สารต้านอนุมูลอิสระ Graphene Oxide Nanoribbon เป็นสารฟอกสีฟันแบบใหม่ที่ยับยั้งกลไกการสร้างเม็ดสี

ติดต่อ:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Hsin-Yu Chou, Hui-Min David Wang,* Chia-Heng Kuo, Pei-Hsuan Lu, Lin Wang, Wenyi Kang และ Chia-Liang Sun*

บทคัดย่อ:ในกระบวนการสังเคราะห์เมลานิน ปฏิกิริยาออกซิเดชันมีบทบาทสำคัญ และเป็นกลยุทธ์ที่ดีในการยับยั้งการผลิตเมลานินโดยการลดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน ฟูลเลอรีนและอนุพันธ์ของมัน หรือสารเชิงซ้อน ถือเป็นสารกำจัดอนุมูลอิสระที่แข็งแกร่ง และเราได้นำ sp2 นาโนคาร์บอนแบบหลายชั้นมาใช้เพื่อค้นหาเมลานินกลไกการยับยั้งการสังเคราะห์ ในการศึกษานี้ เราใช้วัสดุนาโนที่แปลกใหม่ เช่น ท่อนาโนคาร์บอนหลายชั้น (MWCNT) MWCNT ชนิดสั้น กราฟีนออกไซด์นาโนริบบอน (GONR) และ GONR ชนิดสั้น เป็นสารต้านออกซิเดชันเพื่อควบคุมการผลิตเมลานิน ผลการศึกษาพบว่า GONRs มีความสามารถในการต้านออกซิเดชันในแพลตฟอร์มการวิเคราะห์ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันภายในเซลล์และนอกเซลล์ได้ดีกว่ารุ่นอื่นๆ เราเสนอว่า GONRs มีกลุ่มฟังก์ชันที่ประกอบด้วยออกซิเจน ใน 2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate assay เราพบว่า GONR สามารถคีเลตไอออนของโลหะเพื่อกำจัดชนิดของออกซิเจนที่มีปฏิกิริยาได้ ในมุมมองเชิงลึกระดับโมเลกุล เราสังเกตว่าวัสดุนาโนเหล่านี้ลดระดับการสังเคราะห์เมลานินโดยการลดการแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องกับปัจจัยการถอดรหัสที่เกี่ยวข้องกับไมโครพทาลเมีย และมีผลที่ตามมาที่คล้ายกันในการแสดงออกของโปรตีน โดยสรุปแล้ว GONRs เป็นสารที่มีศักยภาพในการเป็นสารต้านอนุมูลอิสระและวัสดุเครื่องสำอางเพื่อการฟอกสีผิว

Cistanche ก็เช่นกันเป็นตัวแทนที่มีศักยภาพเป็นนวนิยายสารต้านอนุมูลอิสระและปรับสีผิวให้ขาวขึ้นวัสดุเครื่องสำอาง.

1. บทนำ

ผิวหนังเป็นอวัยวะที่ปกคลุมผิวด้านนอกของร่างกายมนุษย์ เนื่องจากอินเทอร์เฟซสัมผัสกับสิ่งแวดล้อม ชั้นผิวหนังจึงมีบทบาทสำคัญในการปกป้องร่างกายจากเชื้อโรค หลีกเลี่ยงการสูญเสียน้ำมากเกินไป การควบคุมอุณหภูมิของร่างกาย และอื่นๆ Melanocytes เติบโตในเยื่อหุ้มพื้นฐานของผิวหนังชั้นนอกและคิดเป็น 5 ถึง 10 เปอร์เซ็นต์ของเนื้อหาในเซลล์ พวกมันมีลักษณะเป็น "ต่อม" ที่มีเซลล์เดียวซึ่งมีเดนไดรต์ที่บาง ยาว คล้ายลำแสงและแตกแขนง เมลาโนไซต์เคลื่อนที่ผ่านเซลล์ผิวหนังชั้นนอกในบริเวณใกล้เคียง ทำให้เกิดกลุ่มดาวเซลล์ผิวหนังชั้นนอกรอบๆ เมลาโนไซต์แต่ละเซลล์ มีหลายสาเหตุทั้งภายในและภายนอกที่ทำให้ผิวหนังแก่ก่อนวัย และปัจจัยหนึ่งคือรังสีอัลตราไวโอเลตจากแสงแดด1 ในระหว่างการสัมผัสรังสียูวี ระดับออกซิเจนปฏิกิริยา (ROS) ในผิวหนังจะเพิ่มขึ้นอย่างมาก ซึ่งเรียกว่าความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน ปัจจัยด้านความเป็นพิษต่อสิ่งแวดล้อมหลายประการยังช่วยเพิ่มความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันต่อผิวหนัง เช่น ยาฆ่าแมลง คาร์บอนเตตระคลอไรด์ โลหะหนัก อะโรมาติกเอมีน และอนุภาค 2.5 (PM2.5) ในกลไกทางชีวเคมี สารออกซิไดซ์ภายในเซลล์จะถูกสร้างขึ้นจากสารที่ไม่ใช่ ระบบเอนไซม์ เปลี่ยนเป็น ROS เพื่อกระตุ้นกระบวนการสร้างเมลาโนเจเนซิส3

นอกจาก ROS แล้ว ยังมีปัจจัยอีกมากมายที่ส่งผลกระทบการผลิตเมลานินรวมถึงการแสดงออกของยีน การอักเสบ การเปลี่ยนแปลงของต่อมไร้ท่อ และการดูดซึมเม็ดสี1 ในขั้นตอนแรกของการผลิตเมลานิน ไทโรซิเนสมีบทบาทในการเร่งปฏิกิริยาไทโรซีนให้เป็นฟีโนเมลานินและยูเมลานิน กลไกการผลิตเม็ดสีทั้งสองมีความคล้ายคลึงกัน ซึ่งรวมถึง L- ไทโรซีนไฮดรอกซิเลชันถึง 3,4-ไดไฮดรอกซี-แอล-ฟีนิลอะลานีน (L- DOPA) และการออกซิเดชันของ L-DOPA กับโดปาควิโนน ในขั้นตอนต่อไป โดปามีนจะถูกออกซิไดซ์โดยโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับไทโรซิเนส 1 (TRP-1) และโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับไทโรซิเนส 2 (TRP-2) ในเมลาโนโซม ซึ่งควบคุมโดยปัจจัยการถอดรหัสที่เกี่ยวข้องกับไมโครพาทาลเมีย ( MITF) เพื่อสร้างเมลานิน ในที่สุด เมลานินจะถูกทำให้สุกและตกตะกอนภายใน stratum corneum4,5 สิ่งเหล่านี้แทรกซึมเข้าสู่ keratinocytes ที่อยู่ใกล้เคียงของชั้นฐานและปกป้อง DNA ของพวกมันจากการกลายพันธุ์หรือการดัดแปลงที่เกิดจากรังสียูวี เมลานินที่โตเต็มที่ภายในเมลาโนโซมจะถูกถ่ายโอนไปยัง keratinocytes6-9 และในที่สุดก็นำไปสู่การสร้างเม็ดสีที่ติดทนนาน Lentigines กระ และจุดสีน้ำตาล/ดำ ทำให้เกิดปัญหาทางสังคมในผู้ชายและผู้หญิงในบางครั้ง การปิดกั้นความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันหรือการยับยั้งการทำงานของไทโรซิเนสเป็นกลยุทธ์หนึ่งในการปรับลดกลุ่มอาการของเม็ดสีผิวคล้ำมากเกินไปและความผิดปกติทางผิวหนัง สารต้านอนุมูลอิสระรักษารอยดำที่เกิดจาก ROS และความเสียหายของเซลล์10,11 ดังนั้น สารประกอบต่อต้านอนุมูลอิสระที่สังเคราะห์ขึ้นจึงมีการใช้งานทางชีวภาพหลายอย่างในการใช้งานผลิตภัณฑ์ดูแลผิว

Fullerene (C60), carbon nanotube (CNT), graphene และ graphene nanoribbon (GNR) เป็น sp2 nanocarbon สี่ชนิดที่ได้รับการวิจัยอย่างกว้างขวางทั่วโลก12 Fullerene และอนุพันธ์หรือสารเชิงซ้อนของมันได้รับการพิจารณาว่ามีความแข็งแกร่งคนเก็บขยะอนุมูลอิสระเป็นเวลานาน. Yodh และคณะ ใช้ C60 ที่ละลายน้ำได้เป็นสารป้องกันการเสื่อมสภาพที่เกิดจากความเครียดจาก catabolic ฉีดและอื่น ๆ สรุปได้ว่า C60(OH)24 เป็นสารประกอบต้านอนุมูลอิสระที่แรงเมื่อความเครียดออกซิเดชันสูงเกินไป Okuda และคณะ แนะนำว่าคอมเพล็กซ์ C60 สามารถป้องกันการบาดเจ็บของเซลล์ที่ไม่ใช้สื่อกลางได้13,14 Tong et al. แสดงให้เห็นว่า C60complexes อาจเป็นตัวเลือกที่มีแนวโน้มในการรักษาโรคที่เกี่ยวข้องกับสมองที่เกิดจากระดับซูเปอร์ออกไซด์ที่เพิ่มขึ้น อันที่จริง บริษัทญี่ปุ่นระบุว่าฟูลเลอรีนมีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระที่แข็งแกร่งสำหรับการใช้เครื่องสำอางในปี 2549 Lucente- Schultz et al. แสดงให้เห็นว่าความสามารถในการกำจัดอนุมูลอิสระของออกซิเจนของ CNTs ผนังเดี่ยว (SWCNTs) ที่ทำหน้าที่ได้นั้นสูงกว่าของ dendritic C60.15–19 Fenoglio et al เกือบ 40 เท่า สังเกตว่า CNTs แบบหลายผนัง (MWCNTs) ที่มีหลายผนังมีความสามารถในการกำจัดอนุมูลอิสระที่โดดเด่นเมื่อสัมผัสกับแหล่งภายนอกของไฮดรอกซิลหรือซูเปอร์ออกไซด์ เรดิคัล 20 การคำนวณทฤษฎีเชิงฟังก์ชันของความหนาแน่นยังเผยให้เห็นแบบจำลองของ SWCNT ที่เป็นสารกำจัดอนุมูลอิสระ ในปี 2547 โนโวเซลอฟและคณะ ครั้งแรกแสดงให้เห็นว่ากราฟีนแสดงผลไฟฟ้าแบบสองขั้วที่แข็งแกร่งและอาจมีแนวโน้มสำหรับการใช้งานทางอิเล็กทรอนิกส์21 หลังจากนั้น กราฟีนยังคงแสดงให้เห็นว่ากราฟีนมีคุณสมบัติทางอิเล็กทรอนิกส์ที่โดดเด่นสำหรับก๊าซ 2 มิติของอนุภาคที่อธิบายโดยสมการไดแรค22,23 ตั้งแต่ งานวิจัยที่ก้าวล้ำทั้งสองนี้ได้รับความสนใจมากขึ้นเรื่อยๆ ต่อการวิจัยที่ใช้กราฟีน24−30 ตัวอย่างเช่น Qiu et al ในปี 2014 แสดงให้เห็นว่ากราฟีนออกไซด์และกราฟีนไม่กี่ชั้นมีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระที่สำคัญและสามารถปกป้องโมเลกุลชีวโมเลกุลต่างๆ จากการเกิดออกซิเดชัน31 Han et al. การทดลองแสดงให้เห็นในปี 2550 ว่าช่องว่างพลังงานของ GNR สามารถควบคุมได้ในระหว่างกระบวนการพิมพ์หินโดยการเปลี่ยนความกว้างของริบบิ้น32 ในบรรดานาโนคาร์บอนทั้งสี่ GNR ได้รับความสนใจน้อยที่สุด ตามความรู้ของเรา มีงานวิจัยเพียงเล็กน้อยเกี่ยวกับคุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระของกราฟีนออกไซด์นาโนริบบอน (GONRs)31,33 ดังนั้นในการศึกษานี้ เราจึงเตรียม MWCNTs, MWCNTs สั้น, GONRs และ GONR สั้น ๆ อย่างรอบคอบ และมีวัตถุประสงค์เพื่อเปรียบเทียบคุณสมบัติของสารต้านอนุมูลอิสระและ ที่เกี่ยวข้องกันอย่างเป็นระบบ

2. ผลลัพธ์และการอภิปราย

2.1. สัณฐานวิทยาของ MWCNTs และ GONRs

Figure 1a shows the low- and high-magnification transmission electron microscopy (TEM) images of MWCNTs and short MWCNTs. Following acidic cutting under ultrasonication, the length of MWCNTs could be shortened from >10 μm ถึง 2−3 μm ในเวลาเดียวกัน พบว่าการบำบัดด้วยกรดไนตริกทำให้พื้นผิวท่อเรียบขึ้น รอยหยักและรูปร่างที่ผิดปกติบางส่วนจะแสดงในรูปภาพที่มีกำลังขยายสูง นอกจากนี้ การใช้ MWCNT และ MWCNT แบบสั้นผ่านปฏิกิริยาไมโครเวฟจะได้รับ GONR และ GONR แบบสั้นตามลำดับ นอกจากนี้เรายังแสดงภาพ TEM กำลังขยายต่ำและสูงของ GONR และ GONR แบบสั้น เนื่องจากการคลายซิปตามยาวที่สำคัญและการตัดในแนวนอนเล็กน้อย ดูเหมือนว่า GONR จะสั้นกว่า MWCNT ในทางกลับกัน รูปภาพที่มีกำลังขยายสูงแสดงเส้นผ่านศูนย์กลางที่ใหญ่กว่า นั่นคือ 0.11−0.18 μm ของ GONR ที่มากกว่าของ MWCNT ซึ่งบ่งชี้ว่ากระบวนการคลายซิปนั้นประสบความสำเร็จ ในทำนองเดียวกัน GONR แบบสั้นจะแสดงความยาวที่สั้นกว่าและเส้นผ่านศูนย์กลางใหญ่กว่า MWCNT แบบสั้น ในเครื่องอัดอากาศของกระบวนการคลายซิปใหม่ของเรา โครงสร้างชั้นบางของ GONR นั้นน้อยกว่าที่เราได้รับในรายงานเบื้องต้นสำหรับพลังงานไมโครเวฟ 250 W ที่เท่ากัน ในขณะที่ยังคง MWCNT ส่วนกลางที่หนาขึ้น12 นี่หมายถึง core−shell MWCNT /GONR โครงสร้างเฮเทอโรมีแนวโน้มที่จะปรากฏขึ้นแทนโครงสร้างนาโนริบบอนที่คลายซิปอย่างเต็มที่ผ่านพลังงานไมโครเวฟทั้งหมดในกระบวนการใหม่ เพื่อเปรียบเทียบกับ GONR แบบสั้นในการศึกษาก่อนหน้านี้ 34 กำลังไฟไมโครเวฟที่สูงขึ้นทำให้เกิดรอยหยักที่ด้านข้างของผ้าหมึกมากขึ้น และไม่มีขอบริบบิ้นที่สวยงามและเรียบ โปรดทราบว่าเราใช้กริด Cu สองแบบในรูปที่ 1a สำหรับ MWCNT และ GONR ที่มีความยาวเพียงพอ จะใช้กริด Gu ที่มีรูปแบบลาซีย์ที่เสถียรด้วยคาร์บอน (หมายเลขผลิตภัณฑ์ 01881-F, Ted Pella, Inc. สหรัฐอเมริกา) รูเปิดในฟิล์มคาร์บอนลาเซย์ป้องกันภาพการส่งผ่านที่ทับซ้อนกันระหว่างนาโนคาร์บอนและฟิล์มคาร์บอน โครงข่ายสีเทาเข้มเป็นของฟิล์มคาร์บอนเลซีย์ อย่างไรก็ตาม ตาราง Gu ที่มี formvar ที่เสถียรด้วยคาร์บอน (หมายเลขผลิตภัณฑ์ 01800-F, Ted Pella, Inc., USA) จำเป็นสำหรับ MWCNT แบบสั้นและ GONR แบบสั้น เนื่องจากรูขนาดใหญ่ในฟิล์มคาร์บอนลาเซย์ทำให้เกิดปัญหาในการจับ MWCNT แบบสั้นและ GONR แบบสั้นได้อย่างมีประสิทธิภาพ ดังที่แสดงในรูปที่ 1 คอนทราสต์สีเทาอ่อนใต้ MWCNT แบบสั้นและ GONR แบบสั้นเป็นชั้นคาร์บอนที่บางเบา ชั้นคาร์บอนนี้ทำให้ฟิล์ม formvar เสถียรกับลำแสงอิเล็กตรอนผ่านคุณสมบัติการนำความร้อนและไฟฟ้า

2.2. การกำหนดค่าพันธะของ MWCNTs และ GONRs

สเปกตรัมรามันของนาโนคาร์บอนทั้งสี่ถูกนำเสนอในรูปที่ 1b; วง D ของ GONR นั้นสูงกว่าของ MWCNT หลังจากกระบวนการคลายซิป สาเหตุนี้มีสาเหตุมาจากระดับออกซิเดชันที่สูงขึ้นและโครงสร้างขอบของ GONR จำนวนมากขึ้นเมื่อเทียบกับ MWCNT ปรากฏการณ์นี้ยังคล้ายกับที่เราสังเกตเห็นใน 2011.12 เนื่องจากระดับกราฟต์สูง แถบ G ของ MWCNT จึงมีตัวเลขเต็มความกว้างครึ่งสูงสุดต่ำสุดที่ต่ำที่สุด อัตราส่วน ID/IG ของนาโนคาร์บอนสี่ตัวคือ {{10}}}.076, 0.502, 0.483 และ 0.700 ตามลำดับ โดยสังเขป ความยาวที่ลดลงและการเกิดออกซิเดชันที่พื้นผิวเพิ่มระดับข้อบกพร่องและทำให้อัตราส่วน ID/IG สูงขึ้น พีค D′ มีอยู่ในกราฟีนที่บกพร่องทั้งหมด และถูกมองว่าเป็นตัววัดคุณภาพ 35 ดังที่แสดงในรูปที่ 1b พีค D′ ในสเปกตรัมทั้งสี่จะมีความโดดเด่นมากขึ้นหลังจากกระบวนการตัดหรือคลายซิป ซึ่งบ่งชี้ว่าพวกมันเป็นอันตราย กระบวนการที่ทำให้เกิดข้อบกพร่องมากมาย รูปที่ 1c, d แสดงเอ็กซ์เรย์โฟโตอิเล็กตรอนสเปกโตรสโคปีสเปกตรัมของนาโนคาร์บอนทั้งสี่ เห็นได้ชัดว่า D′ peak นั้นชัดเจนที่สุดสำหรับ GONR ระยะสั้น ดังแสดงในรูปที่ 1c ระดับ O เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญจาก 7.6 เปอร์เซ็นต์ (MWCNT) เป็น 19.9 เปอร์เซ็นต์ (GONRs) เนื่องจากความสามารถในการออกซิเดชันที่แรงของ KMnO4 ในสภาพแวดล้อมที่เป็นกรด ในทางกลับกัน ระดับ O เพิ่มขึ้นเล็กน้อย 0.8 เปอร์เซ็นต์จาก MWCNT เป็น MWCNT แบบสั้น ที่สำคัญ ระดับ O สูงสุดคือ 38.3 เปอร์เซ็นต์สำหรับ GONR แบบสั้น ซึ่งหมายความว่าปลายนาโนริบบอนจะติดกลุ่มฟังก์ชันออกซิเจนได้ง่ายกว่าพื้นผิวระนาบ sp2 จำนวนเต็มความกว้าง-ครึ่งสูงสุดที่ใหญ่กว่าและการเปลี่ยนเป็นพลังงานการจับสูงของยอด C 1s หลังจากกระบวนการคลายซิปของทั้ง MWCNT และ MWCNT แบบสั้นจะแสดงไว้ในรูปที่ 1d สำหรับกราฟีนออกไซด์ พีคที่แยกส่วนในด้านพลังงานการยึดเกาะสูงสามารถกำหนดให้กับพันธะ C−C(CC), C−O, CO และ COOH ได้36 เรากำหนดลักษณะ GONR (200 W) ในปี 2013 ,37 และผลการศึกษามีความคล้ายคลึงกับผลการศึกษาครั้งนี้ การศึกษานี้สรุปปรากฏการณ์ของสเปกตรัมรามัน ซึ่งหมายความว่ามีการสร้างกลุ่มฟังก์ชันที่ประกอบด้วยออกซิเจนมากขึ้นในระหว่างการเปลี่ยนรูประหว่างท่อเป็นริบบิ้น (รูปที่ 2)

2.3. คุณสมบัติต้านออกซิเดชันของ MWCNTs และ GONRs

2.3.1. การหาค่า 1,1-Diphenyl-2-picrylhy-drazyl Free Radical Scavenging Activity Assays

1,1- Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) กิจกรรมการขับอนุมูลอิสระเป็นแพลตฟอร์มสารต้านอนุมูลอิสระที่ใช้ในการตรวจหาความสามารถในการต้านออกซิเดชัน ผลลัพธ์สำหรับนาโนคาร์บอนทั้งสี่ตัวได้อธิบายไว้ในตารางที่ 2 ในการทดสอบ DPPH วิตามินซีที่ความเข้มข้น 100 μM ถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวก เพื่อทดสอบฤทธิ์ต้านออกซิเดชันของ MWCNT, MWCNT แบบสั้น, GONR และ GONR แบบสั้น ขนาดยา 1, 5 และ 10 มก./ลิตร ถูกบ่มในสารละลายปฏิกิริยาเพื่อวัดคุณสมบัติ MWCNTs, MWCNT แบบสั้น, GONR และ GONR แบบสั้นมีความสามารถในการยับยั้งปานกลางที่ 10 มก./ลิตร (19.2 ± 0.3, 12.1 ± 0.3, 26.8 ± 0.3 และ 30.0 ± 0.4 เปอร์เซ็นต์ ) ในขณะที่วิตามินซีมีสภาวะใกล้เคียงกันที่ 100 ไมโครโมลาร์ (93.4 ± 0.1 เปอร์เซ็นต์) สำหรับการปราบปราม

2.3.2. การทดสอบกิจกรรมคีเลตไอออน.

ภายในสถานการณ์ความเครียดออกซิเดชัน เฟอร์โรซีนสามารถพัฒนาสารเชิงซ้อนด้วย Fe2 plus เพื่อวัดในเชิงปริมาณ เมื่อมีสารไกล่เกลี่ยคีเลต สารเชิงซ้อนจะแตก ทำให้ไอออนของเหล็กลดลงจากสีแดงเข้มของสารเชิงซ้อน Fe2 plus เราใช้ EDTA เป็นตัวควบคุมเชิงบวก ตารางที่ 2 แสดงว่า MWCNT, MWCNT แบบสั้น, GONR และ GONR แบบสั้นมีกิจกรรมคีเลตที่ 10 มก./ลิตร (29.2 ± {{10}}.8, 28.7 ± 0 .7, 69.7 ± 0.6 และ 68.9 ± 0.3 เปอร์เซ็นต์ ) ในขณะที่กลุ่มควบคุมเชิงบวกมีสภาวะที่คล้ายกันที่ 100 ไมโครโมลาร์ (93.4 ± 0.1 เปอร์เซ็นต์)

2.3.3. การวัดกำลังของสารต้านอนุมูลอิสระลดเฟอริก

การทดสอบศักย์รีดิวซ์เฟอริกเป็นการทดสอบที่ง่ายและเชื่อถือได้ซึ่งใช้ในการหาปริมาณการสังเคราะห์เชิงซ้อนของ Fe(III)−ferricyanide ในการทดสอบนี้ กำลังรีดิวซ์ของนาโนคาร์บอนสี่ตัวที่ผลิตสารเชิงซ้อน Fe(III)−TPTZ ที่เป็นเหล็กถูกตรวจพบโดยการเปลี่ยนแปลงสีของสารละลายจากสีเหลืองเป็นสีเขียวและสีน้ำเงิน ตารางที่ 2 แสดงให้เห็นว่ากำลังรีดิวซ์ของ MWCNT, MWCNT แบบสั้น, GONR และ GONR แบบสั้นคือความหนาแน่นของแสง (OD) 1.11, 1.13, 1.15 และ 1.11 ที่ 10 มก./ลิตร

2.3.4. MWCNTs และ GONRs ยับยั้งการสะสม ROS ภายในเซลล์

รายงานหลายฉบับแสดงให้เห็นว่า ROS ทำลายความสมบูรณ์ของโครงสร้างของเยื่อหุ้มเซลล์ รวมทั้งเยื่อหุ้มเซลล์และเยื่อหุ้มเซลล์นิวเคลียร์เพื่อนำไปสู่ความเสียหายของเซลล์และการสูญเสียการทำงานตามปกติ38-40 นอกจากนี้ ROS ยังเป็นหนึ่งในปัจจัยสำคัญในการกระตุ้นการสร้างไทโรซิเนส เมลานินและการยับยั้งการผลิต ROS เป็นกลยุทธ์ที่ดีในการลดระดับการสังเคราะห์เมลานิน ในการศึกษานี้ เราใช้การทดสอบการย้อมสี 2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFDA) เพื่อวิเคราะห์ระดับความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันภายในเซลล์ในเซลล์บำบัด MWCNT และ GONR Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) กระตุ้นการกระตุ้นออกซิเดชันในกลุ่ม MWCNT และ GONR และถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ41 เมื่อความเข้มข้นของ PMA เท่ากับ 20 ng/mL จะทำให้เกิดความเครียดออกซิเดชัน เพิ่มขึ้น มูลค่าถึง 38 เปอร์เซ็นต์ ; หลังจากรักษา GONRs และ MWCNTs ระดับของ ROS ถูกลดระดับลงสู่ระดับปกติ ข้อมูลแสดงให้เห็นว่าวัสดุทั้งสองยับยั้งระดับความเครียดออกซิเดชัน และฤทธิ์ต้านออกซิเดชันของ GONR สูงกว่าของ MWCNT (รูปที่ 3) ตารางที่ 1 แสดงรายการผลที่คล้ายคลึงกัน เราโต้แย้งว่ามีเหตุผลสามประการสำหรับการค้นพบใหม่ของเรา: อันดับแรก ลำดับการละลายของวัสดุเหล่านี้มีดังนี้: GONR สั้น > GONR > MWCNT สั้น > MWCNT หมายความว่าพื้นที่สัมผัสของ GONR สั้นนั้นใหญ่ที่สุด ดังนั้น เหนือกว่าสำหรับ ROS scavenging ประการที่สอง GONR และ MWCNT เป็น sp2-โครงสร้างคาร์บอนที่สามารถทำลายไฟฟ้า ROS ผ่านการก่อตัวแอดดักต์หรือการถ่ายโอนอิเล็กตรอน42 เราพบว่าผลกระทบของสารต้านอนุมูลอิสระของโครงสร้างนาโนริบบอนดีกว่าโครงสร้างของท่อนาโน ดังนั้นนาโนริบบอนจึงสร้างมันขึ้นมา ถ่ายโอนอิเล็กตรอนได้ง่ายกว่าท่อนาโน สุดท้าย ในรูปที่ 1b เราสังเกตว่าไซต์คาร์บอน GONR sp2-มีหมู่ฟังก์ชันออกซิเจนมากกว่า MWCNT กลุ่มกรดคาร์บอกซิลิกสามารถคีเลตไอออนของโลหะ และหมู่ไฮดรอกซิลอาจเป็นตัวให้ H เพื่อไล่ ROS และ ยับยั้งการผลิตเมลานิน

2.4. ความเป็นพิษต่อเซลล์ของ MWCNTs และ GONRs ที่บำบัดในเซลล์ไฟโบรบลาสต์ที่ผิวหนังของมนุษย์

วิธี {{0}}(4,5-Dimethylth-iazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) ถูกนำมาใช้เพื่อประเมิน คุณสมบัติที่เป็นพิษต่อเซลล์ของ GONR บนเซลล์ Hs68 (รูปที่ 3) และเซลล์ถูกเพาะเลี้ยงที่ขนาดยาที่ต่างกันที่ 1, 5 และ 10 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร เราตรวจสอบว่าเซลล์มีชีวิตของ MWCNT เท่ากับ 100.7 ± 3.7, 99.8 ± 4.9 และ 94.1 ± 4.7 เปอร์เซ็นต์ที่ความเข้มข้น 1, 5 และ 10 มก./ลิตร ตามลำดับ ความมีชีวิตสำหรับ MWCNT แบบสั้นคำนวณในลำดับเดียวกันและพบว่าเป็น 93.9 ± 2.2, 86.4 ± 3.0 และ 98.9 ± 2.1 เปอร์เซ็นต์ เราสังเกตว่าเซลล์ B16−F10 ถูกฟักตัวด้วยความเข้มข้นสูง และความอยู่รอดของเซลล์ Hs68 มากกว่า 80 เปอร์เซ็นต์ บ่งชี้ว่า MWCNT และ MWCNT แบบสั้นไม่มีผลที่เป็นพิษต่อเซลล์ไฟโบรบลาสต์ที่ผิวหนังของมนุษย์ ความอยู่รอดของเซลล์ของ GONR และ GONR แบบสั้นคือ 86.24 ± 2.1, 90.87 ± 3.5, 88.58 ± 2.5, 89.03 ± 3.6, 90.71 ± 2.8 และ 90.64 ± 2.5 เปอร์เซ็นต์ นอกจากนี้ยังชี้ให้เห็นในรูปที่ 4a ว่า GONR และ GONR แบบสั้นไม่มีผลต่อเซลล์ HS68 ที่มองเห็นได้ชัดเจน ในรายงานก่อนหน้านี้ การใช้วัสดุนาโนที่ยังไม่ทดลองเพื่อวัตถุประสงค์ด้านเครื่องสำอางถือเป็นเรื่องที่น่าสงสัย 43,44 และมักเกิดจากการโจมตีของดีเอ็นเอหลังจากที่อนุภาคนาโนเข้าสู่เซลล์ หลังจากการทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์ เราพบว่าวัสดุของเราไม่ก่อให้เกิดความเป็นพิษต่อเซลล์ผิวหนังปกติ เราสรุปได้ว่าหลังจากวัสดุนาโนเข้าสู่เซลล์ วัสดุนาโนเพียงแค่ยับยั้งการผลิตเมลานินโดยการลดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและไอออนของโลหะที่เป็นคีเลต และไม่ทำลายไมโตคอนเดรียหรือดีเอ็นเอ ซึ่งหมายความว่า MWCNT และ GONRs ปลอดภัยที่จะใช้

2.5. MWCNTs และ GONRs สองประเภทในกิจกรรม B16−F10 Cellular Tyrosinase และเนื้อหาเมลานิน

ในเส้นทางการสังเคราะห์เมลานิน ไทโรซิเนสมีบทบาทสำคัญ ไทโรซิเนสออกซิไดซ์และสร้างยูเมลานินและฟีโอเมลานินผ่านปฏิกิริยาทางชีวเคมีหลายชุด เพื่อตรวจสอบว่า GONRs และ MWCNTs ยับยั้งการทำงานของไทโรซิเนสและทำให้การผลิตเมลานินลดลงหรือไม่ เราได้วิเคราะห์กิจกรรมของไทโรซิเนสในเซลล์ B16−F10 เราพบว่า MWCNT และ MWCNT แบบสั้นยับยั้งการทำงานของไทโรซิเนสได้ประมาณ 17.1 เปอร์เซ็นต์ และ 23 เปอร์เซ็นต์ ที่ 10 มก./ลิตร GONR และ GONR แบบสั้นมีผลดีกว่าในการยับยั้งการทำงานของไทโรซิเนสที่ความเข้มข้นเท่ากันเมื่อเทียบกับ GONR อื่น พวกมันยังอยู่ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยาและยับยั้ง 49.8 เปอร์เซ็นต์และ 44.7 เปอร์เซ็นต์ของแอคติวิตีของไทโรซิเนสดังที่แสดงไว้ในรูปที่ 4b

เมลานินเป็นเม็ดสีที่ขาดไม่ได้ในร่างกายมนุษย์ แต่การแสดงออกของเมลานินที่มากเกินไปมักจะทำให้เกิดโรคต่างๆ ในการศึกษาก่อนหน้านี้ Xiao et al. ใช้วัสดุที่คล้ายคลึงกันคือ Radical Sponge ซึ่งเป็นอนุภาคนาโนฟูลเลอรีน เป็นสารต้านเมลานิน45 มีผลดีบางประการ สามารถยับยั้งการผลิตเมลานินได้ประมาณ 20 เปอร์เซ็นต์ เพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพ เราได้ปรับปรุงวัสดุทดสอบเพิ่มเติมเพื่อวัดอัตราการยับยั้งเมลานินและกลไกระดับโมเลกุล ดังแสดงในรูปที่ 4c และ 5 MWCNT และ MWCNT แบบสั้นลดปริมาณเมลานิน 17.6 ± 5.5 และ 13.2 ± {{ 16}}.2 เปอร์เซ็นต์ ที่ 10 มก./ลิตร และในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา GONR และ GONR แบบสั้นปรับลดค่าลงอย่างมากเป็น 32.0 ± 2.3 และ 35.3 ± 3.4 เปอร์เซ็นต์ที่ 10 มก./ลิตร ผลการทดลองชี้ให้เห็นว่าทั้งสี่ประเภทสามารถยับยั้งการสังเคราะห์เมลานินและ GONRs มีผลมากขึ้น ในทางกลับกัน เรายังสังเกตเห็นว่า GONR แบบสั้นมีผลดีกว่าในการยับยั้งการผลิตเมลานิน เราสรุปได้ว่า GONR แบบสั้นมีกลุ่มการทำงานมากกว่า และสามารถป้องกันไทโรซิเนสที่เร่งปฏิกิริยาด้วยไอออนของโลหะได้อย่างมีประสิทธิภาพ ซึ่งยับยั้งการผลิตเมลานินต่อไป (รูปที่ 2) ในตารางที่ 1 เราสังเกตว่าความพยายามของประเภทโลหะ ion-chelating short นั้นสูงกว่าชนิดปกติ ซึ่งหมายความว่า GONRs สั้น ๆ เหล่านี้สามารถนำไปใช้ในด้านเครื่องสำอางในฐานะตัวแทนการดูแลผิวได้

2.6. กลไกของ MWCNTs และ GONRs ยับยั้งเนื้อหาเซลลูลาร์เมลานิน B16−F10

เซลล์ตอบสนองต่อความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันภายนอกโดยควบคุมการแสดงออกของโปรตีน เซลล์ B16−F10 ปรับปรุงการแสดงออกของยีน c-myc และ AMPK ที่ได้รับการควบคุมเพื่อลดระดับออกซิเดชัน46 และในงานนี้ MITF เป็นปัจจัยการถอดรหัสเฉพาะของไทโรซิเนสเพื่อควบคุมเส้นทางสัญญาณการสังเคราะห์เมลานินระดับโมเลกุล47−49 ในรูป 5a, MWCNTs และ GONRs ปรับลดปัจจัยการถอดรหัสที่เกี่ยวข้องกับไมโครพทาลเมียโดยการลดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน จากนั้น TRP ของยีนปลายทาง-1 และ TRP-2 ก็ถูกปรับลดเช่นกัน สำหรับระดับโปรตีน พบปรากฏการณ์ที่คล้ายคลึงกัน โดยที่ MWCNTs และ GONRs ปรับลดวิถีการสร้างเมลาโนเจเนซิสที่เกี่ยวข้องกับ MITF ลง และจากนั้นก็ลดปริมาณเมลานินในที่สุด (รูปที่ 5b)

3. วัสดุและวิธีการทดลอง

3.1. การเตรียม MWCNTs และ GONRs

กระบวนการที่เกี่ยวข้องสำหรับการทำ GONRs ได้รับการรายงานในเอกสารฉบับที่แล้ว 12 MWCNT (0.05 g) ถูกระงับใน 9:1 H2SO4/H3PO4 และบำบัดด้วยเครื่องปฏิกรณ์ไมโครเวฟ (CEM-Discover) โดยตั้งกำลังไฟไว้ที่ 250 W เป็นเวลา 2 นาที หลังจากเติม KMnO4(0.25 ก.) ลงในสารละลาย สารละลายจะได้รับการบำบัดด้วยกำลังไมโครเวฟเดียวกันที่ 65 องศาเป็นเวลา 4 นาที12 จากนั้นเราจึงแก้ไขกระบวนการนี้โดยใช้ไมโครเวฟระยะที่สองที่สั้นลง 8 นาที โดยใช้เครื่องอัดอากาศ ที่นี่ใช้เครื่องอัดอากาศเพื่อควบคุมอุณหภูมิของเครื่องปฏิกรณ์ไมโครเวฟในระหว่างกระบวนการ กำลังไมโครเวฟตั้งไว้ที่ 250 W ในการทดสอบเบื้องต้น

3.2. การเตรียม MWCNT แบบสั้น และ GONR แบบสั้น

มีการรายงานกระบวนการที่เกี่ยวข้องสำหรับการทำ GONR แบบสั้นในเอกสารฉบับก่อนของเรา34 เลือกเวลาการบำบัดที่เป็นกรดเป็น 8 ชั่วโมง กำลังไมโครเวฟตั้งไว้ที่ 250 W ซึ่งเท่ากับพลังงานที่ได้รับ GONR

3.3. กิจกรรมกวาดล้าง DPPH Radical

DPPH มักถูกใช้เพื่อตัดสินความสามารถในการกำจัดของตัวอย่างและคุณสมบัติในการต้านอนุมูลอิสระ50 DPPH คือรีเอเจนต์สีม่วงที่เปลี่ยนสีจากสีม่วงเป็นสีเหลืองหากอนุมูลอิสระถูกถ่ายโอนไปยังสารที่วิเคราะห์ ตัวอย่างสารต้านออกซิเดชันที่เป็นบวกที่มีความเข้มข้นที่เหมาะสมถูกเติมลงในสารละลาย และตัวอย่างถูกวิเคราะห์ที่ 517 นาโนเมตร เป็นเวลา 30 นาที เราใช้เปอร์เซ็นต์ของ DPPH ที่เหลือนอกเหนือจากตัวอย่างทดสอบเพื่อวัดปริมาณสารต้านอนุมูลอิสระที่จำเป็นในการลดอนุมูล DPPH ก่อนหน้า วิตามินซีที่ 100 ไมโครโมลาร์ถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวก กิจกรรมการกำจัด ( เปอร์เซ็นต์ ) ถูกวัดเป็น

ความจุในการกำจัด ( เปอร์เซ็นต์ )=(ตัวอย่าง − Ablank) / (Acontrol − Ablank) × 100 เปอร์เซ็นต์ (1)

3.4. กิจกรรมการหลอมโลหะ.

ไอออนของโลหะเป็นปัจจัยที่ทำให้ไขมันเกิดออกซิเดชันมากเกินไป และ Fe2 plus เป็นหนึ่งในไอออนที่มีอิทธิพลมากที่สุด50 โหลดความเข้มข้นต่างๆ ของวัสดุนาโน (1 ไมโครลิตร) ลงในเพลต96-หลุมซึ่งมี FeCl2·4H2O 2 มิลลิโมลาร์ (10 ไมโครลิตร) แล้วบรรจุลงในเฟอร์โรซีน (5 มิลลิโมลาร์, 20 ไมโครลิตร) ส่วนผสมที่เพิ่มถูกผสมอย่างเต็มที่ด้วยเมนทอล 69 ไมโครลิตร และเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาที จากนั้น สารละลายของปฏิกิริยาตัวอย่างถูกสังเกตพบที่ 562 นาโนเมตร EDTA ถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวกที่ 100 μM และสูตรการคำนวณกิจกรรมคีเลตของโลหะมีพื้นฐานอยู่บน eq 1

3.5. ลดแรง.

การคำนวณกำลังรีดิวซ์อิงจากการศึกษาก่อนหน้านี้50 ขั้นแรก ให้ผสมวัสดุกราฟีน 2.5 ไมโครลิตรกับบัฟเฟอร์ PBS (67 มิลลิโมลาร์, pH 6.8) และ K3Fe(CN)6 (2.5 ไมโครลิตร, 20 เปอร์เซ็นต์) แล้วจึงฟักที่ 50 องศา เป็นเวลา 20 นาที จากนั้น กรดไตรคลอโรอะซิติก 10 เปอร์เซ็นต์ (160 ไมโครลิตร) ถูกผสมกับรีเอเจนต์ที่ 300 กรัมปั่นเหวี่ยงเป็นเวลา 20 นาที ความยาวการดูดซึมถูกกำหนดหาที่ 700 นาโนเมตรหลังจากถูกผสมกับ FeCl3 25 ไมโครลิตร (2 เปอร์เซ็นต์) บิวทิเลตไฮดรอกซีอะนิโซล (BHA) ถูกใช้ที่ 100 ไมโครโมลาร์

3.6. การตรวจการเพิ่มจำนวนเซลล์

สายเซลล์ไฟโบรบลาสต์ที่ผิวหนังของมนุษย์ HS68 ถูกใช้เพื่อวิเคราะห์อัตราส่วนของการเพิ่มจำนวนเซลล์ HS68 ถูกฟักไข่ในตัวกลาง Eagle (DMEM) ที่ดัดแปลงของ Dulbecco ที่มีซีรัมของวัวในครรภ์ 10 เปอร์เซ็นต์และเพนิซิลลิน 1 เปอร์เซ็นต์และสเตรปโตมัยซินผสมกัน 50,51 หลังจากได้รับการบำบัดด้วยตัวอย่างที่มีความเข้มข้นต่างกัน เราใช้ MTT เพื่อตรวจหาอัตราส่วนการเพิ่มจำนวนเซลล์ 8000 เซลล์ถูกเพาะในเพลต 96-หลุมและบำบัดด้วยตัวอย่างเป็นเวลา 24 ชั่วโมง สารละลายเหนือตะกอนถูกเอาออก และเราใช้สารละลาย MTT ในการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ 37 องศา หลังจากการฟักไข่ เราเอาตัวกลางที่ประกอบด้วย MTT ออกและละลายมันด้วยไดเมทิลซัลฟอกไซด์ (DMSO) อ่านสารละลายที่ OD 590 nm และอัตราที่คำนวณโดย eq 1

3.7. การประเมินเนื้อหาเซลลูลาร์เมลานิน

เราใช้วิธีการที่มีการดัดแปลงเล็กน้อยตามการทดสอบก่อนหน้า 52,53 เม็ดเซลล์ของ B16−F10 จากศูนย์รวบรวมและวิจัยทรัพยากรชีวภาพ (BCRC, CRL 6323, Hsinchu, ไต้หวัน) ถูกละลายในส่วนผสมของ 2.0 ไม่มี NaOH และ DMSO 10 เปอร์เซ็นต์ ต่อมา ตัวอย่างถูกให้ความร้อนเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 90 องศาและหมุนเหวี่ยงที่ 10,000g อีก 10 นาทีเพื่อให้ได้ส่วนลอยเหนือตะกอนที่ชี้แจง จำนวนเมลานินถูกกำหนดโดยการเฝ้าติดตาม OD ของส่วนลอยเหนือตะกอนที่ 475 นาโนเมตร

3.8. B16−F10 กิจกรรมของเซลล์ไทโรซิเนส

สำหรับกิจกรรมของไทโรซิเนสของเซลล์ B16−F10 เราอ้างอิงถึงงานก่อนหน้าด้วยการดัดแปลงบางอย่าง50 เซลล์ถูกเพาะเลี้ยงในเพลต12-หลุมที่ 105 เซลล์แต่ละหลุม หลังการบำบัดด้วยตัวอย่าง เซลล์ถูกสลายใน 1 เปอร์เซ็นต์ Triton X-100/PBS และ 2 มิลลิโมลาร์ L-ไทโรซีน (50 ไมโครลิตร) เป็นเวลา 3 ชั่วโมง หลังจากการฟักไข่ เรานำสื่อออกและอ่านค่าการดูดกลืนแสงที่ OD 590 นาโนเมตร สูตรการออกฤทธิ์ของไทโรซิเนสคำนวณโดยสมการที่ 1

Cistanche เป็นตัวยับยั้งไทโรซิเนส

3.9. การตรวจจับ ROS โดยการย้อมสี DCFDA

อ้างอิงถึงการศึกษาก่อนหน้านี้,54 1.2 1.105 B16−F10 เซลล์ถูกเพาะในเพลต6-หลุมและบำบัดด้วยความเข้มข้นต่างๆ ของตัวอย่าง เซลล์ถูกแขวนลอยใน PBS และจากนั้นโหลดด้วย DCFDA (5 ไมโครโมลาร์) ใน DMEM สีแดงที่ไม่ใช่ฟีนอลเป็นเวลา 30 นาทีที่ 37 องศา โฟลว์ไซโตมิเตอร์ (ฝรั่ง, เมอร์ค, เยอรมนี) ถูกใช้เพื่อตรวจจับสัญญาณเรืองแสงของ DCFDA ความยาวคลื่นกระตุ้นและการปลดปล่อยของ DCFDA คือ 488 และ 535 นาโนเมตรตามลำดับ

3.10. ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์ตามเวลาจริงเชิงปริมาณ

เราปฏิบัติตามวิธีการของ Lin et al. (2018).1 ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสเชิงปริมาณแบบเรียลไทม์แบบเรียลไทม์ (qRT-PCR) ประกอบด้วยโพรบไพรเมอร์พิเศษเฉพาะเพื่อสร้างการเรืองแสง ใช้เทคนิคการตรวจจับเรืองแสงที่ตรวจจับแต่ละรอบโดยใช้ระบบ 7500 qRT-PCR (Applied Biosystems, USA) โดยตรวจพบวัฏจักรตามปริมาณการเรืองแสงที่ปล่อยออกมา จากนั้นจึงคำนวณผลิตภัณฑ์ของแต่ละรอบสำหรับเนื้อหาที่สร้างขึ้น ซึ่งส่งผลให้บรรลุวัตถุประสงค์เชิงปริมาณแบบเรียลไทม์ Trizol (Invitrogen, USA) ใช้เพื่อสกัด RNA ที่สมบูรณ์ของเนื้อเยื่อปอดตามทิศทางที่กำหนดโดยผู้ผลิต ต่อจากนั้นก็ใช้ชุดการถอดความแบบย้อนกลับ (Takara, Japan) เพื่อสร้าง DNA ใน qRT-PCR โดยใช้ไพรเมอร์ ที่แสดงรายการไว้ในตารางที่ 1 อันดับแรก ตัวอย่างถูกให้ความร้อนเพื่อสร้าง DNA สายเดี่ยว จากนั้นจึงทำการจับไพรเมอร์เพื่อสร้าง DNA แบบสองสาย (dsDNA) หลังจากนั้นจึงรวม SYBR Green dsDNA ซึ่งใช้ชุดรีเอเจนต์สีเขียว SYBR (โรช บาเซิล สวิส) ซึ่งส่งผลให้เกิดการเรืองแสง ผลลัพธ์ถูกส่งผ่านระบบตรวจจับเรืองแสง การตรวจจับสัญญาณเรืองแสงเกิดขึ้นระหว่างระยะการยืดหรือหลอมของแต่ละรอบ หลังจากการตรวจพบ เนื้อหาของตัวอย่างถูกผลักกลับโดยความเข้มของการเรืองแสงที่ตรวจพบ 55 ระดับการแสดงออกของยีนเป้าหมายถูกทำให้เป็นมาตรฐานในระดับ -tubulin โดยใช้วิธี2−ΔΔCt

myricetin

3.11. การทดสอบ Western Blot

เซลล์ B16−F10 ถูก lysed ที่ 4 องศาในชั่วข้ามคืนด้วยบัฟเฟอร์การทดสอบ radioimmunoprecipitation assay (Thermo Scientific Co., USA) ซึ่งมีสารยับยั้งโปรตีเอส ชุดทดสอบโปรตีนกรด bicinchoninic (BCA, Sigma-Aldrich Corp., USA) ถูกใช้เพื่อหาปริมาณโปรตีน แยกโปรตีนจากตัวอย่างบนเจลโซเดียม โดเดซิล ซัลเฟต-โพลีอะคริลาไมด์ 10 เปอร์เซ็นต์ และถ่ายโอนไปยังเมมเบรนโพลีไวนิลลิดีนไดฟลูออไรด์ (PVDF) (PALL Life Science, Ann Arbor, MI, USA) เมมเบรน PVDF ถูกบล็อกด้วยบัฟเฟอร์การบล็อก (Thermo Scientific) เป็นเวลา 1 ชั่วโมง และบ่มด้วยแอนติบอดีปฐมภูมิจำเพาะในชั่วข้ามคืนที่ 4 องศา ถัดไป ล้างเมมเบรนด้วยน้ำเกลือ Tris buffered - Tween 20 buffer สองครั้งและบ่มด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิเป็นเวลา 1.5 ชั่วโมง หลังจากนั้น เมมเบรนถูกจุ่มลงในรีเอเจนต์การตรวจจับเคมี (Thermo Scientific) และวิเคราะห์โดยเครื่องสร้างภาพเคมีแบบเคมีลูมิเนสเซนซ์ (MiniChemi Chemiluminescence imager) (Beijing Sage Creation Science, China) แหล่งที่มาของแอนติบอดีรวมถึงแอนติ-MITF ของกระต่าย, แอนติ-TRP ของกระต่าย-1, แอนติ-TRP ของกระต่าย-2ของกระต่าย และ -แอคติน (Thermo Scientific)

3.12. การวิเคราะห์วัสดุ

TEM (JEOL JEM-1230, 100 kV) ถูกใช้เพื่อสังเกตสัณฐานวิทยาของนาโนคาร์บอน ไมโครรามันสเปกโตรมิเตอร์ (PTT, RAMaker) ถูกนำมาใช้เพื่อตรวจสอบโหมดเรโซแนนซ์ของนาโนคาร์บอน เอ็กซ์เรย์โฟโตอิเล็กตรอนสเปกโทรสโกปี (XPS, Kratos Axis Ultra DLD) ยังได้ดำเนินการเพื่อกำหนดการวิเคราะห์องค์ประกอบ12,34

3.13. การวิเคราะห์ทางสถิติ.

ตัวอย่างและการทดลองมาตรฐานทั้งหมดถูกทำซ้ำอย่างน้อยสามครั้ง เราใช้การทดสอบ t ของนักเรียนเพื่อเปรียบเทียบและแสดงค่าเฉลี่ยของค่าเฉลี่ย ± ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานทางสถิติ

4. บทสรุป

โดยสรุปแล้ว เราสังเกตว่า GONR แบบสั้นเป็นวัสดุที่มีศักยภาพสำหรับผลิตภัณฑ์ดูแลผิว เนื่องจากมีคุณสมบัติทางชีวภาพหลายอย่าง (รูปที่ 6) ผลการวิจัยพบว่านาโนคาร์บอนมีบทบาทเป็นสารต้านอนุมูลอิสระนอกเซลล์และภายในเซลล์ ในขณะเดียวกัน นาโนคาร์บอนยับยั้งการทำงานของไทโรซิเนสและปริมาณเมลานิน และไม่ก่อให้เกิดการบาดเจ็บร้ายแรงต่อเซลล์เม็ดสี งานนี้สร้างฟังก์ชันต่อต้านการสร้างเม็ดสีของนาโนคาร์บอนสี่ประเภท การศึกษาในอนาคตจะได้รับการตรวจสอบกลไกของสารประกอบเหล่านี้เกี่ยวกับการแสดงออกของยีนและโปรตีนจำเพาะที่เกี่ยวข้องกับการเจริญเติบโตของเมลานิน การขนส่ง และการสะสม

Cistanche ช่วยเพิ่มความขาว

กรุณาคลิกที่ภาพและรับรายละเอียดเพิ่มเติม