ผลของเอ็กไคนาโคไซด์ต่อหนูขาดเลือดในสมอง

เชิงนามธรรม: วัตถุประสงค์ เพื่อศึกษาผลของเอไคโนไซด์(ECH) ต่อสารสื่อประสาทโมโนเอมีนในของเหลวนอกเซลล์ของ striatum ในหนูที่มีภาวะสมองขาดโฟกัส และเพื่อสำรวจกลไกที่เป็นไปได้ของผลการป้องกันระบบประสาทของ ECH ในสมอง วิธีการสุ่มแบ่งหนู SD ออกเป็นกลุ่มควบคุม กลุ่มแบบจำลอง กลุ่ม ECH ที่มีขนาดยาสูงและต่ำ และกลุ่มลิกุสทราซีน (CXQ) หนูในแต่ละกลุ่มได้รับยาที่เกี่ยวข้องหรือน้ำเกลือทางสรีรวิทยาในช่องท้องวันละครั้งเป็นเวลา 7 วัน ในวันที่สามของการบริหาร ปลอกหุ้มโพรบถูกฝังอยู่ในโครงร่างของสมอง หนึ่งชั่วโมงหลังจากการบริหารให้ครั้งสุดท้าย แบบจำลองหนูของภาวะสมองขาดเลือดโฟกัส (MCAO) ถูกสร้างขึ้น หลังจากสร้างแบบจำลองแล้ว จะทำไมโครไดอะไลซิสทันที สารฟอกขาวถูกฉีดเข้าไปในเครื่องตรวจจับโครมาโทกราฟี-ไฟฟ้าเคมีประสิทธิภาพสูง (HPLC-ECD) เพื่อตรวจสอบปริมาณของนอร์เอพิเนฟริน (NE), โดปามีน (DA), 5-ไฮดรอกซีทริปตามีน (5-HT), 3 ,4-กรดไดไฮดรอกซีฟีนิลอะซิติก (DOPAC), กรดโฮโมวานิลลิก (HVA), 5-กรดไฮดรอกซีอินโดลอะซิติก (HIAA) ในของเหลวนอกเซลล์ของ striatum ของแต่ละกลุ่ม ผลลัพธ์ เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม ระดับของ NE, DA และ 5-HT ในกลุ่มแบบจำลองเพิ่มขึ้น และสารเมตาบอไลต์ที่เป็นกรด DOPAC, HVA และ HIAA ก็เพิ่มขึ้นเช่นกัน เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มแบบจำลอง เนื้อหาของสารหกชนิดในกลุ่ม ECH ขนาดสูงและต่ำ (30, 15 มก. · กก - 1 · d - 1) และกลุ่ม CXQ ลดลง ผลการป้องกันระบบประสาทของ ECH อาจเกี่ยวข้องกับการเพิ่มขึ้นของสารสื่อประสาท monoamine หลังจากสมองขาดเลือด

ผงซิสแทนเช่

คำสำคัญ: เอไคโนไซด์; ภาวะสมองขาดเลือด; สเตรตัม; HPLC-ECD; สารสื่อประสาทและสารสื่อประสาทโมโนเอมีน

เอชินาซีโอไซด์(ECH) เป็นส่วนประกอบที่มีประสิทธิภาพของฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ที่แยกและทำให้บริสุทธิ์จากซิสตานเช่ เดซินิโกลา, โรงงานพิเศษในซินเจียง การศึกษาพบว่า ECH มีฤทธิ์ป้องกันระบบประสาท เช่น การต้านอนุมูลอิสระ [1-2] การป้องกันเส้นประสาท [3-4] การต่อต้านวัย [5] และการปรับปรุงการเรียนรู้และความจำ [6-8] ผลลัพธ์ของ Chen Hong และคณะ ยืนยันว่า ECH มีผลในการป้องกันเซลล์ประสาท DA ในโรคพาร์กินสัน [9]. สารสื่อประสาทโมโนเอมีนเป็นสารสำคัญชนิดหนึ่งที่ควบคุมกิจกรรมทางสรีรวิทยาของร่างกายปริมาณในเนื้อเยื่อสามารถสะท้อนถึงกระบวนการสังเคราะห์ทางชีวภาพ การปลดปล่อย การดูดซึม และการหยุดการทำงานของสารสื่อประสาท [10-11] ในปัจจุบัน ยังไม่มีรายงานที่เกี่ยวข้องเกี่ยวกับผลกระทบของ ECH ต่อเครื่องส่งสัญญาณ monoamine ในสมองของหนูที่มีภาวะสมองขาดเลือด ในการศึกษานี้ ผลกระทบของ ECH ต่อเนื้อหาของสารสื่อประสาทโมโนเอมีนในของเหลวนอกเซลล์ของ striatum ของหนูที่มีภาวะขาดเลือดในสมองได้รับการตรวจสอบโดยใช้เทคโนโลยีไมโครไดอะไลซิสในสมอง และกลไกที่เป็นไปได้ของ ECH ต่อการป้องกันระบบประสาทของสมองได้รับการสำรวจเบื้องต้น

ผงสกัด Cistanche tubulosa

1.วัสดุ

1.1 สัตว์ทดลอง

หนู SD, ♂, มวลตัว 250~300 กรัม (ซื้อจาก Xinjiang Experimental Animal Center, หมายเลขใบอนุญาต: 2009-0053)

1.2 ยาและรีเอเจนต์

ECH ได้รับการบริจาคโดยศาสตราจารย์ Tu Pengfei คณะเภสัชศาสตร์ มหาวิทยาลัยปักกิ่ง (ความบริสุทธิ์มากกว่า 95%); นอร์อิพิเนฟริน (NE), โดปามีน (DA), 5-ไฮดรอกซีทริปตามีน (5-HT), 3,4-กรดไดไฮดรอกซีฟีนิลอะซีติก (DOPAC), กรดโฮโมวานิลลิก (HVA)

5-กรดไฮดรอกซีอินโดลอะซิติก (HIAA) คือซิกมา; Tetramethylpyrazine ไฮโดรคลอไรด์สำหรับการฉีด (CXQ, Harbin Sanlian Pharmaceutical Co., Ltd. ); ซีเมนต์ซิงค์ฟอสเฟต (ผลิตภัณฑ์ของบริษัท Shanghai Medical Instruments Co., Ltd. ประกอบด้วยของเหลวและผงผสมกับกาลเวลา) โซเดียม 1-อัลคิลซัลเฟต (DIKMA); กรดซิตริกไฮเดรต (สถาบันวิจัยเคมีขั้นสูงของ Tianjin Jinke); ไตรโซเดียมซิเตรต (Acros); กรดไดโซเดียมเอทิลีนไดเอมีนเตตร้าอะซิติก (JTTakerChemicalco); เมทานอล (DIKMA); อะซีโตไนไตรล์ (DIKMA); ของเหลวกำซาบเพื่อการฟอกไตในสมองคือการฉีดโซเดียมคลอไรด์แบบผสม (Beijing Shuanghe Pharmaceutical Co., Ltd.); น้ำที่ใช้ทั้งหมดเป็นน้ำที่ใช้ไอน้ำซ้ำ

1.3 เครื่องดนตรี

อุปกรณ์ Stereotactic สมองหนู BAS4100 อเมริกัน; โพรบ CMA/12 และปลอกโพรบ อุปกรณ์สำหรับสัตว์ที่มีสติ CMA/120; ปั๊มไมโคร CMA/402; เครื่องเก็บตัวอย่างอัตโนมัติอุณหภูมิต่ำ CMA/150 ปั๊มแช่ Esa 5600A; ปั๊มแช่ Esa 5600A; อุปกรณ์ฉีดตัวอย่างอัตโนมัติ Esa 542; เครื่องตรวจจับเคมีไฟฟ้า CoulArray ของ Esa; อิเล็กโทรดทำงานแบบคาร์บอนคล้ายแก้วและอิเล็กโทรดอ้างอิง Ag/AgCl; คอลัมน์ C18 (DIKMA, ODS5 μm, 150 มม. × 4.6 มม.); เวิร์กสเตชันโครมาโตกราฟี CoulArraywin (บริษัท Esa); เครื่องผสมน้ำวน (ชนิด QL{14}}); เครื่องมือทดสอบความเป็นกรดบนเดสก์ท็อป (HANNA-211); เครื่องหมุนเหวี่ยงความเร็วสูงแบบตั้งโต๊ะ (ประเภท XYJ-2)

2.วิธี

ซิสต์อาหารเสริมแก้ปวดใกล้ฉัน—อิ่มพิสูจน์ความทรงจำ

คลิกที่นี่เพื่อดูผลิตภัณฑ์ Cistanche ปรับปรุงหน่วยความจำ

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

2.1 การจัดกลุ่มและการบริหารสัตว์

หนูสามสิบตัวถูกสุ่มแบ่งออกเป็นห้ากลุ่ม: ① กลุ่มควบคุม: 1 มล. · กิโลกรัม -1 · d-1 น้ำเกลือปกติ; 2 กลุ่มแบบจำลอง: น้ำเกลือปกติ 1 มล. · กก. -1 · d -1; 3 โมเดล+ลิกุสทราซีน (CXQ) 30มก. · กิโลกรัม-1 · d-1; ④ - ⑤ โมเดล+ECH กลุ่มที่มีขนาดยาสูงและต่ำ (ECHB, ECHS): 30, 15 mg · kg-1 · d-1; สัตว์ทั้งหมดในแต่ละกลุ่มถูกฉีดในช่องท้องเป็นเวลา 7 วัน

2.2 วิธีการสร้างแบบจำลองและการฟอกไตด้วยไมโครไดอะไลซิส

หนูแต่ละตัวถูกฝังด้วยแคนนูลาในวันที่สามของการบริหาร: หนูถูกดมยาสลบด้วยคลอราลไฮเดรต 10% (3.5 มล. · กก.-1) ติดอยู่กับอุปกรณ์ Stereotactic ของสมอง BAS4100 และ สายสวนโพรบถูกฝังเข้าไปใน striatum ด้านซ้าย (พิกัด AP:+0.2 มม.; ML: - 3.0 มม.; DV: - 3.5 มม.) เกี่ยวกับ "แผนที่สเตอริโอของสมองหนู" ของ GeorgePaxinos หลังจากการให้ยาครั้งสุดท้าย หนูจะถูกดมยาสลบในอีก 1 ชั่วโมงต่อมา และหนูถูกสร้างขึ้นแบบจำลองการขาดเลือดในสมองโฟกัส (แบบจำลอง MCAO) โดยใช้วิธีเย็บ Longa ที่ปรับปรุงใหม่ของ Yang Zanzhang [12] เส้นปลาในกลุ่มควบคุมถูกสอดเข้าไปเพียง 10 มม. และขั้นตอนอื่นๆ เหมือนกับขั้นตอนในกลุ่มปฏิบัติการ หลังจากการสร้างแบบจำลอง ให้ใส่โพรบไมโครไดอะไลซิสในสภาวะมีสติและเคลื่อนไหวอย่างอิสระ และใช้สารละลายริงเกอร์ไปที่ μ เก็บไมโครไดอะไลเซตในสมองที่ 4 องศา และเก็บหลอดของไดอะไลเซตที่ 20 นาที หลังจากรวบรวมสารฟอกขาวแต่ละหลอดแล้ว ควรเก็บไว้ในตู้เย็นที่มีอุณหภูมิ - 20 องศาทันที และย้ายไปยังตู้เย็นที่มีอุณหภูมิ - 70 องศาหลังจากการฟอกไต วัดอัตราการฟื้นตัวของโพรบก่อนการใช้งาน ซึ่งใช้ในการแปลงความเข้มข้นของสารสื่อประสาทโมโนเอมีนในสารฟอกขาว

cistanche tubulosa ทำอะไร - ปรับปรุงความจำ

2.3 การวิเคราะห์ HPLC-ECD

การกำหนดค่าเฟสเคลื่อนที่: เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยบัฟเฟอร์กรดซิตริก-โซเดียมซิเตรต 0.15mol · L-1 829 มล. ต่อลิตร 0.1mol · L-1 ไดโซเดียม EDTA 1 มล.; เมทานอล 150มล.; โซเดียม {{10}}อัลคิลซัลเฟต 0.283ก. ตั้งค่าอัตราการไหลของเฟสเคลื่อนที่เป็น 0.7ml · นาที-1 และอุณหภูมิของเตาอบแบบคอลัมน์เป็น 28 องศา แรงดันไฟฟ้าในการทำงานของเครื่องตรวจจับไฟฟ้าเคมีคือ 200mV, 400mV และ 600mV โดยมี 2, 3 และ 4 ช่องสัญญาณตามลำดับ กำไรคือ 2nA ปริมาตรการฉีดคือ 25 ไมโครลิตร เส้นโค้งมาตรฐานถูกวาดด้วยสารละลายมาตรฐานแบบผสมเกรเดียนต์ 0.025, 0.05, 0.1, 0.2, 0.5 มก. · L-1

2.4 การประมวลผลทางสถิติ

ข้อมูลการทดลองแสดงเป็น x ฟิลด์ ± s และข้อมูลการวัดซ้ำได้รับการวิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์ทางสถิติ SPSS13.0

รูปที่ 1-6 แสดงให้เห็นการเปลี่ยนแปลงในระดับ NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA และ 5-HT ในระดับของเหลวที่อยู่นอกเซลล์ของโครงร่างของหนู จะเห็นได้จากรูปที่หลังจากภาวะขาดเลือดในสมอง สารสื่อประสาทชนิด monoamine ในของเหลวนอกเซลล์ของ striatum มีความผิดปกติของการเผาผลาญ และเนื้อหาของสารสื่อประสาทแต่ละตัวก็เพิ่มขึ้น ภายในช่วงหนึ่ง การเพิ่มขึ้นจะชัดเจนยิ่งขึ้นเมื่อระยะเวลาของภาวะขาดเลือดขาดเลือดยาวนานขึ้น ที่ภาวะขาดเลือด 90 นาที ความเข้มข้นของ DA และ NE ในของเหลวนอกเซลล์ของ striatum มากกว่าสามเท่าของกลุ่มควบคุม ระดับ NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA และ 5-HT ในกลุ่มควบคุมลดลงจากสูงไปต่ำ ซึ่งอาจเกี่ยวข้องกับภาวะขาดเลือดชั่วคราวของสมองซีกซ้ายหลังการผูกหลอดเลือดแดงคาโรติดร่วมด้านซ้าย และความเสียหายที่เกิดจากการใส่โพรบ จากกราฟการเปลี่ยนแปลง ECH และ CXQ สามารถลดความเข้มข้นสูงสุดของ DA, DOPAC, HIAA, HVA และ 5-HT หลังจากภาวะสมองขาดเลือด และ CXQ และ ECH ในปริมาณสูงจะชัดเจนมากขึ้น การเลื่อนลงของเส้นโค้งเวลาของสารสื่อประสาทแต่ละตัวบ่งชี้ว่า ECH สามารถยับยั้งการเพิ่มขึ้นของสารสื่อประสาทและสารเมตาบอไลท์ในสมองของหนูที่มีภาวะสมองขาดเลือด

                                                                           รูปที่ 2 ผลของเอชิโนไซด์ต่อระดับนอกเซลล์ของ DA ใน striatum ของหนู

รูปที่ 3 ผลของเอคิโนไซด์ต่อระดับนอกเซลล์ของ DOPAC ใน striatum ของหนู รูปที่ 4 ผลของเอชิโนไซด์ต่อระดับนอกเซลล์ของ HIVV ใน striatum ของหนู

รูปที่ 5 ผลของเอคิโนไซด์ต่อระดับนอกเซลล์ของ HVA ใน striatum ของหนู รูปที่ 6 ผลของเอคิโนไซด์ต่อระดับนอกเซลล์ของ 5-HT instriatum ของหนู

4.การอภิปราย

ซูเปอร์แมน cistancheสมุนไพร—ปรับปรุงมีความทรงจำ

【สอบถามเพิ่มเติม】 อีเมล:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

กลไกการบาดเจ็บของสมองที่เกิดจากภาวะสมองขาดเลือดมีความซับซ้อน ในกรณีของภาวะสมองขาดเลือด สารสื่อประสาทชนิดโมโนเอมีนในสมองจะไม่เป็นระเบียบ และเนื้อหาของ NE, DA และ 5-HT จะลดลงอย่างมีนัยสำคัญ ยิ่งภาวะสมองขาดเลือดรุนแรงมากขึ้น ปริมาณของ NE, DA และ 5-HT ในเนื้อเยื่อสมองก็จะยิ่งลดลง [13] วิธีการล้างไตด้วยเครื่องไตเทียมในสมองพิสูจน์ให้เห็นว่าปริมาณสารสื่อประสาทชนิดโมโนเอมีนเพิ่มขึ้นในของเหลวที่อยู่นอกเซลล์ในระหว่างภาวะขาดเลือดในสมอง ซึ่งคงอยู่ไปตลอดระยะเวลาที่ขาดเลือด และเพิ่มขึ้นอีกเมื่อระยะเวลาที่ขาดเลือดยาวนานขึ้น ผลการทดลองสอดคล้องกับรายงาน [14]เอไคโนไซด์เป็นส่วนประกอบที่มีประสิทธิภาพของฟีนิลทานอยด์ไกลโคไซด์ที่แยกและทำให้บริสุทธิ์จาก Cistanche Deserticola ซึ่งเป็นพืชชนิดพิเศษในซินเจียง มีฤทธิ์ป้องกันระบบประสาทมากมาย เช่น ต่อต้านวัย ปรับปรุงการเรียนรู้และความจำ และต่อต้านการตายของเซลล์ประสาท. ในการศึกษานี้ มีการใช้เครื่องฟอกไตในสมองขั้นสูงในประเทศร่วมกับเทคโนโลยีการตรวจจับ HPLC-ECD เพื่อสำรวจผลกระทบของเอไคโนไซด์เกี่ยวกับสารสื่อประสาท monoamine และสารของพวกมันในของเหลวนอกเซลล์ของ striatum ของหนูทดลองที่มีภาวะขาดเลือดในสมอง ผลการวิจัยพบว่า ECH สามารถลดการเพิ่มขึ้นของสารสื่อประสาทชนิดโมโนเอมีนในของเหลวนอกเซลล์ของ striatum ที่เกิดจากภาวะสมองขาดเลือด และมีผลดีกว่าในการปรับปรุงความเสียหายของเนื้อเยื่อสมองขาดเลือด