การสูดดมเซโวฟลูเรนเป็นเวลาสั้นๆ สามารถลดการเกิดแผลเป็นจากต่อมน้ำเหลืองหลังการบาดเจ็บที่สมองจากภาวะขาดออกซิเจนและขาดเลือดในหนูแรกเกิด ตอนที่ 2

PCR แบบเรียลไทม์

Total RNA ถูกสกัดจากเนื้อเยื่อ hippocampal ของลูกสุนัขที่ 12, 24 และ 48 ชั่วโมงหลังการผ่าตัดโดยใช้ TRIzolreagent (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) DNA เสริมถูกสังเคราะห์โดยใช้ชุด Superscript II RT-PCR ขั้นสูง (Invitrogen)

การบาดเจ็บจากภาวะขาดออกซิเจนและขาดเลือดหมายถึงสภาวะทางพยาธิวิทยาที่เกิดจากภาวะสมองขาดเลือด ภาวะขาดออกซิเจน ความผิดปกติของการเผาผลาญ และความเสียหายของเซลล์ประสาทอันเนื่องมาจากความผิดปกติของระบบหัวใจและหลอดเลือดและระบบหลอดเลือดในสมอง ด้วยความก้าวหน้าทางสังคมและการเปลี่ยนแปลงวิถีชีวิต การบาดเจ็บจากภาวะขาดออกซิเจนและขาดเลือดจึงกลายเป็นเรื่องปกติมากขึ้นเรื่อยๆ ภาวะนี้อาจก่อให้เกิดอันตรายมากมายต่อสุขภาพของมนุษย์ รวมถึงส่งผลต่อสติปัญญาและความจำด้วย

แม้ว่าภาวะขาดออกซิเจนและภาวะขาดเลือดอาจทำให้การทำงานของสมองลดลง แต่ก็ไม่ได้หมายความว่าความจำจะได้รับผลกระทบในทางลบ ในทางกลับกัน เราสามารถพัฒนาความจำและเพิ่มประสิทธิภาพสมองได้ด้วยวิธีการที่ถูกต้อง ต่อไปนี้เป็นวิธีที่จะช่วยปรับปรุงความจำของคุณ:

1. การรับประทานอาหารเพื่อสุขภาพ: ผลกระทบของการรับประทานอาหารต่อความจำเป็นสิ่งสำคัญมาก อาหารที่อุดมไปด้วยโปรตีน วิตามิน และแร่ธาตุสามารถช่วยรักษาระบบประสาทและการทำงานของความคิดให้แข็งแรง

2. ออกกำลังกายให้มากขึ้น: การออกกำลังกายสามารถส่งเสริมการไหลเวียนโลหิต เพิ่มการไหลเวียนของออกซิเจน เพิ่มภูมิคุ้มกันของร่างกาย และลดความเสี่ยงต่อโรคต่างๆ คุณสามารถพัฒนาความสามารถในการจดจำของคุณได้ผ่านการออกกำลังกาย

3. เสริมสร้างความมั่นใจในตนเอง: ความมั่นใจเป็นปัจจัยสำคัญในความทรงจำของบุคคล หากคุณเชื่อว่าคุณสามารถทำงานบางอย่างให้สำเร็จได้ คุณจะบรรลุผลตามที่คุณต้องการได้อย่างง่ายดาย และคุณยังสามารถปรับปรุงความจำของคุณได้อย่างมีประสิทธิภาพอีกด้วย

จะเห็นได้ว่าการบาดเจ็บจากภาวะขาดออกซิเจนและขาดเลือดไม่ใช่ภาวะที่จะทำร้ายความทรงจำของมนุษย์อย่างหลีกเลี่ยงไม่ได้ ตราบใดที่เราเชี่ยวชาญในวิธีการที่ถูกต้องและดูแลสมองของเราอย่างดี เราก็สามารถมีอนาคตที่ดีได้ด้วยทัศนคติเชิงบวก จะเห็นได้ว่าเราต้องปรับปรุงความจำ และ Cistanche Deserticola สามารถปรับปรุงความจำได้อย่างมีนัยสำคัญ เนื่องจาก Cistanche Deserticola มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ ต้านการอักเสบ และต่อต้านวัย ซึ่งสามารถช่วยลดปฏิกิริยาออกซิเดชันและการอักเสบในสมอง จึงช่วยปกป้อง สุขภาพของระบบประสาท นอกจากนี้ Cistanche Deserticola ยังสามารถส่งเสริมการเจริญเติบโตและการซ่อมแซมเซลล์ประสาท ซึ่งจะช่วยปรับปรุงการเชื่อมต่อและการทำงานของโครงข่ายประสาทเทียม ผลกระทบเหล่านี้สามารถช่วยพัฒนาความจำ การเรียนรู้ และความเร็วในการคิด และยังอาจป้องกันการพัฒนาของความผิดปกติทางสติปัญญาและโรคเกี่ยวกับความเสื่อมของระบบประสาทอีกด้วย

คลิกรู้วิธีปรับปรุงการทำงานของสมอง

สีย้อมฟลูออเรสเซนต์ SYBR Green I (SYBR Green PCRMaster Mix, Applied Biosystems, ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) และ 1μL ของ DNA เสริมที่ถอดรหัสแบบย้อนกลับถูกนำมาใช้เพื่อตรวจจับการสังเคราะห์ DNA โดย PCR แบบเรียลไทม์ด้วยไพรเมอร์เฉพาะของ HIF-1 -

ในระบบขยาย DNA แบบเรียลไทม์ของยีนโรเตอร์ (Corbett Research, Sydney, Australia) ได้มีการดำเนินการ PCR ด้วยรอบต่อไปนี้: การเสียสภาพที่ 95 องศาเป็นเวลา 15 นาที; 40 รอบที่ 95 องศา (20 วินาที) หลอมที่ 58 องศาเป็นเวลา 25 วินาที และดึงลงที่ 72 องศา เป็นเวลา 35 วินาที การตรวจติดตามผลิตภัณฑ์ฟลูออเรสเซนต์ถูกดำเนินการเป็นเวลานานที่ 72 องศา

ซอฟต์แวร์วิเคราะห์ยีนโรเตอร์ (การวิจัย Corbett) ถูกนำมาใช้เพื่อสร้างมาตรฐานให้กับยีนดูแลทำความสะอาด GAPDH และวัดปริมาณการแสดงออกของยีนสัมพัทธ์ ลำดับไพรเมอร์ทั้งหมดแสดงไว้ในตารางที่ 1

การย้อมสี Nissl
สมองของหนูถูกเตรียมเป็นชิ้น ๆ 28 วันหลังการผ่าตัดตามที่อธิบายไว้ข้างต้นสำหรับอิมมูโนฮิสโตเคมี สมองแต่ละอันถูกแบ่งส่วนติดต่อกัน และเลือกสามส่วนที่คล้ายกันของสมองสำหรับการย้อมสี Nissl

ด้วยการใช้กล้องจุลทรรศน์ดิจิตอล Nikon C1 (Nikon Corporation, โตเกียว, ญี่ปุ่น) ภาพไมโครโฟโต้ทั่วไปของ CA1, CA3 และ DGareas ของฮิปโปแคมปัสจึงถูกจับภาพได้ เซลล์หลายเซลล์ที่นับในแต่ละส่วนทั้งสามถูกดำเนินการในลักษณะที่มองไม่เห็นโดยใช้ซอฟต์แวร์ ImageJ

การทดสอบพฤติกรรม

หนูหย่านมเมื่ออายุ 3 สัปดาห์ แบ่งออกเป็นสามถึงห้ากลุ่ม และเก็บไว้ในกรงตามการมอบหมายกลุ่ม การทดสอบพฤติกรรมดำเนินการกับหนู P28–P33 (เช่น 21–26 วันหลังการผ่าตัด) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้า (Wang et al., 2019a )แต่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย เพื่อแยกอิทธิพลของวงจรการเป็นสัดต่อพฤติกรรมของสัตว์ฟันแทะ จึงทำการทดสอบเฉพาะหนูตัวผู้เท่านั้น

เขาวงกตน้ำมอร์ริส

การทดสอบเขาวงกตน้ำของมอร์ริสใช้เพื่อประเมินความสามารถด้านการเรียนรู้เชิงพื้นที่และความจำของหนู P28–P33 (Wang et al.,2019a)

การทดสอบประกอบด้วยสองขั้นตอน ได้แก่ ส่วนการฝึกอบรมและการทดสอบการค้นหาเชิงพื้นที่ เป็นเวลา 5 วันติดต่อกัน มีการดำเนินการส่วนการฝึกอบรมสี่ส่วนทุกวัน เริ่มเวลา 8:{2}} น. สำหรับการทดสอบการตรวจจับแท่น หนู 10 ตัวจากแต่ละกลุ่มจะถูกวางแยกกันในน้ำในตำแหน่งต่างๆ โดยสุ่มโดยหันหน้าไปทางผนังสระน้ำ

หากหนูตรวจพบแพลตฟอร์มได้สำเร็จภายใน 90 วินาที มันจะถูกบังคับให้อยู่บนแพลตฟอร์มเป็นเวลา 20 วินาที และเวลาที่ใช้ในการตรวจจับแพลตฟอร์มจะถูกบันทึกเป็นเวลาแฝงในการหลบหนี การทดสอบแต่ละครั้งใช้เวลา 90 วินาที และเวลาแฝงในการหลบหนีถูกวัดเป็นเวลาตั้งแต่หนูถูกปล่อยลงไปในน้ำจนกระทั่งขึ้นแท่นได้สำเร็จ

หากหนูไม่พบแพลตฟอร์มภายใน 90 วินาที การบันทึกจะหยุดลงและดำเนินการเรียนรู้และแนะนำหน่วยความจำ (ผู้ทดลองใช้ไม้เรียวยาวเพื่อนำทางหนูไปยังแพลตฟอร์ม และปล่อยให้พวกเขาอยู่บนแพลตฟอร์มเป็นเวลา 20 วินาทีเพื่อเรียนรู้) ในระหว่างการทดสอบ เวลาแฝงในการหลบหนีของหนูที่ไม่ผ่านเข้าสู่ระยะจะถูกบันทึกเป็น 90 วินาที

ในการทดสอบเชิงพื้นที่ที่ดำเนินการในวันที่หกของการทดสอบ แพลตฟอร์มถูกถอดออกและวางหนูไว้ในควอแดรนท์ฝั่งตรงข้ามและได้รับอนุญาตให้ว่ายน้ำเป็นเวลา 90 วินาที ความเร็วในการว่ายน้ำ เวลาแฝงในการหลบหนี และจำนวนครั้งที่พวกเขาข้ามสถานที่ซึ่งแพลตฟอร์มเคยตั้งอยู่ก่อนหน้านี้ถูกบันทึกโดยระบบติดตามวิดีโอ (Shanghai MobileDatum Ltd., เซี่ยงไฮ้, จีน)

การทดสอบการระงับ

ทำการทดสอบระบบกันสะเทือนกับหนู P28–P32 เพื่อประเมินการทำงานของมอเตอร์ เริ่มตั้งแต่เวลา 15.00 น. ทุกวัน วางเชือกพลาสติกแนวนอนที่มีเส้นผ่านศูนย์กลาง 0.5 ซม. ให้ห่างจากพื้น 45 ซม. และให้หนูจับเชือกพลาสติกด้วยแขนขาทั้งสองข้าง จากนั้นจึงวัดเวลาที่หนูร่วงหล่น เวลาแฝงของการระงับ การทดสอบสิ้นสุดลงหาก: (i) หนูล้มลง; (ii) เวลาแฝงของการระงับมากกว่า 60 วินาที; หรือ (iii) เชือกถูกจับโดยแขนขาด้านหลัง

การทดสอบภาคสนามแบบเปิด

การทดสอบภาคสนามแบบเปิดดำเนินการกับหนู P28 โดยใช้อุปกรณ์กลางแจ้งที่ประกอบด้วยกล่องเพล็กซิกลาส (100 ซม. × 100 ซม. บอร์จซานาต เตหะราน อิหร่าน) ล้อมรอบด้วยกำแพงสูง 45- ซม. โดยพื้นแบ่งออกเป็น 16 สี่เหลี่ยม พื้นที่ส่วนกลางคือพื้นที่ 50 ซม. × 50 ซม. ตรงกลางสนามกีฬา หนูแต่ละตัวถูกวางไว้แยกกันตรงกลางสนามและได้รับอนุญาตให้สำรวจโดยไม่มีข้อจำกัดเป็นเวลา 10 นาที

ระบบติดตามวิดีโอ (บอร์จ สานัต) ใช้เพื่อบันทึกและวิเคราะห์แผนการเดินทางทั้งหมด (เป็นตัวบ่งชี้กิจกรรมการออกกำลังกาย) และเวลาที่ใช้ในพื้นที่ส่วนกลาง (เป็นตัวบ่งชี้พฤติกรรมวิตกกังวล) (Zhai etal., 2019)

การย้อมสี Golgi

หลังจากเสร็จสิ้นการทดสอบพฤติกรรม (เช่น 26 วันหลังการผ่าตัด) หนู 5 ตัวจะถูกสุ่มเลือกจากแต่ละกลุ่ม การย้อมสี Golgi ดำเนินการในส่วนสมอง 150- μm-thickfrozen โดยใช้ FD Rapid Golgi Stain Kit (FDNeuroTechnologies, Columbia, MD, USA) ตามระเบียบการของผู้ผลิต

ใช้ซอฟต์แวร์ ImageJ เพื่อวิเคราะห์ความหนาแน่นของกระดูกสันหลัง (จำนวนกระดูกสันหลังต่อ 10 μm) ของเซลล์ประสาทแต่ละอัน กระดูกสันหลังถูกนับบนส่วนเดนไดรต์รองสองหรือสามส่วน

การวิเคราะห์ทางสถิติ

SPSS 17.0 สำหรับ Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) ถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูล ซึ่งแสดงเป็นค่าเฉลี่ย ± ข้อผิดพลาดมาตรฐานของค่าเฉลี่ย (SEM) การทดสอบชาปิโร-วิลค์ถูกใช้เพื่อทดสอบสมมติฐานของภาวะปกติระหว่างตัวแปรต่อเนื่องทั้งหมด นอกจากนี้ การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียวตามด้วยการทดสอบเปรียบเทียบหลายรายการหลังการทดสอบของ Tukey ถูกนำมาใช้ในการทดลองต่างๆ

หากข้อมูลไม่เป็นไปตามสมมติฐานปกติ การทดสอบ Kruskal-Wallis H หรือ Mann-Whitney Utest จะดำเนินการแยกกัน เวลาแฝงของ Escape ได้รับการวิเคราะห์โดยอาศัยการวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบสองทางสำหรับการวัดซ้ำ ค่า P < 0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติ

ผลลัพธ์

SPC ปรับปรุงการสูญเสียเซลล์ประสาทฮิปโปแคมปัส

ฮิบโปแคมปัสรวมถึงบริเวณที่ตรวจสอบทั้งสามนั้นสัมพันธ์กับการเรียนรู้และความทรงจำ (Jung et al., 2020) การทดสอบหลังพฤติกรรม ทำการย้อม Nissl เพื่อตรวจสอบสถาปัตยกรรมฮิปโปแคมปัส

ในกลุ่ม HI ความหนาแน่นของเส้นประสาททำงานได้ลดลงเมื่อเทียบกับกลุ่มหลอกลวง อย่างไรก็ตาม จำนวนเซลล์ประสาทเพิ่มขึ้นในสัตว์ที่สัมผัสกับ SPC; ผลกระทบนี้กลับกันโดย YC-1 ซึ่งทำให้ความหนาแน่นของเส้นประสาทลดลง (รูปที่ 1A) ปรากฏการณ์นี้ถูกสังเกตได้ในภูมิภาค CA1, CA3 และ DG ของฮิบโปแคมปัส (P< 0.05; Figure 1B–D).

SPC ปรับปรุงและลดความหนาแน่นของกระดูกสันหลัง dendritic ในพื้นที่ hippocampal CA1

การย้อมสี Golgi ใช้เพื่อตรวจจับความหนาแน่นของกระดูกสันหลังของเส้นประสาทเสี้ยม CA1 (รูปที่ 2A) เนื่องจากขนาดของกระดูกสันหลังมีความหลากหลายอย่างมาก (เช่น เดนไดรต์ที่มีกิ่งก้าน บางหรือมีลักษณะเป็นเห็ด) เราเพียงแต่พิจารณาว่าความหนาแน่นของกระดูกสันหลังเดนไดรต์นั้นเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในกลุ่ม HIS เมื่อเทียบกับกลุ่ม HI (P < 0.{{6 }}5) ในขณะที่ความหนาแน่นของกระดูกสันหลัง dendritic ลดลงในกลุ่ม HIS + YC -1 เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม HIS (P < 0.01; รูปที่ 2B)
SPC ปรับปรุงการแสดงออกของ PSD95 และ GAP43 ในฮิบโปแคมปัส

เราประเมินการแสดงออกของโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับไซแนปส์ GAP43 และ PSD95 เพื่อตรวจสอบว่าพวกมันถูกยับยั้งโดยรอยแผลเป็น glial หรือไม่ HI ลดการแสดงออกของโปรตีน PSD95 (P < 0.0 1) และ GAP43 ( P <0.05) อย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับ shamgroup (รูปที่ 2C – E) เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม HIS ระดับการแสดงออกของ PSD95 และ GAP43 ลดลงอย่างเห็นได้ชัดหลังจากการฉีด YC{12}}

การก่อตัวของแอสโตรลิโอซิสและแผลเป็นเกลียสร้างความเสียหายให้กับสถาปัตยกรรมฮิปโปแคมปัสหลัง HI

ต่อไป เราพยายามตรวจสอบว่าเซโวฟลูเรนปรับปรุงการทำงานของการเรียนรู้และความจำหรือไม่โดยการปกป้องสถาปัตยกรรมฮิปโปแคมปัสและลดภาวะแอสโตรลิโอซิส HIE ของทารกแรกเกิดทำให้เกิดการตายของเซลล์ในฮิบโปแคมปัส เช่นเดียวกับแอสโตรลิโอซิสที่เกิดปฏิกิริยาในบริเวณกล้ามเนื้อหัวใจตายซึ่งต่อมาพัฒนาเป็นแผลเป็น glial (Rolls et al., 2009)

ในกลุ่ม HI ชั้นพีระมิด CA1 และ CA3 และบริเวณ DG แสดงให้เห็นว่าเซลล์ประสาทลดลงอย่างเห็นได้ชัด (P < 0.01, P < 0.001; Figures3E และ 4C) เช่นเดียวกับจำนวนแอสโตรไซต์ที่เพิ่มขึ้นโดยมีการเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาที่แตกต่างกัน ( P <0.001; รูปที่ 3C และ 4B) เราประเมินการแสดงออกของ GFAP และ NeuN ในสามพื้นที่ของฮิบโปด้านซ้ายโดยใช้อิมมูโนฮิสโตเคมีและการวิเคราะห์แบบซับแบบตะวันตก

ผลลัพธ์ของเราแสดงให้เห็นว่าเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มเสแสร้ง แอสโตรไซต์ถูกกระตุ้นในกลุ่ม HI ซึ่งแทรกเข้าไปในชั้นพีระมิด CA1 (รูปที่ 4A) และ CA3 (รูปที่ 3A) และเซลล์ประสาทที่ล้อมรอบใน DG (รูปที่ 3B) ภาวะแอสโทรลิโอซิสที่มากเกินไปส่งผลให้เกิดการขยายกระบวนการไกลเลียไปสู่โครงสร้างเซลล์ประสาทปกติ ทำให้เกิดตาข่ายแอสโตรไซต์ที่มีลักษณะคล้ายผนังที่ผิดปกติ (รูปที่ 3A, B และ 4A)

ยิ่งไปกว่านั้น ปฏิกิริยาภูมิคุ้มกันของ GFAP (รูปที่ 3C, D และ 4B, E) และระดับโปรตีนเพิ่มขึ้น (P < 0.01; รูปที่4E) ในขณะที่ปฏิกิริยาภูมิคุ้มกันของ NeuN ลดลง (P < {{7} }.01 orP < 0.001; รูปที่ 3E, F และ 4C) เพื่อตรวจสอบการก่อตัวของแผลเป็น glial เพิ่มเติม เราได้ประเมินระดับการแสดงออกของ neurocanprotein และปฏิกิริยาภูมิคุ้มกันในฮิปโปแคมปัส (รูปที่ 5A, B และ 6A)

ผลลัพธ์ของอิมมูโนฟลูออเรสเซนต์ที่มีการติดฉลากสองครั้งเผยให้เห็นความแตกต่างที่เห็นได้ชัดเจนในความเข้มของฟลูออเรสเซนซ์ของการสร้างภูมิคุ้มกันของ neurocan+/GFAP+ ระหว่าง HI และกลุ่มเสแสร้ง (P < 0.001, P < 0.05, P < 0.01; รูปที่ 5G, H และ 6D) ซึ่งสอดคล้องกับผลลัพธ์ของเวสเทิร์นบล็อต (P< 0.01; Figure 6F).

SPC ลดทอน astrogliosis และการเกิดแผลเป็น glial ในฮิบโปแคมปัส

ต่อไป การศึกษาของเราตรวจสอบว่า SPC ลดการเกิดแผลเป็นของ glial หรือไม่ เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม HI ปฏิกิริยาภูมิคุ้มกันของ GFAP (รูปที่ 5C, D และ 6C) และนิวโรแคน (รูปที่ 5E, F และ 6B) ในกลุ่ม HIS ได้รับการควบคุมลดลงอย่างเห็นได้ชัดในฮิบโปแคมปัส (P < 0.{{6} }1 หรือ P < 0.001)

ในทางตรงกันข้าม การแสดงออกของ GFAP และนิวโรแคนในกลุ่ม HIS + YC-1 เพิ่มขึ้นอย่างเห็นได้ชัดเมื่อเทียบกับกลุ่ม HIS และไม่แตกต่างจากกลุ่ม HIS + YC-1 และ HI (P > 0.05; รูปที่ 6E และ F)

นอกจากนี้ ภาวะภูมิคุ้มกันบกพร่องของ NeuN ได้รับการควบคุม และโครงสร้างปรากฏเป็นระเบียบมากขึ้นในกลุ่ม HIS เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่ม HI ซึ่งกลับกันโดย YC-1 (รูปที่ 3E, F และ 4C)

For more information:1950477648nn@gmail.com