ผลของการเสริมไกลซีนในอาหารต่อประสิทธิภาพการเจริญเติบโต ภูมิคุ้มกัน และพารามิเตอร์สารต้านอนุมูลอิสระของเม็ดเลือดแดงในปลาคาร์พทั่วไป Cyprinus Carpio

สรุปง่ายๆ:

กรดอะมิโนมีบทบาทสำคัญหลายอย่างในการเจริญเติบโตและสุขภาพของปลา ในหมู่พวกเขา กรดอะมิโนที่ไม่จำเป็นได้รับการศึกษาน้อยกว่าในการเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ แต่มีบทบาททางสรีรวิทยามากมาย Glycine เป็นกรดอะมิโนที่ไม่จำเป็นซึ่งเกี่ยวข้องกับโครงสร้างกลูตาไธโอนและยังเกี่ยวข้องกับระบบต้านอนุมูลอิสระในปลาด้วย นอกจากนี้ไกลซีนยังกระตุ้นระบบภูมิคุ้มกัน การศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าระยะเวลา 8 สัปดาห์ที่ให้อาหารด้วยอาหารที่เสริมด้วยไกลซีน 5 กรัม/กก. สามารถปรับปรุงประสิทธิภาพการเจริญเติบโต ความเสถียรของเม็ดเลือดแดง และการสร้างภูมิคุ้มกันของร่างกายและเยื่อเมือกในปลาคาร์พทั่วไป ดังนั้นผลลัพธ์ปัจจุบันจึงสามารถนำมาใช้ในการผลิตอาหารปลาคาร์พเพื่อสนับสนุนการเติบโตและสุขภาพที่สูงขึ้น

เชิงนามธรรม:

ผลของการเสริมไกลซีนในอาหาร 0 (กลุ่มควบคุม), 5 (5 GL) และ 10 (10 GL) กรัม/กก. ได้รับการตรวจสอบเกี่ยวกับการเจริญเติบโต พารามิเตอร์ทางโลหิตวิทยา ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของเม็ดเลือดแดง ภูมิคุ้มกันของร่างกายและเยื่อเมือก ในปลาคาร์พทั่วไป Cyprinus carpio หลังจากการให้อาหารเป็นเวลาแปดสัปดาห์ การบำบัดด้วย 5 GL แสดงการปรับปรุงประสิทธิภาพการเจริญเติบโตและประสิทธิภาพการป้อนอาหารอย่างมีนัยสำคัญ เมื่อเทียบกับการบำบัดแบบควบคุม จำนวนเม็ดเลือดแดง (RBC) และเซลล์เม็ดเลือดขาว (WBC) ฮีโมโกลบิน ฮีมาโตคริต นิวโทรฟิล และโมโนไซต์นับ/เปอร์เซ็นต์ RBC ลดปริมาณกลูตาไธโอน (GSH) และเยื่อเมือกของผิวหนัง อัลคาไลน์ฟอสฟาเตส เปอร์ออกซิเดส โปรตีเอส และไลโซไซม์มีความคล้ายคลึงกัน ในปลาที่ได้รับไกลซีนและสูงกว่ากลุ่มควบคุมอย่างมีนัยสำคัญ เปอร์เซ็นต์ลิมโฟไซต์ในเลือดลดลงในปลาที่ได้รับไกลซีน แต่จำนวนลิมโฟไซต์เพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับปลากลุ่มควบคุม กิจกรรม RBC glutathione reductase ในปลาที่ได้รับไกลซีนมีความคล้ายคลึงกันและต่ำกว่าการควบคุมอย่างมีนัยสำคัญ ไลโซไซม์ในพลาสมาสูงสุดและกิจกรรมเสริมทางเลือกถูกสังเกตพบในการรักษาด้วย GL

ปลาที่ได้รับไกลซีน โดยเฉพาะ 5 GL ปรับปรุงความต้านทานการเปราะบางของ RBC อย่างมีนัยสำคัญ ไกลซีนในอาหารไม่มีผลอย่างมีนัยสำคัญต่อกิจกรรมของ RBC กลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส, อิมมูโนโกลบูลินในพลาสมา, เปอร์เซ็นต์/จำนวนอีโอซิโนฟิล และดัชนีทางโลหิตวิทยา โดยสรุป ประโยชน์ส่วนใหญ่ของการเสริมไกลซีนในอาหารอาจอาศัยการสังเคราะห์กลูตาไธโอนที่เพิ่มขึ้นและพลังในการต้านอนุมูลอิสระ

คำสำคัญ: กรดอะมิโน; กลูตาไธโอน; โภชนาการ; เซลล์เม็ดเลือด เมือกที่ผิวหนัง

อิมมูโนโกลบูลินในพลาสมาเป็นหนึ่งในองค์ประกอบที่สำคัญที่สุดของระบบภูมิคุ้มกันของร่างกาย อิมมูโนโกลบูลินสามารถจดจำและผูกมัดเชื้อโรคได้ ดังนั้นจึงช่วยส่งเสริมการกำจัด ออกแรงการทำงานของภูมิคุ้มกัน และรักษาสุขภาพ อิมมูโนโกลบูลินในพลาสมาส่วนใหญ่ประกอบด้วยสามประเภท: IgG, IgM และ IgA และเนื้อหาและอัตราส่วนของพวกมันมีความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับภูมิคุ้มกันของมนุษย์ ภายใต้สถานการณ์ปกติ ปริมาณอิมมูโนโกลบูลินในคนที่มีสุขภาพดีจะค่อนข้างสูง และอัตราส่วนดังกล่าวจะประสานกัน สภาวะสมดุลนี้สามารถต้านทานการบุกรุกของเชื้อโรคจากภายนอกได้อย่างมีประสิทธิภาพ เมื่อร่างกายอยู่ในสภาวะภูมิคุ้มกัน การเปลี่ยนแปลงของปริมาณและอัตราส่วนของอิมมูโนโกลบูลินสามารถเป็นพื้นฐานสำคัญในการป้องกันและรักษาโรค ตัวอย่างเช่น IgM มีบทบาทสำคัญในการรับรู้เริ่มต้นและการผูกมัดของการติดเชื้อก่อโรคเฉียบพลัน ดังนั้นการเพิ่มขึ้นของมันสามารถบ่งชี้ถึงการติดเชื้อเฉียบพลันหรือระยะเวลาการฟื้นตัว ระดับ IgG ที่คงที่และคงที่สะท้อนให้เห็นว่าสภาวะทางสรีรวิทยาของร่างกายดีขึ้น และมีความสามารถในการรักษาและปรับปรุงการทำงานของภูมิคุ้มกันได้ดีขึ้น

ดังนั้น ภูมิคุ้มกันของร่างกายจึงสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับปริมาณและอัตราส่วนของอิมมูโนโกลบูลินในพลาสมา การตรวจสอบและการปรับปริมาณและอัตราส่วนของอิมมูโนโกลบูลินในพลาสมาอย่างรอบคอบจึงเป็นหนึ่งในมาตรการสำคัญในการรักษาสุขภาพที่ดีและภูมิคุ้มกันที่แข็งแรง เห็นได้จากสิ่งนี้ที่เราต้องใส่ใจกับการปรับปรุงภูมิคุ้มกันของเรา นอกเหนือจากการรับประทานอาหารเพื่อสุขภาพและการออกกำลังกายในชีวิตประจำวันแล้ว cistanche ยังสามารถปรับปรุงภูมิคุ้มกันได้อีกด้วย Cistanche มีส่วนประกอบทางชีวภาพหลายชนิด เช่น โพลีแซคคาไรด์ เห็ด Huangli เป็นต้น ส่วนผสมเหล่านี้สามารถกระตุ้นเซลล์ต่างๆ ของระบบภูมิคุ้มกันและเพิ่มกิจกรรมภูมิคุ้มกันได้

คลิก ประโยชน์ต่อสุขภาพของ cistanche

1. บทนำ

กรดอะมิโนในอาหารมีบทบาทสำคัญในการเจริญเติบโตและสุขภาพของปลา ปลาต้องพึ่งพาอาหารเพื่อตอบสนองความต้องการของกรดอะมิโนบางชนิด ซึ่งเรียกว่ากรดอะมิโนจำเป็น กรดอะมิโนเหล่านี้ไม่สามารถสังเคราะห์ได้ในร่างกายปลา [1] อย่างไรก็ตาม กรดอะมิโนอื่นๆ สามารถสังเคราะห์ได้โดยปลา หากมีซับสเตรต เอนไซม์ และโคแฟกเตอร์บางชนิด การศึกษาส่วนใหญ่เกี่ยวกับความต้องการกรดอะมิโนในปลาเน้นไปที่กรดอะมิโนที่จำเป็น แต่ควรเน้นไปที่กรดอะมิโนที่ไม่จำเป็นเช่นกัน แม้ว่ากรดอะมิโนเหล่านี้สามารถสังเคราะห์ได้ในร่างกายของปลา แต่ก็มีบทบาททางสรีรวิทยาที่สำคัญมากมายซึ่งมีความสำคัญต่อสุขภาพและสวัสดิภาพของปลา [2,3] ดังนั้น คำจำกัดความทั่วไปของกรดอะมิโนที่จำเป็น/ไม่จำเป็นจึงถูกท้าทายโดยนักวิจัยเมื่อไม่นานมานี้

Glycine เป็นหนึ่งในกรดอะมิโนที่ไม่จำเป็นในปลาเช่นเดียวกับสัตว์อื่นๆ แต่มีหน้าที่ทางสรีรวิทยาที่สำคัญหลายอย่าง [2] Glycine มีส่วนร่วมในการสร้างคอลลาเจน และ 33 เปอร์เซ็นต์ของคอลลาเจนสร้างจากกรดอะมิโนนี้ [4] นอกจากนี้ ไกลซีนร่วมกับกลูตาเมตและซิสเทอีน มีส่วนร่วมในการสังเคราะห์กลูตาไธโอน ซึ่งเป็นโมเลกุลสารต้านอนุมูลอิสระที่ทรงพลังและมีความสำคัญ [5] ดังนั้น ไกลซีนจึงปรับเปลี่ยนระบบต้านอนุมูลอิสระ กรดอะมิโนนี้มีบทบาทต่างๆ ในการทำงานของภูมิคุ้มกัน เป็นที่ทราบกันดีว่าการลดลงของความเข้มข้นของไกลซีนในซีรั่มในเลือดจะเพิ่มความต้านทานต่อซีรั่มของเชื้อโรคต่างๆ ในมนุษย์ [6] การศึกษาเกี่ยวกับปลานิล Oreochromis niloticus ได้เปิดเผยว่าวิถีเมแทบอลิซึมของไกลซีนเป็นวิถีที่สำคัญที่สุดในการป้องกันการตายในปลาที่ติดเชื้อโดย Edwardsiella tarda [7]

มีการศึกษาเล็กน้อยเกี่ยวกับผลกระทบของไกลซีนในอาหารที่มีต่อปลา แต่ผลลัพธ์ไม่สอดคล้องกัน ตัวอย่างเช่น ปลานิลมีประสิทธิภาพการเจริญเติบโตเพิ่มขึ้นอย่างมาก เมื่อให้อาหารเสริมด้วยไกลซีน 5 กรัม/กก. ไกลซีนในอาหารไม่สามารถส่งผลกระทบต่อระดับต่างๆ ของพลาสมาและ/หรือเมแทบอไลต์ของตับ กิจกรรมของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระ กิจกรรมของไลโซไซม์/ไมอีโลเปอร์ออกซิเดส และปริมาณ malondialdehyde (MDA) ความท้าทายในการทดลองกับ Streptococcus iniae แสดงให้เห็นว่า glycine ล้มเหลวในการปรับปรุงความต้านทานโรค และการตอบสนองของสารต้านอนุมูลอิสระ/ภูมิคุ้มกันอื่นๆ คล้ายกับการทดสอบล่วงหน้า ยกเว้นการเพิ่มขึ้นของพลาสมาซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเตส (SOD) กลูตาไธโอนรีดัคเตส (GR) และไมอีโลเปอร์ออกซิเดส กิจกรรม [8].

การศึกษาเกี่ยวกับปลากะพงปากกว้าง Micropterus salmoides เปิดเผยว่าการรับประทานอาหารจากพืชที่เสริมด้วยไกลซีน 20 ก./กก. มีประโยชน์ในการป้องกันการชะลอการเจริญเติบโตและการขาดแคลนวิลลี่ในลำไส้ เมื่อเปรียบเทียบกับการรับประทานอาหารที่มีปลาป่นเป็นหลัก อย่างไรก็ตาม ไม่มีการเปลี่ยนแปลงของกิจกรรม SOD ในตับและกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส (GPx) และการเพิ่มขึ้นของปริมาณ MDA ในตับและกิจกรรมอะลานีนอะมิโนทรานสเฟอเรสในพลาสมาบ่งชี้ว่าปลาอาจมีปัญหาตับ [9] Hoseini และ Moghaddam [10] ได้แสดงให้เห็นว่าการเสริม glycine ไม่มีผลอย่างมีนัยสำคัญต่อประสิทธิภาพการเจริญเติบโตของเบลูก้า Huso huso จำนวนเซลล์เม็ดเลือดขาว (WBC), ระดับกลูตาไธโอนที่ลดลง (GSH) ในพลาสมา, GPx, ไลโซไซม์ และกิจกรรมเสริมเพิ่มขึ้นที่ระดับไกลซีน 2.5 และ/หรือ 5 ก./กก. บ่งบอกถึงสารต้านอนุมูลอิสระและผลการปรับภูมิคุ้มกันของไกลซีน อย่างไรก็ตาม ปริมาณ MDA ในพลาสมาที่เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญที่ 5 และ 10 ก./กก. ไกลซีน ทำให้ยากที่จะเชื่อว่าผลของไกลซีนต่อสารต้านอนุมูลอิสระในสปีชีส์นี้

การศึกษาก่อนหน้านี้ของเราเกี่ยวกับปลาคาร์พสามัญ Cyprinus carpio ได้แสดงให้เห็นว่า 3-ระยะเวลาหนึ่งสัปดาห์ของการให้อาหารที่มีไกลซีน 2.5–10 กรัม/กก. มีประโยชน์ในการปรับปรุงพลาสมาไลโซไซม์ (ไกลซีน 5 และ 10 กรัม/กก.), GPx ( ไกลซีน 2.5–10 ก./กก.), กลูตาไธโอน-เอส-ทรานสเฟอเรส (GST; 10 ก./กก. ไกลซีน) กิจกรรม และ GSH (5 และ 10 ก./กก. ไกลซีน) แต่ลดพลาสมาคาตาเลส (CAT; 5 และ 10 ก. /กก.ไกลซีน) และไม่มีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อ MDA ในพลาสมา [11] การให้อาหารแบบเดียวกันเป็นเวลา 8-สัปดาห์แสดงให้เห็นว่าไกลซีนไม่มีผลต่อการเจริญเติบโตของปลา แม้ว่าอัตราการเติบโตและประสิทธิภาพการให้อาหารของปลาจะเพิ่มขึ้นเป็นตัวเลข ~10.5 และ 12.5 เปอร์เซ็นต์ตามลำดับ Plasma SOD, CAT, GPx และ GST ยังคงไม่เปลี่ยนแปลง แต่ GSH และ MDA ในพลาสมาเพิ่มขึ้นและลดลงตามลำดับ [12] การศึกษาเหล่านี้บ่งชี้ว่าจำเป็นต้องมีการประเมินเพิ่มเติมเพื่อปรับปรุงความรู้ในปัจจุบันเกี่ยวกับผลกระทบของไกลซีนในอาหารปลา

ตัวอย่างเช่น การศึกษาที่กล่าวถึงข้างต้นได้มุ่งเน้นไปที่จำนวนจำกัดของพารามิเตอร์ภูมิคุ้มกันโดยธรรมชาติของร่างกาย (ไลโซไซม์, คอมพลีเมนต์, ไมอีโลเปอร์ออกซิเดส, กิจกรรมการระเบิดของทางเดินหายใจ และ WBC) และละเลยพารามิเตอร์อื่นๆ เช่น พารามิเตอร์ภูมิคุ้มกันของเยื่อเมือกของผิวหนัง นี่เป็นหัวข้อสำคัญที่พิจารณาถึงบทบาททางภูมิคุ้มกันของไกลซีนที่รายงานในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม [13] และบทบาทเฉพาะของมันต่อภูมิคุ้มกันของเยื่อเมือกที่พบในสุกร [14] ยิ่งไปกว่านั้น ผลของสารต้านอนุมูลอิสระของไกลซีนได้รับการประเมินเฉพาะในเลือดปลาและตับเท่านั้น แต่ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าเซลล์เม็ดเลือดแดง (RBC) ทั้งในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมและปลา สูบฉีดไกลซีนเข้าสู่ไซโตพลาสซึม [15,16] เพื่อสนับสนุนการสังเคราะห์กลูตาไธโอน และรักษาความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระภายใน ไกลซีนยังเป็นส่วนประกอบสำคัญของการสังเคราะห์ฮีมโดยมีส่วนร่วมใน 5-การผลิตกรดอะมิโนเลวูลินิก การยับยั้งการนำเข้า glycine โดย erythroid ทำให้การสังเคราะห์ heme ในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมหยุดชะงัก [17]

เมื่อพิจารณาจากข้อมูลที่จำกัดเกี่ยวกับบทบาทของไกลซีนในอาหารปลา (เมื่อเทียบกับสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม) การศึกษานี้ได้รับการออกแบบเพื่อประเมินผลของไกลซีนในอาหารต่อประสิทธิภาพการเจริญเติบโต พารามิเตอร์ของเยื่อบุผิวและภูมิคุ้มกันของร่างกาย พารามิเตอร์ทางโลหิตวิทยา ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของ RBC และแนวโน้มที่จะ ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในปลาคาร์พทั่วไป

2. วัสดุและวิธีการ

2.1. อาหาร

จากการศึกษาก่อนหน้า [11,12] เราเลือกไกลซีน 5 (5 GL) และ 10 (10 GL) กรัม/กก. สำหรับการเสริม แต่ลดระดับไกลซีนพื้นฐาน (จากภายนอก) (จาก 19.8 เป็น 16.1 กรัม/กก.) โดยการลด ปริมาณผลพลอยได้ของสัตว์ปีกในอาหารเพื่อดูว่าการเสริมไกลซีนในอาหารที่มีพืชเป็นหลัก (ผลพลอยได้จากสัตว์ปีกต่ำ) สามารถรองรับการเจริญเติบโตได้สูงสุดหรือไม่ การควบคุมอาหารโดยไม่เสริมไกลซีน (CTL) รวมอยู่ด้วย อาหารสัตว์ (กากข้าวโพด ข้าวสาลีป่น กากถั่วเหลือง กากเมล็ดฝ้าย ผลพลอยได้จากปลากระป๋อง และผลพลอยได้จากสัตว์ปีก) ถูกร่อน (200 µ) และผสมตามสัดส่วนที่ต้องการ (ตารางที่ 1)

จากนั้นเติมน้ำมันถั่วเหลือง พรีมิกซ์วิตามิน/แร่ธาตุ กรดอะมิโน เซลลูโลส และไกลซีนลงในส่วนผสม เติมน้ำประมาณ 400 มล./กก. ลงในส่วนผสมและเตรียมแป้งซึ่งปั้นเป็นก้อนโดยใช้เครื่องบดเนื้อ องค์ประกอบใกล้เคียงของอาหารถูกกำหนด (สามตัวอย่างต่ออาหารหนึ่งมื้อ) ตามวิธีมาตรฐาน (วิธีเจลดาห์ลสำหรับโปรตีน การสกัดอีเทอร์สำหรับไขมัน การอบแห้งในเตาอบที่ 70 ◦C สำหรับความชื้น การเผาไหม้ในเตาสำหรับเถ้า และการย่อยกรด/เบสสำหรับไฟเบอร์) ตามที่อธิบายไว้ โดย โฮซีนี, โมแกดดัม [10]. โปรไฟล์กรดอะมิโนในอาหารถูกกำหนดโดยระบบ HPLC (Waters Corporation, Milford, MA, USA) ตัวอย่างถูกกำจัดไขมันด้วย n-hexane และย่อยโดย HCl ตามด้วย derivitization ด้วย phenyisothiocyanase และการแยกด้วยคอลัมน์ PICO.TAG และการตรวจจับในเครื่องตรวจจับการดูดกลืนแสง λ คู่ [10]

2.2. การเลี้ยงปลา

ลูกปลาคาร์พทั่วไป 200 ตัวซื้อมาจากฟาร์มในท้องถิ่นและเลี้ยงในถังขนาด 1 ลบ.ม. หนึ่งถังเป็นเวลา 7 วัน ในระหว่างนั้นพวกมันได้รับอาหาร CTL หลังจากนั้น ได้ทำการคัดเลือกปลาที่แข็งแรง 90 ตัว (24.5 ± 0.21 กรัม) ที่มีขนาดสม่ำเสมอและสุ่มแจกในตู้กระจก 9 ตู้ ตู้ปลาเติม 50-น้ำประปาลดคลอรีนด้วยการเติมอากาศอย่างต่อเนื่อง ความหนาแน่นของการเลี้ยงอ้างอิงจากการศึกษาก่อนหน้านี้เกี่ยวกับปลาชนิดเดียวกัน [12] ปลาได้รับอาหารอย่างใดอย่างหนึ่งดังกล่าวข้างต้น วันละสองครั้ง (ร้อยละ 2 ของมวลชีวภาพ) เป็นเวลา 8 สัปดาห์ ทุก ๆ สัปดาห์ ปลาของพิพิธภัณฑ์สัตว์น้ำแต่ละแห่งจะถูกจับจำนวนมากและวางไว้ในถังที่เต็มไปด้วยน้ำบนตาชั่งดิจิทัลเพื่อบันทึกมวลชีวภาพของตู้ปลาและการปรับปริมาณอาหาร น้ำในตู้ปลาได้รับการปรับปรุงใหม่ 30 เปอร์เซ็นต์ทุกวัน และของเสียถูกสูบออก อุณหภูมิของน้ำ ค่า pH ออกซิเจนละลายน้ำ และแอมโมเนียทั้งหมดเท่ากับ 23.8 ± 0.85 ◦C, 7.74 ± 0.68, 6.78 ± 0.74 มก./ลิตร และ 1.53 ± 0.33 มก./ลิตร ตามลำดับ .

หลังจากการเลี้ยง 8 สัปดาห์ การเพิ่มน้ำหนัก (WG) อัตราการเติบโตเฉพาะ (SGR) และอัตราส่วนการเปลี่ยนอาหาร (FCR) ถูกบันทึกดังนี้:

2.3. การเก็บตัวอย่างและการประมวลผล

เมื่อสิ้นสุดระยะเวลาการเลี้ยง ปลาสามตัวถูกจับจากตู้ปลาแต่ละตู้และวางยาสลบใน 100 µL/L eugenol จากนั้น เก็บตัวอย่างเลือด (1 มล. ต่อปลา 1 ตัว) จากหลอดเลือดดำส่วนหางของปลา โดยใช้หลอดฉีดยาเฮปาริไนซ์ ตัวอย่างเลือดสด 300 µL ส่วนหนึ่งใช้สำหรับการตรวจทางโลหิตวิทยา ตัวอย่างเลือดสดอีก 200 ไมโครลิตรถูกใช้สำหรับการทดสอบความเปราะบางแบบออสโมติกของ RBC ในการทำให้เซลล์ไลเซท RBC ที่อัดแน่นของตัวอย่างถูกแช่แข็งที่ −70 ◦C และเติมด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) สองปริมาตร หลังจากการวอร์เท็กซ์ สารแขวนลอยถูกหมุนเหวี่ยง (6000× g; 7 นาที; 4 ◦C) และส่วนเหนือตะกอนถูกเก็บไว้ที่ −70 ◦C จนกระทั่งวิเคราะห์ RBC GSH, GR และ GPx เพื่อให้ได้พลาสมา ตัวอย่างเลือดสด 350 µL ถูกหมุนเหวี่ยง (6000× g; 7 นาที; 4 ◦C) และตัวอย่างพลาสมาถูกเก็บไว้ที่ −70 ◦C จนกระทั่งวิเคราะห์ไลโซไซม์ ส่วนประกอบทางเลือก (ACH50) และอิมมูโนโกลบูลินทั้งหมด (ไอจี).

เก็บตัวอย่างเมือกจากปลาสามตัวต่อตู้ ปลาได้รับการดมยาสลบตามที่กล่าวไว้ข้างต้นและเก็บตัวอย่างเมือกจากพื้นผิวด้านหลังโดยใช้ไม้พายขัด ตัวอย่างน้ำมูกที่รวบรวมได้ผสมกับน้ำเกลือ Tris-buffered ในปริมาตรที่เท่ากัน (TBS, 50 mM Tris–HCl, 150 mM NaCl, pH 8.0) หลังจากการหมุนเวียนของน้ำวน ของผสมจะถูกหมุนเหวี่ยง (13,000× g; 15 นาที; 4 ◦ซ) และส่วนเหนือตะกอนถูกเก็บไว้ที่ −70 ◦ซ จนกระทั่งการตรวจวิเคราะห์ทางภูมิคุ้มกันของเยื่อเมือก

2.4. การวิเคราะห์

2.4.1. การตรวจทางโลหิตวิทยา

RBC และ WBC ถูกนับโดยใช้ห้อง Neubauer หลังจากเจือจางด้วยสารละลาย Dacie วัดค่าฮีมาโตคริต (Hct) และฮีโมโกลบิน (Hb) โดยวิธีปั่นเหวี่ยงและไซยาโนเมธีโมโกลบินตามลำดับ ปริมาณเฉลี่ยของ corpuscular (MCV) ค่าเฉลี่ยของ corpuscular hemoglobin (MCH) และค่าเฉลี่ยของความเข้มข้นของ corpuscular hemoglobin (MCHC) ถูกคำนวณตาม Dacie และ Lewis [18] การตรวจนับความแตกต่างของเม็ดเลือดขาวดำเนินการโดยการเตรียมสไลด์เลือดที่ย้อมด้วย Giemsa

2.4.2. พารามิเตอร์ภูมิคุ้มกันวิทยาในพลาสมา

กิจกรรมของไลโซไซม์ในพลาสมาถูกกำหนดโดยใช้วิธีวัดความขุ่น ตามที่อธิบายโดยเอลลิส [19] ใช้ Micrococcus luteus เป็นเป้าหมายและแขวนลอยอยู่ในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.2) ใน 1 มล. ของสารแขวนลอยนี้ มีการเติมตัวอย่างพลาสมา 25 µL และการลดลงของความหนาแน่นเชิงแสงเฉลี่ยต่อนาทีถูกบันทึกในช่วง 5 นาทีที่ 450 นาโนเมตร ทุกๆ 0.001 ความหนาแน่นของแสงที่ลดลงต่อนาทีถือเป็นหนึ่งหน่วยของกิจกรรมของไลโซไซม์

กิจกรรมของพลาสมา ACH50 ถูกวัดโดยใช้วิธี hemolytic [20] โดยใช้ RBC ของแกะเป็นเป้าหมายใน veronal buffer ที่มีแมกนีเซียมและเจลาติน (pH 7.0) ตัวอย่างพลาสมาที่เจือจางแบบอนุกรมถูกเติมไปยังสารแขวนลอยของ RBC ในบัฟเฟอร์และบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 60 นาที ปริมาณในพลาสมาที่นำไปสู่การแตกของเม็ดเลือดแดงร้อยละ 50 ถูกประเมินและใช้ในการคำนวณแอคติวิตีของ ACH50 ต่อมิลลิลิตรในพลาสมา

ความเข้มข้นของ Ig ทั้งหมดในพลาสมาถูกกำหนดหลังจากการตกตะกอนด้วยโพลิเอทิลีนไกลคอล [21] ผสมพลาสมาและสารละลายโพลีเอทิลีนไกลคอลในปริมาณที่เท่ากัน (ร้อยละ 12) และเก็บไว้ภายใต้การกวนที่อุณหภูมิห้อง หลังจาก 2 ชั่วโมง ของผสมถูกหมุนเหวี่ยง (6000× g; 7 นาที; 4 ◦C) เพื่อให้ตกตะกอน Ig ความแตกต่างของโปรตีนตัวอย่างก่อนและหลังการปั่นแยกมีค่าเท่ากับความเข้มข้นของ Ig ทั้งหมดของตัวอย่าง

2.4.3. RBC เอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระ

พารามิเตอร์สารต้านอนุมูลอิสระ RBC ได้รับการประเมินตาม Yousefi และ Hoseini [22] เซลล์ RBC ไลเซทถูกละลายและสารละลายถูกหมุนเหวี่ยงเพื่อตกตะกอนดาร์บีใดๆ ส่วนเหนือตะกอนถูกนำมาใช้สำหรับการตรวจวิเคราะห์ด้วยเอนไซม์ ชุดอุปกรณ์เชิงพาณิชย์ (Zellbio Co., GmbH, Deutschland, Germany) ถูกนำมาใช้เพื่อประเมินกิจกรรมของเอนไซม์ ความเข้มข้นของ GSH วัดจากปฏิกิริยากับ 5,50 -dithiobis-(2-nitrobenzoic acid) ที่ 412 นาโนเมตร หลักการของการทดสอบ GPx ขึ้นอยู่กับการเติม GSH ลงในตัวอย่างและการแปลง GSH เป็นออกซิไดซ์กลูตาไธโอน (GSSG) โดยตัวอย่าง GPx GSSG ที่เป็นผลลัพธ์ถูกนำไปรีไซเคิลเป็น GSH โดยกิจกรรม GR ซึ่งใช้ NADPH การลดลงของความเข้มข้นของ NADPH เป็นสัดส่วนกับกิจกรรมของ GPx และสามารถวัดได้ที่ 340 นาโนเมตร โปรโตคอลเดียวกันนี้ใช้สำหรับการกำหนดกิจกรรม GR แต่เพิ่ม GSSG ลงในตัวอย่างแทน GSH วัดระดับเฮโมโกลบินของสารละลายและแสดงกิจกรรมของเอนไซม์ตามนั้น

2.4.4. การทดสอบความเปราะบางแบบออสโมติก

การทดสอบความเปราะบางของ RBC ได้ดำเนินการตาม Gao, Liu [23] โดยสังเขป 25 µL ของ RBC สดที่บรรจุถูกเติมลงใน 1 มล. ของ 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, {{ 11}}.5, 0.6, 0.7, 0.85 เปอร์เซ็นต์สารละลายโซเดียมคลอไรด์ และทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 90 นาที จากนั้น สารแขวนลอยถูกหมุนเหวี่ยง (6000× g; 7 นาที; 4 ◦C) และวัดค่าการดูดกลืนแสงของส่วนเหนือตะกอนที่ 492 นาโนเมตร ความหนาแน่นของแสงได้รับการแก้ไขตามจำนวน RBC และ MCH ความหนาแน่นของแสงสูงสุดถือเป็นการแตกของเม็ดเลือดแดงร้อยละ 100 และอัตราการแตกของเม็ดเลือดแดงที่มีความหนาแน่นของแสงอื่น ๆ ได้รับการคำนวณตามนั้น

2.4.5. พารามิเตอร์ทางภูมิคุ้มกันวิทยาของเมือกในผิวหนัง

ความเข้มข้นของโปรตีนที่ละลายน้ำได้ของตัวอย่างเสมหะของผิวหนังถูกกำหนดขึ้นจากแบรดฟอร์ด [24] กิจกรรมของเมือกเปอร์ออกซิเดสของผิวหนังถูกกำหนดตาม Quade และ Roth [25] โดยใช้ 3,30,5,50 -tetramethylbenzidine ไฮโดรคลอไรด์และไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์เป็นสารตั้งต้นที่ 450 นาโนเมตร กิจกรรมของน้ำย่อยในเมือกของผิวหนังถูกกำหนดโดย Zhang, Hu [26] โดยใช้ AZOcasein เป็นสารตั้งต้นที่ 350 นาโนเมตร กิจกรรมไลโซไซม์เมือกของผิวหนังถูกกำหนดตามที่อธิบายไว้ข้างต้น กิจกรรมอัลคาไลน์ฟอสฟาเตสของเมือกในผิวหนัง (ALP) ถูกกำหนดโดยใช้ชุดเครื่องมือ Parsazmun Co. (เตหะราน ประเทศอิหร่าน) ตามข้อมูลของ Hoseinifar, Roosta [27]

2.5. การวิเคราะห์ทางสถิติ

ก่อนการวิเคราะห์ ค่าเฉลี่ยของข้อมูลต่อตู้ปลาได้รับการคำนวณและใช้สำหรับการวิเคราะห์ทางสถิติ (n {{0}}) หลังจากยืนยันการแจกแจงแบบปกติของข้อมูลโดยการทดสอบ Shapiro– Wilk และความแปรปรวนแบบเอกพันธ์โดยการทดสอบ Levene ข้อมูลจะถูกกำหนดโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบทางเดียว ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างการรักษาถูกกำหนดโดยการทดสอบ Tukey p <0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญและการวิเคราะห์ทั้งหมดดำเนินการใน SPSS v.22

3. ผลลัพธ์

การเจริญเติบโตของปลาแสดงในตารางที่ 2 FCR ในการบำบัดด้วย 5 GL และ 10 GL ต่ำกว่าการบำบัดด้วย CTL อย่างมีนัยสำคัญ น้ำหนักสุดท้าย, WG และ SGR ในการบำบัดด้วย 5 GL สูงกว่าของการบำบัดด้วย CTL อย่างมีนัยสำคัญ ไม่มีการเสียชีวิตระหว่างการรักษา

พารามิเตอร์สารต้านอนุมูลอิสระของ RBC แสดงไว้ในตารางที่ 3 ปริมาณ GSH เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ เนื่องจากกิจกรรมของ GR ลดลงอย่างมีนัยสำคัญในการบำบัด 5 GL และ 10 GL เมื่อเทียบกับการบำบัดด้วย CTL ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในกิจกรรม GPx ระหว่างการรักษา

ผลของการทดสอบความเปราะบางของออสโมติกแสดงในตารางที่ 4 ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในอัตราการแตกของเม็ดเลือดแดงระหว่างการรักษาที่ความเข้มข้นของ NaCl ที่ 0.1, 0.2, 0 7 และ 0.85 เปอร์เซ็นต์ ที่ความเข้มข้นของ NaCl ที่ 0.3–0.5 เปอร์เซ็นต์ อัตราการแตกของเม็ดเลือดแดงของการบำบัดด้วย 5 GL ต่ำกว่าการบำบัดด้วย CTL อย่างมีนัยสำคัญ อัตราการเกิดเม็ดเลือดแดงแตกของปลาที่ได้รับไกลซีนที่ความเข้มข้นของ NaCl ที่ 0.6 เปอร์เซ็นต์ ต่ำกว่าของการบำบัดด้วย CTL อย่างมีนัยสำคัญ

พารามิเตอร์ทางภูมิคุ้มกันวิทยาของเยื่อเมือกผิวหนังของปลาแสดงอยู่ในตารางที่ 6 ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในกิจกรรมของโปรตีนที่ละลายในเยื่อเมือก, ไลโซไซม์, เปอร์ออกซิเดส, โปรตีเอส และ ALP ระหว่างการรักษา 5 GL และ 10 GL; ทั้งสองแสดงค่าที่สูงกว่าอย่างมีนัยสำคัญ เมื่อเปรียบเทียบกับการรักษาด้วย CTL

4. การอภิปราย

Glycine มีส่วนช่วยในการสังเคราะห์โปรตีนโครงสร้างและคิดเป็นเกือบร้อยละ 9 ของโปรตีนทั้งตัวในปลาคาร์พทั่วไป [28] ในการศึกษาปัจจุบัน การเสริมไกลซีนในอาหารช่วยเพิ่มประสิทธิภาพการเจริญเติบโตและประสิทธิภาพการกินอาหารของปลาคาร์พทั่วไปอย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งไม่เหมือนกับการศึกษาก่อนหน้าของเราในสายพันธุ์เดียวกัน [12] เหตุผลที่แน่นอนสำหรับความแตกต่างดังกล่าวไม่ชัดเจน คาดว่าระดับไกลซีนที่ต่ำกว่าในอาหารควบคุมของการศึกษาปัจจุบัน (ร้อยละ 1.61 ) เมื่อเทียบกับครั้งก่อน (ร้อยละ 1.98 ) สร้างความแตกต่าง อย่างไรก็ตาม การเจริญเติบโตของปลาควบคุมในการศึกษาทั้งสองมีความใกล้เคียงกันโดยประมาณ

ดังนั้น ปัจจัยอื่นๆ อาจมีส่วนทำให้เกิดความแตกต่างดังกล่าว คำอธิบายหนึ่งอาจเป็นการเปลี่ยนแปลงองค์ประกอบของกรดอะมิโนในอาหารระหว่างการศึกษาทั้งสอง ไลซีนและเมไทโอนีนซึ่งเป็นกรดอะมิโนหลักที่จำกัดการเจริญเติบโต 2 ชนิดในการศึกษานี้สูงกว่าในครั้งก่อน และระดับกรดอะมิโนเหล่านี้ในอาหารต่ำกว่าปกติส่งผลให้การกักเก็บไนโตรเจน กรดอะมิโน และไกลซีนลดลง [29,30] . ผลลัพธ์ปัจจุบันสอดคล้องกับการศึกษาก่อนหน้าเกี่ยวกับปลานิล [8] และปลากะพงปากกว้าง [9] ที่การเสริมไกลซีนในอาหารได้ปรับปรุงการเจริญเติบโตของปลา แม้ว่าจะสามารถสังเคราะห์กรดอะมิโนที่ไม่จำเป็นในร่างกายปลาได้ แต่อัตราการสังเคราะห์อาจไม่เพียงพอต่อความต้องการทางชีวภาพ ดังนั้น ประสิทธิภาพการเจริญเติบโตที่ดีขึ้นในการบำบัดด้วยไกลซีนในการศึกษาปัจจุบัน อาจเนื่องมาจากความพร้อมใช้ของไกลซีนที่สูงขึ้นเพื่อตอบสนองความต้องการในการเจริญเติบโตและการบำรุงรักษา

การศึกษาทางโลหิตวิทยาทำให้เห็นถึงสุขภาพของปลาและสถานะการระดมก๊าซ การลดลงของจำนวน RBC และปริมาณฮีโมโกลบินขัดขวางการเติมออกซิเจนของเนื้อเยื่อและการกวาดล้างคาร์บอนไดออกไซด์ [31] ดังนั้น จึงมีงานวิจัยหลายชิ้นที่ประเมินบทบาทของการปรับโภชนาการ [32–34] รวมถึงการเสริมกรดอะมิโน [35–37] เกี่ยวกับพารามิเตอร์ทางโลหิตวิทยาในปลาชนิดต่างๆ ไม่ค่อยมีใครรู้เกี่ยวกับบทบาทของไกลซีนในพารามิเตอร์ทางโลหิตวิทยาในปลา การศึกษาเกี่ยวกับปลาดุกแชนเนล Ictalurus punctatus เปิดเผยว่า RBC ทำหน้าที่ขนส่งไกลซีนเข้าสู่ไซโตพลาสซึม ซึ่งสามารถนำไปใช้ในการสังเคราะห์กลูตาไธโอน [15] ดังที่สังเกตได้ในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม [17] เนื่องจากการมีอยู่ของฮีโมโกลบิน RBCs อยู่ในภาวะคุกคามอย่างต่อเนื่องของการเกิดออกซิเดชัน และกลูตาไธโอนมีบทบาทสำคัญในการป้องกันความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันของ RBC [15]

จากผลลัพธ์ปัจจุบัน การปรับปรุงค่าพารามิเตอร์ของสารต้านอนุมูลอิสระที่เกี่ยวข้องกับกลูตาไธโอน (การเพิ่มปริมาณ GSH และการลดลงของกิจกรรม GR) สามารถทำให้จำนวน RBC สูงขึ้นและความต้านทานต่อการแตกของเม็ดเลือดแดงในปลาที่ได้รับไกลซีน มีการเปิดเผยว่าเม็ดเลือดแดงของปลามีความไวต่อสภาวะออกซิเดชันมาก ซึ่งจะทำให้ปริมาณ GSH ลดลงอย่างมาก (ซึ่งเป็นผลมาจากการเกิดออกซิเดชัน) และการเพิ่มขึ้นของ GPx, การเกิด lipid peroxidation และภาวะเม็ดเลือดแดงแตก [38–40] ไม่มีการเปลี่ยนแปลงในกิจกรรม GPx ในการศึกษานี้บ่งชี้ว่าอาจไม่มีความแตกต่างกันในสภาวะออกซิเดชันระหว่างการรักษา ดังนั้น ปริมาณ GSH ที่สูงขึ้นในทรีตเมนต์ 5 GL และ 10 GL อาจเกิดจากการสังเคราะห์กลูตาไธโอนที่ดีขึ้นภายใต้ความพร้อมใช้งานของไกลซีน การสังเคราะห์ GSH ที่เพิ่มขึ้นสามารถเติมเต็มความต้องการทางชีวภาพของเซลล์ได้ ดังนั้นจึงไม่จำเป็นต้องรีไซเคิล GSSG อีกต่อไป ซึ่งจะอธิบายถึงการลดลงของกิจกรรม GR ในการบำบัด 5 GL และ 10 GL

เม็ดเลือดขาวเป็นเซลล์ภูมิคุ้มกันที่สำคัญซึ่งมีหน้าที่หลากหลายซึ่งช่วยโฮสต์ต่อสู้กับเชื้อโรคต่างประเทศ [41] การเพิ่มขึ้นของ WBC หลังจากการเสริมอาหารพบว่าเพิ่มความต้านทานโรคในปลาชนิดต่างๆ [42,43] เกี่ยวกับไกลซีน การเสริมอาหารพบว่าเพิ่ม WBC ในเบลูกา [10] ซึ่งคล้ายกับผลลัพธ์ปัจจุบัน นิวโทรฟิลเป็นเม็ดเลือดขาวชนิดแรกที่ปกป้องเมื่อปลาเผชิญกับการโจมตีของเชื้อโรค พวกมันฆ่าเชื้อโรคโดยฟาโกไซโทซิส ซึ่งนำไปสู่การสร้างโมเลกุลปฏิกิริยา [44] โมโนไซต์เป็นเซลล์ภูมิคุ้มกันอื่นๆ ที่มีฟังก์ชันฟาโกไซติก [45]

เนื่องจากเซลล์เหล่านี้ผลิตโมเลกุลโปรออกซิแดนท์หลายชนิด พวกเขาต้องการระบบต้านอนุมูลอิสระที่แข็งแกร่งเพื่อความอยู่รอด การศึกษาเกี่ยวกับเซลล์ของมนุษย์ได้เปิดเผยว่ากลูตาไธโอนมีความจำเป็นอย่างยิ่งต่อความมีชีวิตและการทำงานของนิวโทรฟิลและโมโนไซต์ [46,47] แต่มีข้อมูลจำกัดเกี่ยวกับหัวข้อนี้ในปลา การศึกษาเกี่ยวกับปลาคาร์พพบว่าปริมาณกลูตาไธโอนเพิ่มขึ้นในนิวโทรฟิลในระหว่างการกระตุ้นเซลล์ทำลายเซลล์หรือไลโปโพลีแซคคาไรด์ [48] การสัมผัส monocytes ของปลานิลกับสารโปรออกซิแดนท์ (อนุภาคนาโนทองแดง) ทำให้เกิดการตายแบบอะพอพโทซิส ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน และการลดลงของปริมาณ GSH [45]

ดังนั้นจึงสันนิษฐานได้ว่านิวโทรฟิลในเลือดและจำนวนโมโนไซต์ที่สูงขึ้น/เปอร์เซ็นต์ในปลาที่ได้รับไกลซีนในการศึกษานี้เป็นผลมาจากการปรับปรุงเนื้อหา GSH ของเซลล์ อย่างไรก็ตาม ไกลซีนไม่มีผลกระทบที่มีนัยสำคัญต่อประชากรลิมโฟไซต์ในเลือด และการลดลงของเปอร์เซ็นต์ลิมโฟไซต์ในปลาที่ได้รับไกลซีนเป็นผลมาจากการเพิ่มขึ้นของเปอร์เซ็นต์ของเม็ดเลือดขาวชนิดอื่นๆ ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าการเสริมไกลซีนในอาหารช่วยเพิ่มความแข็งแรงของระบบภูมิคุ้มกันโดยกำเนิด

ไลโซไซม์ทำหน้าที่เป็นสารฆ่าเชื้อแบคทีเรียที่หลั่งออกมาโดยนิวโทรฟิลในเลือดในการไหลเวียน [49] ดังนั้นจึงสันนิษฐานว่าการเพิ่มขึ้นของไลโซไซม์ในพลาสมาในปลาที่ได้รับไกลซีนเกิดจากการเพิ่มขึ้นของจำนวนนิวโทรฟิลในเลือดหรือการผลิตไลโซไซม์ของพวกมัน ในทำนองเดียวกัน การเพิ่มขึ้นของกิจกรรมไลโซไซม์ในพลาสมามาพร้อมกับการเพิ่มขึ้นของประชากรนิวโทรฟิลในเลือด หลังจากเพิ่มสารปรุงแต่งอาหารต่างๆ ลงในอาหารปลา [50,51]

คล้ายกับการศึกษาในปัจจุบัน การเสริมไกลซีนในอาหารได้เพิ่มกิจกรรมไลโซไซม์ในพลาสมาอย่างมีนัยสำคัญในปลาเบลูกา [10] และปลาคาร์พทั่วไป [11] ระบบคอมพลีเมนต์ทำหน้าที่เป็นตัวฆ่าเชื้อโรคและต่อต้านเชื้อโรคในปลาซึ่งประกอบด้วยโปรตีนหลายชนิดที่ผลิตในตับ [52] การเสริมไกลซีนในอาหารพบว่าเพิ่มกิจกรรม ACH50 ในพลาสมาในเบลูกา [10]; อย่างไรก็ตาม ระยะเวลาสั้นๆ ของการให้อาหารที่มีไกลซีนเสริมทำให้ไม่มีการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญในกิจกรรมของพลาสมา ACH50 ในปลาคาร์พทั่วไป [11] กลไกที่แน่ชัดโดยที่ไกลซีนช่วยปรับปรุงการทำงานของ ACH50 ในพลาสมานั้นยังไม่ชัดเจน แต่ GSH อาจมีส่วนช่วย เนื่องจากการเสริมกลูตาไธโอนในอาหารได้เพิ่มความเข้มข้นของโปรตีนเสริมในน้ำเลือดของปูนวม Eriocheir sinensis อย่างมีนัยสำคัญ ซึ่งอาจเป็นผลจากสุขภาพของตับอ่อนที่สูงขึ้น และการสังเคราะห์โปรตีนที่เกิดจากความพร้อมใช้งานของ GSH [53]

ดังนั้นจึงสันนิษฐานว่าไกลซีนในอาหารสามารถเพิ่มความเข้มข้นของ GSH ซึ่งอาจทำให้กิจกรรมของ ACH50 สูงขึ้นในการศึกษานี้ ยิ่งไปกว่านั้น สารโพรดีดินซึ่งเป็นโมเลกุลที่อุดมด้วยไกลซีนซึ่งควบคุมการทำงานของคอมพลีเมนต์ ได้รับการระบุในเนื้อเยื่อต่างๆ ของปลา เช่น ตับ ผิวหนัง นิวโทรฟิล และโมโนไซต์ [54,55] โมเลกุลนี้ได้รับการระบุในปลาคาร์พทั่วไป [56] ดังนั้นจึงสันนิษฐานว่าความพร้อมใช้ของไกลซีนอาจสนับสนุนการผลิตโพรพิลีนที่สูงขึ้นและเพิ่มกิจกรรม ACH50 ในการศึกษาปัจจุบัน

ภูมิคุ้มกันของเยื่อเมือกผิวหนังมีความสำคัญมากในการป้องกันโรคในการเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ เนื่องจากน้ำทำหน้าที่เป็นตัวนำเชื้อโรคหลักและภูมิคุ้มกันของเยื่อเมือกที่แข็งแรงสามารถป้องกันไม่ให้เชื้อโรคเข้าสู่ปลาใหม่ได้ [57] ไลโซไซม์เยื่อบุผิวทำหน้าที่เป็นสารฆ่าเชื้อแบคทีเรีย คล้ายกับไลโซไซม์ในพลาสมา [49] โปรตีเอสในเมือกที่ผิวหนังจะฆ่าเชื้อโรค ลดความสมบูรณ์ของเมือก เพิ่มการลอกของชั้นเมือก และกระตุ้นพารามิเตอร์ภูมิคุ้มกันอื่นๆ [58] เปอร์ออกซิเดสเยื่อเมือกของผิวหนังมีส่วนร่วมในการสร้างเปอร์ออกซิเดส– H2O2–ฮาไลด์คอมเพล็กซ์ ซึ่งเป็นสารฆ่าเชื้อแบคทีเรียและพิษต่อเซลล์ที่รุนแรง [58] กิจกรรมของ ALP ในเมือกของผิวหนังสามารถล้างพิษสารก่อการอักเสบที่สร้างขึ้นโดยจุลินทรีย์ [59] ไม่มีการศึกษาที่คล้ายคลึงกันสำหรับการเปรียบเทียบ แต่ผลการวิจัยในปัจจุบันชี้ให้เห็นว่าการเสริมไกลซีนในอาหารสามารถปรับปรุงภูมิคุ้มกันของเยื่อเมือกในปลาคาร์พทั่วไปได้

5. สรุปผลการวิจัย

โดยสรุปแล้ว การเสริมไกลซีนในอาหารสามารถรองรับการสังเคราะห์ GSH ซึ่งช่วยเพิ่มความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระและความต้านทานต่อการแตกของเม็ดเลือดแดงใน RBC นอกจากนี้ การเสริมไกลซีนในอาหารจะเพิ่มจำนวนนิวโทรฟิลในเลือดและโมโนไซต์ ซึ่งอาจเนื่องมาจากบทบาทการป้องกันของ GSH ในเซลล์เหล่านี้ ที่น่าสนใจคือ ไกลซีนสามารถปรับปรุงการมองเห็นเข้าสู่ร่างกายของปลาได้ จากประโยชน์เหล่านี้ แนะนำให้เสริมไกลซีน 5 ก./กก. สำหรับการเสริมอาหารปลาคาร์พทั่วไป

ผลงานของผู้เขียน:

การสร้างแนวคิด ATM, SMH และ HVD; วิธีการ MA และ HR; ซอฟต์แวร์ SHH; การวิเคราะห์ทางการ SHH และ SMH; การสอบสวน MA และ SMH; การจัดการข้อมูล ATM; การเขียน—การเตรียมร่างต้นฉบับ MA และ SMH; การเขียน—ตรวจทานและแก้ไข, SMH; การสร้างภาพ, HR; การกำกับดูแล SMH; การบริหารโครงการ, ATM, SMH; การได้มาซึ่งเงินทุน HVD ผู้เขียนทุกคนได้อ่านและยอมรับต้นฉบับที่เผยแพร่แล้ว

เงินทุน:

ไม่ได้รับเงินทุนสำหรับการศึกษานี้

คำชี้แจงของคณะกรรมการพิจารณาสถาบัน:

โปรโตคอลการศึกษาในสัตว์ได้รับการอนุมัติโดย Institutional Review Board of Inland Waters Aquatics Resources Research Center (ET.CG/2; 9 กันยายน 2021)" สำหรับการศึกษาที่เกี่ยวข้องกับสัตว์

คำชี้แจงความยินยอมที่ได้รับการบอกกล่าว:

ไม่สามารถใช้ได้.

คำชี้แจงความพร้อมใช้งานของข้อมูล:

ข้อมูลของการศึกษานี้มีให้ตามคำขอจากผู้เขียนที่เกี่ยวข้อง

กิตติกรรมประกาศ:

งานวิจัยนี้ได้รับการสนับสนุนบางส่วนจากมหาวิทยาลัยเชียงใหม่

ผลประโยชน์ทับซ้อน:

ผู้เขียนประกาศว่าไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์

อ้างอิง

1. ไม, พ.; Xue, ม.; เขา, G.; เซี่ย, SQ; Kaushik, SJ บทที่ 4— โปรตีนและกรดอะมิโน ใน โภชนาการปลา , 4th ed.; ฮาร์ดี, RW, Kaushik, SJ, Eds.; สื่อวิชาการ: Oxford, UK, 2022; หน้า 181–302.

2. ลี่พี; เชียงใหม่ แคนซัส; Trushenski, J.; Wu, GY พัฒนาการใหม่ในโภชนาการกรดอะมิโนของปลา: สู่อาหารสัตว์น้ำเชิงหน้าที่และเป็นมิตรกับสิ่งแวดล้อม กรดอะมิโน. 2552, 37, 43–53. [ครอสรีฟ] [PubMed]

3. โฮซินี่ เอสเอ็ม; รีเวอร์เตอร์, ม. ผลส่งเสริมสุขภาพของกรดอะมิโนในปลา. ในความก้าวหน้าทางเทคโนโลยีชีวภาพในการจัดการสุขภาพสัตว์น้ำ; คุปตะ, SK, Giri, SS, Eds.; สปริงเกอร์ สิงคโปร์: สิงคโปร์ 2564; หน้า 493–533.

4. หลี่ พี; Wu, G. บทบาทของ glycine, proline และ hydroxyproline ในอาหารในการสังเคราะห์คอลลาเจนและการเจริญเติบโตของสัตว์ กรดอะมิโน. 2018, 50, 29–38. [ครอสรีฟ] [PubMed]

5. เปเรซ-ตอร์เรส, I.; María Zuniga-Munoz, A.; Guarner-Lans, V. ผลประโยชน์ของกรดอะมิโนไกลซีน มินิ รายได้แพทย์ เคมี 2017, 17, 15–32. [ครอสรีฟ] [PubMed]

6. คู, ท.-ส.; วู, J.-H.; เฉิน X.-W.; เฉิน, Z.-G.; เจิ้งเจ; Peng, B. ไกลซีนจากภายนอกส่งเสริมการเกิดออกซิเดชันของกลูตาไธโอนและคืนค่าความไวของแบคทีเรียก่อโรคต่อการตายของเซลล์ที่เกิดจากซีรั่ม รีดอกซ์ไบโอล 2022, 58, 102512. [CrossRef]

7. หยาง D.-X.; ยาง, M.-J.; หยิน, ย.; คู, ท.-ส.; เป้ง, ล.-ต.; เฉิน, Z.-G. เมแทบอลิซึมของซีรีนจะปรับการตอบสนองของภูมิคุ้มกันเพื่อส่งเสริมการรอดชีวิตของ Oreochromis niloticus จากการติดเชื้อ Edwardsiella tarda เอ็มซิสเต็มส์. 2021, 6, จ00426-21 [ครอสรีฟ]

8. Xie, S.; โจว ว.; เทียน, ล.; นิว เจ; Liu, Y. ผลของการเสริม N-acetyl cysteine ​​และ glycine ต่อประสิทธิภาพการเจริญเติบโต การสังเคราะห์กลูตาไธโอน ความสามารถในการต่อต้านอนุมูลอิสระและภูมิคุ้มกันของปลานิล Oreochromis niloticus ปลา หอย. อิมมูนอล 2559, 55, 233–241. [ครอสรีฟ]

9. รอสซี ดับบลิว จูเนียร์; อัลเลน กมธ.; Habte-Tsion, H.-M.; มีศาลา, K.-M. การเสริมไกลซีน พรีไบโอติก และนิวคลีโอไทด์ในอาหารที่ทำจากกากถั่วเหลืองสำหรับปลากะพงปากกว้าง (Micropterus salmoides): ผลกระทบต่อประสิทธิภาพการผลิต องค์ประกอบและการเก็บรักษาสารอาหารทั้งร่างกาย และจุลพยาธิวิทยาของลำไส้ การเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ พ.ศ. 2564, 532, 736031. [CrossRef]

10. โฮซินี่ เอสเอ็ม; โมแกดดัม เอเอ ; Ghelichpour, ม.; ปะเก๊ะ, อี; ฮากปานาห์, อ.; Gharavi, B. การเสริมไกลซีนในอาหารจะปรับการตอบสนองของสารต้านอนุมูลอิสระและภูมิคุ้มกันของ beluga, Huso huso, เด็กและเยาวชน อควา ตัวแทน 2022, 23, 101026 [CrossRef]

11. โฮซินี่ เอสเอ็ม; เพาลุชชี ม.; อาร์กิเดห์ ม.; Hosseinpour Delavar, F.; ซาฟวาร์ เอฟ; Hoseinifar, SH ผลของการบริหารไกลซีนในอาหารต่อการตอบสนองทางชีวเคมีต่อความเป็นพิษของแอมโมเนียในปลาคาร์พสามัญ Cyprinus carpio อควา ความละเอียด 2022, 53, 2185–2194. [ครอสรีฟ]

12. โฮซินี่ เอสเอ็ม; มาจิดิยัน, น.; เมียร์กาเอด ; โฮซินิฟาร์, เชอรีน; Van Doan, H. การเสริมไกลซีนในอาหารช่วยลดความเครียดที่เกิดจากการขนส่งในปลาคาร์พทั่วไป Cyprinus carpio การเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ. 2022, 551, 737959 [CrossRef]

13. หลี่ พี; หยิน, ย. - ล.; ลี่, ด.; Woo Kim, S.; Wu, G. กรดอะมิโนและการทำงานของภูมิคุ้มกัน บร. เจ นัท 2550, 98, 237–252. [ครอสรีฟ]

14. จิ, ย.; แฟน, X.; จาง วาย; หลี่ เจ; ได, Z.; Wu, Z. Glycine ควบคุมภูมิคุ้มกันของเยื่อเมือกและองค์ประกอบของจุลินทรีย์ในลำไส้ในลูกสุกรหย่านม กรดอะมิโน. พ.ศ. 2564, 54, 385–398. [ครอสรีฟ] [PubMed]

15. แองเกอไมเยร์, เอสเอ็ม; เชพเพิร์ด, แมริแลนด์; Tunnicliff, G. Glycine ขนส่งโดยเซลล์สีแดงของปลาดุกแชนเนล สามารถ. เจ. โซล. 2539, 74, 688–692. [ครอสรีฟ]

16. คิม KM; คิงส์มอร์ เอสเอฟ ; ฮัน เอช; หยางเฟิง TL; Godinot, N.; Seldin, MF การโคลนของตัวขนส่งไกลซีนของมนุษย์ประเภทที่ 1: ลักษณะทางโมเลกุลและเภสัชวิทยาของตัวแปรไอโซฟอร์มใหม่และการแปลโครโมโซมของยีนในจีโนมมนุษย์และเมาส์ โมล ยา 2537, 45, 608.

17. เหมันต์ ม.; ฉุน, เจ; เคอเนอร์, อ.; อัลเบราติ, D.; คริสเตน เอฟ.; Schmitt, G. ผลของการยับยั้ง GlyT1 ต่อการสร้างเม็ดเลือดแดงและสภาวะสมดุลของธาตุเหล็กในหนู ประสบการณ์ ฮีมาทอล 2016, 44, 964–974.e4. [ครอสรีฟ]

18. ดาซี่ เจ; Lewis, S. โลหิตวิทยาเชิงปฏิบัติ; เชอร์ชิลล์และลิฟวิงสตัน: ลอนดอน สหราชอาณาจักร 2539

19. Ellis, AE Lysozyme ตรวจสอบ ในเทคนิคภูมิคุ้มกันวิทยาของปลา; ถูกขโมย JS เอ็ด; สิ่งพิมพ์ SOS: Fair Haven, NJ, USA, 1990; หน้า 101–103.

20. Yano, T. การทดสอบกิจกรรมเสริม hemolytic ในเทคนิคภูมิคุ้มกันวิทยาของปลา; ถูกขโมย JS เอ็ด; สิ่งพิมพ์ SOS: Fair Haven, NJ, USA, 1992; หน้า 131–141

21. ซีวิกกี้ อ.; Anderson, D. การทดสอบกลไกการป้องกันที่ไม่เฉพาะเจาะจงในปลา: II. กิจกรรมการฆ่าที่เป็นไปได้ของนิวโทรฟิลและแมคโครฟาจ กิจกรรมของไลโซไซม์ในซีรัมและอวัยวะ และระดับอิมมูโนโกลบูลินทั้งหมดในซีรั่ม ใน วิธีการวินิจฉัยและป้องกันโรคปลา ; Siwicki, A., Anderson, D., Waluga, J., Eds.; Wydawnictwo Instytutu Rybactwa Srodladowego: Olsztyn โปแลนด์ 2536; หน้า 105–112.

22. ยูเซฟ เอ็ม; โฮซีนี เอสเอ็ม; วัทนิคอฟ, ย.; นิกิชอฟ, เอเอ ; Kulikov, EV Thymol เป็นยาชาชนิดใหม่ในปลาคาร์พทั่วไป (Cyprinus carpio): ประสิทธิภาพและผลกระทบทางสรีรวิทยาเมื่อเปรียบเทียบกับยูจีนอล การเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ พ.ศ. 2561, 495, 376–383. [ครอสรีฟ]

23. เกา, Y.-J.; หลิว, ย.-จ.; เฉิน X.-Q.; ยาง, H.-J.; หลี่, X.-F.; เทียน, แอล.-เอ็กซ์. ผลของระดับฮิสทิดีนแบบแบ่งระดับต่อประสิทธิภาพการเจริญเติบโต กิจกรรมของเอนไซม์ย่อย ความเปราะบางของเม็ดเลือดแดง และความทนทานต่อการขาดออกซิเจนของปลาตะเพียนหญ้าวัยอ่อน Ctenopharyngodon idella การเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ พ.ศ. 2559, 452, 388–394. [ครอสรีฟ]

24. Bradford, MM วิธีการที่รวดเร็วและละเอียดอ่อนสำหรับการวัดปริมาณโปรตีนในระดับไมโครกรัมโดยใช้หลักการจับกับโปรตีนและสีย้อม ไบโอเคมีทางทวารหนัก 2519, 72, 248–254. [ครอสรีฟ]

25. ควอด, เอ็มเจ; Roth, JA การทดสอบโดยตรงอย่างรวดเร็วเพื่อวัดการสลายตัวของแกรนูลปฐมภูมินิวโทรฟิลของวัว เวทอิมมูนอล. อิมมูโนพาทอล 2540, 58, 239–248. [ครอสรีฟ]

26. จาง, W.-W.; หู, ย.-ฮ.; วัง, H.-L.; Sun, L. การระบุและลักษณะของโปรตีเอสที่เกี่ยวข้องกับความรุนแรงจากสายพันธุ์ Pseudomonas fluorescens ที่ทำให้เกิดโรค เวทไมโครไบโอล. 2552, 139, 183–188. [ครอสรีฟ]

27. โฮซีนิฟาร์, เชอรีน; Roosta, ซี; ฮาจิมอราดลู, อ.; Vakili, F. ผลกระทบของแลคโตบาซิลลัส แอซิโดฟิลัสในฐานะอาหารเสริมต่อพารามิเตอร์ภูมิคุ้มกันของเยื่อเมือกของผิวหนัง, จุลินทรีย์ในลำไส้, การต้านทานความเครียด และการเจริญเติบโตของหางดาบสีดำ (Xiphophorus helleri) ปลา หอย อิมมูนอล. 2558, 42, 533–538. [ครอสรีฟ] [PubMed]

28. ฟู ซี; ชุย, วาย.; ฮุง, สส.; Zhu, Z. รูปแบบกรดอะมิโนทั่วร่างกายของ F4 ฮอร์โมนการเจริญเติบโตของมนุษย์ ยีน-ปลาคาร์พสามัญสีแดงดัดแปรพันธุกรรม (Cyprinus carpio) เลี้ยงด้วยอาหารที่มีระดับโปรตีนต่างกัน การเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ พ.ศ. 2543, 189, 287–292. [ครอสรีฟ]

29. กัน, ล.; หลิว, วายเจ; เทียน แอลเอ็กซ์; ยู, YR; ยาง เอชเจ ; Liu, FJ ผลของออกซิเจนละลายน้ำและระดับไลซีนในอาหารต่อประสิทธิภาพการเจริญเติบโต อัตราส่วนการเปลี่ยนอาหาร และส่วนประกอบของร่างกายปลาคาร์พหญ้า Ctenopharyngodon idella เพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ. นัท 2013, 19, 860–869. [ครอสรีฟ]

30. หยุน ย.; เพลง, D.; เขา Z.; มิ, เจ; วัง, ล.; Nie, G. ผลของการเสริมเมไทโอนีนในอาหารโปรตีนจากพืชต่อประสิทธิภาพการเจริญเติบโตและคุณภาพเนื้อของปลาคาร์พแม่น้ำเหลืองวัยอ่อน (Cyprinus carpio haematopterus) การเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ พ.ศ. 2565, 549, 737810. [CrossRef]

31. Fazio, F. การวิเคราะห์โลหิตวิทยาของปลาในฐานะเครื่องมือสำคัญของการเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ: บทวิจารณ์ การเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ พ.ศ. 2562, 500, 237–242. [ครอสรีฟ]

32. โมห์เซนี ม.; ฮามิโดลี, อ.; Bai, SC สังกะสีในอาหารอินทรีย์และอนินทรีย์ในปลาสเตอร์เจียนเบลูกา (Huso huso): ผลต่อการเจริญเติบโต โลหิตวิทยา ความเข้มข้นของเนื้อเยื่อ และความสามารถในการออกซิเดชัน การเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ พ.ศ. 2564, 539, 736672. [CrossRef]

33. โมห์เซนี ม.; ซัลทาแนต, NL; ราสตราวัน, เมน; Golalipour, Y. ผลของการเสริมเบทาอีนในอาหารที่มีโปรตีนจากพืชเป็นพื้นฐานต่อประสิทธิภาพการเจริญเติบโต พารามิเตอร์ของเม็ดเลือดและภูมิคุ้มกัน สถานะของสารต้านอนุมูลอิสระ และกิจกรรมของเอนไซม์ย่อยอาหารของปลาเทราท์แคสเปียนเด็กและเยาวชน เพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ. นัท พ.ศ. 2564, 27, 2132–2141 [ครอสรีฟ]

34. อัฟทับการ์ด ม.; ซาลาซาเดห์ อ.; Mohseni, ม.; บาห์รี ชาบานิปูร์ อาห์; Zorriehzahra, MEJ ประสิทธิภาพร่วมกันของไอโซมอลทูโอลิโกแซ็กคาไรด์ในอาหาร และ Bacillus spp. ต่อการเจริญเติบโต ดัชนีจุลชีพทางซีรั่มในเลือด และลำไส้ของปลาเทราต์สีน้ำตาลแคสเปี้ยน (Salmo trutta caspius Kessler, 1877) โปรไบโอติกต้านจุลชีพ โปรตีน 2019, 11, 198–206. [ครอสรีฟ]

35. มิเคลาโต้ ม.; ซามินฮัน ม.; บอสโคโล ดับบลิวอาร์ ; Nogaroto, V.; วิคารี ม.; Artoni, RF ความต้องการฮีสทิดีนในอาหารของลูกปลานิลตามประสิทธิภาพการเจริญเติบโต การแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องกับการเจริญเติบโตของกล้ามเนื้อ และการตอบสนองทางโลหิตวิทยา การเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ พ.ศ. 2560, 467, 63–70. [ครอสรีฟ]

36. มาชาโด ม.; อาเซเรโด อาร์; ฟอนตินญา เอฟ; เฟอร์นันเดซ-บู เอส; คอนเซเซา, LEC; Dias, J. เมไทโอนีนในอาหารช่วยปรับปรุงสถานะภูมิคุ้มกันของปลากะพงขาว (Dicentrachus labrax) การตอบสนองการอักเสบ และความต้านทานโรค ด้านหน้า. อิมมูนอล 2018, 9, 2672 [CrossRef]

37. ชาร์ฟ, วาย.; Khan, MA ความต้องการของนิ้วปลา Channa punctatus (Bloch) สำหรับไลซีนในอาหารตามการเจริญเติบโต การเปลี่ยนอาหาร และประสิทธิภาพการเก็บไลซีน อัตราส่วน RNA/DNA พารามิเตอร์ทางโลหิตวิทยา และฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระในซีรั่ม เพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ. นัท 2021, 27, 140–150. [ครอสรีฟ]

38. ลี่, H.-T.; ฮ, ล.; เจียง ว.-ด.; หลิว วาย; เจียง เจ; Li, S.-H. พารามิเตอร์ความเครียดออกซิเดทีฟและการตอบสนองต้านการตายของเซลล์ต่ออนุมูลไฮดรอกซิลในเม็ดเลือดแดงของปลา: ผลการป้องกันของกลูตามีน อะลานีน ซิทรูลีน และโพรลีน น้ำ สารพิษ 2556, 126, 169–179. [ครอสรีฟ] [PubMed]

39. Gwo´zdzi ´ski, K.; โรช, เอช; Pérès, G. การเปรียบเทียบผลกระทบของไอออนโลหะหนักต่อกิจกรรมของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระในเม็ดเลือดแดง Dicentrachus labrax ของมนุษย์และปลา คอมพ์ ชีวเคมี ฟิสิโอล ส่วน C เปรียบเทียบ ยา 2535, 102, 57–60. [ครอสรีฟ] [PubMed]

40. แจนส์เซ่น, บีเจ; เลอ กัลล์, ร.; Rees, JF Peroxide-triggered erythrocytes hemolysis เป็นแบบจำลองสำหรับการศึกษาความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่นในปลาทะเล เจ. ฟิชไบโอล. 2545, 61, 71–84. [ครอสรีฟ]

41. ไมซีย์ เค; Imarai, M. ความหลากหลายของโมเลกุลเม็ดเลือดขาว teleost: บทบาทของการประกบทางเลือก ปลา หอย อิมมูนอล. 2554, 31, 663–672. [ครอสรีฟ] [PubMed]

42. คอค เจเอฟเอ; เดอ Oliveira, CAF; Zanuzzo, FS Dietary -glucan (MacroGard®) ปรับปรุงการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันโดยกำเนิดและความต้านทานโรคในปลานิลโดยไม่คำนึงถึงระยะเวลาการบริหาร ปลา หอย อิมมูนอล. พ.ศ. 2564, 112, 56–63. [ครอสรีฟ]

For more information:1950477648nn@gmail.com