การวิเคราะห์องค์ประกอบและฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของพอลิแซ็กคาไรด์จาก Cistanche Deserticola

บทคัดย่อ: ในบทความนี้ โพลิแซ็กคาไรด์สกัดจากซิสแทนช์ เดสทิโคลา, ซิสแทนช์ เดสทิโคลาดิบโพลีแซคคาไรด์CLP ถูกทำให้บริสุทธิ์โดย DEAE เซลลูโลสคอลัมน์โครมาโตกราฟี และได้รับ CLP2 น้ำตาลที่เป็นกลางและน้ำตาลที่เป็นกรด CLP2 ของ Cistanche Deserticola ปริมาณน้ำตาลทั้งหมด กรดยูริก และโปรตีนในCistanche Deserticola พอลิแซ็กคาไรด์ดิบCLP, Cistanche Deserticola น้ำตาลที่เป็นกลาง CLPl และCistanche Deserticola น้ำตาลที่เป็นกรดCLP2 ถูกกำหนดโดยการสแกนสเปกตรัม UV และกำหนดน้ำหนักโมเลกุลและองค์ประกอบของโมโนแซ็กคาไรด์ของโพลีแซคคาไรด์ ในเวลาเดียวกัน วิเคราะห์ความสามารถในการกำจัดอนุมูล DPPH และความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดของ Cistanche Deserticola CLP ดิบโพลีแซคคาไรด์ CLP1 น้ำตาลกลาง Cistanche Deserticola และน้ำตาล Cistanche Deserticola ที่เป็นกรด Cl.P2 ข้อมูลที่วัดได้แสดงให้เห็นว่าส่วนประกอบของ Cistanche Deserticola crud Polysaccharide CLP, Cistanche Deserticola Neutral Sugar CLP1 และ Cistanche Deserticola Acidic SugarCLP2 มีความคล้ายคลึงกัน แต่มีความแตกต่างอย่างมากในเนื้อหาของพวกมัน สามารถรับจุดสูงสุดของการชะหลายได้เมื่อ Cistanche Deserticola Neutral Sugar CLP1 และ Cistanche CLP2 น้ำตาลที่เป็นกรดของทะเลทรายทะเลทรายถูกแยกและทำให้บริสุทธิ์โดย DEAE เซลลูโลสโครมาโตกราฟีคอลัมน์ และการกระจายน้ำหนักโมเลกุลคือ 0~10 000 Da ซึ่งบ่งชี้ว่าส่วนประกอบหลักของ Cistanche Deserticola Polysaccharides คือน้ำตาลโมเลกุลขนาดเล็ก ผลการตรวจวัดโมโนแซ็กคาไรด์ของน้ำตาล Cistanche Deserticola ที่เป็นกลาง CLPl แสดงว่าโมโนแซ็กคาไรด์ในน้ำตาลที่เป็นกลางของ Cistanche Deserticola CLP1 ส่วนใหญ่เป็นแมนโนส กรดกาแลกทูโรนิก กลูโคส กาแลคโตส และอะราบิโนส ผลการตรวจวัดโมโนแซ็กคาไรด์ของน้ำตาล Cistanche Deserticola ที่เป็นกรด CLP2 แสดงว่าโมโนแซ็กคาไรด์ใน Cistanchedeserticola น้ำตาลที่เป็นกรด ClP2 ส่วนใหญ่เป็นแรมโนส กรดกาแล็กทูโรนิก กลูโคส และกาแลคโตส ผลการทดลองการขจัดอนุมูลของ DPPH และการทดสอบความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดของพอลิแซ็กคาไรด์จาก Cistanche Deserticola แสดงว่าความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของ Cistanche Deserticola น้ำตาลที่เป็นกลาง CLPl สูงกว่าของพอลิแซ็กคาไรด์หยาบของ Cistanche Deserticola CLP และ Cistanche Deserticola น้ำตาลที่เป็นกรด CLP2

คำสำคัญ:ซิสแทนช์ เดสทิโคลา; โพลีแซคคาไรด์; การวิเคราะห์องค์ประกอบฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ; การดูดกลืนแสง

รับสารสกัดจาก Cistanche Tubulosa เพื่อผลลัพธ์ที่ตรงเป้าหมาย

ซิสแตนช์เป็นไม้ล้มลุกที่มีกาฝากอยู่เป็นจำนวนมากฟีนอลิกไกลโคไซด์s, การสังเคราะห์ทางชีวภาพ,ฟีนิลเอธานอยด์ไกลโคไซด์น้ำตาลและแอลกอฮอล์ ไกลแคนส่วนใหญ่อยู่ในรูปของโพลีแซคคาไรด์ Cistanche polysaccharide มีหน้าที่ควบคุมกิจกรรมภูมิคุ้มกันที่แข็งแกร่ง [1-2]

เนื่องจากเป็นสารที่เป็นตัวกลางในกิจกรรมต่างๆ ของชีวิตมนุษย์ อนุมูลอิสระจึงอยู่ในสภาวะที่ไม่เสถียรและมีฤทธิ์ออกซิเดชั่นเข้มข้นสูง ซึ่งสามารถทำให้เกิดโมเลกุลขนาดใหญ่ทางชีวภาพได้ ดังนั้น การใช้สารต้านอนุมูลอิสระจากธรรมชาติ ดังนั้น การใช้สารต้านอนุมูลอิสระจากธรรมชาติเพื่อกำจัดอนุมูลอิสระจึงมี กลายเป็นทิศทางหลักของการวิจัยอาหารในปัจจุบัน องค์ประกอบของโพลีแซคคาไรด์ของซิสแตนช์มีความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระที่แข็งแกร่งซึ่งสามารถส่งเสริมการกำจัดอนุมูลอิสระในร่างกายมนุษย์ องค์ประกอบโพลีแซคคาไรด์ของ Cistanches มีความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระที่แข็งแกร่งและสามารถส่งเสริมการกำจัดอนุมูลอิสระในร่างกายมนุษย์ [3]

ในเอกสารฉบับนี้โพลีแซคคาไรด์ใน Cistanche stannic ถูกสกัดและจำแนกโดยการซึมผ่านของเจลที่มีประสิทธิภาพสูง น้ำหนักโมเลกุลของพอลิแซ็กคาไรด์ใน Cistanche ถูกกำหนดโดยโครมาโตกราฟีการซึมผ่านของเจลที่มีประสิทธิภาพสูง น้ำหนักโมเลกุลของโพลีแซคคาไรด์ของ Cistanche ถูกกำหนดโดยโครมาโตกราฟีแบบซึมผ่านของเจลที่มีประสิทธิภาพสูง และองค์ประกอบของโพลีแซคคาไรด์ก็เช่นกัน น้ำหนักโมเลกุลของโพลีแซคคาไรด์ของ Cistanche ถูกกำหนดโดยโครมาโตกราฟีแบบซึมผ่านของเจลที่มีประสิทธิภาพสูง และองค์ประกอบของโพลีแซคคาไรด์คือ วิเคราะห์

ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ Cistanche ได้รับการวิเคราะห์โดยพิจารณาจากพลังการขับอนุมูลอิสระและความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดของส่วนประกอบโพลีแซคคาไรด์ นอกจากนี้ เรายังกำหนดความสามารถในการกำจัดอนุมูลอิสระและความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดของส่วนประกอบโพลีแซคคาไรด์ของ Cistanch และให้พื้นฐานทางทฤษฎีสำหรับการพัฒนาและการใช้ประโยชน์จาก Cistanche และมูลค่าเพิ่มของมัน

1 การเตรียมตัวอย่างและการสกัดสารโพลีแซคคาไรด์จาก Cistanche

นำ Cistanche หนัก 2.5 กก. หั่นเป็นชิ้น เติมน้ำกลั่น 12.5 ลิตร แล้วต้มเป็นเวลา 3 ชั่วโมง หลังจากเดือดเป็นเวลา 3 ชั่วโมง ตัวกรองถูกรวบรวมโดยการกรองและเติมเอทานอล 75 เปอร์เซ็นต์ และปล่อยทิ้งไว้เป็นเวลา 24 ชั่วโมง หลังจากการเดือด สารกรองถูกรวบรวมโดยการกรอง เติมเอทานอล 75 เปอร์เซ็นต์และทิ้งไว้เป็นเวลา 24 ชั่วโมง หมุนเหวี่ยงที่ 4000r/นาที เป็นเวลา 30 นาที และรวบรวมตะกอน ตะกอนถูกรวบรวม แช่แข็ง และทำให้แห้งเพื่อให้ได้โพลีแซคคาไรด์ CLP ดิบของ Cistanche [4] ตะกอนถูกทำให้แห้งแบบเยือกแข็งเพื่อให้ได้พอลิแซ็กคาไรด์ดิบ CLP ของ Cistanche [4] เซลลูโลส DEAE ถูกนำไปแช่และบวม ไล่ก๊าซออก บรรจุลงในคอลัมน์แลกเปลี่ยนประจุลบเซลลูโลสของ DEAE และปรับสมดุลด้วยน้ำกลั่นและสารละลาย NaCl ใช้น้ำและสารละลาย NaCl เพื่อความสมดุล พอลิแซ็กคาไรด์หยาบ 100 มก. ของ Cistanche tubulosa CLP ถูกละลายในน้ำกลั่น 10 มล. และสารชะถูกรวบรวมหลังจากการชะด้วยน้ำกลั่น

สารชะถูกรวบรวมหลังจากการชะด้วยน้ำกลั่นและทำแห้งเยือกแข็งโดยความเข้มข้นเพื่อให้ได้ CLP1 น้ำตาลที่เป็นกลางของ Cistanche; สารชะถูกรวบรวมหลังจากการชะด้วยสารละลาย NaCl จากนั้นทำให้เข้มข้นและทำแห้งเยือกแข็งหลังจากการไดอะไลซิสเพื่อให้ได้ CLP1 ของน้ำตาลที่เป็นกรดของ Cistanche หลังจากการชะด้วยสารละลาย NaCl สารชะจะถูกรวบรวมและทำให้เข้มข้นโดยการไดอะไลซิสและทำแห้งแบบเยือกแข็งเพื่อให้ได้ CLP2 ของน้ำตาลที่เป็นกรด Cistanche [5]

CLP1 น้ำตาลที่เป็นกลางและ CLP2 น้ำตาลที่เป็นกรดของ Cistanche tubulosa ถูกเตรียมที่ความเข้มข้น 1 มก./กก. ตามลำดับ สารละลายพอลิแซ็กคาไรด์ถูกเตรียมที่ความเข้มข้น 1 มก./มล. และวิเคราะห์พอลิแซ็กคาไรด์ด้วยสเปกโทรสโกปี UV โดยใช้สเปกโทรโฟโตมิเตอร์ที่ 210-600 นาโนเมตร สเปกตรัม UV ถูกสแกนโดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ที่ 210-600 นาโนเมตร และเมื่อจุดสูงสุดปรากฏที่ 260-280 นาโนเมตร เมื่อจุดสูงสุดปรากฏที่ 260-280 นาโนเมตร สารละลายได้รับการพิสูจน์ว่ามีโปรตีนและกรดนิวคลีอิก [6].

2 การหาองค์ประกอบของสารโพลีแซคคาไรด์ของ Cistanche

ใช้วิธีฟีนอล-ซัลฟิวริกแอซิดเพื่อหาปริมาณน้ำตาลทั้งหมดในตัวอย่าง Cistanche วัดสารละลายกลูโคส 0.1 มก./มล., 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 และ 1 มล. ในหลอดทดลองแก้วและเติมน้ำกลั่นเพื่อกำหนดปริมาตรเป็น 1 มล. จากนั้นเติมฟีนอลรีเอเจนต์ .5 มล. และกรดซัลฟิวริกเข้มข้น 2.5 มล. ที่มีความเข้มข้น 6 เปอร์เซ็นต์ลงในหลอดทดลอง เขย่าขวดและทำให้เย็นลงที่อุณหภูมิห้อง วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 490 นาโนเมตรโดยใช้สเปกโตรโฟโตมิเตอร์ และกราฟมาตรฐานถูกพล็อตโดยมีปริมาณน้ำตาลเป็นพิกัดแนวนอน และค่าดูดกลืนแสงเป็นพิกัดแนวตั้ง และคำนวณสมการถดถอย [7-8]

ปริมาณโปรตีนของตัวอย่าง Cistanche ถูกกำหนดโดยวิธี Komas Brilliant Blue ปริมาณโปรตีนของตัวอย่างถูกวัดด้วยสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ที่ 495 นาโนเมตร และคำนวณปริมาณโปรตีนตามสมการเส้นโค้งมาตรฐาน [9]

ปริมาณไกลออกซาเลตในตัวอย่าง Cistanche ถูกกำหนดหาโดยใช้วิธี m-hydroxyphenyl ความเข้มข้นที่แตกต่างกันของมาตรฐานและ 0.4 มล. ของสารละลายตัวอย่างที่มีความเข้มข้น 0.1 มก./มล. ถูกเติมลงในหลอดทดลองที่มีกรดซัลฟิวริกเข้มข้น 2.5 มล. เขย่า

เติมความเข้มข้นของ m-hydroxybiphenyl และ 0.5 เปอร์เซ็นต์ของสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ลงในหลอดทดลอง เขย่าให้เข้ากันและทิ้งไว้ 30 นาที วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 525 นาโนเมตรด้วยสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ และปริมาณไกลออกซาเลตในตัวอย่างคำนวณตามสมการเส้นโค้งมาตรฐาน [10-11] น้ำหนักโมเลกุลสัมพัทธ์ของพอลิแซ็กคาไรด์ของ Cistanche ถูกกำหนดโดยเจลโครมาโตกราฟีประสิทธิภาพสูง และองค์ประกอบของโมโนแซ็กคาไรด์ของ Cistanche ถูกกำหนดโดยโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง องค์ประกอบของโมโนแซ็กคาไรด์ของ Cistanche ถูกกำหนดโดยโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง [12]

3 ผลลัพธ์และการวิเคราะห์องค์ประกอบของโพลีแซคคาไรด์ของ Cistanche Tubulosa

จากรูปที่ 1 จะเห็นได้ว่าน้ำตาลที่เป็นกลาง CLP1 ของ Cistanche Tubulosa แสดงจุดสูงสุดในการดูดซึมที่ชัดเจนที่ 280 นาโนเมตร ในขณะที่น้ำตาลที่เป็นกรด CLP2 ของ Cistanche Tubulosa ไม่มีจุดสูงสุดในการดูดซึมที่ชัดเจนที่ 260-280nm แต่ สเปกตรัมการดูดกลืนรังสียูวีสูงขึ้น เนื่องจากทริปโตเฟนและไทโรซีนที่มีอยู่ในโปรตีนมีค่าการดูดซึมรังสียูวีที่มากกว่าที่ 280 นาโนเมตร จึงอาจตัดสินได้ว่า CLP1 น้ำตาลที่เป็นกลางของ Cistanche มีไกลโคโปรตีน แต่ไม่สามารถตัดสินได้ว่าน้ำตาลที่เป็นกรดของ Cistanche CLP2 มีกรดนิวคลีอิกและโปรตีนหรือไม่

ไม่สามารถระบุได้ว่าน้ำตาลที่เป็นกรด CLP2 ของ Cistanche มีกรดนิวคลีอิกและโปรตีนหรือไม่

การวิเคราะห์คอลัมน์โครมาโตกราฟีแบบแลกเปลี่ยนไอออนด้วยเซลลูโลส DEAE สามารถดูดซับสารไอออนิกและสิ่งเจือปนบนคอลัมน์เพื่อให้เกิดการแยกสารโพลีแซคคาไรด์ และหลังจากการทำให้เข้มข้นและทำให้แห้งน้ำกลั่น จะได้ CLP1 ของน้ำตาล Cistanche ที่เป็นกลางทั้งหมด 34.68 มก. และหลังจากนั้น โดยใช้สารละลาย NaCl เพื่อชะและทำให้เข้มข้นและทำให้แห้ง จะได้ CLP2 ของน้ำตาล Cistanche ที่เป็นกรดทั้งหมด 16.52 มก. สมการเส้นโค้งมาตรฐานของปริมาณน้ำตาลทั้งหมด ปริมาณโปรตีน และสมการเส้นโค้งมาตรฐานไกลออกซีเลต วัดน้ำตาลทั้งหมด โปรตีน และไกลออกซิเลตของ Cistanche วัดปริมาณน้ำตาล โปรตีน และกรดกลูคูโรนิกทั้งหมดของ Cistanche และแสดงในตารางที่ 1

เส้นโค้งการสแกนของสเปกตรัม UV ของโฟโตมิเตอร์ตั้งแต่ 210 ถึง 600 นาโนเมตรแสดงในรูปที่ 1

จากรูปที่ 1 จะเห็นได้ว่า Cistanche neutrophilic sugar CLP1 แสดงจุดสูงสุดในการดูดซึมที่ชัดเจนที่ 280 nm ในขณะที่ Cistanche acidic sugar CLP2 แสดงจุดสูงสุดในการดูดซึมที่ 260-280 nm และน้ำตาลที่เป็นกรด CLP2 ของ Cistanche Tubulosa แสดงจุดสูงสุดในการดูดซึมที่ชัดเจนที่ 260-280 นาโนเมตร แม้ว่าจะไม่มีค่าพีคการดูดกลืนที่ชัดเจนที่ 260-280 นาโนเมตร แต่สเปกตรัมการดูดกลืนรังสียูวีก็สูงกว่า เนื่องจากทริปโตเฟนและไทโรซีนที่มีอยู่ในโปรตีนมีค่าการดูดซึมที่มากกว่าที่ 280 นาโนเมตรสำหรับค่าการดูดซับรังสียูวี จึงตัดสินได้ว่า Cistanche neutrophilic sugar CLP1 มีไกลโคโปรตีน แต่ไม่สามารถระบุได้ว่า Cistanche acidic sugar CLP2 มีกรดนิวคลีอิกและโปรตีนหรือไม่ . ไม่สามารถระบุการมีอยู่ของกรดนิวคลีอิกและโปรตีนใน Cistanche CLP2 ได้

การวิเคราะห์คอลัมน์โครมาโตกราฟีแบบแลกเปลี่ยนไอออนด้วยเซลลูโลส DEAE สามารถดูดซับสารไอออนิกและสิ่งสกปรกลงในคอลัมน์ได้ การแยกสารพอลิแซ็กคาไรด์ทำได้โดยการดูดซับสารไอออนิกและสิ่งสกปรกบนคอลัมน์ น้ำกลั่นถูกทำให้เข้มข้นและทำให้แห้งเพื่อให้ได้น้ำตาลที่เป็นกลางของ Cistanche หลังจากทำให้น้ำกลั่นเข้มข้นและทำให้แห้ง จะได้ CLP1 ทั้งหมด 34.68 มก. และหลังจากการทำให้เข้มข้นและทำให้แห้งด้วยสารละลาย NaCl จะได้ CLP1 ของน้ำตาลที่เป็นกรด ได้รับน้ำตาลที่เป็นกรด CLP2 ของ Cistanche เป็น 16.52 มก. ได้รับสมการเส้นโค้งมาตรฐานของปริมาณน้ำตาลทั้งหมด ปริมาณโปรตีน และปริมาณไกลออกซีเลตของ Cistanche และสมการเส้นโค้งมาตรฐานไกลออกซีเลต วัดน้ำตาลทั้งหมด โปรตีน และไกลออกซิเลตของ Cistanche วัดปริมาณน้ำตาล โปรตีน และกรดกลูคูโรนิกทั้งหมดของ Cistanche และแสดงในตารางที่ 1

ตารางที่ 1 ปริมาณน้ำตาล โปรตีน และกรดยูริกทั้งหมดใน Cistanche Deserticola

สามารถหาน้ำหนักโมเลกุลและพื้นที่พีคของตัวอย่างมาตรฐานได้ และสมการถดถอยถดถอยสามารถหาได้โดยการแทนสัญญาณการปล่อยแสงของตัวอย่างที่จะทดสอบลงในสมการถดถอย สามารถหาน้ำหนักโมเลกุลของตัวอย่างที่จะทดสอบได้ สามารถหาน้ำหนักโมเลกุลของตัวอย่างที่จะทดสอบได้โดยการแทนค่าสัญญาณการปล่อยแสงของตัวอย่างที่จะทดสอบลงในสมการถดถอย น้ำหนักโมเลกุลเฉลี่ย น้ำหนักโมเลกุลหนักเฉลี่ย และค่าสัมประสิทธิ์การกระจายตัวของ Cistanche Tubulosa CLP1 และ Cistanche Tubulosa CLP2 CLP1 น้ำตาลที่เป็นกลางของ Cistanche และ CLP2 ที่เป็นกรดของ Cistanche ถูกกำหนดโดยโครมาโตกราฟีการซึมผ่านของเจลที่มีประสิทธิภาพสูง ผลลัพธ์ของเวลากักเก็บและการคำนวณน้ำหนักโมเลกุลแสดงในตารางที่ 2 อัตราส่วนของน้ำหนักโมเลกุลเฉลี่ยหนักต่อจำนวนน้ำหนักโมเลกุลเฉลี่ยถูกนำมาใช้เพื่อระบุความกว้างของการกระจายโมเลกุล อัตราส่วนของน้ำหนักโมเลกุลเฉลี่ยหนักต่อน้ำหนักโมเลกุลเฉลี่ยใช้เพื่อระบุความกว้างของการกระจายโมเลกุล

สอบถามเพิ่มเติม:

อีเมล:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/โทรศัพท์: บวก 86 15292862950