ผลของสารสกัดจากเปลือกกล้วย Sucrier ต่อการยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสผ่านเส้นทางการส่งสัญญาณ ERK
Apr 25, 2023
เชิงนามธรรม
Hyperpigmentation เป็นความผิดปกติของเม็ดสีประเภทหนึ่งที่เกิดจากการแสดงออกของปริมาณเมลานินที่มากเกินไป ทำให้เกิดปัญหาด้านความงามอย่างรุนแรง เช่น ฝ้า กระ กระ จุดด่างดำ เลนติโก และรูปแบบอื่น ๆ บนผิวหนังมนุษย์ สารทำให้ผิวขาวหลายชนิดถูกจำกัดการใช้เนื่องจากผลข้างเคียงหรือความเสถียร เช่น กรดโคจิก กรดแอสคอร์บิก และไฮโดรควิโนน สามารถทำหน้าที่เป็นสารที่เป็นพิษต่อเซลล์ที่เกี่ยวข้องกับผิวหนังอักเสบและมะเร็งผิวหนัง เพื่อค้นหาสารที่ปลอดภัย การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อค้นหาความสามารถของส่วนประกอบต่างๆ ในสารสกัดจากเปลือกกล้วย Sucrier (SBP) ในการยับยั้งกระบวนการสร้างเมลาโนเจเนซิสผ่านเส้นทางการส่งสัญญาณ p38 ในเซลล์เมลาโนมาของหนูเมาส์ B16F10 กิจกรรมของเอนไซม์ไทโรซิเนสและปริมาณเมลานินของเซลล์มีลักษณะขึ้นอยู่กับขนาดยาที่ลดลงหลังการรักษาด้วย SBP นอกจากนี้ SBP ยังลดการแสดงออกของโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับเมลาโนเจเนซิสในฐานะปัจจัยการถอดรหัสที่เกี่ยวข้องกับไมโครพาทาลเมีย (MITF) และโปรตีนไทโรซิเนสหลังจาก 24 ชั่วโมงของการบ่มด้วยฮอร์โมนกระตุ้นเมลาโนไซต์ (MSH) ผลการวิจัยแสดงให้เห็นว่า SBP มีสารที่มีประสิทธิภาพสำหรับสารยับยั้งการเกิดรอยดำผ่านเส้นทางการส่งสัญญาณ p38 โดยไม่มีผลกระทบใดๆ ต่อเส้นทาง ERK และต่อมาลดการควบคุมการแสดงออกของ MITF และการผลิตตระกูลเอนไซม์ไทโรซิเนส
จากการศึกษาที่เกี่ยวข้องพบว่ากระท่อมเป็นสมุนไพรที่ขึ้นชื่อว่า "สมุนไพรมหัศจรรย์อายุยืน" มีองค์ประกอบหลักคือซิสทาโนไซด์ซึ่งมีเอฟเฟกต์ต่างๆ เช่นสารต้านอนุมูลอิสระ, ต้านการอักเสบ, และการส่งเสริมการทำงานของภูมิคุ้มกัน. กลไกระหว่างซิสแทนช์กับการทำให้ผิวขาวขึ้นอยู่ที่ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของซิสแทนช์ไกลโคไซด์เมลานินในผิวหนังของมนุษย์ผลิตโดยปฏิกิริยาออกซิเดชั่นของไทโรซีนที่เร่งปฏิกิริยาโดยไทโรซิเนส และปฏิกิริยาออกซิเดชั่นต้องอาศัยออกซิเจน ดังนั้นอนุมูลอิสระในร่างกายจึงกลายเป็นปัจจัยสำคัญที่ส่งผลต่อการผลิตเมลานินซิสแตนช์มีสารซิสทาโนไซด์ซึ่งเป็นสารต้านอนุมูลอิสระและสามารถลดการสร้างอนุมูลอิสระในร่างกายได้ยับยั้งการสร้างเมลานิน.
คลิกที่ ฉันจะซื้อ Cistanche ได้ที่ไหน
สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม:
david.deng@wecistanche.com วอทแอพ:86 13632399501
คำสำคัญ:เปลือกกล้วยสุก สารประกอบฟีนอล ไทโรซิเนส; ปัจจัยการถอดความที่เกี่ยวข้องกับ microphthalmia; เมลาโนเจเนซิส
การแนะนำ
เมลานินผลิตขึ้นภายในเมลาโนโซมซึ่งเป็นออร์แกเนลล์ที่สำคัญภายในเซลล์เมลาโนไซต์ Melanocyte ตั้งอยู่ในชั้นฐานของผิวหนังชั้นนอก หลังจากกระบวนการผลิต เมลานินเป็นเม็ดสีที่มีหน้าที่สร้างสีผิว ผม และสีตา ซึ่งทำหน้าที่เป็นสารต้านอนุมูลอิสระตามธรรมชาติ สารล้างพิษ และคีเลเตอร์ไอออนบวกที่ทรงพลัง และยังสามารถทำหน้าที่เป็นเกราะป้องกันความเสียหายจากรังสียูวีแบบสากล [1] การผลิตเมลานินที่ผิดปกติสามารถทำให้เกิดความผิดปกติของเม็ดสีได้ เช่น ภาวะเม็ดสีน้อยเกินไปและรอยดำมากเกินไป Hypopigmentation ทำให้เกิด vitiligo, albinism และปัญหาผมผิดปกติในขณะที่ hyperpigmentation ทำให้เกิดกระ, ฝ้า, จุดด่างดำและรอยดำหลังการอักเสบ ความบกพร่องทางพันธุกรรม การเปลี่ยนแปลงของฮอร์โมนโดยเฉพาะอย่างยิ่งเอสโตรเจน รวมถึงปัจจัยอื่นๆ เช่น โรคตับ เนื้องอก มะเร็ง การขาดสารอาหาร หรือการทำงานที่ผิดปกติของต่อมใต้สมอง เป็นปัจจัยภายในรวมถึงปัจจัยภายนอก เช่น การได้รับรังสียูวี และสารพิษที่เป็นสาเหตุหลักของการเกิดรอยดำ [2] .
ไทโรซิเนสเป็นเอ็นไซม์จำกัดอัตราที่กำหนดเป้าหมายกระบวนการทั้งกระตุ้นและยับยั้งกระบวนการผลิตเมลานิน การกระตุ้นเมลานินใช้เป็นสารฟอกหนังหรือการรักษาเม็ดสีผม การแสดงออกของไทโรซิเนสถูกควบคุมโดย microphthalmia-associated transcription factor (MITF) ซึ่งเป็นปัจจัยการถอดรหัสเฉพาะของ melanocyte ที่ควบคุมการสร้างความแตกต่างของ melanocyte การเพิ่มจำนวน และการอยู่รอด [3, 4] ความรับผิดชอบของ MITF ต่อการสร้างเมลาโนเจเนซิสคือการเพิ่มการแสดงออกของไทโรซิเนสโดยการจับกับ DNA ในโครงสร้างของโฮโมไดเมอร์หรือเฮเทอโรไดเมอร์ด้วยโปรตีน MiT ซึ่งเป็นตำแหน่งที่มีผลผูกพันที่เกี่ยวข้องกับ E-Box และ M-Box ขนาบข้างนิวคลีโอไทด์ไทมิดีน ซึ่งกระตุ้นขั้นตอนต่อเนื่องในการผลิตเอนไซม์สร้างเม็ดสีผิว เช่น โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับไทโรซิเนส 1 (TRP-1), โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับไทโรซิเนส-2 (TRP-2) และโดปาโครม เทาโทเมอเรส กฎระเบียบของ MITF เริ่มต้นจากการส่งสัญญาณหลังจาก -MSH จับกับตัวรับ MC1R ซึ่งกระตุ้นไคเนสโปรตีนที่กระตุ้นการทำงานของไมโทเจน (MARKs) ซึ่งเป็นซีรีน/ทรีโอนีนไคเนส และยังรวมถึงไคเนสที่ควบคุมการส่งสัญญาณนอกเซลล์ (ERK) และ p38 ด้วย การศึกษาหลายชิ้นพบว่าการสังเคราะห์เมลานินถูกควบคุมโดยเส้นทางการส่งสัญญาณหลายทาง เช่น phosphotidylineasital-3-kinase (PI3K/AKT) สามารถยับยั้งได้ด้วยสารธรรมชาติซึ่งมีกลุ่มโพลีฟีนอลผ่านเส้นทางการส่งสัญญาณ ERK ของเซลล์เมลาโนมาของหนูเมาส์ B16F10 [5,6 ].
การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อหาผลการยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสจากสารสกัดเปลือกกล้วยหอมซูคริเออร์ SBP อาจมีสารประกอบโพลีฟีนอลิกหลายชนิดที่ทำหน้าที่เป็นตัวยับยั้งเอนไซม์ไทโรซิเนส เช่น คาเทชิน โปรไซยานิดิน กรดเฟรูลิก และกรดแกลลิก ซึ่งตรวจพบโดยการแสดงออกของวิถีการส่งสัญญาณ ERK ที่ส่งผลต่อการผลิตเอนไซม์สร้างเม็ดสีผิว เช่น TRP-1 และ TRP-2 [7-10]
วัสดุและวิธีการ
เคมีภัณฑ์และวัสดุ
กล้วยหักมุก (Musa spp.) กล้วยหักมุก (7 วันหลังเก็บเกี่ยว) จากจังหวัดกำแพงเพชร ประเทศไทย ล้างเปลือกกล้วยด้วยน้ำ ตากแดดจนแห้ง บดด้วยเครื่องปั่น สกัดด้วยเมทานอล 60 เปอร์เซ็นต์ นาน 24 ชั่วโมง (MW24) ปั่นแยกด้วยเอทานอล 95 เปอร์เซ็นต์ นาน 10 นาที ที่อุณหภูมิ 4 องศา (E4) ต้มใน DI น้ำที่อุณหภูมิ 60 องศา นาน 20 นาที (W60) และต้มในเมทานอล 95 เปอร์เซ็นต์ ที่อุณหภูมิ 60 องศา นาน 20 นาที (M60) ขั้นตอนต่อไปคือลดปริมาตรด้วยเครื่องระเหยแบบหมุนที่อุณหภูมิ 40 องศา และทำให้แห้งด้วยเครื่องทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง Christ Alpha- 4 LD plus
การเพาะเลี้ยงเซลล์
เซลล์เมลาโนมาของหนู B16F10 ได้รับการเพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อ Eagle (DMEM) ดัดแปลงของ Dulbecco ที่เสริมด้วยซีรั่มวัวทารกในครรภ์ 10 เปอร์เซ็นต์ที่ 37 องศาในการบ่มด้วย CO2 5 เปอร์เซ็นต์ หลังจากการบ่ม 24 ชั่วโมง จึงเปลี่ยนอาหารเลี้ยงเชื้อเป็นอาหารเลี้ยงเชื้อที่ปราศจากซีรั่มด้วยสารสกัดเปลือกกล้วยซูคริเออร์ (SBP) ที่มีความเข้มข้นต่างกันด้วยการกระตุ้น -MSH จากนั้นจึงเก็บเซลล์ด้วยทริปซิไนเซชันสำหรับการทดลองครั้งต่อไป
การทดสอบความมีชีวิตของเซลล์
ความเป็นพิษต่อเซลล์ของสารสกัด SBP ถูกวัดโดย MTT assay เซลล์ (5 ×10 3) ถูกเพาะลงในเพลต 96 หลุมและเพาะเลี้ยงใน DMEM เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ 37 องศาในการบ่มด้วย CO2 5 เปอร์เซ็นต์ จากนั้นเปลี่ยนอาหารเลี้ยงเชื้อเป็นอาหารเลี้ยงเชื้อที่ปราศจากซีรั่มด้วยสารสกัด SBP ที่มีความเข้มข้นต่างกันสำหรับ 48 ชั่วโมง หลังการบำบัด ให้ทิ้งสื่อและล้างสองครั้งด้วย PBS เย็น เติมสารละลาย MTT 100 ul (5 มก./มล.) ลงในแต่ละหลุม บ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเป็นเวลา 4 ชั่วโมง จากนั้นตรวจวัดด้วยเครื่องอ่าน ELISA ที่ 420 นาโนเมตร
การทดสอบเนื้อหาเมลานิน
เซลล์ที่เก็บเกี่ยวถูกสลายในบัฟเฟอร์การสลายด้วยความเย็น (โซเดียมฟอสเฟต 20 มิลลิโมลาร์ pH 6.8, ไตรตันเอ็กซ์ 1 เปอร์เซ็นต์-100, 1 มิลลิโมลาร์ PMSF และ 1 มิลลิโมลาร์ EDTA) จากนั้นปั่นแยก 1,200 รอบต่อนาทีที่ 4 องศาเป็นเวลา 10 นาทีเพื่อแยกส่วนลอยเหนือตะกอนออกในขณะที่เม็ดเมลานิน ถูกละลายใน NaOH 200 ul 1N เป็นเวลา 60 นาที ที่ 80 องศา เครื่องอ่าน ELISA ใช้สำหรับวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 415 นาโนเมตร และคำนวณเปรียบเทียบกับปริมาณโปรตีนจากการทดสอบปริมาณโปรตีนของกรดบิซินโคนินิก (BCA) (Pierce Biotechnology, Packford, IL, USA)
การวิเคราะห์แบบตะวันตก
ส่วนลอยเหนือตะกอนที่ถูกแยกออกระหว่างกระบวนการสลายเซลล์ถูกนำไปแยกส่วนบน SDS-PAGE จากนั้นจึงถ่ายโอนไปยังเยื่อหุ้มเซลล์ไนโตรเซลลูโลสชนิดเคมิลูมิเนสเซนซ์ที่ปรับปรุงแล้วของ Hybond (Amersham, Little Chalfont, UK) และโพรบที่มีแอนติบอดีปฐมภูมิต่อไทโรซิเนส (ซานตาครูซ, เทคโนโลยีชีวภาพ, ซานตาครูซ , แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา), MITF ( Merck Millipore Darmstadt เยอรมนี) ERK (Merck Millipore Darmstadt เยอรมนี) P38 ( Merck Darmstadt Millipore เยอรมนี) และโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อ B-Actin (AC-15, Sigma Aldrich ). จากนั้น บ่มเมมเบรนด้วยการสร้างภาพข้อมูลที่ซับซ้อนของแอนติบอดีทุติยภูมิที่ผันคอนจูเกตจากฮอร์สราดิชเปอร์ออกซิเดส และวัดปริมาณสัญญาณด้วยซอฟต์แวร์ ImageJ
การวิเคราะห์ทางสถิติ ข้อมูลทั้งหมดวิเคราะห์โดยค่าเฉลี่ย ± ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD) การทดสอบ ANOVA แบบทางเดียวใช้เพื่อวัดความแตกต่างระหว่างข้อมูลแต่ละชุด ค่า P น้อยกว่า 0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติ
ผลลัพธ์
สารประกอบฟีนอล
การทดลองนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อวัดประสิทธิภาพของตัวทำละลายที่ใช้ในการสกัดและวิธีการที่สามารถสกัดสารประกอบฟีนอลได้มากที่สุด สารประกอบฟีนอลส่วนใหญ่ละลายได้ดีเมื่อสกัดด้วยสารละลายที่มีขั้วสูง เช่น น้ำ เมทานอล (MeOH) เอทานอล (EtOH) อะซีโตน เอทิลอะซีเตต โพรพานอล กรดอะซิติก หรือส่วนผสมของสารประกอบเหล่านี้ในส่วนต่างๆ [11] รูปที่ 1A แสดงให้เห็นว่า W60 สามารถสกัดสารประกอบฟีนอลได้มากถึง 16.24 µg/ml ตามด้วย M60, E4 และ MW24 ที่มีฟีนอลทั้งหมด 13.89, 9.21 และ 8.38 µg/ml ตามลำดับ ความเป็นพิษต่อเซลล์ของ SBP ได้รับการทดลองโดยการทดสอบ MTT รีดักชัน ซึ่งวัดสภาพแวดล้อมการลดลงจากการทำงานของไมโทคอนเดรียของเซลล์ที่มีชีวิตโดยการวัดการก่อตัวของฟอร์มาซานเพื่อเข้าถึงผลกระทบที่เป็นพิษต่อเซลล์ ผลการวิจัยพบว่า SBP ที่ความเข้มข้นที่ระบุ (ไม่เกิน 500 µg/ml) มีเวลาฟักตัว 48 ชั่วโมง ความเป็นพิษต่อเซลล์ไม่แสดงผลที่มีนัยสำคัญหลังการรักษาด้วย SBP (รูปที่ 1B)
ผลของ SBP ต่อการทำงานของเอนไซม์และปริมาณเมลานินในเซลล์ B16F10
ในการทดสอบการยับยั้งการสร้างเม็ดสีเมลาโนเจเนซิสของ SBP ขั้นตอนแรกคือการทดสอบความสามารถในการยับยั้งเอนไซม์ไทโรซิเนสจากเห็ดเปรียบเทียบกับกรดโคจิกซึ่งเป็นสารทำให้ผิวขาวที่มีจำหน่ายทั่วไป SBP (MW24) มีประสิทธิภาพสูงกว่ากรดโคจิกและการสกัดอื่นๆ ที่ความเข้มข้นเดียวกัน (100-500 µg/ml) MW24 มีเปอร์เซ็นต์การยับยั้งไทโรซิเนสสูงสุด (66.39-77.05 เปอร์เซ็นต์ ) ในขณะที่กรดโคจิกมีเปอร์เซ็นต์การยับยั้งไทโรซิเนสเพียง 44.68-59.93 เปอร์เซ็นต์ดังแสดงในรูปที่ 1C จากนั้นเป็นต้นมา MW24 ที่มีเปอร์เซ็นต์การยับยั้งเอนไซม์ไทโรซิเนสสูงสุดถูกเลือกสำหรับการวัดสารต่อต้านการสร้างเมลาโนเจเนซิสโดยการผลิตเมลานินจากเซลล์ B16F10 ปริมาณเมลานินของเซลล์ B16F10 ลดลงหลังการรักษาด้วย SBP (MW24) (รูปที่ 2A) ปริมาณเมลานินของเซลล์ B16F10 ลดลงอย่างมีนัยสำคัญหลังจากกระตุ้นด้วย -MSH และรักษาด้วย SBP (MW24) เป็นเวลา 24 ชั่วโมงในลักษณะขึ้นกับขนาดยาดังแสดงในรูปที่ 2B
ผลของ SBP (M24) ต่อระดับการแสดงออกของโปรตีนของไทโรซิเนสและ MITF
การวิเคราะห์ Western blot ใช้สำหรับกิจกรรมไทโรซิเนสและ MITF โดยการวัดระดับการแสดงออกของโปรตีนหลังจากได้รับการรักษาด้วย SBP (MW24) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ระเบียบของเอ็นไซม์สร้างเม็ดสีผิว เช่น TRP-1 และ TRP-2 เป็นผลมาจากผลการถอดรหัสของ MITF และระดับโปรตีนไทโรซิเนส ผลลัพธ์แสดงว่า SBP (MW24) มีความสามารถในการควบคุมการแสดงออกของโปรตีนไทโรซิเนสและ MITF ที่ขึ้นกับปริมาณยา ดังที่แสดงในรูปที่ 3
ผลของ SBP (M24) ต่อการยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสผ่านเส้นทางการส่งสัญญาณของโปรตีนไคเนสที่กระตุ้นด้วยไมโทเจน (MAPKs)
ในการสร้างเมลาโนเจเนซิส ตระกูลไคเนสของ MAPK โดยเฉพาะ ERK และ p38 เกี่ยวข้องโดยตรงกับขั้นตอนนี้ [12] การส่งสัญญาณ ERK จะลดลงในขณะที่การส่งสัญญาณ p38 จะเพิ่มการควบคุมระหว่างการเกิดขึ้นของการผลิตเมลานิน อย่างไรก็ตาม ฟอสโฟรีเลชั่นของ ERK และ p38 จะมีขั้นตอนการผลิตเมลานินย้อนกลับ ผลลัพธ์แสดงให้เห็นผลที่ชัดเจนหลังจากการรักษาด้วย SBP (MW24) ด้วย -MSH ที่กระตุ้นโดยอิมมูโนบล็อตติงไปยังเส้นทางการส่งสัญญาณ MAPK SBP (MW24) ลดการแสดงออกของโปรตีน p38 เล็กน้อยและควบคุมฟอสโฟรีเลชั่นของ p38 เล็กน้อย ผลลัพธ์นี้แสดงวิธีการยับยั้งกระบวนการสร้างเมลาโนเจเนซิสผ่านทางเดิน p38 โดยไม่มีผลกระทบต่อ ERK แต่ระดับฟอสโฟรีเลชั่นของโปรตีน ERK ลดลงเล็กน้อยหลังจากการรักษา -MSH และ SBP (MW24) ดังแสดงในรูปที่ 4
การอภิปราย
เปลือกกล้วยซูคริเออร์เป็นวัสดุเหลือใช้จากการเกษตรที่มีสารออกฤทธิ์อยู่มากมาย โดยเฉพาะในกลุ่มของสารประกอบฟีนอลและแคโรทีนอยด์ ซึ่งเป็นสารทุติยภูมิที่พืชสร้างขึ้นเพื่อใช้ในการป้องกันตนเอง [7] สารเหล่านี้สามารถพบได้ในใบ เปลือก ผล เปลือก และเมล็ดพืชเกือบทุกชนิด สารประกอบฟีนอลและแคโรทีนอยด์เป็นสารพฤกษเคมีที่มีคุณสมบัติดีต่อสุขภาพของมนุษย์ สารเหล่านี้ประกอบด้วยต้านการอักเสบ ต้านไวรัส แก้ปวด สารต้านอนุมูลอิสระ ต้านสารก่อมะเร็ง ฯลฯ [13] โดยทั่วไป สารประกอบฟีนอลสามารถละลายได้ดีในตัวทำละลายที่มีขั้วสูง สำหรับการทดลอง การสกัดด้วย MW24 น่าจะสกัดสารประกอบฟีนอลได้มากที่สุด เนื่องจากใช้ขั้นตอนการสกัดจาก Folin-Cicualteu assay สกัดสารประกอบที่มีขั้วต่ำก่อนแล้วจึงตามด้วยสารที่มีขั้วสูง ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับอัตราส่วนการผสมสุดท้ายของตัวทำละลายในขั้นตอน ผลการวิจัยพบว่า W60 สามารถสกัดสารประกอบฟีนอลได้มากที่สุด อาจเป็นเพราะอุณหภูมิ 60 องศาเซลเซียส ซึ่งอาจเป็นอุณหภูมิที่เหมาะสมในการสกัดสารประกอบฟีนอล [11] นอกจากนี้ยังสันนิษฐานได้ว่า SBP อาจมีสารที่มีขั้วสูงซึ่งละลายได้ดีในน้ำ เมื่อเปรียบเทียบปริมาณสารประกอบฟีนอลิกทั้งหมดดังแสดงในรูปที่ 1A, W60, M60, E4 และ MW24 แสดงให้เห็นถึงความเป็นไปได้ของการละลายของสารอย่างมีนัยสำคัญ
หลังจากทราบปริมาณสารประกอบฟีนอลิกทั้งหมดแล้ว เราสามารถดำเนินการระบุชนิดและปริมาณของสารฟลาโวนอยด์และแคโรทีนอยด์ได้ เราพบว่าสารสกัด SBP (MW24) มีกรดเฟอรูลิกสูงถึง 906.62 มก./100 ก. และยังพบลูทีนและแคโรทีนอยด์ในปริมาณเล็กน้อยซึ่งจัดอยู่ในกลุ่มแคโรทีนอยด์ที่ 1.23 และ 2.37 มก./100 ก. ตามลำดับ SBD (MW24) ยังคงมีเปอร์เซ็นต์การยับยั้งไทโรซิเนสสูง จึงได้คัดเลือก ศอ.บต. (มว.24) เพื่อศึกษาเพิ่มเติม
จากการทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์ ไม่พบความเป็นพิษต่อเซลล์ที่มีนัยสำคัญจาก SBP แม้ว่าปริมาณความเข้มข้นของการใช้จะสูงถึง 500 µg/ml อาจเป็นเพราะการสกัดสารแคโรทีนอยด์จำนวนเล็กน้อยมีความสามารถในการปกป้องเซลล์ สารในกลุ่มนี้มีคุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระที่สามารถกำจัดพิษได้ผ่านทาง Cytochrome P-450 โดยเฉพาะ - แคโรทีนซึ่งมีบทบาทกระตุ้นการทำงานของภูมิคุ้มกันโดยทำปฏิกิริยากับ Reaction Oxygen Species (ROS) สิ่งนี้จะสนับสนุนประสิทธิภาพของสารประกอบฟีนอลที่มีคุณสมบัติ ROS scavenging effect เพื่อลดการอักเสบของไซโตไคน์ [14] ดังนั้น SBD (MW24) ไม่เพียงแต่ไม่เป็นพิษเท่านั้น แต่ยังมีบทบาทในการปกป้องเซลล์อีกด้วย
การศึกษาของเรายังพบว่า SBP (MW24) มีความสามารถในการยับยั้งการสร้างเม็ดสีของเซลล์ B16F10 การแสดงออกของไทโรซิเนสและ MITF ลดลงหลังจากการรักษา SBP (MW24) ในการประเมินทั้งด้วยเห็ดไทโรซิเนสและการวิเคราะห์ Western blot ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา การทดสอบนี้บ่งชี้ว่า SBP (MW24) สามารถยับยั้งการสร้างเมลานินโดยวิถีการส่งสัญญาณ p38 ที่ควบคุมลง และการควบคุมฟอสโฟรีเลชั่นของ p38 ที่ควบคุมมากขึ้น ซึ่งกระตุ้นการย่อยสลายโปรตีนของ MITF และมีผลไปลดการแสดงออกของเอนไซม์ตระกูลเมลาโนเจนิก เช่น ไทโรซิเนส การยับยั้ง p38 จะลดการทำงานของ cAMP Response Binding Protein (CREB) ซึ่งเป็นปัจจัยการถอดความสำคัญที่ทำงานร่วมกับ PAX3 และ SOX10 ที่ยึดติดกับ M-BOX ของยีน MITF เพื่อกระตุ้นการแสดงออกของโปรตีน MITF ที่ส่งผลต่อกระบวนการผลิตเมลานินและกิจกรรมการอยู่รอดของเซลล์ [15 ]. โดยทั่วไป การเปิดใช้งาน ERK จะนำไปสู่การเกิดฟอสโฟรีเลชั่นของ MITF ที่ซีรีน 73 ซึ่งทำให้เกิดการแพร่หลายและการย่อยสลายในที่สุด สารประกอบธรรมชาติส่วนใหญ่สามารถยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสผ่านกระบวนการกระตุ้นของเส้นทางการส่งสัญญาณ ERK แต่ SBP (MW24) ไม่มีอิทธิพลอย่างมีนัยสำคัญต่อเส้นทางการส่งสัญญาณ ERK [16]
งานวิจัยหลายชิ้นพบว่าสารประกอบฟีนอลและแคโรทีนอยด์สามารถยับยั้งการสร้างเม็ดสีเมลานินได้ เนื่องจากเบต้าแคโรทีนมีความสามารถในการดูดซับโฟตอนของรังสี UVB ในขณะเดียวกันก็มีคุณสมบัติเป็นสารต้านอนุมูลอิสระที่ละลายในไขมัน และสารประกอบฟีนอลิกสามารถกระตุ้น Nrf2 ปิดกั้นตัวรับ ROS ลดการอักเสบ การผลิตไซโตไคน์และกระตุ้นการแสดงออกของ y-GSC ซึ่งสนับสนุนการศึกษาของเรา แต่ในทางที่แตกต่างกันในการยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิส [17] นอกเหนือจากกรดเฟอรูลิกที่พบใน SBP (MW24) เป็นสารหลักในกลุ่มของสารประกอบฟีนอลที่ได้รับการยืนยันจากงานวิจัยหลายชิ้นว่ามีคุณสมบัติในการต่อต้านการสร้างเม็ดสีผิว เนื่องจากสามารถปรับการแสดงออกของ vascular endothelial growth factor (VEGF) กระตุ้นไนตริกออกไซด์ ซินเทสทำหน้าที่เป็นยีนยับยั้งเนื้องอกและยังเกี่ยวข้องกับกระบวนการสร้างเม็ดสีเมลานินอีกด้วย ในสารละลาย SBP (MW24) กรดเฟอรูลิกสามารถเพิ่มประสิทธิภาพเมื่อผสมกับแคโรทีนอยด์หรือฟอสโฟลิปิดอื่นๆ เนื่องจากความสามารถในการละลายน้ำ ความสามารถในการละลายของไขมัน และการดูดซึมทางชีวภาพจะเพิ่มขึ้น ส่งผลให้การยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสของเซลล์ B16F10 ดีขึ้น [18] ความหมายของผลลัพธ์ทั้งหมดสรุปได้ว่า SBP (MW24) สามารถลดการสร้างเม็ดสีเมลาโนเจเนซิสได้อย่างมีประสิทธิภาพ
ตัวย่อ
MITF: ปัจจัยการถอดรหัสที่เกี่ยวข้องกับ microphthalmia; -MSH: -ฮอร์โมนกระตุ้นเมลาโนไซต์; MC1R: ตัวรับเมลาโนคอร์ติน-1; TRP1: โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับไทโรซิเนส 1; TRP2: โปรตีนที่เกี่ยวข้องกับไทโรซิเนส 2; MAPK: ไคเนสโปรตีนที่กระตุ้นการทำงานของไมโทเจน
กิตติกรรมประกาศ
งานนี้ได้รับการสนับสนุนทุนจาก Royal Golden Jubilee Ph.D.: RGJPHD ประเทศไทย. (พธ./0017/2558).
ผลงานของผู้เขียน
RH, KT, KS และ UP คิดและออกแบบการทดลอง RHCHL และ MC ทำการทดลอง; RH และ MC และ CHL วิเคราะห์ข้อมูล รีเอเจนต์/วัสดุ/เครื่องมือวิเคราะห์ที่สนับสนุนโดย RH; RH และ CHL เขียนบทความ
การแข่งขันความสนใจ
ผู้เขียนได้ประกาศว่าไม่มีผลประโยชน์ที่แข่งขันกัน
อ้างอิง
1.Regnault MR, Gadaud N, Boulinguez S, Tournier E, Lamant L, Gladieff L และอื่นๆ การทำเคมีบำบัดที่เกี่ยวข้องกับการสร้างเม็ดสีเรติคูเลต: กรณีศึกษาและการทบทวนวรรณกรรม โรคผิวหนัง 2558; 231: 312-8.
2. Ali A. Dermatology รีวิวรูปภาพ McGraw Hill Education 2010. ISBN978-0-07-179323-0.
3. Garraway LA, Widlund R, Rubin MA, Getz G, Berger AJ, Ramaswamy S, Beroukhim R และอื่นๆ การวิเคราะห์จีโนมเชิงบูรณาการระบุว่า MITF เป็นยีนที่อยู่รอดในสายเลือดที่ขยายในมะเร็งผิวหนังชนิดเมลาโนมา ธรรมชาติ 2548; 436: 117–22.
4. Busca R, Ballotti R. Cyclic AMP เป็นผู้ส่งสารหลักในการควบคุมการสร้างเม็ดสีผิว การวิจัยเซลล์เม็ดสีและเมลาโนมา 2543; 13: 60-9
5. Zhou J, Ren T, Li Y, Cheng A, Xie W, Xu L และอื่นๆ Oleoylethanolamide ยับยั้ง -melanocyte stimulating hormone กระตุ้นการสร้างเม็ดสีผิวผ่านเส้นทางการส่งสัญญาณ ERK, Akt และ CREB ในเซลล์มะเร็งผิวหนังชนิด B16 บนโคทาร์เก็ต 2017; 8: 56868-79
6. Onkoksoong T, Jeayeng S, Poungvarin N, Limsaengurai S, Thamsermsang O, Tripatara P, Akarasereenont P, Panich U. Thai Herb Antipyretic 22 Formula (APF22) ยับยั้งการสร้างเม็ดสีผิวที่อาศัยรังสี UVA ผ่านการกระตุ้น Nrf2-สารต้านอนุมูลอิสระที่มีการควบคุม ป้องกัน. การวิจัยพฤกษบำบัด 2018; 32: 1546-54.
7. Singh B, Singh JP, Kaur A, Singh N. สารออกฤทธิ์ทางชีวภาพในกล้วยและประโยชน์ต่อสุขภาพที่เกี่ยวข้อง - บทวิจารณ์ เคมีอาหาร 2558; 1: 1-11
8. Leerach N, Yakaew S, Phimnuan P, Soimee W, Nakyai W, Luangbudnark W, Viyoch J. ผลของกล้วยไทย (กลุ่ม Musa AA) ในการลดการสะสมของผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้ายออกซิเดชันในผิวหนังของหนูที่ฉายรังสี UVB วารสารโฟโตเคมีและโฟโตไบโอโลจี, B: Biology 2017; 168: 50-58.
9. Hung BY, Kim SY, Jung JM, Won CH, Choi JH, Lee MW ยาต้านเชื้อรา clotrimazole ยับยั้งการสร้างเม็ดสีโดยการเร่งการย่อยสลาย ERK และ PI3K-/Akt-mediated tyrosinase โรคผิวหนังทดลอง 2558; 24: 381-400.
10. Shen T, Heo SI, วัง MH การมีส่วนร่วมของเส้นทางการส่งสัญญาณ p38 MAPK และ ERK ในฤทธิ์ต้านการสร้างเม็ดสีเมลาโนเจนของเมทิล 3,5- คาเฟอออิลควินเนตในเซลล์มะเร็งผิวหนังของหนู B16F10 ปฏิสัมพันธ์ทางเคมีและชีวภาพ 2012; 199: 106-11.
11. Ruesgas-Ramón M, Figueroa-Espinoza MC, Durand E. การใช้ Deep Eutectic Solvents (DES) สำหรับการสกัดสารประกอบฟีนอล: ภาพรวม ความท้าทาย และโอกาส วารสารเคมีเกษตรและอาหาร 2560; 10: 3591-3601
12. Tsao YT, Kuo CY, Kuan YD, Lin HC, Wu LH, Lee CH สารสกัดจาก Astragalus membranaceus ยับยั้งการสร้าง Melanogenesis ผ่านทาง ERK Signaling Pathway วารสารวิทยาศาสตร์การแพทย์นานาชาติ 2560; 3: 1049-53
13. ช้าง ที. การทบทวนตัวยับยั้งไทโรซิเนสที่ปรับปรุงแล้ว International Journal of Molecular Sciences 2009; 26: 2440-75.
14. Juturu V, Bowman JP, Deshpande J. โทนสีผิวโดยรวมและผลการปรับสีผิวให้สว่างขึ้นด้วยการเสริมลูทีนและซีแซนทีนไอโซเมอร์ทางปาก: การทดลองทางคลินิกแบบควบคุมด้วยยาหลอก คลินิกเวชสำอางและเวชศาสตร์ผิวหนัง 2559; 7: 325-332
15. Bell RE, Levy C. สาม m's: melanoma, micro-ophthalmia-associated transcription factor และ microRNA การวิจัยมะเร็งเมลาโนมาของเซลล์เม็ดสี 2554; 24:1088–106.
16. Zhou J, Ren T, Li Y, Cheng A, Xie W, Xu L, Peng L. Oleoylethanolamide ยับยั้ง -melanocyte stimulating melanogenesis ที่กระตุ้นฮอร์โมนผ่าน ERK, Akt และ CREB เส้นทางการส่งสัญญาณในเซลล์มะเร็งผิวหนัง B16 บนโคทาร์เก็ต 2017; 23: 56868-79.
17. Toews DPL, Hofmeister NR, เทย์เลอร์ SA วิวัฒนาการและพันธุศาสตร์ของการแปรรูปแคโรทีนอยด์ในสัตว์ แนวโน้มพันธุกรรมปี 2560; 33: 171-182.
18. Li L, Liu Y, Xue Y, Zhu J, Wang X, Dong Y. การเตรียมคอมเพล็กซ์กรด ferulic-phospholipid เพื่อปรับปรุงการละลาย การละลาย และกิจกรรมยับยั้งการสร้างเมลาโนเจเนซิสของเซลล์ B16F10 วารสารเคมีกลาง 2560; 22: 11-26
สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501
