Circular RNA CircDVL1 ยับยั้งการลุกลามของเซลล์มะเร็งไตเซลล์ใสผ่านแกน MiR-412-3p/PCDH7

เชิงนามธรรม

มะเร็งไตเซลล์ใส (ccRCC) เป็นมะเร็งไตระยะแรกที่มีฟีโนไทป์ที่ลุกลามสูงและการพยากรณ์โรคที่แย่มาก หลักฐานที่สะสมบ่งชี้ว่า circRNAs (circRNAs) มีบทบาทสำคัญในการเกิดขึ้นและการพัฒนาของมะเร็งในมนุษย์หลายชนิด อย่างไรก็ตาม การแสดงออก ความสำคัญทางคลินิก และบทบาทการกำกับดูแลของ circRNAs ใน ccRCC ยังคงไม่ชัดเจนเป็นส่วนใหญ่ ที่นี่เรารายงานว่า circDVL1 ลดลงในซีรั่มและเนื้อเยื่อของผู้ป่วย ccRCC และมีความสัมพันธ์เชิงลบกับคุณสมบัติที่ร้ายกาจของ ccRCC การแสดงออกที่มากเกินไปของ circDVL1 ยับยั้งการแพร่กระจาย ชักนำการจับกุม G1/S กระตุ้นการตายของเซลล์ และลดการย้ายถิ่นและการบุกรุกในเซลล์ ccRCC ต่างๆ ในหลอดทดลอง ในทำนองเดียวกัน circDVL1 overexpression จะยับยั้ง ccRCC tumorigenicity ในรูปแบบ xenograft ของเมาส์ ในเชิงกลไก circDVL1 ทำหน้าที่เป็นฟองน้ำสำหรับ oncogenic miR-412-3p ดังนั้นจึงป้องกันการกด miR-412-3p-mediated ของโปรโตคาเธอริน 7 (PCDH7) เป้าหมายในเซลล์ ccRCC โดยรวมแล้ว ผลลัพธ์ของเราแสดงให้เห็นว่า circDVL1 ออกแรงยับยั้งเนื้องอกระหว่างการลุกลามของ ccRCC ผ่านแกน circDVL1/miR-412-3p/PCDH7 และแนะนำว่า circDVL1 อาจเป็นตัวบ่งชี้การวินิจฉัยและการพยากรณ์โรคแบบใหม่ และเป้าหมายการรักษาสำหรับ ccRCC

คำหลัก

วงกลมDVL1; มะเร็งเซลล์ไต miR-412-3พี; PCDH7; ไบโอมาร์คเกอร์

คลิกที่นี่เพื่อดูประโยชน์ของ Cistanche

การแนะนำ

มะเร็งเซลล์ไต (RCC) เป็นมะเร็งร้ายแรงร้ายแรงของระบบทางเดินปัสสาวะและส่งผลกระทบอย่างรุนแรงต่อสุขภาพของมนุษย์ [1] อุบัติการณ์ของ RCC เพิ่มขึ้นในช่วงไม่กี่ทศวรรษที่ผ่านมา โดยมีผู้ป่วยรายใหม่ 73,750 รายที่ได้รับการวินิจฉัยในสหรัฐอเมริกาในปี 2563 [2, 3] เซลล์ที่ชัดเจน RCC (ccRCC) ซึ่งเป็นประเภทย่อยที่พบมากที่สุดและก้าวร้าวของ RCC คิดเป็น 70–75 เปอร์เซ็นต์ของกรณี RCC [4] ที่สำคัญกว่าร้อยละ 30 ของผู้ป่วย ccRCC เกี่ยวข้องกับการแพร่กระจายในการวินิจฉัยครั้งแรก ยิ่งกว่านั้น แม้ว่าการผ่าตัดถอนรากถอนโคนจะเป็นทางเลือกการรักษาหลักสำหรับ ccRCC หลัก แต่ยังมีผู้ป่วยประมาณ 40 เปอร์เซ็นต์ที่มีอาการกำเริบและการแพร่กระจายโดย5-ปีโดยรวมที่รอดชีวิตน้อยกว่า 10 เปอร์เซ็นต์ [5, 6] ภาวะที่กลืนไม่เข้าคายไม่ออกเหล่านี้เน้นย้ำถึงความจำเป็นเร่งด่วนในการสำรวจกลไกระดับโมเลกุลที่เป็นรากฐานของการพัฒนา ccRCC ทั้งในฐานะตัวบ่งชี้ทางชีวภาพในการวินิจฉัยและการพยากรณ์โรค และเป็นเป้าหมายในการรักษาที่มีศักยภาพ

Circular RNAs (circRNAs) เป็น RNA ที่ไม่เข้ารหัสซึ่งมีโครงสร้างวงปิดแบบสายเดี่ยวซึ่งทำให้มีความเสถียรสูง [7, 8] การศึกษาเมื่อเร็วๆ นี้แสดงให้เห็นว่า circRNAs มีอยู่มากมายในเลือด [9, 10] น้ำลาย [11] และ exosomes [12] ซึ่งบ่งชี้ว่าพวกมันสามารถใช้เป็นไบโอมาร์คเกอร์เพื่อการวินิจฉัยที่แปลกใหม่ได้ [13] เนื่องจากการตรวจชิ้นเนื้อของเหลวนั้นมีการบุกรุกน้อยกว่าการตรวจชิ้นเนื้อเนื้อเยื่อแบบดั้งเดิม [14] circRNAs จึงถือเป็นเครื่องมือทำนายที่มีค่าสำหรับการแพทย์ที่แม่นยำ [15-17] โดยเฉพาะอย่างยิ่ง circRNA หลายชนิด เช่น cricNOX4, circEGLN3 และ circPRRC2A อาจทำหน้าที่เป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่เป็นไปได้สำหรับการวินิจฉัย RCC และ/หรือการพยากรณ์โรค ซึ่งได้รับการสรุปในการทบทวนล่าสุดของเรา [18] นอกจากนี้ การวิจัยในปัจจุบันส่วนใหญ่มุ่งเน้นไปที่การสลับการแสดงออกของ circRNA ในเนื้อเยื่อ ccRCC [19, 20] อย่างไรก็ตาม ระดับของพวกมันในการตรวจชิ้นเนื้อของเหลวยังไม่เป็นที่ทราบแน่ชัด ซึ่งเป็นอุปสรรคต่อการสำรวจตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่มีศักยภาพ นอกจากนี้ แม้ว่า circRNAs หลายตัว รวมถึง circHIAT1 [21], circ-AKT3 [22] และ cRAPGEF5 [23] ได้แสดงให้เห็นว่ามีบทบาทสำคัญในการเริ่มต้นและความก้าวหน้าของ ccRCC [18] การตรวจสอบอย่างเป็นระบบของ circRNAs ที่เกี่ยวข้องใน ccRCC ยังขาดการพัฒนาเช่นเดียวกับกลไกระดับโมเลกุลพื้นฐาน

ที่นี่ ก่อนอื่นเราพิจารณาการแสดงออกของ circRNAs ในตัวอย่างซีรัมจากผู้ป่วย ccRCC และการควบคุมสุขภาพโดยใช้ circRNA microarray อย่างมีนัยสำคัญ เราระบุ circRNA circDVL1 ที่เกี่ยวข้องกับ ccRCC ใหม่ (รหัสซาก: hsa_circ_ 0009267) ซึ่งเข้ารหัสในยีน DVL1 CircDVL1 ลดลงอย่างมีนัยสำคัญในซีรั่มจากผู้ป่วย ccRCC และการแสดงออกของมันมีความสัมพันธ์แบบผกผันกับการให้คะแนน ccRCC Fuhrman ซึ่งบ่งบอกถึงศักยภาพในการเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพ นอกจากนี้ CircDVL1 ยังลดลงในเนื้อเยื่อเนื้องอก ccRCC ในทำนองเดียวกัน circDVL1 สามารถยับยั้งการเพิ่มจำนวน กระตุ้นการจับกุมวัฏจักรของเซลล์ กระตุ้นการตายของเซลล์ และลดการย้ายถิ่นและการบุกรุกของเซลล์ ccRCC ในเชิงกลไก circDVL1 ทำหน้าที่เป็นฟองน้ำ miR-412-3p เพื่อควบคุมการแสดงออกของ PCDH7 โดยรวมแล้ว การค้นพบเหล่านี้ระบุว่า circDVL1 เป็นตัวยับยั้งเนื้องอกสำหรับ ccRCC และแนะนำศักยภาพของมันในฐานะเป็นทั้งตัวบ่งชี้ทางชีวภาพในการวินิจฉัยและเป้าหมายในการรักษาโรค

อาหารเสริม Cistanche

วัสดุและวิธีการ

1. ตัวอย่างทางคลินิก

การศึกษานี้ได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการจริยธรรมของโรงพยาบาลในเครือแห่งแรกของมหาวิทยาลัยเจ้อเจียง (2021-104) เก็บตัวอย่าง ccRCC และเนื้อเยื่อที่ไม่ใช่เนื้องอกที่อยู่ติดกันสิบแปดตัวอย่างจากผู้ป่วย ccRCC ตัวอย่างถูกเก็บรักษาอย่างรวดเร็วในไนโตรเจนเหลวหลังการผ่าตัด และเก็บไว้ที่ระดับ -80 จนกว่าจะใช้งานต่อไป เก็บตัวอย่างซีรั่มจากผู้ป่วย 60 ccRCC และ 66 กลุ่มควบคุมที่มีสุขภาพดี จากนั้น ตัวอย่างได้รับการประมวลผลโดยใช้วิธีการที่เหมาะสม และซีรั่มที่ได้รับจะถูกเก็บไว้ที่ระดับ -80 จนกว่าจะใช้งานต่อไป

2. เซลล์และการเพาะเลี้ยงเซลล์

เซลล์ทั้งหมดซื้อจาก National Collection of Authenticated Cell Cultures (ประเทศจีน) เพาะเลี้ยงเซลล์ 786-O และ Caki-1 ใน RPMI 1640 (HyClone) เพาะเลี้ยงเซลล์ ACHN ใน MEM (HyClone) และเพาะเลี้ยงเซลล์ 293T ในสื่อ DMEM (Gibco) อาหารเลี้ยงเซลล์ทั้งหมดได้รับการเสริมด้วยซีรั่มวัวของทารกในครรภ์ 10 เปอร์เซ็นต์ (Gibco) และส่วนผสมของเพนิซิลลินและสเตรปโตมัยซิน 1 เปอร์เซ็นต์ (Gibco) การเพาะเลี้ยงเซลล์ได้รับการบำรุงรักษาในตู้อบความชื้นที่ 37 องศาและ 5 เปอร์เซ็นต์ CO₂.

3. การวิเคราะห์ CircRNA microarray

การทำโปรไฟล์ CircRNA microarray ในตัวอย่างซีรั่มได้ดำเนินการโดยใช้ Arraystar human CircRNA Array V2 (Capital Biotechnology, China) ซอฟต์แวร์ GeneSpring V13.0 (Agilent Technologies) ใช้สำหรับการสรุปข้อมูล การทำให้เป็นมาตรฐาน และการควบคุมคุณภาพ microarray CircRNAs ที่มีเกณฑ์การเปลี่ยนแปลงการพับมากกว่าหรือเท่ากับ 2 และน้อยกว่าหรือเท่ากับ −2 และค่า P-< 0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติ การวิเคราะห์กลุ่มลำดับชั้นดำเนินการโดยใช้ระยะทางแบบยุคลิดมาตรฐานพร้อมการเชื่อมโยงที่สมบูรณ์

4. การจัดลำดับอาร์เอ็นเอ (RNA-seq) และการวิเคราะห์ข้อมูล

RNA-seq รุ่นต่อไปได้ดำเนินการตามรายละเอียดก่อนหน้านี้ [24, 25] miR-412-3p และเซลล์ควบคุมเลียนแบบ 786-0 เซลล์ถูกใช้สำหรับการจัดลำดับ RNA การสร้างห้องสมุดและการวิเคราะห์ชีวสารสนเทศของข้อมูลดิบดำเนินการโดย Novogene Co., Ltd. (ปักกิ่ง ประเทศจีน) ข้อมูล RNA-seq ถูกฝากไว้ใน Gene Expression Omnibus (GEO) ภายใต้หมายเลขภาคยานุวัติ GSE175492

5. การสกัด RNA และ RT-PCR เชิงปริมาณตามเวลาจริง (RT-qPCR)

RT-qPCR ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้า [26, 27] RNA ทั้งหมดถูกแยกได้จากซีรั่ม เซลล์ และเนื้อเยื่อเนื้องอกโดยใช้ AG RNAex Pro Reagent (AG, Hunan, China) สำหรับการตรวจจับ circRNA นั้น RNA ทั้งหมด 1 ug ถูกย่อยด้วย RNase R (3 U/ug, Epicenter Technologies, Madison, USA, Cat#RNR07250) ที่ 37 องศาเป็นเวลา 10 นาที และสร้าง DNA เสริม (cDNA) โดยใช้ HiScript II 1st ชุดการสังเคราะห์ Strand cDNA (Vazyme) ระดับการแสดงออกของ CircRNA และ mRNA ถูกทำให้เป็นมาตรฐานเป็น -actin ในการตรวจสอบการแสดงออกของ miRNA การถอดความแบบย้อนกลับได้ดำเนินการด้วยชุดการสังเคราะห์ miRNA First-strand ของ miR-XTM (Takara Bio USA, CA, USA, Cat. #638313) โดยมีการแสดงออกของ U6 (Rnu6–1) เป็นตัวควบคุมภายนอก ระดับนิพจน์ RNA สัมพัทธ์ถูกกำหนดด้วยวิธี 2-ΔΔCt ลำดับไพรเมอร์สำหรับการวิเคราะห์ qRT-PCR ทั้งหมดแสดงในตาราง S2

6. โครงสร้างพลาสมิดและการถ่ายที่เสถียร

ในการสร้าง circDVL1 และ circDVL1-MUT overexpression vector ลำดับ circDVL1 และ circDVL1 ที่กลายพันธุ์ถูกโคลนลงใน pcDNA 3.1( plus ) Laccase 2 MCS Exon vector ซึ่งสั่งจาก Addgene (#69893) [28] เซลล์ ACHN และ 786-O ถูกถ่ายด้วย circRNA และเวกเตอร์ควบคุมเชิงลบโดยใช้ Lipofectamine 3000 (Invitrogen, Carlsbad, CA) หลังจาก 48 ชั่วโมง เซลล์ทรานส์เฟกที่เสถียรซึ่งแสดงออก circDVL1 ถูกเลือกโดยการเติม G418 800 ไมโครกรัม/มิลลิลิตรไปยังอาหารเลี้ยงเชื้อ

7. ความมีชีวิตของเซลล์

การทดสอบความมีชีวิตของเซลล์ถูกกำหนดด้วยชุด CCK8 (Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japan, Cat# CK04) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [29] 786-O และ ACHN circDVL1 ที่แสดงออกมากเกินไปและเซลล์ควบคุมถูกเพาะในเพลต 96-หลุม เติมสารละลาย CCK8 (10 ไมโครลิตร) ตามเวลาที่กำหนดและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเป็นเวลา 2 ชั่วโมง และวัดค่าการดูดกลืนแสงโดยใช้สเปกโตรโฟโตมิเตอร์

เฮอร์บา ซิสแทนเช่

8. การก่อตัวของอาณานิคม

การทดสอบการก่อตัวของอาณานิคมได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [24] ACHN (800 เซลล์/หลุม) และ 786-O เซลล์ (400 เซลล์/หลุม) ถูกเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 10 วัน และแก้ไขด้วยพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4 เปอร์เซ็นต์เป็นเวลาประมาณ 30 นาที ตามด้วยการย้อมด้วย 0.1 เปอร์เซ็นต์ สารละลายคริสตัลไวโอเล็ต ประมาณ 15 นาที โคลนที่มีเซลล์มากกว่า 50 เซลล์จะถูกนับเป็นโคโลนีเดียว

9. การวิเคราะห์วัฏจักรของเซลล์

เซลล์ถูกซิงโครไนซ์ในตัวกลาง RPMI 1640 โดยไม่มี FBS ในชั่วข้ามคืน และเปลี่ยนเป็นตัวกลางที่มี FBS 10 เปอร์เซ็นต์ในอีก 48 ชั่วโมงข้างหน้า เซลล์ถูกล้าง แขวนลอยใหม่ในเอทานอล 70 เปอร์เซ็นต์ใน PBS และเก็บไว้ที่ระดับ -20 ข้ามคืน จากนั้น เซลล์ถูกย้อมด้วยสารละลายโพรพิเดียมไอโอไดด์ (PI) ที่มี RNase A สำหรับการวิเคราะห์วัฏจักรของเซลล์

10. การวิเคราะห์การตายของเซลล์

ACHN และ 786-การวิเคราะห์การตายของเซลล์ O ดำเนินการด้วยชุดตรวจหาการตายของเซลล์ Annexin V-FITC/PI (เทคโนโลยีชีวภาพปักกิ่ง ไบโอซี ประเทศจีน) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

11. การตรวจการย้ายถิ่นและการบุกรุกของเซลล์

ในหลอดทดลอง ความสามารถในการย้ายเซลล์ได้รับการประเมินโดยใช้ห้องทรานส์เวลล์ที่มีเยื่อโพลีคาร์บอเนตรูพรุนขนาด 8 ไมโครเมตร (มิลลิพอร์, แมสซาชูเซตส์, สหรัฐอเมริกา) การทดสอบการบุกรุกของเซลล์ดำเนินการกับห้องทรานส์เวลล์ที่เคลือบด้วย Matrigel 100 ไมโครลิตร (BD Biosciences, USA) 786-O เซลล์ (2×104) หรือเซลล์ ACHN (4×104) ถูกแขวนลอยใน 200 μL ของ RPMI 1640 โดยไม่มีซีรั่มและเพาะเข้าไปในช่อง transwell ด้านบน จากนั้นจึงเติมตัวกลาง 600 μL ที่มี FBS 20 เปอร์เซ็นต์ เข้าไปในห้องด้านล่าง จากนั้น เพาะเลี้ยงเซลล์เป็นเวลา 24 ชั่วโมงเพื่อวัดการย้ายถิ่น และเป็นเวลา 48 ชั่วโมงเพื่อประเมินการบุกรุก เซลล์ในช่องด้านบนถูกขูดออกอย่างระมัดระวัง และเซลล์ในช่องด้านล่างได้รับการแก้ไขด้วยพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4 เปอร์เซ็นต์และย้อมด้วยคริสตัลไวโอเลต ได้รับภาพและนับจำนวนเซลล์ด้วยกล้องจุลทรรศน์

12. รอยเปื้อนตะวันตก

โปรตีนทั้งหมดถูกสกัด หาปริมาณ และแยกออกจากกันบนเจล SDS-PAGE 10 เปอร์เซ็นต์ จากนั้นถ่ายโอนไปยังเยื่อโพลีไวนิลิดีน ไดฟลูออไรด์ (มิลลิพอร์ แมสซาชูเซตส์ สหรัฐอเมริกา) ซึ่งบ่มด้วยสารต้านกลีเซอรอลดีไฮด์หลัก 3-ฟอสเฟตดีไฮโดรจีเนส (GAPDH) (Proteinch, 60004-1-Ig), anti-PCDH7 (Abcam, ab139274) แอนติบอดีปฐมภูมิที่ระดับ 4 ในชั่วข้ามคืน

13. การย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนต์

เซลล์ถูกเพาะลงบนแผ่นปิดเป็นเวลา 24 ชั่วโมงและแก้ไขด้วยพาราฟอร์มัลดีไฮด์ 4 เปอร์เซ็นต์ ซึมผ่านด้วย 0.2 เปอร์เซ็นต์ Triton X-100 เป็นเวลา 20 นาที และบ่มด้วยซีรัมอัลบูมินจากวัว 5 เปอร์เซ็นต์ ต่อไป เซลล์ถูกบ่มด้วยแอนติบอดีหลักที่จำเพาะสำหรับ Ki67 (1:400, ab48027, Abcam) ที่อุณหภูมิ 4 องศาในชั่วข้ามคืน และต่อมาบ่มด้วย 488-conjugated goat anti-rabbit IgG (1:150, D110088, Sangon ) ที่ 37 องศา นาน 1 ชม. เซลล์ถูกย้อมด้วย 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) และรับภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ Leica (DM4000)

14. การก่อตัวของเนื้องอกในร่างกายและการย้อมสี Ki67

หนูเปลือย BALB/c เพศผู้อายุ 6 สัปดาห์ (ซื้อจาก Shanghai SLAC) ถูกแบ่งออกเป็น 2 กลุ่ม (n=5 สำหรับแต่ละกลุ่ม) หนูได้รับการฉีดวัคซีนด้วยเซลล์ควบคุมประมาณ 3 × 106 หรือเซลล์ ACHN circDVL1 ที่แสดงออกมากเกินไปโดยการฉีดเข้าใต้ผิวหนัง วัดขนาดเนื้องอกด้วยคาลิปเปอร์แบบเลื่อนทุก 3 วัน เริ่มวันที่ 6 หลังการฉีด ปริมาณเนื้องอกคำนวณเป็นความยาว × กว้าง × สูง/2 การทดลองทั้งหมดดำเนินการตามแนวทางการดูแลและการใช้สัตว์ทดลอง (เอกสารเผยแพร่ของ NIH 80-23 ฉบับปรับปรุงปี 1996) และได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการการดูแลสัตว์แห่งมหาวิทยาลัยเจ้อเจียง เมืองหางโจว ประเทศจีน

แคปซูล Cistanche

15. การเรืองแสงในแหล่งกำเนิดการผสมพันธุ์ (FISH)

โพรบ circDVL1 double-digoxigenin (DIG)- โพรบมะรุมเปอร์ออกซิเดส (HRP) (Exon Biotechnology, กวางโจว, จีน) ถูกสังเคราะห์ขึ้น เซลล์ควบคุมและเซลล์ ACHN ที่แสดงออกมากเกินไปใน circDVL1 ถูกเพาะเลี้ยงบนแผ่นสไลด์ครอบและบ่มด้วยโพรบที่มีฉลากที่ 37 องศาเป็นเวลา 24 ชั่วโมง หลังจากการล้าง สไลด์ถูกบ่มในแอนติบอดีทุติยภูมิต้าน DIG ที่ 37 องศาเป็นเวลา 1 ชั่วโมง วิธีการขยายสัญญาณไทรามีนถูกใช้เพื่อตรวจจับสัญญาณ circDVL1 และเซลล์ถูกขัดขวางด้วย DAPI สำหรับ co-FISH ฝาครอบสไลด์ถูกบ่มด้วย DIGlabeled circDVL1 และ biotin-label miR-412-3p

16. การทดสอบ RNA immunoprecipitation (RIP)

ทำการทดสอบ RIP ด้วย Magna RIP™ RNA-Binding Protein Immunoprecipitation Kit (Millipore, MA, USA) 786-O เซลล์ถูกสลายใน RIP lysis buffer ที่สมบูรณ์ จากนั้นบ่มด้วยบัฟเฟอร์กระตุ้นภูมิคุ้มกันที่มีเม็ดแม่เหล็กซึ่งผสานกับ AGO2 (Abcam, MA, USA) หรือ IgG แอนติบอดีคอมเพล็กซ์ที่ 4 องศาในชั่วข้ามคืน จากนั้นทำการทดสอบ RNA ที่กระตุ้นภูมิคุ้มกันโดย RT-qPCR

17. การทดสอบนักข่าวดูอัลลูซิเฟอร์เรส

ลำดับ CircDVL1, PPM1H-3'UTR และ PCDH7-3'UTR ซึ่งมีไซต์การจับ miR-412-3p ที่กลายพันธุ์และลำดับที่กลายพันธุ์ที่สอดคล้องกัน ถูกสังเคราะห์แล้วทำการโคลนย่อยลงใน Luciferase Reporter เวกเตอร์ psiCHECK-2 (Promega) เพื่อสร้าง circDVL1-WT, circDVL1-Mut1, circDVL1-Mut2, PPM1H-3'UTR-WT, PCDH{ {14}}'UTRWT, PCDH7-3'UTR-Mut1 และ PCDH7-3'UTR-Mut2 เวกเตอร์ ลำดับ 3'UTR ที่แตกต่างกันของ PPM1H และ PCDH7 มีแฟรกเมนต์ 500 bp ที่มีไซต์รวม miR-412-3p ที่เป็นไปได้ (ขนาบข้างด้วย 250 bp) กิจกรรมของลูซิเฟอเรสสัมพัทธ์ได้รับการประเมินด้วยการทดสอบนักข่าวแบบดูอัลลูซิเฟอเรส (Promega, USA) การทดสอบทั้งหมดดำเนินการในการจำลองแบบอิสระสามครั้ง

18. การวิเคราะห์ทางสถิติ

การวิเคราะห์ทางสถิติดำเนินการด้วย GraphPad Prism 70 (ซอฟต์แวร์ GraphPad, La Jolla, CA) ความแตกต่างระหว่างกลุ่มได้รับการประเมินด้วยการทดสอบของนักเรียนหรือการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) ความแตกต่างระหว่างกลุ่มได้รับการพิจารณาว่ามีนัยสำคัญทางสถิติเมื่อค่า P เป็น < 0.05

การอภิปราย

มีการเสนอและประเมินตัวบ่งชี้ทางชีวภาพ ccRCC ประเภทต่างๆ รวมถึง mRNAs [32], miRNAs [33], lncRNAs [34] และ circRNAs [35] อย่างไรก็ตาม ไม่มีสิ่งใดที่ได้รับการยืนยันว่าเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพสำหรับการวินิจฉัยที่ถูกต้องสำหรับการใช้ทางคลินิกเป็นประจำในผู้ป่วย ccRCC ที่นี่ การศึกษาของเราแสดงให้เห็นว่า circDVL1 มีบทบาทสำคัญในความก้าวหน้าของ ccRCC ขั้นแรก เราคัดกรองซีรั่มจากผู้ป่วย ccRCC และกลุ่มควบคุมสุขภาพเพื่อระบุ circRNAs ที่แสดงออกแตกต่างกันโดยใช้ circRNA microarray ข้อมูล RT-qPCR เปิดเผยว่า circDVL1 ถูกควบคุมลงอย่างมากในตัวอย่าง ccRCC การศึกษาก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่า circRNAs สามารถทำหน้าที่เป็น biomarkers ในซีรั่มแฝงในมะเร็งต่างๆ [36, 37] ตัวอย่างเช่น Bei และคณะ แสดงให้เห็นว่า exosomal has-circ-0004771 เพิ่มขึ้นในซีรัมที่เก็บจากผู้ป่วยมะเร็งลำไส้ใหญ่ [38] อย่างไรก็ตาม การวิจัยเกี่ยวกับบทบาทเฉพาะของ circRNA ในฐานะตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่ไม่รุกรานใน ccRCC ยังคงมีจำกัด การศึกษาของเราพบว่า circDVL1 ถูกควบคุมอย่างมีนัยสำคัญในซีรั่มจากผู้ป่วย ccRCC และการแสดงออกที่ลดลงของซีรั่ม circDVL1 อาจมาจากเนื้องอก นอกจากนี้ ระดับ circDVL1 ในซีรั่มมีค่าการวินิจฉัยที่สำคัญในการแยกแยะระหว่างผู้ป่วยที่มีเนื้องอก Fuhrman เกรด I-II และ Fuhrman เกรด III-IV ดังนั้น serum circDVL1 อาจเป็นตัวบ่งชี้การวินิจฉัยที่มีแนวโน้มสำหรับ ccRCC อย่างไรก็ตาม ผู้ป่วยที่มีสุขภาพแข็งแรงหลายรายแสดงระดับ circDVL1 ในซีรั่มในระดับต่ำ ซึ่งบ่งชี้ว่าการตรวจติดตามผู้ป่วยโดยอิงจากการวิเคราะห์ RNA ที่ไหลเวียนนี้เพียงอย่างเดียวอาจส่งผลให้เกิดผลบวกลวงได้ ดังนั้นค่าของ circDVL1 ในฐานะตัวบ่งชี้การวินิจฉัยเดี่ยวจึงค่อนข้างจำกัด และอาจจำเป็นต้องวิเคราะห์การรวมกันของ RNA ที่หมุนเวียนต่างกันเพื่อให้ได้การทำนายที่เชื่อถือได้สำหรับการพัฒนาของเนื้องอกและการแพร่กระจาย

ในฐานะที่เป็น circRNA ที่ระบุใหม่ บทบาททางชีววิทยาและพยาธิวิทยาของ circDVL1 จึงไม่ได้รับการตรวจสอบ ในการศึกษานี้ เราได้ประเมินบทบาทและกลไกการกำกับดูแลของ circDVL1 ใน ccRCC การตรวจวิเคราะห์การทำงานแสดงให้เห็นว่า circDVL1 ที่แสดงออกมากเกินไปสามารถลดการเพิ่มจำนวนเซลล์ ccRCC ความสามารถในการสร้างอาณานิคม และศักยภาพของเนื้องอก ซึ่งน่าจะเป็นเพราะการตายของเซลล์ที่เพิ่มขึ้น ในหลอดทดลอง และยับยั้งการพัฒนาของเนื้องอก ในร่างกาย ข้อมูลบอกเป็นนัยว่า circDVL1 อาจมีฟังก์ชันต้านเนื้องอกใน ccRCC

CircRNAs สามารถส่งเสริมการเริ่มต้นและการลุกลามของเนื้องอกโดยทำหน้าที่เป็นฟองน้ำ miRNA ดังนั้นเราจึงตรวจสอบว่า circDVL1 สามารถควบคุมการกำเนิดทางชีวภาพของ miRNA ในระหว่างการสร้างมะเร็ง ccRCC ได้หรือไม่ เมื่อใช้ซอฟต์แวร์ miRanda และ miRWalk เราพบว่า circDVL1 มีไซต์เชื่อมโยงที่เป็นไปได้สำหรับ miR-412-3p การทดสอบของนักข่าว Luciferase แสดงการเชื่อมโยงโดยตรงระหว่าง circDVL1 และ miR-412-3p การศึกษาก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่า miR-412-3p มีส่วนในการเกิดโรคของมะเร็งชนิดต่างๆ ผ่านกลไกระดับโมเลกุลต่างๆ [31, 39, 40] ตัวอย่างเช่น miR-412-3p มีบทบาทในการก่อมะเร็งในมะเร็งลำไส้ ส่งเสริมการย้ายถิ่น การบุกรุก และการเพิ่มจำนวนเซลล์ของเซลล์ต้นกำเนิดมะเร็ง [31] ยิ่งไปกว่านั้น การแสดงออกของ miR-412-3p ถูกควบคุมในถุงนอกเซลล์จากผู้ป่วยมะเร็งเซลล์สความัสในช่องปาก (OSCC) [39] ในทำนองเดียวกัน ผลลัพธ์ของเราชี้ให้เห็นว่า miR-412-3p เป็นตัวการก่อมะเร็งที่สำคัญใน ccRCC

ผงซิสแตนช์

นอกจากนี้ยังระบุเป้าหมายของ circDVL1/miR-412-3p ด้วย Protocadherins (PCDHs) เป็นโปรตีนของเยื่อหุ้มเซลล์ที่เป็นของตระกูล cadherin ซึ่งมีบทบาทสำคัญในการยึดเกาะของเซลล์และเส้นทางการส่งสัญญาณ PCDH7 เป็นสมาชิกของตระกูล PCDH และมีบทบาทที่มั่นคงในการจดจำเซลล์ต่อเซลล์และการยึดเกาะของเซลล์ [41] เป็นที่ทราบกันโดยทั่วไปว่าการสูญเสียการยึดเกาะเป็นขั้นตอนแรกในการบุกรุกและการแพร่กระจายของเซลล์เนื้องอก หลักฐานที่เกิดขึ้นใหม่บ่งชี้ว่า PCDH7 แสดงออกอย่างผิดปกติในเนื้องอกหลายประเภท ตัวอย่างเช่น ในมะเร็งปอดที่ไม่ใช่เซลล์ขนาดเล็กของมนุษย์ PCDH7 มักจะแสดงออกมากเกินไปและทำหน้าที่เป็นยีนก่อมะเร็งเพื่อกระตุ้นการเปลี่ยนแปลงของเซลล์และส่งเสริมการสร้างเนื้องอกในปอดโดยการส่งสัญญาณ MAPK ที่มีศักยภาพ [42] ในทางกลับกัน PCDH7 ยับยั้งการย้ายถิ่นและการบุกรุกของเซลล์มะเร็งกระเพาะอาหารผ่าน E-cadherin [43] นอกจากนี้ยังพบการแสดงออกของ PCDH7 ที่ลดลงในมะเร็งลำไส้ใหญ่และทวารหนัก [44] และมะเร็งกระเพาะปัสสาวะ [45] ข้อมูลเหล่านี้บ่งชี้ว่า PCDH7 มีหน้าที่หลากหลายในเนื้องอกที่แตกต่างกัน ในการศึกษานี้ เราแสดงให้เห็นว่าระดับ PCDH7 ลดลงในตัวอย่างเนื้องอก ccRCC ที่น่าสนใจคือ การทดลองการช่วยเหลือเชิงหน้าที่เผยให้เห็นว่าคุณสมบัติในการยับยั้งเนื้องอกของ circDVL1 ส่วนหนึ่งเป็นผลจากผลกระทบของมันต่อ PCDH7 การศึกษาของเราแสดงให้เห็นอย่างชัดเจนถึงความสำคัญของแกนควบคุม circDVL1/miR-412-3p/ PCDH7 ในการพัฒนา ccRCC

การศึกษานี้มีข้อจำกัดหลายประการ เราทดสอบ siRNA เฉพาะสามรายการสำหรับ circDVL1 ภายนอก แต่น่าเสียดายที่ siRNA ทั้งหมดเหล่านี้ล้มเหลวในการล้ม circDVL1 อาจเป็นเพราะโครงสร้างที่เป็นเอกลักษณ์ของ circRNA นี้ รวมถึงการแสดงออกพื้นฐานที่ต่ำในเซลล์ ccRCC นอกจากนี้ ผลลัพธ์ของเรายังแสดงให้เห็นว่า circDVL1 อาจเป็นเป้าหมายการรักษาในผู้ป่วย ccRCC จำเป็นต้องมีการศึกษาทางคลินิกกับกลุ่มผู้ป่วยจำนวนมากเพื่อแสดงให้เห็นความสำคัญทางคลินิกเพิ่มเติม ในการศึกษาของเรา เราไม่ได้ตรวจสอบสาเหตุของการลดลงของ circDVL1 ในรอยโรค ccRCC มีรายงานว่า RNA-binding proteins (RBPs) รวมถึง quaking (QKI), epithelial-splicing regulatory protein 1 (ESRP1) และ fused-in-sarcoma (FUS) มีส่วนร่วมในการสร้าง circRNAs หลังการถอดรหัส [{{10 }}]. นอกจากนี้ ปัจจัยการถอดรหัสบางอย่าง (เช่น ZEB1, c-Myb และ c-Jun) ยังเกี่ยวข้องกับการกำเนิดทางชีวภาพของ circRNAs เฉพาะ [49-52] นอกจากนี้ การศึกษายังแสดงให้เห็นว่าการดัดแปลง m6A ไกล่เกลี่ยการย่อยสลายของ circRNA ปาร์ค et al. รายงานว่า circRNAs ที่ดัดแปลงด้วย m6A นั้นถูกลดการควบคุมผ่านแกน YTHDF2- HRSP12-RNase P/MRP [53] ไม่ว่า RBPs ปัจจัยการถอดความและเมทิลเลชั่น m6A เหล่านี้จะเกี่ยวข้องกับการลดการควบคุมของ circDVL1 หรือไม่นั้นยังคงไม่แน่นอน ในการวิจัยในอนาคตของเรา เราจะพยายามสำรวจกลไกการกำกับดูแลต้นน้ำของ circDVL1 ในการพัฒนา ccRCC และการเกิดเนื้องอก

โดยสรุป เราแสดงให้เห็นว่าระดับ circDVL1 ลดลงในซีรั่มจากผู้ป่วย ccRCC โดยเฉพาะอย่างยิ่ง เราได้ตรวจสอบเพิ่มเติมเกี่ยวกับกลไกการกำกับดูแลของ circDVL1 และแสดงให้เห็นว่า circDVL1 ยับยั้งการกำเนิดเนื้องอก ccRCC โดยการส่งเสริมการแสดงออกของ PCDH7 โดยการทำให้ฟองน้ำ miR-412-3 p ดังนั้น การศึกษาของเราแสดงให้เห็นว่า circDVL1 อาจเป็นเป้าหมายการรักษาที่เป็นไปได้สำหรับการรักษาด้วย ccRCC ในอนาคต

อ้างอิง

1.Cheng SK, Chuah KL. มะเร็งเซลล์ไตระยะแพร่กระจายไปยังตับอ่อน: บทวิจารณ์ หอจดหมายเหตุของพยาธิวิทยาและยาในห้องปฏิบัติการ 2559; 140: 598-602.

2. Jonasch E, Walker CL, Rathmell WK. ล้างเซลล์มะเร็งเซลล์ไต ontogeny และกลไกการตาย แนท เรฟ เนฟรอล 2564; 17: 245-61.

3. Siegel RL, Miller KD, Jemal A. สถิติมะเร็ง ปี 2020 CA Cancer J Clin 2563; 70.

4. Shuch B, Amin A, Armstrong AJ, Eble JN, Ficarra V, Lopez-Beltran A และอื่นๆ ทำความเข้าใจความแปรปรวนทางพยาธิวิทยาของมะเร็งเซลล์ไต: กลั่นโอกาสในการรักษาจากความซับซ้อนทางชีววิทยา ระบบทางเดินปัสสาวะของยุโรป 2558; 67: 85-97.

5. Koul H, Huh JS, Rove KO, Crompton L, Koul S, Meacham RB และอื่นๆ ลักษณะทางโมเลกุลของมะเร็งเซลล์ไต: บทวิจารณ์ ฉันเป็นมะเร็ง Res 2554; 1: 240-54

6. Sanchez-Gastaldo A, Kempf E, Gonzalez Del Alba A, Duran I. การรักษามะเร็งเซลล์ไตอย่างเป็นระบบ: การทบทวนอย่างครอบคลุม รักษาโรคมะเร็ง ปี 2560; 60: 77-89.

7. Kristensen LS, Andersen MS, Stagsted LVW, Ebbesen KK, Hansen TB, Kjems J. การกำเนิดทางชีวภาพ ชีววิทยา และลักษณะของ RNA แบบวงกลม ธรรมชาติรีวิวพันธุศาสตร์ 2562; 20: 675-91.

8. Patop IL, Wüst S, Kadener S. อดีต ปัจจุบัน และอนาคตของ circRNAs วารสาร EMBO 2562; 38:e100836.

9. Perez de Acha O, Rossi M, Gorospe M. RNAs แบบวงกลมในมะเร็งในเลือด Front Mol Biosci. 2563; 7:109.

10. Zhang SJ, Chen X, Li CP, Li XM, Liu C, Liu BH และอื่นๆ การระบุและการกำหนดลักษณะเฉพาะของ Circular RNAs ในฐานะตัวบ่งชี้ทางชีวภาพระดับใหม่ในผู้ป่วยเบาหวานขึ้นตา จักษุวิทยาเชิงสืบสวนและวิทยาศาสตร์การมองเห็น 2560; 58: 6500-9.

11. Bahn JH, Zhang Q, Li F, Chan TM, Lin X, Kim Y และอื่นๆ ภูมิทัศน์ของ microRNA, RNA ที่มีปฏิสัมพันธ์กับ Piwi และ RNA แบบวงกลมในน้ำลายของมนุษย์ เคมีคลินิก. 2558; 61: 221-30.

12. Li Y, Zheng Q, Bao C, Li S, Guo W, Zhao J และคณะ Circular RNA อุดมและเสถียรใน exosomes: ตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่มีแนวโน้มสำหรับการวินิจฉัยโรคมะเร็ง การวิจัยเซลล์ 2558; 25: 981-4.

13. Li S, Han L. Circular RNA เป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่มีแนวโน้มในมะเร็ง: การตรวจจับ การทำงาน และอื่นๆ ยาจีโนม 2562; 11:15.

14. Ye Q, Ling S, Zheng S, Xu X. การตรวจชิ้นเนื้อของเหลวในมะเร็งเซลล์ตับ: เซลล์มะเร็งหมุนเวียนและ DNA เนื้องอกหมุนเวียน มะเร็งมอล. 2562; 18:114.

15. Wen G, Zhou T, Gu W. ศักยภาพของการใช้ RNA ของเลือดเป็น biomarker การตรวจชิ้นเนื้อของเหลวสำหรับโรคในมนุษย์ เซลล์โปรตีน. 2563.

16 Zhang Z, Yang T, Xiao J. Circular RNAs: Biomarkers ที่มีแนวโน้มสำหรับโรคในมนุษย์ EBioMedicine. 2561; 34: 267-74.

17. Wang S, Zhang K, Tan S, Xin J, Yuan Q, Xu H และอื่น ๆ RNAs แบบวงกลมในของเหลวในร่างกายเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพของมะเร็ง: แนวหน้าใหม่ของการตัดชิ้นเนื้อของเหลว มะเร็งมอล. 2564; 20:13.

18. Wang Y, Zhang Y, Wang P, Fu X, Lin W. RNAs แบบวงกลมในมะเร็งเซลล์ไต: ผลกระทบต่อการเกิดเนื้องอก การวินิจฉัย และการรักษา มะเร็งมอล. 2563; 19:149.

19. Chen D, Chen W, Xu Y, Zhu M, Xiao Y, Shen Y และอื่นๆ จุดตรวจภูมิคุ้มกันควบคุม HHLA2 ในเซลล์มะเร็งไตเซลล์ใส: ตัวบ่งชี้ทางชีวภาพเชิงพยากรณ์ที่แปลกใหม่และเป้าหมายการรักษาที่มีศักยภาพ เจ เมด เจเน็ท. 2562; 56: 43-9.

20. Lv Q, Wang G, Zhang Y, Shen A, Tang J, Sun Y และอื่นๆ CircAGAP1 ส่งเสริมการลุกลามของเนื้องอกโดยการบีบ miR-15-5p ในเซลล์มะเร็งไตเซลล์ใส J Exp Clin มะเร็ง Res. 2564; 40:76.

21. Wang K, Sun Y, Tao W, Fei X, Chang C. Androgen receptor (AR) ส่งเสริมการย้ายเซลล์มะเร็งไต (ccRCC) และการบุกรุกผ่านการเปลี่ยนแปลง circHIAT1/miR-195-5p/29a{{ สัญญาณ 4}}p/29c-3p/CDC42 จดหมายมะเร็ง 2560; 394: 1-12.

22. Xue D, Wang H, Chen Y, Shen D, Lu J, Wang M และอื่น ๆ Circ-AKT3 ยับยั้งการแพร่กระจายของเซลล์มะเร็งไตของเซลล์ที่ชัดเจนผ่านการเปลี่ยนแปลงสัญญาณ miR-296-3p/E-cadherin มะเร็งโมเลกุล 2562; 18:151.

23. Chen Q, Liu T, Bao Y, Zhao T, Wang J, Wang H และอื่นๆ CircRNA cRAPGEF5 ยับยั้งการเจริญเติบโตและการแพร่กระจายของมะเร็งเซลล์ไตผ่านเส้นทาง miR-27a-3p/TXNIP จดหมายมะเร็ง 2562; 469: 68-77.

24. Guo X, Lin W, Wen W, Huyghe J, Bien S, Cai Q และอื่นๆ การระบุยีนที่ไวต่อการเกิดมะเร็งลำไส้ใหญ่และทวารหนักจากการศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างผู้ถอดเสียง 125,478 คน ระบบทางเดินอาหาร 2564; 160.

25. Wang J, Nie W, Xie X, Bai M, Ma Y, Jin L และอื่น ๆ MicroRNA-874-3p/ADAM (A Disintegrin and Metalloprotease) 19 เป็นสื่อกลางในการกระตุ้นการทำงานของมาโครฟาจและพังผืดของไตหลังจากการบาดเจ็บที่ไตเฉียบพลัน ความดันโลหิตสูง 2564; 77: 1613-26.

26. Kun-Peng Z, Chun-Lin Z, Jian-Ping H, Lei Z. นวนิยายที่หมุนเวียนอยู่ใน hsa_circuit_0081001 ทำหน้าที่เป็น biomarker ที่เป็นไปได้สำหรับการวินิจฉัยและการพยากรณ์โรคของ osteosarcoma Int J Biol วิทยาศาสตร์ 2561; 14: 1513-20

27. Yuan Y, Bao J, Chen Z, Villanueva AD, Wen W, Wang F และอื่นๆ การวิเคราะห์แบบมัลติโอมิกส์เพื่อระบุยีนที่ไวต่อมะเร็งลำไส้ใหญ่และทวารหนัก ฮัม มอล เจเน็ต. 2021.

28. Kramer MC, Liang D, Tatomer DC, Gold B, March ZM, Cherry S และอื่น ๆ การควบคุมแบบผสมของการแสดงออกของ Drosophila วงกลม RNA โดยการทำซ้ำแบบ intronic, hnRNPs และโปรตีน SR ยีนเดฟ 2558; 29: 2168-82.

29. Guo X, Lin W, Bao J, Cai Q, Pan X, Bai M และอื่น ๆ การวิเคราะห์ cis-eQTL ที่ครอบคลุมเผยให้เห็นยีนเป้าหมายในตำแหน่งความไวต่อมะเร็งเต้านมที่ระบุในการศึกษาความสัมพันธ์ทั่วทั้งจีโนม Am J Hum Genet. 2561; 102: 890-903

30. Zhong S, Wang J, Zhang Q, Xu H, Feng J. CircPrimer: ซอฟต์แวร์สำหรับใส่คำอธิบายประกอบ circRNAs และกำหนดความจำเพาะของไพรเมอร์ circRNA BMC ชีวสารสนเทศ. 2561; 19:292.

31. Zhu K, Wang Y, Liu L, Li S, Yu W. Long non-coding RNA MBNL1-AS1 ควบคุมการแพร่กระจาย การย้ายถิ่น และการบุกรุกของเซลล์ต้นกำเนิดมะเร็งในมะเร็งลำไส้ใหญ่โดยการทำปฏิกิริยากับ MYL9 ผ่านทาง microRNA ที่เป็นฟองน้ำ -412-3หน้า คลินิกและการวิจัยด้านตับและระบบทางเดินอาหาร 2563; 44: 101-14.

32. Schrödter S, Braun M, Syring I, Klümper N, Deng M, Schmidt D และอื่น ๆ การระบุตัวขนส่งโดปามีน SLC6A3 เป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพสำหรับผู้ป่วยมะเร็งเซลล์ไต มะเร็งโมเลกุล 2559; 15:10.

33. Ran L, Liang J, Deng X, Wu J. miRNAs ในการทำนายการพยากรณ์โรคในเซลล์มะเร็งไตเซลล์ใส Biomed Res Int. 2560; 2560: 4832931.

34. Li JK, Chen C, Liu JY, Shi JZ, Liu SP, Liu B และอื่น ๆ MRCCAT1 RNA ที่ไม่เข้ารหัสแบบยาวส่งเสริมการแพร่กระจายของเซลล์มะเร็งไตเซลล์ใสผ่านการยับยั้ง NPR3 และเปิดใช้งานการส่งสัญญาณ p38-MAPK มะเร็งโมเลกุล 2560; 16:111.

35. Sheng JQ, Liu L, Wang MR, Li PY RNAs แบบวงกลมในมะเร็งระบบย่อยอาหาร: ตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่เป็นไปได้และเป้าหมายการรักษา ฉันเป็นมะเร็ง Res 2561; 8: 1142-56

36. Vea A, Llorente-Cortes V, de Gonzalo-Calvo D. RNA แบบวงกลมในเลือด Adv Exp Med Biol. 2561; 1087: 119-30

37. Vo JN, Cieslik M, Zhang Y, Shukla S, Xiao L, Zhang Y และอื่นๆ ภูมิทัศน์ของ Circular RNA ในมะเร็ง เซลล์ 2562; 176.

38. Pan B, Qin J, Liu X, He B, Wang X, Pan Y และอื่น ๆ การระบุ Serum Exosomal has-circ-0004771 เป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพสำหรับการวินิจฉัยใหม่ของมะเร็งลำไส้ใหญ่ ฟรอนท์เจเนท. 2562; 10:1096.

39. Gai C, Camussi F, Broccoletti R, Gambino A, Cabras M, Molinaro L และอื่น ๆ miRNAs ที่เกี่ยวข้องกับถุงน้ำลายนอกเซลล์เป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่มีศักยภาพในมะเร็งเซลล์สความัสในช่องปาก บีเอ็มซี มะเร็ง. 2561; 18:439.

40. Lenherr SM, Tsai S, Silva Neto B, Sullivan TB, Cimmino CB, Logvinenko T และอื่น ๆ โปรไฟล์การแสดงออกของ MicroRNA ระบุเนื้องอกในกระเพาะปัสสาวะที่ไม่รุกรานกล้ามเนื้อระดับสูงที่มีความเสี่ยงสูงที่จะลุกลามไปสู่ฟีโนไทป์ที่รุกราน ยีน (บาเซิล). 2560; 8.

41. Yoshida K. รูปร่างของเซลล์ไฟโบรบลาสต์และการยึดเกาะ ในหลอดทดลอง ถูกเปลี่ยนแปลงโดยการแสดงออกมากเกินไปของไอโซฟอร์ม 7a และ 7b ของโปรโตคาเดริน 7 แต่ไม่ใช่ไอโซฟอร์ม 7c เซลล์ โมล ไบโอเลต 2546; 8: 735-41.

42. Zhou X, Updegraff BL, Guo Y, Peyton M, Girard L, Larsen JE และคณะ PROTOCADHERIN 7 ทำหน้าที่ผ่าน SET และ PP2A เพื่อเพิ่มศักยภาพในการส่งสัญญาณ MAPK โดย EGFR และ KRAS ระหว่างการกำเนิดเนื้องอกในปอด มะเร็ง Res 2560; 77: 187-97.

43. Chen HF, Ma RR, He JY, Zhang H, Liu XL, Guo XY และอื่นๆ Protocadherin 7 ยับยั้งการย้ายเซลล์และการบุกรุกผ่าน E-cadherin ในมะเร็งกระเพาะอาหาร เนื้องอก Biol 2560; 39:1010428317697551.

44. Bujko M, Kober P, Mikula M, Ligaj M, Ostrowski J, Siedlecki JA การเปลี่ยนแปลงการแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องกับการยึดเกาะระหว่างเซลล์และเซลล์ในเนื้องอกลำไส้ใหญ่ ออนคอลเลตต์. 2558; 9: 2463-70

45. Lin YL, Wang YL, Fu XL, Li WP, Wang YH, Ma JG. การแสดงออกต่ำของ protocadherin7 (PCDH7) เป็น biomarker ที่มีศักยภาพในการพยากรณ์โรคสำหรับมะเร็งกระเพาะปัสสาวะระยะลุกลามที่ไม่ใช่กล้ามเนื้อ Oncotarget. 2559; 7: 28384-92.

46. ​​Conn SJ, Pillman KA, Toubia J, Conn VM, Salmanidis M, Phillips CA และอื่นๆ การสั่นของโปรตีนที่จับกับ RNA จะควบคุมการก่อตัวของ circRNAs เซลล์ 2558; 160: 1125-34.

47. Errichelli L, Dini Modigliani S, Laneve P, Colantoni A, Legnini I, Capauto D และอื่น ๆ FUS ส่งผลต่อการแสดงออกของ RNA แบบวงกลมในเซลล์ประสาทสั่งการจากเซลล์ต้นกำเนิดจากตัวอ่อนของหนู นัทคอมมูน. 2560; 8:14741.

48. Yu CY, Li TC, Wu YY, Yeh CH, Chiang W, Chuang CY และอื่นๆ RNA แบบวงกลม circBIRC6 มีส่วนร่วมในวงจรโมเลกุลที่ควบคุมการมีอยู่มากมายของมนุษย์ นัทคอมมูน. 2560; 8:1149.

49. Lee YH, Kim HS, Kim JS, Yu MK, Cho SD, Jeon JG และอื่นๆ C-my ควบคุมการดูดเลือดอัตโนมัติสำหรับพลังของเยื่อกระดาษในความเครียดจากกลูโคสออกซิเดทีฟ เจ เดนท์ เรส 2559; 95: 430-8.

50. Li Q, Wang Y, Wu S, Zhou Z, Ding X, Shi R และอื่นๆ CircACC1 ควบคุมการประกอบและการเปิดใช้งาน AMPK Complex ภายใต้ความเครียดจากการเผาผลาญ เซลล์ Metab 2562; 30.

51. Ren C, Zhang Z, Wang S, Zhu W, Zheng P, Wang W. Circular RNA hsa_circular_0001178 อำนวยความสะดวกในการบุกรุกและการแพร่กระจายของมะเร็งลำไส้ใหญ่ผ่านการควบคุม ZEB1 ผ่านการบีบ miRNA หลายๆ ตัว ไบโอล เคม. 2563; 401: 487-96.

52. Zeng K, Chen X, Xu M, Liu X, Hu X, Xu T และอื่น ๆ CircHIPK3 ส่งเสริมการเจริญเติบโตของมะเร็งลำไส้ใหญ่และการแพร่กระจายของเนื้อร้ายโดยการใช้ฟองน้ำ miR-7 โรคการตายของเซลล์ 2561; 9:417.

53. Park OH, Ha H, Lee Y, Boo SH, Kwon DH, Song HK และอื่นๆ Endoribonucleolytic Cleavage ของ RNA ที่มี mA โดย RNase P/MRP Complex โมลเซลล์. 2562; 74.

Ying Wang1,2, Yunjing Zhang1,2, Xinwan Su3, Qiongzi Qiu4, Yuan Yuan2, Chunhua Weng2, Sailan Zou5, Yan Tian5, Weidong Han6, Pengyuan Liu4, Xingyi Guo7, Jianhua Mao8, Xianghui Fu5, Ping Wang3, Weiqiang Lin1

1. The Fourth Affiliated Hospital, and International Institutes of Medicine, Zhejiang University School of Medicine, Jinhua 322000, เจ้อเจียง, จีน

2. ไต โรค ศูนย์, the First Affiliated Hospital, and Institute of Translational Medicine, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310003, Zhejiang, China.

3. แผนกระบบทางเดินปัสสาวะ, โรงพยาบาลในเครือแห่งแรก, คณะแพทยศาสตร์มหาวิทยาลัยเจ้อเจียง, หางโจว 310003, เจ้อเจียง, จีน

4. ภาควิชาเวชศาสตร์ทางเดินหายใจ, โรงพยาบาล Sir Run Run Shaw และสถาบันการแพทย์การแปล, คณะแพทยศาสตร์มหาวิทยาลัยเจ้อเจียง, หางโจว 310016, เจ้อเจียง, จีน

5. แผนกต่อมไร้ท่อและเมแทบอลิซึม ห้องปฏิบัติการหลักของรัฐด้านชีวบำบัดและศูนย์มะเร็ง โรงพยาบาลเวสต์ไชน่า มหาวิทยาลัยเสฉวน และศูนย์นวัตกรรมการบำบัดด้วยชีวบำบัด เฉิงตู 610041 มณฑลเสฉวน ประเทศจีน

6. ภาควิชามะเร็งวิทยา โรงพยาบาล Sir Run Run Shaw คณะแพทยศาสตร์มหาวิทยาลัยเจ้อเจียง หางโจว 310016 เจ้อเจียง ประเทศจีน

7. กองระบาดวิทยา แผนกการแพทย์ ศูนย์ระบาดวิทยาแวนเดอร์บิลต์ และศูนย์มะเร็งแวนเดอร์บิลต์-อินแกรม โรงเรียนแพทย์มหาวิทยาลัยแวนเดอร์บิลต์ แนชวิลล์ 37203 เทนเนสซี สหรัฐอเมริกา

8. ภาควิชาโรคไต, ศูนย์วิจัยทางคลินิกแห่งชาติเพื่อสุขภาพเด็ก, โรงพยาบาลเด็ก, คณะแพทยศาสตร์มหาวิทยาลัยเจ้อเจียง, หางโจว 310003, เจ้อเจียง, จีน