ผลของโพลิแซ็กคาไรด์ดิบจาก Cistanche Deserticola ต่อโรคปากและเท้าเปื่อย แอนติบอดีไวรัสและกลุ่มย่อยทีเซลล์

ติดต่อ: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

จางอ้ายเหลียน; BA Xue-li; วัง ด่านยาง; จ้าวปิง

โรคมือเท้าปาก (FMD)เป็นโรคที่เกิดจากไวรัสโรคปากและเท้าเปื่อย (FMDV)ที่แพร่กระจายในหมู่สัตว์ที่มีกีบเท้าซึ่งเป็นอันตรายต่อสุขภาพของปศุสัตว์อย่างจริงจังและก่อให้เกิดความสูญเสียทางเศรษฐกิจอย่างมาก การฉีดวัคซีนเป็นวิธีที่มีประสิทธิภาพในการป้องกันโรคปากเท้าเปื่อยและได้ผลลัพธ์ที่น่าทึ่ง เนื่องจากภูมิคุ้มกันที่อ่อนแอของไวรัสโรคปากและเท้าเปื่อยทำให้แอนติเจนหยุดทำงาน จึงมักจำเป็นต้องเพิ่มสารเสริมเพื่อให้มีบทบาท [1-2] ในปัจจุบัน วัคซีนเสริมที่ใช้กันทั่วไปในวัคซีนโรคปากและเท้าเปื่อยในเชิงพาณิชย์คือ อิมัลชันน้ำมัน ISA-206 ซึ่งเป็นตัวกระตุ้นของเซลล์ และยังสามารถเพิ่มการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของร่างกาย แต่ผลข้างเคียงของมันค่อนข้างมาก แม้ว่าจะมีสารเสริมหลายชนิด เช่น สารเสริมที่ใช้กันทั่วไป (สารเสริมเกลืออลูมิเนียม อิมัลชันน้ำน้ำมัน ฯลฯ) และสารเสริมชนิดใหม่ (MF59, พอลิแซ็กคาไรด์จากพืช เป็นต้น) สารเสริมที่ใช้สำหรับวัคซีนโรคปากเท้าเปื่อย ยังคงมีอยู่อย่างจำกัด โดยส่วนใหญ่รวมถึงอะลูมิเนียมไฮดรอกไซด์ ช่วง Span น้ำมันแร่เบา ฯลฯ ทั้งหมดมีข้อบกพร่องที่แตกต่างกัน เช่น ผลภูมิคุ้มกันที่ไม่น่าพอใจ หรือพิษสูงและผลข้างเคียง [3-4] ดังนั้นจึงมีความจำเป็นเร่งด่วนในการพัฒนาวัคซีนป้องกันโรคปากและเท้าเปื่อยที่มีประสิทธิภาพสูง มีความเป็นพิษต่ำ เพื่อปรับปรุงผลการป้องกันภูมิคุ้มกันของวัคซีน ซึ่งมีความสำคัญในเชิงบวกต่อการป้องกันและรักษาโรคปากเท้าเปื่อย.

ยาจีนสมุนไพร มีโอกาสนำไปใช้อย่างกว้างขวางในการป้องกันและรักษาโรคติดเชื้อ ยาสมุนไพรจีนมีประวัติการรักษาโรคของมนุษย์และสัตว์มาอย่างยาวนาน ในด้านการวิจัยวัคซีนเสริม นักวิจัยในประเทศและต่างประเทศได้สกัดพอลิแซ็กคาไรด์จากยาสมุนไพรจีนหลายชนิดเพื่อศึกษาฤทธิ์เสริมของยาเหล่านี้ เช่น โพลิแซ็กคาไรด์โสม โพลิแซ็กคาไรด์ แอสตรากาลัส พอลิแซ็กคาไรด์ tuckahoe polysaccharides epimedium polysaccharides เป็นต้น และพบว่ามี ฟังก์ชั่นภูมิคุ้มกันของมนุษย์และสัตว์ มีผลในการเลื่อนตำแหน่งที่ดีและกลายเป็นผู้ช่วยคนใหม่ [5-7]

Cistanche (Cistanche deserticola YCMa)เป็นพืชในวงศ์แดง เป็นยาสมุนไพรจีนบำรุงที่ใช้กันทั่วไปและถูกนำมาใช้เป็นอาหารบำรุงสำหรับการบริโภคในระยะยาวของผู้คน ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา นักวิจัยได้ทำการวิจัยเกี่ยวกับโครงสร้างทางเคมีและฤทธิ์ทางเภสัชวิทยาของโพลิแซ็กคาไรด์จาก Cistanche เป็นจำนวนมาก และพบว่าส่วนผสมที่ออกฤทธิ์ของมันส่วนใหญ่ประกอบด้วยพอลิแซ็กคาไรด์ ฟีนิลลิทานอยด์ ไกลโคไซด์ อัลคาลอยด์ ฯลฯ ซึ่งเนื้อหาของโพลีแซคคาไรด์ประกอบด้วย ค่อนข้างสูงและสามารถปรับได้ ระบบภูมิคุ้มกันมีฤทธิ์ต้านออกซิเดชันและต่อต้านวัย [8-9]

Cistanche (Cistanche deserticola YCMa)

การศึกษาเบื้องต้นพบว่าการรวมกันของโพลีแซ็กคาไรด์ในทะเลทราย cistanche ดิบและหนูที่ได้รับวัคซีนป้องกัน OVA ช่วยเพิ่มระดับแอนติบอดีจำเพาะต่อ OVA อย่างมีนัยสำคัญ และความเข้ากันได้กับวัคซีนไข้หวัดใหญ่สามารถเพิ่มระดับแอนติบอดีของวัคซีนไข้หวัดใหญ่ได้ [10-11] ด้วยเหตุนี้ การศึกษานี้จึงใช้พอลิแซ็กคาไรด์ดิบของ Cistanche Deserticola เป็นสารเสริมสำหรับวัคซีนป้องกันโรคปากและเท้าเปื่อยที่ไม่ได้ใช้งาน และเลือกสารเสริมที่ละลายน้ำได้ซึ่งมีผลเสริมภูมิคุ้มกันที่สำคัญและมีผลข้างเคียงเพียงเล็กน้อย ดังนั้นโพลีแซ็กคาไรด์ดิบจาก Cistanche deserticola สามารถใช้เป็นยาเสริมใหม่สำหรับวัคซีนโรคปากและเท้าเปื่อยได้อย่างมีประสิทธิภาพ

การเตรียมตัวแทน

ในการศึกษาครั้งนี้โพลีแซ็กคาไรด์ดิบจาก Cistanche deserticola (CDCP)ถูกนำมารวมกับไวรัสโรคมือเท้าปากเพื่อเตรียมวัคซีน หนู ICR ได้รับภูมิคุ้มกันผ่านทางเส้นทางของกล้ามเนื้อ ตรวจพบผลกระทบของการสร้างภูมิคุ้มกันต่อการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของร่างกายและระดับเซลล์ของหนูทดลอง และสังเกตพบความปลอดภัย การพัฒนาวัคซีนเสริมชนิดใหม่ที่ปลอดภัยสำหรับวัคซีนโรคปากเท้าเปื่อยเป็นข้อมูลอ้างอิง

โพลีแซ็กคาไรด์ดิบจาก Cistanche deserticola

ผลของ Crude Polysaccharide จาก Cistanche deserticola (CDCP) ต่อระดับแอนติบอดีจำเพาะ FMDV ในซีรัม

ระดับของ IgG ในซีรัมมีแนวโน้มเพิ่มขึ้นทีละน้อยที่ 14 วัน 21 วันและ 28 วันหลังจากการระบาดครั้งแรก (รูปที่ 1) ในวันที่ 14 และ 21 วันหลังจากการสร้างภูมิคุ้มกันครั้งแรก ระดับแอนติบอดีของกลุ่ม FMDV Ag/CDCP สูงกว่ากลุ่มที่ปราศจากสารเสริม FMDV-Ag อย่างมีนัยสำคัญ (P<0.05), and="" there="" was="" no="" significant="" difference="" from="" the="" fmdv="" group="" (p="">0.05) ที่ 28 วันหลังจากการสร้างภูมิคุ้มกันครั้งแรก เมื่อเปรียบเทียบกับ FMDV-Ag ที่ไม่มีสารเสริม ระดับแอนติบอดี IgG ของ FMDV-Ag/CDCP เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (P<0.05), but="" it="" was="" extremely="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" fmdv/isa-206="" group=""><0.01). the="" antibody="" level="" of="" the="" fmdv-ag="" adjuvant-free="" group="" was="" significantly="" different="" from="" that="" of="" the="" 0.9%="" nacl="" control="" group=""><>

โพลีแซ็กคาไรด์ดิบจาก Cistanche deserticola (CDCP) ต่อการเพิ่มจำนวนของเซลล์เม็ดเลือดขาวม้าม

21 วันหลังจากการสร้างภูมิคุ้มกันครั้งแรก วิธี MTT ถูกใช้เพื่อตรวจหาผลการเพิ่มจำนวนของ Crude Polysaccharide จาก Cistanche Deserticola ต่อเซลล์เม็ดเลือดขาวม้าม ดังที่แสดงในรูปที่ 2 หลังจาก FMDV-Ag กระตุ้นเซลล์เม็ดเลือดขาวม้ามในหลอดทดลอง ดัชนีการกระตุ้นลิมโฟไซต์ของกลุ่ม FMDV-Ag/CDCP สูงกว่ากลุ่ม FMDV-Ag no adjuvant อย่างมีนัยสำคัญ (P<0.05), and="" compared="" with="" fmdv/isa-206="" there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" the="" groups="" (p="">0.05) หลังการกระตุ้นด้วย ConA และ LPS สามารถเพิ่มจำนวนของเซลล์เม็ดเลือดขาวม้าม (P<>

ผลของ Crude Polysaccharide จาก Cistanche deserticola (CDCP) ต่อการแสดงออกของ CD4 plus และ CD8 plus T cells

21 วันหลังจากการสร้างภูมิคุ้มกันครั้งแรก ผลของ CDCP และ FMDV-Ag ต่อ CD4 plus และ CD8 บวกทีเซลล์ในม้ามของหนูเมาส์ได้รับการทดสอบ ผลลัพธ์แสดงไว้ในรูปที่ 3-A D. อัตราส่วนของชุดย่อยของ CD3 plus , CD4 plus , CD3 plus , CD8 บวก T เซลล์ในกลุ่ม FMDV-Ag/CDCP สูงกว่าของสารเสริม FMDV-Ag อย่างมีนัยสำคัญ - กลุ่มฟรี (P<0.05), and="" compared="" with="" fmdv/isa-="" the="" difference="" between="" the="" 206="" groups="" was="" not="" significant="" (p="">0.05) กลุ่มที่ปราศจากสารเสริม FMDV-Ag ไม่ได้ปรับปรุงการแสดงออกของ CD4 บวกและ CD8 บวกทีเซลล์

ผลของโพลิแซ็กคาไรด์ดิบจาก Cistanche deserticola (CDCP) ต่อ CD4 plus , CD44 plus , และ CD8 บวก CD44 บวกเอฟเฟกเตอร์ T เซลล์ชุดย่อย

เพื่อที่จะสังเกตผลของ Crude Polysaccharide จาก Cistanche Deserticola ต่อเซลล์เอฟเฟคเตอร์ T โฟลว์ไซโตเมทรีถูกใช้เพื่อตรวจหาการแสดงออกของ CD4 plus , CD44 plus และ CD8 plus , CD44 plus ในเซลล์ม้ามของหนูหลังการให้ภูมิคุ้มกัน ผลลัพธ์แสดงในรูปที่ 4-AD เปอร์เซ็นต์ของ CD4 plus , CD44 plus , และ CD8 plus , CD44 plus ในกลุ่ม FMDV Ag/CDCP มีค่าสูงกว่าในกลุ่มที่ไม่มีสารเสริม FMDV-Ag อย่างมีนัยสำคัญ (P<0.05), and="" were="" different="" from="" the="" fmdv/isa-206="" group="" not="" significant="" (p="">0.05).

ผลของโพลิแซ็กคาไรด์ดิบจาก Cistanche deserticola (CDCP) ต่อการเจริญเติบโตของหนู

After immunizing animals with Crude Polysaccharide from Cistanche deserticola through the muscle route, the growth of the mice was observed during the entire immunization period and the body weight was weighed weekly to observe the granuloma at the injection site (Table 1). After the immunization, the mice did not have hair loss or refusal to eat. The weight of each group of mice increased normally at 14 d, 21 d, and 28 d after immunization, and there was no significant change in body weight between the groups (P>0.05) หนูเมาส์ในกลุ่ม FMDV Ag/CDCP ไม่มีแกรนูโลมาที่บริเวณที่ฉีด และหนูที่อยู่ในไวรัสโรคมือเท้าปากกลุ่มวัคซีนที่มีสารเสริมน้ำมัน ISA 206 มีแกรนูโลมาที่บริเวณที่ฉีด

สารเสริมถูกนำมาใช้ในวัคซีนหลายชนิดมาเป็นเวลานาน สามารถช่วยให้วัคซีนกระตุ้นภูมิคุ้มกัน ลดปริมาณวัคซีน และมีบทบาทสำคัญในการป้องกันและแพร่ระบาดของโรคติดเชื้อ [3] ด้วยการพัฒนาวัคซีนชนิดใหม่ ไม่ว่าจะในด้านการวิจัยวัคซีนสำหรับสัตว์หรือการวิจัยวัคซีนในมนุษย์ ข้อกำหนดสำหรับปริมาณและคุณภาพของวัคซีนเสริมก็เพิ่มมากขึ้นเรื่อยๆ สารเสริมชนิดใหม่ในอุดมคติควรมีผลกระตุ้นอย่างมีประสิทธิผลต่อภูมิคุ้มกันของเซลล์หรือร่างกาย มีผลยาวนานและคงที่ ลดจำนวนการสร้างภูมิคุ้มกัน มีผลข้างเคียงน้อยลง ผลิตง่ายและฉีดง่าย [13] .

ในไวรัสโรคมือเท้าปากวัคซีนเชื้อตาย สารเสริมน้ำมันมักจะเพิ่มเพื่อเพิ่มภูมิคุ้มกันของวัคซีน แต่มีข้อเสียเช่นความเครียดภูมิคุ้มกันสูง เมื่อเทียบกับสารเสริมน้ำมัน สารเสริมแบบน้ำนั้นใช้งานง่าย สามารถผสมกับแอนติเจนของวัคซีนในอัตราส่วนใดๆ ก็ได้ ไม่ต้องการอิมัลซิฟิเคชั่น และฉีดได้ง่าย ดังนั้นสารเสริมในน้ำจึงมีแนวโน้มที่ดีในการประยุกต์ใช้วัคซีน FMDV พอลิแซ็กคาไรด์สมุนไพรจีนมีผลกระตุ้นภูมิคุ้มกันที่ดี บวกกับข้อดีด้านความปลอดภัย เยื่อหุ้มปอดอักเสบ และความเป็นอิสระ และกลายเป็นประเด็นร้อนในการวิจัยวัคซีนเสริมชนิดใหม่ [14] ในด้านการวิจัยวัคซีนเสริม FMDV โพลีแซคคาไรด์สมุนไพรจีนบางชนิดถูกนำมาใช้ในการวิจัยสารเสริมชนิดใหม่ ตัวอย่างเช่น ใช้ astragalus polysaccharides เป็นสารเสริมสำหรับวัคซีน FMDV การสร้างภูมิคุ้มกันในช่องปากสามารถเพิ่มภูมิคุ้มกันของร่างกายและเซลล์ และปริมาณที่ต่ำสามารถยับยั้งเซลล์เดนไดรต์ที่เจริญเต็มที่ ปริมาณที่สูงสามารถส่งเสริมการเจริญเติบโตของมัน

นักวิจัยยังใช้พอลิแซ็กคาไรด์จากไบซูและโพลีแซ็กคาไรด์จากยูคอมเมียเป็นส่วนเสริมของไวรัสโรคมือเท้าปากวัคซีนเพื่อสำรวจผลการเสริมสร้างภูมิคุ้มกัน [15-17] เนื่องจากมีความแตกต่างกันอย่างมากในเนื้อหาของส่วนผสมออกฤทธิ์ของยาสมุนไพรจีนชนิดต่างๆ การตรวจคัดกรองจากยาสมุนไพรจีนที่มีกิจกรรมทางภูมิคุ้มกันอย่างกว้างขวางเพื่อค้นหาสารเสริมที่เหมาะสมมีความสำคัญอย่างยิ่งต่อการป้องกันโรคและสุขภาพของมนุษย์ และยังเป็นแหล่งวิจัยในด้าน วัคซีน ในการทดลองนี้ aโพลีแซ็กคาไรด์ดิบจาก Cistanche deserticolaได้รับเลือกเป็นผู้ช่วยผู้ท้าชิงไวรัสโรคมือเท้าปากวัคซีนและการศึกษาทดลองของผลเสริมได้ดำเนินการ การป้องกันและการรักษาโรคติดเชื้อส่วนใหญ่ขึ้นอยู่กับการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันทางร่างกายที่อาศัยโดยบีลิมโฟไซต์และการตอบสนองภูมิคุ้มกันของเซลล์ที่อาศัยโดยทีลิมโฟไซต์ [18-20]

เพราะว่าไวรัสโรคมือเท้าปากวัคซีนใช้การสร้างภูมิคุ้มกันของกล้ามเนื้อในการผลิตจริง ๆ เส้นทางของกล้ามเนื้อถูกใช้เพื่อสร้างภูมิคุ้มกันให้กับหนูทดลอง และประเมินผลการเสริมภูมิคุ้มกันของ CDCP โดยการประเมินผลกระทบของ CDCP ต่อการผลิตแอนติบอดีและชุดย่อยของทีเซลล์ และประเมินความปลอดภัย การสังเกตเบื้องต้น ผลการศึกษาพบว่าพอลิแซ็กคาไรด์ดิบของ Cistanche cistanche สามารถเพิ่มระดับของแอนติบอดีที่จำเพาะต่อ FMDV ที่ 14 และ 21 วันหลังจากสร้างภูมิคุ้มกัน และไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างผลกับระดับของ ISA-206 adjuvant ; ระดับแอนติบอดีที่ 28 วันหลังจากสร้างภูมิคุ้มกันต่ำกว่า ISA-206 oil Adjuvant ซึ่งแสดงให้เห็นว่าโพลีแซ็กคาไรด์ดิบจาก Cistanche deserticola ช่วยเพิ่มระดับภูมิคุ้มกันของร่างกายภายในช่วงระยะเวลาหนึ่งหลังการฉีดวัคซีน อัตราการแพร่กระจายของลิมโฟไซต์มีความสัมพันธ์เชิงบวกกับระดับของดัชนีการกระตุ้น ในการทดลอง MTTโพลีแซ็กคาไรด์ดิบจาก Cistanche deserticola สามารถส่งเสริมการเพิ่มจำนวนของเซลล์เม็ดเลือดขาวกระตุ้นโดยแอนติเจน FMDV, ConA และ LPS ในการทดลองกลุ่มย่อยของทีเซลล์ CDCP ไม่เพียงแต่เพิ่มการแสดงออกของ CD4 plus และ CD8 plus T เซลล์เท่านั้น แต่ยังเพิ่มระดับของ CD4 plus , CD44 plus และ CD8 plus , CD44 plus effector T เซลล์ และไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญ จากกลุ่มเสริม ISA-206; อย่างปลอดภัย ในการทดลองทางเพศพบว่าหนูในกลุ่มวัคซีนที่มี ISA-206 มี granulomas ที่บริเวณที่ฉีด ในขณะที่กลุ่มวัคซีนที่มีสารเสริมน้ำ CDCP ไม่พบ granulomas ซึ่งเบื้องต้นบ่งชี้ว่าโพลีแซ็กคาไรด์ดิบจาก Cistanche deserticola มีความปลอดภัยที่ดี. เพื่อความปลอดภัย ต้องทำการทดลองที่เกี่ยวข้องเพื่อยืนยัน

โพลีแซ็กคาไรด์ดิบจาก Cistanche deserticolaไม่เพียงแต่เพิ่มการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของร่างกาย แต่ยังเพิ่มระดับการแพร่กระจายของลิมโฟไซต์ ส่งเสริมระดับของชุดย่อยของ CD4 plus และ CD8 บวก T เซลล์เอฟเฟกเตอร์ T ที่กระตุ้น และไม่พบแกรนูโลมาที่บริเวณที่ฉีดหลังการฉีด หนูเติบโตตามปกติและไม่มีพฤติกรรมผิดปกติ ผลการวิจัยเหล่านี้เป็นพื้นฐานสำหรับการวิจัยเพิ่มเติมเกี่ยวกับโพลีแซ็กคาไรด์ดิบจาก Cistanche deserticolaเป็นตัวเสริมใหม่สำหรับไวรัสโรคมือเท้าปากวัคซีนและยังให้ข้อมูลอ้างอิงที่เป็นประโยชน์สำหรับการใช้สารเสริมโพลีแซ็กคาไรด์ในวัคซีนอื่นๆ

อ้างอิง

［1］Diaz-san Segundo F, Median GN, Steinfeldt C, และคณะ วัคซีนโรคปากเท้าเปื่อย［J］. สัตวแพทย์ Microbiol, 2017, 206:102-112.

［2］ปาร์ค เจเอช. ข้อกำหนดสำหรับการปรับปรุงวัคซีนป้องกันการแพร่ระบาดของโรคปากเท้าเปื่อย［J］ Clin Exp Vaccine Res, 2013, 2(1): 8-18.

［3］Cao Y. สารเสริมสำหรับวัคซีนไวรัสโรคปากเท้าเปื่อย: ความคืบหน้าล่าสุด［J］. Expert Rev Vaccines, 2014, 13(11):1377-1385.

［4］Parid AS. การฉีดวัคซีนป้องกันโรคปากเท้าเปื่อย: กลยุทธ์และประสิทธิผล［J］ Expert Rev Vaccines, 2009, 8:347-365.

［5］Licciardi PV, Underwood JR. ยาจากพืช: ยาเสริมภูมิคุ้มกันประเภทใหม่［J］ Int Immunopharmacol, 2011, 11(3):390-398.

［6］อาทิตย์ B, Yu S, Zhao D, et al. พอลิแซ็กคาไรด์เป็นสารเสริมวัคซีน［J］ วัคซีน, 2018, 36:5226-5234.

［7］Meng XY, Chu ZF, Zhang JJ, และคณะ ฟังก์ชันภูมิคุ้มกันของแปะก๊วย biloba ออกจากโพลีแซคคาไรด์ในวัคซีน vvIBDV［J］ ChinaJ Vet Sci, 2019, 39(4):640-645.

［8］Tu PF, Jiang Y, Guo YH, และคณะ การวิจัยและพัฒนาอุตสาหกรรมของ Cistanche［J］ Chin Pharm J, 2011, 46(12):882-887.

［9］Zhang W, Huang J, Wei W, et al. การสกัด การทำให้บริสุทธิ์ ลักษณะเฉพาะ และฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของพอลิแซ็กคาไรด์จาก Cistanche tubulosa［J］ Int J Biol Macromol, 2016, 93:448-458.