ DAB สำหรับการพัฒนาสี การล้าง การทำให้แห้ง และการปิดผนึกถูกดำเนินการภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง สังเกตการแสดงออกของโปรตีนคอลลาเจนชนิด IV ในเนื้อเยื่อไต

2.11 วิธีการทางสถิติ

การใช้ซอฟต์แวร์ GraphPad Prism เวอร์ชัน 5.01 (2007, ซอฟต์แวร์ GraphPad อีกครั้ง) เพื่อวิเคราะห์ข้อมูลและผลลัพธ์

ผลลัพธ์ที่ได้คือค่าเฉลี่ย±SEM บ่งชี้ว่าความแตกต่างระหว่างทั้งสองกลุ่มคือแบบเที่ยวเดียว

วิธี ＡＮＯＶＡ( ｏｌｌｏָּｄּＢｏｎָｒｒｎｎ′ การทดสอบคอลัมน์หนึ่งคู่) วิธี P<0.05 is a significant difference and has statistical significance.