Cistanche อาหารช่วยบรรเทาความเสียหายเฉียบพลันของ Ileum ของเป็ด Ⅱ

3.1 สัณฐานวิทยาของลำไส้

ในการศึกษานี้ การตรวจทางพยาธิวิทยาด้านบน (H&E) และคำแนะนำของโครงสร้างจุลภาคที่ประเมินโดย ultrastructural ของ ileum ได้แสดงให้เห็นแล้วในรูปที่ 1 เมื่อเปรียบเทียบกับ T0 กลุ่ม ileum ใน T0บวกกลุ่ม AFB1 แสดงการลดลงของความหนาของเยื่อบุผิว ความเสียหายของโครงสร้างวิลลี่ และอักเสบการรวมตัวของเซลล์และการ การทำลายโครงสร้างจุลภาคเช่น microvilli จำนวนมากแตกหักอย่างรุนแรงและ mi-mitochondria ดีและการหดตัว ความเสียหายใน ileum ของเป็ดที่มีโครงสร้าง การทำลายของ villi และ microvilli หลังจากการบริหาร AFB1 ทำให้เกิดการปรากฏตัวของ ผู้ติดเชื้อความเครียดออกซิเดชัน. อย่างที่คาดไว้,cistanche อาหารมีความสามารถในการปกป้อง ileum จากความเสียหายเฉียบพลันที่เกิดจาก AFB1การบริหารรวมทั้ง ileum villi-หักเซลล์อักเสบรวมตัวกันและความเสียหายเล็กน้อยของโครงสร้าง ileum ที่จัดระดับโดย H&E และลดจำนวนของ microvilli ที่แตก ทำให้ไมโตคอนเดรียลดลง การบวมและการขจัดอายุของไมโตคอนเดรียที่หดตัวประเมินโดยโครงสร้างรูปวงแหวนที่แสดง ในความแตกต่างของโครงสร้างระหว่าง T500บวกกับ AFB1group และ ต0บวกกับกลุ่ม AFB1

กลุ่ม; ต500 บวก AFB1: cistanche บวกกลุ่ม AFB1

คลิกที่นี่เพื่อรับอาหารเสริม Cistanche Anti-Oxidation

สอบถามเพิ่มเติม:

อีเมล:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plus 86 15292862950

3.2. ระดับของ AFB1-DNA Adducts ในพลาสมา

AFB1-DNA adducts ในพลาสมาของเป็ดถูกวัดโดย ELISA แบบแข่งขันทางอ้อม และแสดงในรูปที่2. เทียบกับต0 กลุ่ม การบริหาร AFB1 เพิ่มเนื้อหาของ AFB อย่างมีนัยสำคัญ1-DNA adducts (p < 0.001) in the plasma. As expected, cistanche อาหารAFB ที่ลดลง1-DNA adducts เนื้อหา (p = 0.001) ในพลาสมาของเป็ดในกลุ่ม T500 บวก AFB1 ที่สัมพันธ์กับกลุ่ม T0 บวกกับกลุ่ม AFB1

บวก AFB1: cistanche บวกกลุ่ม AFB1 ค่าจะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± เอสอีเอ็ม (n= 15), ** หมายถึง < 0.01.

3.3. ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระในพลาสมาและลำไส้เล็กส่วนต้น

ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของพลาสมาแสดงในรูปที่3. การได้รับ AFB1 ทำให้เกิดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน ซึ่งแสดงว่า T-SOD (p = 0.073), GSH-PX (p = 0.034) และ GSH-ST (p = 0.003) กิจกรรมในพลาสมาลดลงใน T0 บวกกับกลุ่ม AFB1 มากกว่ากลุ่มต0 กลุ่ม. อย่างไรก็ตาม T-SOD (p = 0.039), GSH-PX (p = 0.009) และ GSH-ST (p = 0.003) กิจกรรมได้รับการปรับปรุงอย่างมากใน T500 บวกกับกลุ่ม AFB1 มากกว่ากลุ่มต0 บวกกับกลุ่ม AFB1 ความเข้มข้นของ MDA (p = 0.028) ในพลาสมาเพิ่มขึ้นใน T0 บวกกับกลุ่ม AFB1 กว่าในกลุ่มต0 กลุ่มและความเข้มข้นของ MDA (p < 0.001) in the plasma was decreased in the T500 บวกกับกลุ่ม AFB1 มากกว่ากลุ่มต0 แถมเอเอฟB1. 

3.4. การแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องกับ Nrf2-เป็นเส้นทางการส่งสัญญาณใน Ileumการบริหารให้ AFB1 ทำให้เกิดความเครียดออกซิเดชั่นของเซลล์และส่งผลให้เกิดการเปลี่ยนแปลงการแสดงออกของยีนรวมถึง Keap1, Nrf2, CAT, SOD1, GPX, GST, NQO-1, HO-1, GCLC และ GCLM ใน ileum ของ เป็ด ดังแสดงในรูป4การบริหาร AFB1 เพิ่ม mRNA อย่างมีนัยสำคัญ (p = 0.001) ระดับของยีน Keap1 และยับยั้งระดับ mRNA ของยีน รวมทั้ง Nrf2 (p = 0.171), กท (p = 0.166), SOD1 (p = 0.121), GPX (p = 0.065), GST (p = 0.008), NQO-1 (p = 0.061), โฮ-1 (p = 0.068), GCLC (p = 0.800) และ GCLM (p = 0.090) และปริมาณโปรตีน Nrf2 (p = 0.001) ใน ileum ของเป็ดใน T0 บวกกลุ่ม AFB1 เทียบกับกลุ่ม ต0 กลุ่ม. ตามที่คาดไว้ การเพิ่ม cistanche ในอาหารเป็ดที่เลี้ยงเป็นเวลา 70 วันทำให้ mRNA ลดลงอย่างมาก (p = 0.012) การแสดงออกของยีน Keap1 ใน ileum ทำให้ระดับ mRNA ของยีนเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ รวมถึง Nrf2 (p = 0.042), SOD1 (p = 0.038), โฮ-1 (p = 0.041), NQO-1 (p = 0.047) และ GCLC (p = 0.043) และปรับปรุงระดับ mRNA ของยีน รวมทั้ง CAT (p = 0.229), GPX (p = 0.568), GST (p = 0.454) และ GCLM (p = 0.860) และโปรตีน Nrf2 (p = 0.005) ใน ileum ของเป็ดใน T500 บวกกลุ่ม AFB1 เทียบกับกลุ่ม ต0 บวกกับกลุ่ม AFB1

* วิธีp < 0.05, ** meansp < 0.01

3.5. การแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องกับ NF-κB ทางเดินส่งสัญญาณใน Ileum

การแสดงออกของยีนที่อักเสบแสดงในรูปที่5. เทียบกับต0 กลุ่ม การบริหารให้ AFB1 เพิ่มระดับ mRNA ของยีนบางตัว เช่น TLR4 (p = 0.037), NF-κB (พี <0.001), TNF- (p = 0.025), อิลลินอยส์-6 (p = 0.072), TXNIP (p = 0.007), NLRP3 (พี <0.001) และ IL-18 (p = 0.478) ใน ileum ของเป็ดใน T0 บวกกับกลุ่ม AFB1 อย่างที่คาดไว้,cistanche อาหารยับยั้งการแสดงออกของยีนมากเกินไปอย่างมาก รวมถึง TLR4 (พี <0.001), NF-κB (p = 0.001), TNF- (p = 0.012), อิลลินอยส์-6 (p = 0.007), TXNIP (p = 0.001), NLRP3 (p = 0.001) และ IL-18 (พี <0.001) ใน ileum ของเป็ดใน T500 บวกกลุ่ม AFB1 เทียบกับกลุ่ม ต0 บวกกับกลุ่ม AFB1 อนึ่ง เนื้อหาแบบ ภพ.65 (p = 0.004) ใน ileum เพิ่มขึ้นใน T0 บวกกลุ่ม AFB1 เมื่อเทียบกับกลุ่มต0 กลุ่ม. อย่างที่คาดไว้,cistanche อาหารระงับ PP 65 อย่างมีนัยสำคัญ (p = 0.015) ปริมาณโปรตีน

ความเข้มของโปรตีนเป้าหมายต่อการอ้างอิงภายใน (GAPDH) ค่าแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± เอสอีเอ็ม (n = 15) และ* วิธีp < 0.05, ** means p < 0.01

4. การอภิปราย

สัณฐานวิทยาของลำไส้เป็นหนึ่งในตัวบ่งชี้พฤติกรรมในการประเมินการอักเสบและความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันของลำไส้ที่เกิดจากการให้ AFB1 วรรณกรรมเกี่ยวกับผลกระทบของการบริหาร AFB1 ต่อสัณฐานวิทยาของ ileum ของเป็ดยังมีน้อย หยานและคณะ (2020) รายงานว่าการบริหารให้ AFB1 นำไปสู่ความเสียหายทางพยาธิสภาพของหัวใจของหนู Sprague-Dawley การแทรกซึมของเซลล์ที่มีการอักเสบ และการเสื่อมของ cardiomyocyte มากขึ้น [29]. ลำไส้อักเสบจากหวัดที่มีการแทรกซึมของเซลล์อักเสบในลำไส้ของไก่เนื้อที่เกิดจาก AFB1 ทำลายโครงสร้างของลำไส้ [12]. ลูซี่และคณะ (2002) รายงานการหดตัวของลำไส้เล็กส่วนต้นที่เกิดจากการบริหาร AFB1 แบบเฉียบพลัน [30]. ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่า cistanche ในอาหารเป็นสารป้องกันที่มีศักยภาพของ ileum ต่อการยับยั้งการอักเสบ ซึ่งอาจเป็นไปได้ว่า cistanche มีความสามารถในการยับยั้งการอักเสบในความผิดปกติของการอักเสบหลายชนิดในหนู [31–33]. ความเสียหายของ DNA ที่เกิดจากความเครียดออกซิเดชั่นจะทำลายความเสถียรของ DNA ซึ่งสามารถส่งเสริมการก่อตัวของ DNA adducts [34]. AFB1-DNA adduct เป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพในการประเมินระดับการบาดเจ็บของร่างกายซึ่งเกิดจาก AFB1 การสังเคราะห์และเพิ่มคุณค่า AFB1-DNA adducts ทำลายโครงสร้างของเนื้อเยื่อ แล้วส่งผลให้เกิดสารก่อมะเร็ง [35]. AFB1 จะถูกเมแทบอลิซึมโดยไซโตโครม P450s ไอโซไซม์ไปเป็น AFB1-8,9-epoxide (AFBO) และผลิต adducts ที่เกี่ยวข้อง [36] และเพิ่มความเสียหายของเนื้อเยื่อ ความเครียดออกซิเดชัน และความเสียหายของ DNA โดย ROS [37]. AFB1-DNA adducts สามารถจับกับนิวคลีโอโปรตีนและกรดนิวคลีอิก ทำให้ DNA และเซลล์เสียหาย และลดระดับของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระและการสังเคราะห์โปรตีน [38]. จาง และคณะ (2016) รายงานว่าอาหารเสริม cistanche ยับยั้งความเสียหายของตับที่เกิดจาก AFB1 โดยเพิ่มฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระ (GPx, SOD, CAT และ GST) และยับยั้ง AFB1-การผลิต DNA [39]. ในการศึกษานี้ การบริหาร AFB1 เพิ่ม AFB1-DNA เพิ่มเนื้อหาในพลาสมา cistanche ในอาหารลดปรากฏการณ์นี้ลงอย่างมาก ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่า cistanche ในอาหารมีศักยภาพในการปกป้อง ileum ในรูปแบบการบริหาร AFB1 แบบเฉียบพลันนี้ ซึ่งอาจอธิบายได้จากผลของสารต้านอนุมูลอิสระของ cistanche ที่ปรับปรุงความสามารถในการต้านออกซิเดชันของร่างกาย [40,41]. ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่นเกิดขึ้นเมื่อความไม่สมดุลของปฏิกิริยาออกซิเดชั่นและสารต้านออกซิเดชั่นในร่างกายเกิดจากการลดลงของกิจกรรมของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระและการเพิ่มขึ้นของระดับ lipid peroxidation ระบบเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระรวมถึง CAT, GSH-Px และ SOD เป็นด่านแรกของการป้องกันเซลล์ต่ออนุมูลอิสระและสายพันธุ์ออกซิเจนที่เกิดปฏิกิริยา (ROS) และเป็นสิ่งที่ขาดไม่ได้ในกลยุทธ์การป้องกันทั้งหมดของสารต้านอนุมูลอิสระในร่างกาย [42]. 

GST เป็นเอ็นไซม์ที่สำคัญในการลดรีแอคทีฟออกซิเจน (ROS) และความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน เพื่อให้ร่างกายได้รับการล้างพิษ [43]. ดังแสดงในรูป3, ความเครียดออกซิเดชันในพลาสมาและ ileum ของเป็ดเกิดขึ้นระหว่างความเสียหายเฉียบพลันของ ileum ที่เกิดจากการให้ AFB1 ตามที่คาดไว้ cistanche อาหารช่วยปรับปรุงความเครียดออกซิเดชันของร่างกายโดยเพิ่มกิจกรรม T-SOD, GSH-PX และ GSH-ST ในพลาสมาและ ileum หลังการให้ AFB1 ผลในการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าซิสแทนช์เป็นสารต้านออกซิเดชันที่มีศักยภาพสำหรับเป็ดที่เลี้ยงด้วย AFB1 ซึ่งอาจอธิบายได้ด้วยความสามารถในการต้านออกซิเดชันผ่านการยับยั้งการเกิดออกซิเดชันของไขมันและเพิ่มกิจกรรมของเอนไซม์ต้านออกซิเดชันโดยเสริมซิสแทนช์ [8,44,45]. ผลลัพธ์เหล่านี้สอดคล้องกับรายงานก่อนหน้านี้ที่แสดงให้เห็นว่า cistanche ปรับปรุง AFB1-ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงในกิจกรรมของกลูตาไธโอน, SOD, CAT และ MDA [8]. อาจเป็นเพราะความสามารถของ cistanche ในการขจัดอนุมูลอิสระโดยการฟื้นฟูกิจกรรมของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระและบรรเทาความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่น [15,46]. ความสมดุลระหว่างออกซิเดชันและแอนตี้ออกซิเดชันในร่างกายถูกควบคุมโดย T-SOD และ GSH-Px [47]. Nrf2 ถูกย้ายเข้าไปในนิวเคลียสของเซลล์และรวมกับ t องค์ประกอบตอบสนองของสารต้านอนุมูลอิสระ (ARE) และควบคุมการถอดความของยีนของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระซึ่งรวมถึง SOD, CAT, GSH-Px, HO-1, NQO-1, GCLC และ GCLM [47,48]. นอกจากนี้ GST ยังถูกควบคุมโดยการเปิดใช้งานวิธีส่งสัญญาณ Nrf2 และเป็นชนิดของเอนไซม์ล้างพิษระยะที่ II ที่เกี่ยวข้องกับการล้างพิษต่างๆ ในร่างกาย เพื่อบรรเทาความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน [49,50]. ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและการเกิดปฏิกิริยาออกซิเดชันของไขมันเป็นตัวชี้วัดทางชีวภาพสำหรับหนูที่ถูกเหนี่ยวนำโดยการให้ AFB1 [51,52]. ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันลดลงโดยการแสดงออกของยีนกระตุ้นภายใต้ Nrf2-ARE Signaling Path เช่น NQO-1, HO-1 และ GCLC [40]. การวิจัยจำนวนมาก รายงานว่าการแสดงออกของยีนที่เหนี่ยวนำเสริมด้วย cistanche รวมถึง HO-1, NQO-1, -GCLC, -GCLM, CAT และ GPX ผ่านการเปิดใช้งาน Nrf2 ในไก่เนื้อและหนู [40,41] และขจัดความเสียหายของตับที่เกิดจากการให้ AFB1 [39,53]. 

ผลในการศึกษานี้บ่งชี้ว่าการบริหารให้ AFB1 อาจกระตุ้นความเสียหายจากความเครียดออกซิเดชันของ ileum ผ่านการยับยั้งเส้นทางการส่งสัญญาณ Nrf2 cistanche ในอาหารส่งเสริมการแสดงออกของยีนปลายน้ำ Nrf2 เช่น ยีนต้านอนุมูลอิสระ (CAT, SOD1, GPX1, GST) และยีนเอนไซม์ล้างพิษระยะที่ 2 (NQO1, HO-1, GCLC, GCLM) ซึ่งแสดงให้เห็นว่าการเพิ่ม cistanche เข้าไปในอาหารสำหรับ เป็ดยับยั้งความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชันเฉียบพลันของ ileum ที่เกิดจากการให้ AFB1 ผ่านการเปิดใช้งาน Nrf2-เป็นเส้นทางการส่งสัญญาณ ผลลัพธ์ในการศึกษานี้แสดงหลักฐานว่า cistanche ในอาหารอาจเป็นสารฟื้นฟูที่มีศักยภาพในการปกป้อง ileum จากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันที่เกิดจากการให้ AFB1 NF- ที่กระตุ้นความเครียดออกซิเดชันκเส้นทางการส่งสัญญาณ B จากนั้นจึงประเมินการผลิตไซโตไคน์ที่อักเสบ [54]. ในการศึกษานี้ การบาดเจ็บของ ileum ที่เกิดจากการให้ AFB1 อาจเกิดจากการอักเสบ การบริหาร AFB1 อาจกระตุ้นความเสียหายของ ileum โดยตรงผ่านการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของปัจจัยการอักเสบ และการเปิดใช้งานเส้นทางการส่งสัญญาณการอักเสบโดยตรง มีความสัมพันธ์เชิงบวกระหว่างความเครียดออกซิเดชันและการอักเสบในเนื้อเยื่อ [55]. เกาะและคณะ (2020) รายงานว่า NF- ที่กระตุ้นให้เกิดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันκเส้นทางการส่งสัญญาณ B ควบคุมไซโตไคน์โปรอักเสบและทำให้เกิดการอักเสบในปอดหนู [56]. NF-κการส่งสัญญาณ B สามารถเปิดใช้งานได้โดย AFB1 ในเซลล์ไลน์ 3D4/21 [57] ส่งผลให้เกิดปฏิกิริยาการอักเสบ [58]. กุมาราและคณะ. (2020) พบว่าการบริหารให้ AFB1 กระตุ้นการอักเสบโดยการเพิ่มระดับของไซโตไคน์ที่เป็นปัจจัยกระตุ้นการอักเสบ, TNF- , IL-12 และ IL-6 ในซีรัมของหนูเผือก [59]. การสัมผัส AFB1 ในอาหารส่งผลให้ยีน TNF- แสดงออกมากเกินไป , อิลลินอยส์-1 และ IL-6 ในตับของสุกร และระดับ mRNA ของปัจจัยการอักเสบ (TNF- , IL-12, IL-6) ในตับของสุกรที่เลี้ยงด้วยอาหารที่มีกากเมล็ดองุ่น 8 เปอร์เซ็นต์ และ AFB1 กลับสู่ระดับควบคุม [60]. ระดับของ TNF- , IL-6 และ IL-1 ในตับของหนูที่มีภาวะชะลอการเจริญเติบโตภายในมดลูกเพิ่มขึ้น ซึ่งในตับของหนู IUGR ที่เลี้ยงด้วย cistanche 400 มก.กก.−1 อาหารกลับสู่ระดับการควบคุมของหนูแรกเกิดน้ำหนักปกติ [38]. การเปิดใช้งาน NF-κเส้นทางการส่งสัญญาณ B การแสดงออกของยีนควบคุม (NLRP3 และ Caspase-1) ซึ่งส่งเสริม IL-1 และ IL-18 การเจริญเต็มที่และการหลั่ง และกระตุ้นการตอบสนองต่อการอักเสบ [61]. ผลลัพธ์ในการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าการให้ AFB1 ประเมินการแสดงออกของยีนของปัจจัยการอักเสบใน ileum ของเป็ดอย่างมีนัยสำคัญ และอาหาร cistanche ยับยั้งการแสดงออกของยีนนี้ ซึ่งสอดคล้องกับการศึกษาที่เปิดใช้งานเส้นทางการส่งสัญญาณ NLRP3 โดย AFB1 ในหนู [40]. ผลลัพธ์ก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่า cistanche มีความสามารถในการยับยั้งการแสดงออกของโปรตีน NLRP3 ผ่านการยับยั้ง caspase-1 และ IL-1 [29]. ดังนั้น ผลการศึกษานี้เปิดเผยว่า cistanche อาจเป็นหนึ่งในสารเติมแต่งอาหารสัตว์ที่มีแนวโน้มจะบรรเทาการอักเสบใน ileum และความเสียหายของ ileum ที่เกิดจากการให้ AFB1 โดยการยับยั้ง NF-κข. ช่องทางการส่งสัญญาณ

5. สรุปผลการวิจัย

โดยสรุป การบริหาร AFB1 ทำให้เกิดการบาดเจ็บของ ileum ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและการอักเสบผ่านการยับยั้งการแสดงออกของยีนปลายน้ำของ Nrf2-เป็นวิถีการส่งสัญญาณและกระตุ้นการแสดงออกของยีนของยีนปลายน้ำของ NF-κข. ช่องทางการส่งสัญญาณ อย่างไรก็ตาม อาหาร cistanche ช่วยแก้ไขความเสียหายของ ileum ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน และการอักเสบของเป็ดที่เกิดจากการให้ AFB1 อย่างเห็นได้ชัด ซึ่งอาจเป็นเพราะการกระตุ้น Nrf2-ARE และยับยั้ง NF-κเส้นทางส่งสัญญาณ B (รูปที่6). ผลลัพธ์ในการศึกษานี้แสดงหลักฐานที่มีประสิทธิภาพว่า cistanche ในอาหารเป็นสารเติมแต่งอาหารที่มีประสิทธิภาพในการปกป้อง ileum จากการบาดเจ็บเฉียบพลันที่เกิดจากการให้ AFB1 ผ่านการเปิดใช้งาน Nrf2-ARE และยับยั้ง NF-κข. ช่องทางการส่งสัญญาณ