การกำหนดบทบาทของโภชนาการในการแก่ชราของผิวหนัง

โปรดติดต่อoscar.xiao@wecistanche.comสำหรับข้อมูลเพิ่มเติม

เชิงนามธรรม:ผลของอาหารที่มีต่อความชราของผิวได้กลายเป็นหัวข้อวิจัยที่น่าสนใจ การศึกษาก่อนหน้านี้ส่วนใหญ่มุ่งเน้นไปที่ผลประโยชน์ของคอลลาเจนเปปไทด์ที่ได้จากสิ่งมีชีวิตในทะเลต่อผิวหนังที่เสื่อมสภาพเมื่อรับประทานทางปาก ในขณะที่ผลประโยชน์ของคอลลาเจนเปปไทด์ที่ได้จากสัตว์ปีกที่มีต่อผิวหนังที่เสื่อมสภาพนั้นมักไม่ค่อยรายงาน ในการศึกษานี้ คอลลาเจนเปปไทด์ถูกเตรียมจากกระดูกไก่โดยการไฮโดรไลซิสด้วยเอนไซม์ และศึกษาผลและกลไกการออกฤทธิ์ของคอลลาเจนเปปไทด์ที่รับประทานในการบรรเทาความชราของผิวหนังที่เกิดจากรังสียูวีร่วมกับดี-กาแลคโตส ผลการวิจัยพบว่าคอลลาเจนจากกระดูกไก่มีลักษณะทั่วไปของคอลลาเจน และคอลลาเจนเปปไทด์จากกระดูกไก่ส่วนใหญ่เป็นเปปไทด์โมเลกุลขนาดเล็กที่มีน้ำหนักโมเลกุลเท่ากับ<3000 da.="" in="" vivo="" experiments="" showed="" that="" cps="" had="" a="" significant="" relieving="" effect="" on="" aging="" skin,="" indicated="" by="" the="" changes="" in="" the="" compostion="" and="" structure="" of="" the="" aging="" skin,="" improvement="" of="" skin="" antioxidant="" level,="" and="" inhibition="" of="" inflammation;="" the="" relieving="" effect="" was="" positively="" correlated="" with="" the="" dose="" of="" cps.="" further="" investigation="" showed="" that="" cps="" first="" reduce="" the="" level="" of="" skin="" oxidation,inhibit="" the="" expression="" of="" the="" key="" transcription="" factor="" ap-1(c-jun="" and="" c-fos),="" then="" activate="" the="" tgf-β/smad="" signaling="" pathway="" to="" promote="" collagen="" synthesis,="" inhibit="" the="" expression="" of="" mmp-1/3="" to="" inhibit="" collagen="" degradation,and="" inhibit="" skin="" inflammation="" to="" alleviate="" skin="" aging="" in="" mice.="" moreover,="" the="" skin="" transcriptome="" found="" that="" lysosomes="" activated="" after="" oral="" administration="" of="" cps="" may="" be="" an="" important="" pathway="" for="" cps="" in="" anti-skin="" aging,="" and="" is="" worthy="" of="" further="" research.="" these="" results="" suggested="" that="" cps="" might="" be="" used="" as="" a="" functional="" anti-aging="" nutritional="">

กรุณาคลิกที่นี่เพื่อทราบข้อมูลเพิ่มเติม

คำสำคัญ:คอลลาเจนเปปไทด์; ต่อต้านริ้วรอย; ทรานสคริปโทมผิวหนัง;การสังเคราะห์คอลลาเจน;ไลโซโซม

1. บทนำ

ยุคแห่งสุขภาพ การรับประทานอาหารเพื่อสุขภาพอย่างถูกต้องแม่นยำ การกำหนดบทบาทของโภชนาการในการชะลอวัยของผิว และการตัดสินใจว่าจะกินอะไรเพื่อรักษาผิวที่อ่อนเยาว์และมีสุขภาพดีนั้นเป็นปัญหาที่ยาก ผิวหนังเป็นอวัยวะที่ใหญ่ที่สุดของร่างกาย ประกอบด้วยชั้นหนังกำพร้า หนังแท้ และชั้นใต้ผิวหนัง ทำหน้าที่เป็นเกราะปกป้องร่างกายจากปัจจัยภายนอกและยังมีบทบาทด้านสุขภาพและความงาม[1. ริ้วรอยแห่งวัยของผิวเป็นกระบวนการที่ซับซ้อน ซึ่งแบ่งออกเป็นการแก่ก่อนวัยตามลำดับเวลาและการเสื่อมสภาพของผิวด้วยภาพถ่าย โดยได้รับผลกระทบจากปัจจัยทั้งภายในและภายนอกcistanche ก้านลักษณะสำคัญ ได้แก่ การสะสมของความเสียหายของโมเลกุลขนาดใหญ่ในเซลล์ การลดลงของการทำงานของเซลล์ต้นกำเนิด (ส่งเสริมการต่ออายุเนื้อเยื่อ) และการสูญเสียความสมบูรณ์ทางกายภาพของผิวหนังทีละน้อย [2] กลไกระดับโมเลกุลหลักที่ทำให้ผิวหนังแก่ก่อนวัย ได้แก่ ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน เทโลเมียร์สั้นลง ความเสียหายของดีเอ็นเอ การกลายพันธุ์ทางพันธุกรรม การควบคุมไมโครอาร์เอ็นเอ Photo-aging คือการเกิด hyperplasia ของผิวหนัง การแห้ง และการเสื่อมสภาพของเมทริกซ์นอกเซลล์ที่เกิดจากรังสีอัลตราไวโอเลต สาเหตุหลักของการเสื่อมสภาพของภาพถ่ายคือ reactive oxygen species (ROS) ที่เกิดจากรังสีอัลตราไวโอเลตซึ่งเป็นสื่อกลางในการแสดงออกของเมทริกซ์เมทัลโลโปรตีน (MMPs) และโปรคอลลาเจนชนิดที่ 1 ผ่านเส้นทางสัญญาณ เช่น การส่งสัญญาณของโปรตีนไคเนส (MAPK) ที่กระตุ้นด้วยไมโตเจน ทางเดินจึงนำไปสู่การเสื่อมสภาพของ extracellular matrix (ECM) ในผิวหนังและการตายของเซลล์ไฟโบรบลาสต์ [4] ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา การรักษาสุขภาพผิวและการชะลอวัยได้กลายเป็นที่นิยม และการค้นหาส่วนผสมจากธรรมชาติ เช่น เปปไทด์ที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพและโพลีฟีนอลที่มีสารต้านอนุมูลอิสระและฟังก์ชันต่อต้านริ้วรอยได้กลายเป็นจุดสนใจในการวิจัย [5]

Cistanche สามารถต่อต้านริ้วรอย

อย่างไรก็ตาม คอลลาเจนมีน้ำหนักโมเลกุลขนาดใหญ่และยากต่อการดูดซึมและนำไปใช้โดยตรง ในขณะที่คอลลาเจนเปปไทด์โมเลกุลขนาดเล็กหลังจากการไฮโดรไลซิสของคอลลาเจนจะมีฤทธิ์ทางชีวภาพที่แข็งแกร่งกว่าและมีอัตราการดูดซึมสูง [6] ในขณะเดียวกัน การประยุกต์ใช้คอลลาเจนอย่างกว้างขวางในอาหาร ยา วิศวกรรมเนื้อเยื่อ เครื่องสำอาง และสาขาอื่นๆ ทำให้คอลลาเจนเปปไทด์ที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำลง ประสิทธิภาพการดูดซึมสูงขึ้น และกิจกรรมทางชีวภาพที่แข็งแกร่งขึ้นเป็นที่ชื่นชอบในการวิจัยทางการแพทย์และอาหารที่ใช้งานได้จริง [{{1 }}]. คอลลาเจนเปปไทด์มีขนาดเล็ก ประกอบด้วย 2-20 กรดอะมิโนตกค้างที่ได้รับหลังจากการไฮโดรไลซิสของคอลลาเจน พวกมันถูกใช้เป็นอาหารเสริมสำหรับการรักษาความชราของผิวเนื่องจากการทำงานของสารต้านการอักเสบและสารต้านอนุมูลอิสระที่อาจเกิดขึ้น และการควบคุมภูมิคุ้มกัน และผลของการต้านอนุมูลอิสระและการเพิ่มจำนวนบนไฟโบรบลาสต์ของผิวหนัง [10]

หลังจากการบริหารช่องปาก คอลลาเจนเปปไทด์จะถูกดูดซึมในรูปของเปปไทด์ขนาดเล็กและถูกส่งไปยังเลือดอย่างรวดเร็ว และสุดท้ายไปยังไต ผิวหนัง ข้อต่อ และเนื้อเยื่ออื่นๆ เพื่อจัดเก็บและใช้งาน หลังจากผ่านไป 14 วัน ระดับกัมมันตภาพรังสียังคงสูงในผิวหนังของหนูที่ได้รับการดูแลด้วยคอลลาเจนเปปไทด์ที่ติดฉลาก C14-ประโยชน์ของ cistanche tubulosa และผลข้างเคียงคอลลาเจนเปปไทด์สามารถดูดซึมและนำไปใช้โดยร่างกายได้เกือบสมบูรณ์ ในขณะที่อัตราการดูดซึมและการใช้คอลลาเจนเพียง 50-60 เปอร์เซ็นต์ [6,11-13] ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา คอลลาเจนไฮโดรไลเสตจากหนังปลา เกล็ดปลา กระดูกวัว หนังวัว และหนังหมู ได้รับรายงานอย่างกว้างขวางว่ามีผลดีต่อการบรรเทาความชราของผิวหนัง และได้รับความสนใจอย่างมากจากนักวิจัย ตัวอย่างเช่น คอลลาเจนเปปไทด์ที่แยกได้จากหนังปลาคาร์พสีเงินส่งเสริมการสังเคราะห์โปรคอลลาเจนและยับยั้งการแสดงออกของโปรตีน AP-1, MMP-1 และ MMP-3 โดยการกระตุ้นเส้นทาง TGF- /Smad ป้องกันการเสื่อมสภาพของคอลลาเจนและซ่อมแซมเซลล์ผิวที่ถูกแสงแดดจัด [14] การบริหารช่องปากของคอลลาเจนเปปไทด์จากวัวสามารถปรับปรุงการผ่อนคลายของผิว เพิ่มปริมาณคอลลาเจนและการทำงานของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระ ซ่อมแซมเส้นใยคอลลาเจน และทำให้อัตราส่วนคอลลาเจนของผิวเป็นปกติในหนูที่มีอายุมากขึ้น [15] อย่างไรก็ตาม คอลลาเจนเปปไทด์จากแหล่งต่างๆ มีผลต่างกัน ปริมาณและโครงสร้างของเปปไทด์ที่มีฤทธิ์สูงในเลือดหลังการให้คอลลาเจนเปปไทด์ในช่องปากขึ้นอยู่กับแหล่งที่มาของคอลลาเจน [10] ผลการป้องกันของคอลลาเจนเปปไทด์ที่สกัดจากผิวหนังของไก่ต่อการบาดเจ็บของไฟโบรบลาสต์ที่เกิดจากรังสี UVA นั้นเหนือกว่าคอลลาเจนเปปไทด์ที่สกัดจากผิวหนังหมู วัว หรือปลานิล และผลของมันก็เทียบเท่ากับไตรเปปไทด์ที่ได้มาจากคอลลาเจน (Gly-Pro -Hyp)[16].

ความเชื่อทางศาสนาและความกังวลเกี่ยวกับโรค (เช่น โรควัวบ้า) ได้ชักนำผู้คนให้ค่อยๆ เปลี่ยนทิศทางของการพัฒนาคอลลาเจนและผลิตภัณฑ์จากสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมบนบกเป็นสัตว์ปีกและสิ่งมีชีวิตในทะเล|17I.เป็นผลพลอยได้หลักของการแปรรูปสัตว์ปีก ไก่ กระดูกเป็นแหล่งที่ดีของผลิตภัณฑ์คอลลาเจน ไม่เพียงแต่ช่วยลดการสูญเสียทรัพยากรและมลภาวะต่อสิ่งแวดล้อมเท่านั้น แต่ยังช่วยให้การนำผลพลอยได้ไปใช้อย่างมีประสิทธิภาพอีกด้วย ดังนั้นในการศึกษานี้ เราใช้เปปไทด์คอลลาเจนจากกระดูกไก่เป็นวัตถุดิบ โดยหนูนู้ดรับการรักษาด้วย D-galactose และ UV เพื่อกระตุ้นให้เกิดริ้วรอยของผิว เพื่อเป็นแบบจำลองในการประเมินผลของการให้คอลลาเจนเปปไทด์ในช่องปากต่อการบรรเทาความชราของผิวใน หนูและกำหนดกลไกที่เกี่ยวข้อง

2. วัสดุและวิธีการ

2.1.วัสดุ เคมีภัณฑ์ และสัตว์

ฟาร์มไก่ของมหาวิทยาลัยเกษตรกรรมยูนนาน (คุนหมิง ประเทศจีน) จัดหาไก่ที่ใช้แล้วซึ่งถูกแยก ตากแห้ง และบดเพื่อให้ได้กระดูกไก่ป่น ซื้อชุด Su-peroxide dismutase (SOD), catalase (CAT) และ glutathione peroxidase (GSH-PX) จาก Soleibao Biotechnology Co.,Ltd. (ปักกิ่ง ประเทศจีน) Hydroxyproline (HYP), interleukin-1 (IL-1x), matrix metalloproteinase-1/3 (MMP-1/3), type I pro-collagen และกรดไฮยาลูโรนิก (HA) ชุดตรวจอิมมูโนแอสเซย์ (ELISA) ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ (HA) ถูกซื้อจากสถาบัน Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (หนานจิง ประเทศจีน) หนูที่ไม่มีขน BALB/C เพศเมียที่แข็งแรง (อายุ 18±2g อายุหกสัปดาห์) ถูกซื้อจาก Nanijing Junke Bioengineering Corporation, Ltd. (หนานจิง ประเทศจีน) โดยมีหมายเลขใบอนุญาต: SCXK(SU)2016-0010สารสกัดจากซิสทานเช ทูบูโลซ่าPepsin และ papain ถูกซื้อจาก Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd. (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) และสารเคมีอื่นๆ เป็นเกรดวิเคราะห์ หนูทั้งหมดได้รับการจัดการตามระเบียบข้อบังคับของห้องปฏิบัติการดูแลสัตว์ในมณฑลยูนนาน และได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการการดูแลและการใช้สัตว์ของมหาวิทยาลัยเกษตรแห่งยูนนาน (รหัสการอนุมัติ:YAUACUC01)

2.2. การเตรียมคอลลาเจนและองค์ประกอบของกรดอะมิโน

การสกัดและองค์ประกอบกรดอะมิโนของคอลลาเจนจากกระดูกไก่เป็นไปตามวิธีการที่อธิบายไว้โดย Liuet al [18]มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ผงกระดูกไก่กวนและแช่ใน 0.05 M NaOH,10 เปอร์เซ็นต์ n-เฮกเซนและ 0.25 M สารละลาย EDTA (pH7.5) ) ในอัตราส่วน 1/10 (m/o) ในแต่ละขั้นตอน ตัวอย่างจะได้รับการบำบัดเป็นเวลา 36 ชั่วโมง และสารละลายแช่ถูกเปลี่ยนทุกๆ 6 ชั่วโมงเพื่อให้ผงกระดูกพองตัว ขจัดโปรตีน ไขมัน และแร่ธาตุที่ไม่ใช่คอลลาเจนออกจากผงกระดูก ตัวอย่างถูกล้างด้วยน้ำบริสุทธิ์เพื่อให้เป็นกลางหลังจากแต่ละขั้นตอน กากกระดูกไก่ที่ผ่านการบำบัดแล้วผสมกับกรดอะซิติกน้ำแข็ง 0.5 โมลาร์ที่มีเปปซิน 0.1 เปอร์เซ็นต์ (w/v) ที่อัตราส่วนของแข็งต่อของเหลว 1:10 (w/v) และคนอย่างต่อเนื่องและสกัดที่ 4 องศาสำหรับ 48 ชม. จากนั้นกรอง จากนั้นกรองและหมุนเหวี่ยงที่ 15000×g เป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 องศา pH ของ supernatant ถูกปรับเป็น 7.5-7.8 ด้วยสารละลาย NaOH และเติม NaCl ไปที่ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 1.5 M หลังจากที่ส่วนผสมไม่ถูกรบกวนเป็นเวลา 12 ชั่วโมงที่ 4 องศาเพื่อให้เกิดเกลือ คอลลาเจน ตะกอนถูกปั่นแยกที่ 15000×g เป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 องศา จากนั้นละลายด้วยกรดอะซิติก 0.5 โมลาร์ ฟอกในน้ำบริสุทธิ์ แห้งเยือกแข็ง และผลิตภัณฑ์สำเร็จรูปคือคอลลาเจนจากกระดูกไก่

องค์ประกอบกรดอะมิโนของคอลลาเจนจากกระดูกไก่ถูกกำหนดโดยเครื่องวิเคราะห์กรดอะมิโนอัตโนมัติ Sykam S433D (มิวนิก ประเทศเยอรมนี) ตัวอย่างคอลลาเจนจำนวนหนึ่งที่จะทดสอบถูกถ่ายในหลอดที่ปิดสนิท เติมด้วย 10 mL6 M HCl และถูกไฮโดรไลซ์ที่ 110C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ไฮโดรไลเสตถูกทำให้เข้มข้นโดยการเป่าด้วยไนโตรเจนและละลายอีกครั้งในบัฟเฟอร์กรดซิตริก 20 มล. หลังจากการกรองแบบไมโครด้วยเมมเบรนที่มีรูพรุนขนาด 0.22 ไมโครเมตร ไฮโดรไลเสต 20 ไมโครลิตรถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์สเปกตรัมของกรดอะมิโน ปริมาณกรดอะมิโนในตัวอย่างแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์

2.3. การเตรียมและการกระจายน้ำหนักโมเลกุลของคอลลาเจนเปปไทด์ (CPs)

จากผลของกระบวนการปรับให้เหมาะสมก่อนหน้านี้ของเรา CPs ถูกเตรียมโดยใช้ปาเปนที่อัตราส่วนของเอนไซม์ต่อสารตั้งต้นที่ 1:40 (อัตราส่วนมวล) หลังจากปรับ pH เป็น 7 และการไฮโดรไลซิสด้วยเอนไซม์ที่ 63 องศาเป็นเวลา 5 ชั่วโมง เอนไซม์จะหยุดทำงานในอ่างน้ำเดือดเป็นเวลา 15 นาที เอนไซม์ไฮโดรไลเสตถูกขจัดเกลือและไลโอฟิไลซ์ ละลายอีกครั้งในสารละลายกรดฟอร์มิก 0.1 เปอร์เซ็นต์ และหมุนเหวี่ยงเพื่อให้ได้ส่วนลอยเหนือตะกอน AQ Exactive HF Orbitrap High-Resolution Mass Spectrometer-QE-HF(Thermo Fisher, Waltham, MA, USA) ซึ่งติดตั้งอิเล็กโตรสเปรย์ไอออไนซ์ (ESI ใช้ในการวิเคราะห์คอลลาเจนไฮโดรไลเสตในโหมดการสแกนแบบเต็มที่ 350-1800 ม. /z และดึงผลลัพธ์และวิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์ Proteome Discoverer 2.1

2.4.การทดสอบสัตว์

หนูที่ไม่มีขน BALB/C เพศเมีย (n{{0}}) ถูกเก็บไว้ในห้องภายใต้สภาวะควบคุมของอุณหภูมิ (24±1 องศา ) ความชื้น (60 ±5 เปอร์เซ็นต์ ) และ รอบกลางวันและกลางคืน 12 ชั่วโมงเป็นเวลาหนึ่งสัปดาห์ พวกเขาได้รับการเข้าถึงอาหารและน้ำโดยอิสระ หลังจากปรับตัวได้หนึ่งสัปดาห์ หนูถูกสุ่มแบ่งออกเป็นห้ากลุ่มต่อไปนี้ (n=11 ต่อกลุ่ม):(i) กลุ่มปกติ (N): UV unexposed; การบริหารช่องปากของ 0.4 มล. น้ำเกลือทุกวัน (ii). กลุ่มแบบจำลอง (M):รังสี UVexposed บวก D-กาแลคโตส (0.2 มล.); การบริหารช่องปากของน้ำเกลือ 0.4 มล. ทุกวัน

(ผม). กลุ่มคอลลาเจนเปปไทด์ขนาดต่ำ (LCP): สัมผัสกับรังสียูวีบวกกับ D-กาแลคโตส(0.2 มล.); ทางปาก

การบริหารให้ CPs 0.4 มล. (ขนาดยา: 200 มก.:กก.-1 น้ำหนักตัว) ทุกวัน

(iv). กลุ่มคอลลาเจนเปปไทด์ขนาดปานกลาง (MCPs): รังสียูวีที่สัมผัสบวกกับ D-galactose; oral

การบริหารให้ CPs 0.4 มล. (ขนาดยา: 500 มก.·กก.-1 น้ำหนักตัว) ทุกวัน

(v). กลุ่มคอลลาเจนเปปไทด์ปริมาณสูง (HCPs): UVexposed บวก D-galactose; ผู้ดูแลระบบช่องปาก-

tration ของ 0.4 มล. CPs(ขนาดยา: 1000 มก. กก.-1 น้ำหนักตัว) ทุกวัน

การบำบัดด้วย D-galactose ดำเนินการโดยการฉีดใต้ผิวหนังของ 0.2 มล. ของ 10 เปอร์เซ็นต์ของสารละลาย D-galactose ที่ด้านหลังคอของหนูเมาส์ (dose:1.0g/ กก-1น้ำหนักตัว) ทุกวัน ทำการฉายรังสี UV ด้วย 40 W UVA-340 LAMIP (แผง O, คลีฟแลนด์, สหรัฐอเมริกา, ความยาวคลื่นสูงสุด: 340 nm) ระยะห่างระหว่างหลอดไฟกับด้านหลังของหนูคือ 30 ซม. (230 ม. J/ซม. -) และการฉายรังสีกินเวลา 30 นาทีทุกวันเป็นเวลาเจ็ดสัปดาห์ (49 วัน) ความเข้มของรังสีวัดโดยเครื่องวัดรังสี UVA365- (Xinbao Keyi Electronic Technology Co., Ltd., ซีอาน, ประเทศจีน) หนึ่งชั่วโมงหลังจากการรักษาด้วย D-galactose และ UV หนูได้รับ CPs 0.4 มล. ทางปากทุกวัน หลังจากการฉายรังสีครั้งสุดท้าย หนูได้รับยาสลบ ชั่งน้ำหนัก และเนื้อเยื่อถูกสุ่มตัวอย่างสำหรับการวิเคราะห์ในภายหลัง

2.5. ความชื้นของผิวหนัง ดัชนีอวัยวะภายใน และการเพิ่มน้ำหนักตัว

ความชื้นของผิวหนังถูกกำหนดโดย ISO 1442 และคำนวณดัชนีอวัยวะภายในโดยใช้สมการต่อไปนี้: ดัชนีอวัยวะภายใน(กรัม/กก.)= น้ำหนักอวัยวะภายใน/น้ำหนักตัว

2.6. ความเครียด Oxidatioe, HA และ HYP ของผิวหนัง

ตัวอย่างผิวหนังถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันด้วยปริมาณน้ำเกลือปกติ (w/w) ถึงเก้าเท่าในอ่างน้ำแข็งด้วยเครื่องทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน (TGrinder OSE-Y30, Tiangen Biochemical Technology Co.,Ltd.,Beijing, China) แล้วหมุนเหวี่ยงที่ 2000 ×g และ 4 องศา เป็นเวลา 10 นาที กิจกรรมของซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเตส (SOD), คาตาเลส (CAT) และกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส (GSH-PX) และเนื้อหาของกรดไฮยาลูโรนิก (HA) และไฮดรอกซีโพรลีน (HYP) ในสารเหนือตะกอนที่รวบรวมได้ถูกกำหนดหาตามวิธีการที่อธิบายไว้ใน คำแนะนำที่สอดคล้องกับชุดอุปกรณ์ที่เกี่ยวข้อง

2.7.เนื้อเยื่อวิทยาผิวหนัง

ตัวอย่างผิวหนังของหนูเมาส์ถูกตรึงในสารละลายพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลา 24 ชั่วโมง อบแห้ง ฝังในพาราฟิน และหั่นเป็นชิ้น ส่วนของผิวหนังถูกย้อมด้วย hematoxylin และ eosin (HE) และสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง ECLIPSE CI-E ไปข้างหน้า (Nikon, Japan) ประเมินความหนาของผิวหนังชั้นนอกและผิวหนังชั้นหนังแท้โดยใช้ซอฟต์แวร์ Halcon 130.1.1 (MVTec มิวนิก เยอรมนี)

2.8. ลำดับการถอดเสียงของผิวหนัง

2.8.1. การแยก RNA การสร้างห้องสมุด และการจัดลำดับการถอดเสียง

Total RNA ถูกสกัดจากผิวหนังของหนูโดยใช้ RNeasy Mini Kit (Tiangen Bio-chemical Technology Co., Ltd., Beijing, China) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ความบริสุทธิ์และความเข้มข้นของ RNA ได้รับการตรวจสอบโดยใช้ kaiaoK5500Spectrophoto-meter(Kaiao, Beijing, China); ความสมบูรณ์ของ RNA ได้รับการประเมินโดยใช้ RNA Nano 6000 Assay Kit และระบบ Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) การวิเคราะห์ลำดับการถอดรหัสของแต่ละตัวอย่างดำเนินการโดย Biolinker Technology Company Limited (คุนหมิง ประเทศจีน) โดยสังเขป การจัดกลุ่มของตัวอย่างที่มีรหัสดัชนีถูกดำเนินการบนระบบการสร้างคลัสเตอร์ cBot โดยใช้ HiSeq PE Cluster Kit v4-cBot-HS(llu-mina) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต หลังจากการสร้างคลัสเตอร์ ไลบรารีจะถูกจัดลำดับบนแพลตฟอร์ม Ilumina และสร้างการอ่านแบบคู่ขนาน 150 bp

2.8.2. การวิเคราะห์ชีวสารสนเทศของข้อมูลการจัดลำดับ RNA

Gene Ontology(GO) และ Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) การวิเคราะห์ความสมบูรณ์ของยีนที่แสดงความแตกต่าง (DEG) ได้ดำเนินการโดยใช้แพ็คเกจตัววิเคราะห์คลัสเตอร์ภาษา R เมื่อค่า p น้อยกว่า 0.05 รายการและเส้นทางที่เสริมโดย GO และ KEGG จะถือว่ามีนัยสำคัญ

2.8.3. ปฏิกิริยาลูกโซ่ Transcriptase-Polymerase ย้อนกลับ (qRT-PCR)

QRT-PCR ถูกดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [19]

2.9. เวสเทอร์ บลอต

ตามวิธีการอธิบายโดย Park et al. [20] ทำการวิเคราะห์ Western blot (WB) เพื่อหาปริมาณการแสดงออกของโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับการเสื่อมสภาพของผิวหนังในหนูทดลอง ความเข้มข้นของโปรตีนของไลเสตผิวหนังในแต่ละกลุ่มการรักษาถูกหาปริมาณโดยใช้ชุด BCA แยกจากกันโดย SDS-PAGE (เจลอะคริลาไมด์ 10 เปอร์เซ็นต์) ถ่ายโอนไปยังเมมเบรน PVDF บล็อกด้วยนมพร่องมันเนย 5 เปอร์เซ็นต์ และบ่มด้วยปริมาณที่เหมาะสมของหลัก แอนติบอดี (TGF-b1, c-Fos,c-Jun, Samd2/3 และ -actin) ที่ 4 องศาในชั่วข้ามคืน หลังจากล้างด้วย TBST ตัวอย่างจะถูกผสมกับแอนติบอดีทุติยภูมิและฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมงcistanche tubulosa บทวิจารณ์ChemiDoc XRS plus chemiluminescence gel imager (BioRAD, Hercules, CA, USA) ถูกใช้เพื่อตรวจหาโปรตีนจำเพาะ Image] ซอฟต์แวร์ถูกใช้เพื่อหาปริมาณการแสดงออกของโปรตีนเป้าหมายในแต่ละกลุ่มการรักษา และผลลัพธ์ถูกแสดงแทนด้วยค่าความหนาแน่นที่ถูกทำให้เป็นมาตรฐานของโปรตีน -แอคติน

2.10.ELISA

ระดับการแสดงออกของ MMP-1, MMP-3, โปรคอลลาเจนชนิดที่ 1 และ IL-1& ในของเหลวสลายผิวถูกกำหนดหาโดยการทดสอบอิมมูโนที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ การทดสอบดำเนินการตามคำแนะนำที่ให้มาพร้อมกับชุดอุปกรณ์

2.11.การวิเคราะห์ทางสถิติ

ผลลัพธ์ทั้งหมดได้รับการวิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์ SPSS 21 (IBM Inc., Armonk, NY, USA) ผ่านการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) และการทดสอบหลายช่วงของ Duncan โดยตั้งค่าระดับนัยสำคัญเป็น p<0.05. originpro="" 2017(originlab,="" northampton,="" ma,="" usa)was="" used="" to="" plot="" the="" data.="" all="" data="" were="" expressed="" as="" the="" mean="" ±="" standard="" deviation="">

3. ผลลัพธ์และการอภิปราย

3.1.องค์ประกอบของกรดอะมิโนของคอลลาเจน

องค์ประกอบกรดอะมิโนของคอลลาเจนจากกระดูกไก่แสดงในตารางที่ 1.Gly เป็นกรดอะมิโนหลักในตัวอย่าง โดยคิดเป็นเกือบหนึ่งในสาม (27.86 เปอร์เซ็นต์) ของกรดอะมิโนทั้งหมด และ Hyp เป็น กรดอะมิโนพิเศษในคอลลาเจนคิดเป็นร้อยละ 9.83 ลักษณะสำคัญของโมเลกุลคอลลาเจนคือลำดับ Gly-XY ที่ทำซ้ำๆ และโครงสร้างแบบเกลียวสามชั้นที่เป็นเอกลักษณ์ซึ่งประกอบด้วยสายโซ่สามสาย Gly คิดเป็นประมาณหนึ่งในสามของกรดอะมิโนทั้งหมด X และ Y มักเป็นโพรลีนและไฮดรอกซีโพรลีน หรืออาจเป็นสารตกค้างใดๆ [21] องค์ประกอบของกรดอะมิโนในกลุ่มตัวอย่างมีความคล้ายคลึงกับคอลลาเจนของกระดูกไก่ที่รายงานในการศึกษาก่อนหน้านี้และมีลักษณะเฉพาะของคอลลาเจน [22]

3.2. การกระจายน้ำหนักโมเลกุลของ CPs

Molecular weight distribution reflects the degree of collagen hydrolysis. The molecular weight of the CPs was mainly below 3000 Da (Figure 1), accounting for about 87.61%of all collagen hydrolysates, indicating that almost all of the CPs were small peptides. Many studies claim that collagen peptides with a lower molecular weight have better biological activity [23]. For example, Song et al. [24]. reported that lower molecular weight (200-1000 Da, 65%)silver carp skin collagen peptides repaired UV-induced aging skin in mice more effectively than similar peptides with a higher molecular weight(>1,000 ดา, 72 เปอร์เซ็นต์ ). อย่างไรก็ตาม บริษัท Gelita ของเยอรมันแสดงให้เห็นจากการศึกษาทางคลินิกหลายครั้งว่าผลของคอลลาเจนเปปไทด์นั้นส่วนใหญ่ถูกกำหนดโดยระดับการจับคู่กับคุณสมบัติของคอลลาเจนเปปไทด์หลังจากการย่อยสลายคอลลาเจนของมนุษย์ มากกว่าน้ำหนักโมเลกุลของคอลลาเจนเปปไทด์ พวกเขาพบว่าผลิตภัณฑ์ VERISOL③ ที่มีน้ำหนักโมเลกุลเฉลี่ย 2000 Da มีผลกระตุ้นมากที่สุดต่อไฟโบรบลาสต์ของผิวหนัง ในขณะที่ผลิตภัณฑ์ FortigelTM ที่มีน้ำหนักโมเลกุลเฉลี่ย 3000 Da มีผลพิเศษในการซ่อมแซมกระดูกอ่อน [25-27]

3.3. ผลของ CPs ในช่องปากต่อการบรรเทาความชราของผิวหนัง

3.3.1.น้ำหนักตัวและดัชนีอวัยวะ

ดัชนีน้ำหนักตัวและดัชนีอวัยวะมีความสำคัญและสะท้อนถึงภาวะสุขภาพของหนู โดยน้ำหนักของหนูในแต่ละกลุ่มเพิ่มขึ้นตามปกติในช่วงทดสอบ (ตารางที่ 2) น้ำหนักที่เพิ่มขึ้นโดยเฉลี่ยของกลุ่ม M นั้นต่ำกว่ากลุ่ม N และกลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย CP นั้นสูงกว่ากลุ่ม M ซึ่งบ่งชี้ว่า CPs ไม่มีผลข้างเคียงกับหนู ในรายงานก่อนหน้านี้ ปริมาณของหนูที่ได้รับการรักษาด้วยคอลลาเจนเปปไทด์ส่วนใหญ่อยู่ระหว่าง 100-1000 มก./กก.bw·d และขนาดที่ปลอดภัยของเปปไทด์คอลลาเจนจากปลานิลอยู่ที่ 4.07 ก./กก.bw·d [{{6} }]. ในทำนองเดียวกัน การเจริญเติบโตของหนูที่มีอายุผิวหลังการให้น้ำด้วยคอลลาเจนเปปไทด์จากเกล็ดปลานิล (ขนาดยา: 500 และ 1000 มก./กก.·bw·d) ก็คล้ายกับผลลัพธ์ของเราเช่นกัน [29] ม้ามมีบทบาทสำคัญในการสร้างภูมิคุ้มกันของร่างกายและระดับเซลล์ ดังนั้น ดัชนีม้ามจึงมักใช้เพื่อประเมินการทำงานของระบบภูมิคุ้มกันcistanche สหราชอาณาจักรThe liver index was used to evaluate the toxicity of the tested sample. In these tests, the liver and spleen indices in the M group were lower than those in the N group, and both recovered after treatment with CPs, but there was no significant difference across the treatment groups (p >0.05) ผลลัพธ์มีความคล้ายคลึงกับการศึกษาก่อนหน้านี้ [30] ซึ่งบ่งชี้ว่า CPs ปลอดภัยและอาจช่วยเพิ่มภูมิคุ้มกันของหนูได้เล็กน้อย

3.3.2.องค์ประกอบผิว

การรักษาด้วย UV และ D-galactose (กลุ่ม M) ลดความชื้น HA และ Hyp ในผิวหนังลงอย่างมีนัยสำคัญ เมื่อเทียบกับกลุ่ม N ร้อยละ 13.36 ร้อยละ 24.08 และร้อยละ 15.83 ตามลำดับ (p<0.05)(table 2).="" the="" contents="" of="" moisture,="" ha,="" and="" hyp="" in="" the="" skin="" were="" significantly="" higher="" in="" mice="" after="" the="" oral="" administration="" of="" cps="" compared="" to="" the="" contents="" of="" those="" in="" the="" mice="" of="" the="" m="" group=""><0.05). among="" the="" dose="" groups,="" the="" contents="" of="" the="" three="" skin="" components="" were="" significantly="" different="" between="" the="" lcp="" and="" hcp="" groups="" and="" were="" dependent="" on="" the="" dose="" of="" intake="" of="" cps.="" the="" hcp="" group="" had="" even="" higher="" contents="" than="" the="" n="" group,="" and="" ha="" and="" hyp="" were="" significantly="" different="" between="" the="" two="" groups="" (p=""><>

การเปลี่ยนแปลงของความชื้นในผิวหนังทำให้เกิดริ้วรอยและความหย่อนคล้อยของผิวหนัง และได้รับผลกระทบจากองค์ประกอบเมทริกซ์ เช่น คอลลาเจนของผิวหนังและ HA[31] ไฮดรอกซีโพรลีนเป็นกรดอะมิโนชนิดพิเศษที่เสถียร เข้มข้น และพิเศษในคอลลาเจน และเนื้อหาของมันสามารถสะท้อนเนื้อหาของคอลลาเจนในผิวหนังได้ทางอ้อม รวมถึงการเสื่อมสภาพของผิว นอกจากนี้ HA ซึ่งแสดงออกอย่างมากใน ECM ของผิวหนังยังมีบทบาทสำคัญ ในการควบคุมสมดุลของน้ำในผิวหนัง แรงดันออสโมติก การกักเก็บความชื้น และความยืดหยุ่น เป็นระบบกักเก็บน้ำและส่วนประกอบโครงสร้างของผิวหนัง [32] ในการศึกษานี้ ปริมาณความชื้น HYP และ HA ในผิวหนังเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญหลังการบริโภค CP ซึ่งอาจเกี่ยวข้องกับการส่งเสริมการสังเคราะห์คอลลาเจนและ HA โดย CPs นอกจากนี้ การเพิ่มขึ้นของ HYP และ HA ทำให้ความชื้นเพิ่มขึ้น

3.3.3. การเปลี่ยนแปลงทางเนื้อเยื่อผิวหนัง

การเปลี่ยนแปลงทางเนื้อเยื่อวิทยาของผิวหนังหลังของหนูหลังการรักษาอย่างต่อเนื่องเป็นเวลาเจ็ดสัปดาห์ดังแสดงในรูปที่ 2 ผิวที่เสื่อมสภาพของกลุ่ม M แสดงลักษณะของผิวที่หยาบกร้าน ผิวหนังชั้นนอกหนา ผิวหนังชั้นหนังแท้บาง และเซลล์กระจัดกระจาย เมื่อเปรียบเทียบกับผิวหนังของ เอ็น กรุ๊ป อย่างไรก็ตาม สภาพผิวที่แก่ชราในหนูทดลองดีขึ้นหลังจากให้ CPs ทางปาก โดยคงไว้ซึ่งโครงสร้างที่ราบรื่น เป็นระเบียบ และสมบูรณ์คล้ายกับในหนูในกลุ่ม N ดังนั้น ผิวหนังชั้นหนังแท้จึงบางลงอย่างเห็นได้ชัด และชั้นหนังกำพร้าในกลุ่ม M นั้นหนากว่าในกลุ่ม N อย่างมีนัยสำคัญ (p<0.05). the="" change="" in="" skin="" dermis="" and="" epidermal="" thickness="" was="" significantly="" better="" after="" treatment="" with=""><0.05), and="" the="" effect="" was="" more="" obvious="" with="" the="" increase="" in="" the="" dose="" of="" cps="" (figure="" 2).the="" effect="" of="" oral="" cps="" on="" the="" histological="" structure="" of="" aging="" skin="" was="" similar="" to="" that="" reported="" previously="" [4,28,31].="" the="" increase="" in="" the="" thickness="" of="" the="" epidermis="" might="" be="" an="" adaptive="" change="" to="" protect="" the="" skin="" from="" external="" stimuli,loss="" of="" skin="" moisture,="" and="" uv="" damage,="" possibly="" due="" to="" the="" increase="" in="" uv-activated="" epidermal="" growth="" factor="" receptor="" (egfr)="" that="" induces="" keratinocyte="" proliferation="" and="" epidermal="" hyperplasia[4].="" however,="" the="" mechanism="" by="" which="" oral="" cps="" alleviate="" the="" increase="" in="" epidermal="" thickness="" remains="" unclear.="" the="" dermis="" imparts="" elasticity="" and="" strength="" to="" the="" skin,="" and="" the="" degradation="" of="" ecm="" and="" the="" reduction="" in="" the="" ability="" to="" repair="" fibroblasts="" are="" the="" main="" causes="" of="" dermal="" thinning="" in="" aging="" skin.="" dermal="" thickness="" increased="" after="" the="" treatment="" with="" cps,="" which="" might="" be="" due="" to="" the="" removal="" of="" ros="" from="" the="" skin="" and="" inhibition="" of="" the="" increase="" of="" mmps="" by="" cps.="" this,="" in="" turn,="" inhibited="" the="" degradation="" of="" skin="" collagen="" and="" elastin="" (figure="" 3),="" the="" entry="" of="" cps="" in="" the="" skin,="" and="" their="" participation="" in="" the="" synthesis="" of="" collagen="" and="" ha="" [6],="" which="" was="" confirmed="" by="" the="" increase="" in="" the="" content="" of="" hyp="" and="" ha="" in="" the="" skin="" (table="">

3.3.4. ระดับสารต้านอนุมูลอิสระและการอักเสบของผิวหนัง

การกำหนดกิจกรรมของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระเป็นวิธีที่ใช้กันมากที่สุดในการประเมินระดับสารต้านอนุมูลอิสระในร่างกาย [28] ดังแสดงในรูปที่ 3 กิจกรรมของเนื้อหา CAT, SOD, GSH-Px และ MDA ในกลุ่ม M ต่ำกว่ากลุ่ม N อย่างมีนัยสำคัญ (p<0.05). administering="" cps="" effectively="" inhibited="" the="" decrease="" of="" cat,="" sod,="" gsh-pxactivities,and="" the="" mda="" content="" in="" the="" skin="" of="" mice,="" compared="" to="" those="" in="" the="" mice="" skin="" of="" the="" m="" group,="" and="" was="" positively="" correlated="" with="" the="" dose="" of="" cps;="" there="" were="" significant="" differences="" among="" the="" different="" dose="" groups=""><0.05). when="" ros,="" accumulated="" by="" skin="" oxidative="" stress,="" exceed="" the="" antioxidant="" defense="" ability="" of="" the="" body,="" they="" destroy="" the="" ecm,="" which="" is="" the="" key="" cause="" of="" skin="" aging.="" ros="" can="" cause="" the="" oxidation="" of="" lipids="" and="" proteins="" in="" the="" skin,="" resulting="" in="" fibroblast="" degeneration="" and="" changes="" in="" the="" skin.="" ros="" activate="" the="" mapk="" signaling="" pathway="" and="" the="" ap-1="" protein="" to="" upregulate="" the="" expression="" of="" mmps="" and="" promote="" the="" degradation="" of="" matrixcollagen="" [21].="" although="" the="" antioxidant="" enzymes="" and="" antioxidants="" in="" the="" body="" can="" remove="" ros="" to="" protect="" the="" skin="" from="" damage,="" when="" the="" content="" of="" rosexceeds="" the="" defense="" (antioxidant)="" ability="" of="" the="" body="" or="" the="" body's="" defense="" ability="" declines,="" it="" causes="" oxidative="" stress="" and="" skin="">

นอกจากนี้ การตอบสนองต่อการอักเสบของเซลล์ที่เกิดจาก ROS ยังมีส่วนทำให้เกิดริ้วรอยของผิว หลังจากการรักษาด้วยรังสี UV และ D-galactose (Mgroup) เนื้อหาของ IL-lo ในผิวหนังของหนูเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับในกลุ่ม N (ภาพที่ 3D ) แสดงว่าผิวหนังมีการตอบสนองต่อการอักเสบอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.05). the="" cps="" significantly="" reduced="" the="" content="" of="" il-1α="" in="" the="" skin="" in="" a="" dose-dependent="" manner,="" compared="" to="" that="" in="" the="" skin="" of="" mice="" in="" the="" m="" group.="" there="" was="" a="" significant="" difference="" between="" hcps="" and="" lcps=""><0.05),indicating that="" cps="" alleviated="" skin="" inflammation.="" the'o,="" produced="" by="" ultraviolet="" irradiation="" stimulated="" the="" expression="" of="" mmp-1="" in="" dermal="" fibroblasts="" through="" the="" secretion="" of="" il-1α="" and="" il-6,="" thereby="" disrupting="" the="" ecm="" [33].="" therefore,="" this="" study="" suggested="" that="" cps="" significantly="" increased="" the="" activity="" of="" skin="" antioxidant="" enzymes="" and="" inhibited="" inflammatory="" responses,="" which="" might="" be="" important="" in="" delaying="" skin="" aging="" in="">

3.4. กลไกการออกฤทธิ์ของซีพีอาหารในการบรรเทาความชราของผิวหนัง

3.4.1.การวิเคราะห์และการตรวจสอบความถูกต้องของข้อมูล RNA-Seq

Analysis techniques, such as PCA, HCA, gene GOenrichment, and KEGG pathway enrichment were used to analyze the transcriptome data. Based on the PCA analysis (Figure 4A) and hierarchical clustering analysis (heat map)of 4303 differential genes with average channel strength greater than 100, the relative expression levels of total DEGs between the two treatment groups are shown to provide an overview of the changes in gene expression(Figure 4B). The M group and the HCP group were significantly separated, and the expression patterns of most DEGs in the M and HCP groups were opposite, indicating that there were significant differences between the mouse skin after HCP treatment and the M group (Figure 4A,B). Pairwise comparisons showed that after feeding HCPs,4303 genes were significantly expressed in the mice skin, including 1790 upregulated genes and 2513 downregulated genes(Foldchange>2,p<0.05)(figure 4c).among="" the="" sixgenes="" associated="" with="" skin="" aging="" quantified="" by="" qrt-pcr,="" five="" genes="" (including="" fos,="" jun,="" cxcll,and="" egr1)were="" downregulated,="" and="" one="" gene="" was="" upregulated="" (figure="" 4d),="" which="" was="" consistent="" with="" the="" overall="" trend="" of="" transcriptomic="" data.="" the="" rna="" expression="" levels="" of="" fos,="" jun,="" and="" cxcll="" were="" significantly="" upregulated="" in="" damaged="" skin="" compared="" to="" that="" in="" intact="" skin="" [34],="" and="" inhibition="" of="" egr1="" expression="" alleviated="" skin="" inflammation="" [35].="" these="" results="" reflected="" the="" reliability="" of="" transcriptome="" sequencing="" data,="" and="" oral="" cps="" effectively="" alleviated="" skin="">

การวิเคราะห์การเพิ่มคุณค่าของ GO และการวิเคราะห์การเพิ่มประสิทธิภาพของฐานข้อมูล KEGG ให้การสนับสนุนสำหรับการตรวจสอบการทำงานทางชีววิทยาของ DEG เพิ่มเติม การวิเคราะห์ GO แสดงให้เห็นว่า DEG ได้รับการเสริมสมรรถนะอย่างมีนัยสำคัญในกระบวนการทางชีววิทยา เช่น การจำลองดีเอ็นเอ การควบคุมการสร้างเม็ดเลือด การควบคุมกิจกรรมไฮโดรเลส และการผลิตไซโตไคน์ ในเซลล์ส่วนประกอบ ซึ่งรวมถึง lytic vacuole และ lysosome ที่ประกอบด้วยคอลลาเจนและยีนที่เกี่ยวข้องอื่น ๆ ได้รับการเสริมสมรรถนะอย่างมีนัยสำคัญ ในแง่ของการทำงานของโมเลกุล แอคติวิตีของรีเซพเตอร์-ลิแกนด์ แอคทิวิตี้ของไซโทไคน์ และยีนที่เกี่ยวข้องอื่นๆ ถูกทำให้สมบูรณ์ยิ่งขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (รูปที่ 5) การวิเคราะห์การเสริมสมรรถนะ KEGG ของเส้นทางสัญญาณ 20 ทางแรกที่เปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญโดย DEG แสดงไว้ในรูปที่ 5 อันตรกิริยาระหว่างไซโตไคน์กับรีเซพเตอร์, ไลโซโซม, อันตรกิริยาของลิแกนด์-รีเซพเตอร์ที่ออกฤทธิ์ทางประสาท, วัฏจักรเซลล์, โรคลูปัสระบบ และวิถี TGF (p<05) were="" closely="" related="" to="" aging,="" especially="" cytokine-receptor="" interactions,="" lysosomes,="" and="" tgf-βsignaling.="" an="" important="" feature="" of="" cellular="" senescence="" is="" the="" accumulation="" of="" damaged="" or-ganelles="" and="" protein="" aggregates.="" lysosomes="" play="" an="" important="" role="" in="" degrading="" damaged="" organelles="" and="" protein="" aggregates="" in="" senescent="" cells="" [36].="" cytokine-receptor="" interaction="" is="" the="" main="" pathway="" of="" enrichment="" in="" the="" skin="" after="" being="" affected="" by="" various="" factors="" such="" as="" inflammation="" [37],="" sulfur="" mustard="" exposure="" [38],="" and="" terahertz="" pulse="" [39].="" cytokines,="" as="" small="" molecular="" proteins="" synthesized="" and="" secreted="" by="" various="" tissue="" cells,="" maintain="" skin="" homeostasis="" by="" controlling="" the="" balance="" between="" keratinocyte="" proliferation,="" diferentiation,="" and="" apoptosis="" through="" complex="" interactions="" with="" growth="" factors[40].="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" is="" also="" important="" for="" regulating="" skin="" aging[14].="" gene="" functional="" enrichment="" anal-ysis="" showed="" that="" tgf-β="" was="" highly="" expressed="" during="" cytokine-receptor="" interaction="" and="" in="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway.="" tgf-β="" is="" a="" major="" pro-fibrotic="" cytokine="" that="" regulates="" cell="" differentiation="" and="" proliferation="" while="" inducing="" extracellular="" matrix="" protein="" synthesis="" [41].="" therefore,="" we="" verified="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" and="" some="">

3.4.2. การตรวจสอบกลไกการออกฤทธิ์ของซีพีในการบรรเทาความชราของผิวหนัง

เพื่อตรวจสอบบทบาทของเส้นทางการส่งสัญญาณ TGF และปฏิกิริยาระหว่างตัวรับไซโตไคน์ในการบรรเทาความชราของผิวด้วย CPs ในช่องปาก การวิเคราะห์ WB ได้ดำเนินการเพื่อตรวจสอบ TGF- และปัจจัยการถอดรหัส Smad2/3 ในเส้นทางการส่งสัญญาณ TGF- เช่นเดียวกับกุญแจ ปัจจัยการถอดรหัส AP-1 (c-Fos และ c-Jun) ที่ควบคุมไซโตไคน์ เนื้อหาของ MMP-1, MMP-3, Type I pro-collagen และ IL-1 ถูกกำหนดโดย ELISA ผลการวิเคราะห์ WB พบว่าการแสดงออกของ TGF- , Smad2 และ Smad3 ในกลุ่ม M ต่ำกว่าในกลุ่ม N อย่างมีนัยสำคัญ (p<0.05). the="" expression="" levels="" of="" tgf-β="" and="" smad3="" were="" significantly="" higher="" in="" mice="" after="" the="" oral="" administration="" of="" cps="" compared="" to="" their="" levels="" in="" group="" m="" mice;="" additionally,="" smad2="" also="" increased=""><0.05), except="" for="" in="" the="" lcps="" in="" a="" dose-dependent="" manner(figure="" 6).="" on="" the="" contrary,="" the="" expression="" of="" c-fos="" and="" c-jun="" in="" the="" mgroup="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" in="" the="" n="" group.="" the="" expression="" of="" c-fos="" and="" c-jun="" in="" the="" cp="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" m="" group,="" except="" for="" the="" expression="" of="" c-jun="" in="" the="" lcp="" group=""><0.05), and="" the="" change="" was="" dose-dependent.="" these="" results="" indicated="" that="" the="" tgf-β="" signaling="" pathway="" was="" activated="" and="" ap-1="" was="" inhibited="" after="" feeding="">

โปรตีน AP-1 เป็นคอมเพล็กซ์ไดเมอร์ของโปรตีนในตระกูล Jun และ Fos และเป็นตัวควบคุมที่สำคัญของการอักเสบของผิวหนังและการแสดงออกของไซโตไคน์ โดยทั่วไป คอมเพล็กซ์ที่ประกอบด้วย c-Jun และ c-Fos จะแสดงกิจกรรมการถอดรหัสสูงสุดในผิวหนัง [41,A42] ROS ที่ผลิตขึ้นในเซลล์ผิวที่แก่ก่อนวัยจะกระตุ้นโปรตีน AP-1 ก่อนแล้วจึงควบคุมไซโตไคน์ที่ปลายน้ำ (เช่น IL-1 ), MMP และเส้นทางการส่งสัญญาณ TGF- ผ่านการถอดรหัสและการแปล จึงอำนวยความสะดวกในการเกิดริ้วรอยของผิว[43 ,44]. ปฏิกิริยาการส่งสัญญาณ TGF- /Smad เป็นวิถีการสังเคราะห์คอลลาเจนแบบดั้งเดิม และปัจจัยการถอดรหัส Smad อยู่ที่แกนหลักของเส้นทางการส่งสัญญาณนี้ TGF- กระตุ้นฟอสโฟรีเลชันและกระตุ้นการทำงานของ Smad2 และ Smad3 ที่ปลายน้ำโดยการจับกับตัวรับ ซึ่งจะทำให้การสังเคราะห์ COLI เพิ่มขึ้น [14]

นอกจากนี้ ผลลัพธ์ของ ELISA ยังแสดงให้เห็นว่าเนื้อหาของ MP-1,MMP-3 และ IL-1a ในผิวหนังของกลุ่ม M นั้นสูงกว่าในกลุ่ม N อย่างมีนัยสำคัญ และ เนื้อหาของ Typel pro-collagen ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (p<0.05). however,="" the="" contents="" of="" mmp-1,mmp-3,and="" il-1α(figure="" 3d)in="" the="" skin="" after="" oral="" administration="" of="" cps="" were="" significantly="" lower="" than="" those="" in="" the="" m="" group=""><0.05); type="" i="" pro-collagen="" increased="" significantly,="" and="" all="" the="" changes="" were="" dose-dependent="" with="" cps="" (figure="" 7).="" mps="" are="" involved="" in="" the="" decomposition="" of="" skin="" collagen,="" il-1o="" shows="" the="" level="" of="" inflammation="" of="" the="" skin,="" and="" type="" i="" pro-collagen="" reflects="" the="" synthesis="" of="" skin="" collagen.="" accumulating="" evidence="" suggests="" that="" the="" role="" of="" the="" jun/ap-1="" protein="" pathway="" has="" also="" been="" proposed="" to="" regulate="" skin="" inflammation="" [40].="" the="" elisa="" results="" showed="" that="" the="" combined="" treatment="" of="" uv="" and="" d-galactose="" caused="" skin="" collagen="" degradation,="" decreased="" collagen="" synthesis,="" and="" caused="" skin="" inflammation,="" leading="" to="" skin="" aging.="" however,="" these="" changes="" were="" reversed="" after="" the="" oral="" administration="" of="">

นอกเหนือจากวิถีทางข้างต้น ในการศึกษานี้ ยีนที่ได้รับการควบคุมหลังจากการบำบัดด้วย CP ได้รับการเสริมสมรรถนะอย่างมีนัยสำคัญในวิถีทางไลโซโซม ซึ่งบ่งชี้ว่าการรักษาด้วยซีพีกระตุ้นไลโซโซมในผิวหนัง (รูปที่ 5) การศึกษาก่อนหน้านี้ระบุว่าไลโซโซมที่ถูกกระตุ้นจะทำให้เกิดการรวมตัวที่ชัดเจนและยกระดับการกระตุ้นเซลล์ต้นกำเนิดจากประสาทในวัยชราในช่วงอายุมากขึ้น [45] นอกจากนี้ ฟังก์ชันที่เพิ่มขึ้นของไลโซโซมยังช่วยลดความเข้มข้นของ ROS ภายในเซลล์เพื่อป้องกันการพักตัวของเซลล์ ในทำนองเดียวกัน การลดลงของฟังก์ชันไลโซโซมสามารถเพิ่มความเข้มข้นของ ROS ภายในเซลล์ที่ส่งเสริมการพักตัวของเซลล์ในที่สุด [46] แม้ว่าเราจะยังไม่ได้ตรวจสอบอย่างเป็นระบบในบทความนี้ ผลลัพธ์เหล่านี้และรายงานก่อนหน้านี้บอกเป็นนัยว่าการกระตุ้นการทำงานของไลโซโซมอาจเป็นวิธีหลักสำหรับ CPs เพื่อบรรเทาความชราของผิว และเราจะยังคงตั้งเป้าที่จะตรวจสอบต่อไป

ดังนั้น การศึกษานี้จึงแสดงให้เห็นว่า CPs ในอาหารสามารถบรรเทาความชราของผิวที่เกิดจากรังสี UV และ D-galactose ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา CPs บรรเทาความชราของผิวโดยลดระดับการเกิดออกซิเดชันของผิวหนัง ยับยั้งการแสดงออกของปัจจัยการถอดรหัสคีย์ AP-1(c-Jun และ c-Fos) กระตุ้นเส้นทางการส่งสัญญาณ TGF- /Smad เพื่อส่งเสริมการสังเคราะห์คอลลาเจน ยับยั้งการแสดงออกของ MMP-1 และ MMP-3 (ที่ยับยั้งการเสื่อมสภาพของคอลลาเจน) และยับยั้งการอักเสบของผิวหนังเพื่อบรรเทาความชราของผิว (รูปที่ 8) นอกจากนี้ การค้นพบของเราในการศึกษาในปัจจุบันยังชี้ให้เห็นว่าไลโซโซมที่ถูกกระตุ้นอาจเป็น แนวทางที่สำคัญสำหรับ CPs ในการควบคุมความชราของผิว ซึ่งสมควรได้รับความสนใจเป็นพิเศษ

4. บทสรุป

โดยสรุป การศึกษานี้ยืนยันว่าการเสริมอาหารของคอลลาเจนเปปไทด์คอลลาเจนจากกระดูกไก่สามารถบรรเทาความชราของผิวที่เกิดจากรังสีอัลตราไวโอเลตและ D-galactose ได้อย่างมีนัยสำคัญผ่านหลายเส้นทาง ซึ่งรวมถึงการส่งเสริมการสังเคราะห์โปรคอลลาเจน ยับยั้งการเสื่อมสภาพของคอลลาเจน ปรับปรุงระดับสารต้านอนุมูลอิสระของผิวหนัง และยับยั้งการอักเสบ การบรรเทาขึ้นอยู่กับขนาดยากับ CPs การตรวจสอบอย่างละเอียดพบว่า CPs ลดระดับการเกิดออกซิเดชันของผิวหนังก่อน ยับยั้งการแสดงออกของปัจจัยการถอดรหัสที่สำคัญ AP-1(c-Jun และ c-Fos) จากนั้นจึงเปิดใช้งานเส้นทางการส่งสัญญาณ TGF- /Smad เพื่อส่งเสริม การสังเคราะห์คอลลาเจน ยับยั้งการแสดงออกของ MMP-1 และ MMP-3 เพื่อยับยั้งการเสื่อมสภาพของคอลลาเจน และยับยั้งการอักเสบของผิวหนังเพื่อบรรเทาความชราของผิวในหนูทดลอง นอกจากนี้ การกระตุ้นไลโซโซมอาจเป็นหนทางหลักสำหรับซีพีในการบรรเทาความชราของผิว ซึ่งควรค่าแก่การติดตามผลการวิจัยและตรวจสอบ ผลลัพธ์เหล่านี้เป็นพื้นฐานทางทฤษฎีสำหรับการใช้คอลลาเจนเปปไทด์เพื่อบรรเทาความชราของผิวหนังและขยายขอบเขตสำหรับการใช้ประโยชน์อย่างครอบคลุมของผลพลอยได้จากสัตว์ในอาหารเพื่อสุขภาพ

บทความนี้คัดมาจาก Nutrients 2022, 14, 1622 https://doi.org/10.3390/nu14081622 https://www.mdpi.com/journal/nutrients