ผลการต่อต้านการแพร่กระจายของ Cistanches Salsa ต่อความก้าวหน้าของ Prostatic Hyperplasia อ่อนโยน

ผลของ CSE ต่อการอักเสบในหนูที่เกิดจากเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาล

กิจกรรมของไนตริกออกไซด์และ COX อาจมีบทบาทสำคัญในการพิจารณาความสัมพันธ์ระหว่างการอักเสบและการเจริญเติบโตของต่อมลูกหมาก (Sciarra et al.2008) ในเซลล์ที่มีการอักเสบของต่อมลูกหมาก iNOS เป็นปัจจัยหลักที่กระตุ้นไนโตรเจนชนิดปฏิกิริยาที่สามารถทำลายเซลล์ได้ ไนตริกออกไซด์ยังช่วยเพิ่มกิจกรรม COX ซึ่งเป็นปัจจัยที่สอง ตรวจพบกิจกรรม COX-2 ในเซลล์ที่มีการอักเสบทั้งหมดในเยื่อบุผิวและช่องว่างคั่นระหว่างหน้าของเนื้อเยื่อต่อมลูกหมากของมนุษย์ และจะเพิ่มขึ้นในแผลอักเสบที่ลุกลาม ทำให้เกิด prostaglandins ที่ทำให้เกิดการอักเสบ เพื่อตรวจสอบผลของ CSE ต่อการอักเสบ เราได้ตรวจสอบการแสดงออกของโปรตีนของ iNOS และ COX-2 ในเนื้อเยื่อต่อมลูกหมากของหนูที่เกิดจากเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาล ดังที่แสดงในรูปที่ 4 การวิเคราะห์ western blot เปิดเผยการเพิ่มขึ้นของการแสดงออกของโปรตีน iNOS และ COX-2 ในกลุ่มที่เหนี่ยวนำโดย BPH เมื่อเทียบกับระดับของพวกมันในกลุ่มควบคุม อย่างไรก็ตาม เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มที่เหนี่ยวนำโดย BPH กลุ่มที่ได้รับ finasteride และ CSE แสดงการแสดงออกของโปรตีน iNOS และ COX-2 ที่ลดลง ซึ่งบ่งชี้ถึงผลต้านการอักเสบในเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาล

รูปที่ 3ผลของการให้สารสกัด Cistanche salsa (CSE) ต่อการเพิ่มจำนวนเซลล์ต่อมลูกหมาก การย้อมสีฮีมาทอกซิลินและอีโอซินของเนื้อเยื่อต่อมลูกหมากจากแบบจำลองหนูหนูที่เหนี่ยวนำให้เกิดต่อมลูกหมากโต (BPH) ที่ไม่เป็นพิษเป็นภัย (A) ความหนาของเนื้อเยื่อเยื่อบุผิวจากต่อมลูกหมาก (TETP) (B); กำลังขยายดั้งเดิม 40x (แถบมาตราส่วน∶200 μm) และ 400x (แถบมาตราส่วน∶20μm) ตามลำดับ （C） ระดับการแสดงออกของโปรตีนนิวเคลียสของนิวเคลียสที่เพิ่มจำนวนของเซลล์ (PCNA) ถูกกำหนดโดยเวสเทิร์นบล็อตติงโดยใช้แอนติบอดีจำเพาะ - ใช้แอกตินเป็นตัวควบคุมภายใน วิเคราะห์เดนซิโตเมตริกโดยใช้ซอฟต์แวร์ Bio-rad Quantity One@ ข้อมูลที่แสดงแสดงถึงค่าเฉลี่ย±SEM ของหนู 6 ตัวต่อกลุ่ม ""ป<0.01,><0.001 vs.con=""><><><0.001 vs.bph="">

Cistanche คุณภาพสูง

ผลของ CSE ต่อการตายของเซลล์ในหนูที่เกิดจากเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาล

อะพอพโทซิสหมายถึงการตายของเซลล์ที่เกิดขึ้นเป็นส่วนปกติและควบคุมการเจริญเติบโตของสิ่งมีชีวิต การรบกวนในการตายของเซลล์นั้นเชื่อมโยงกับโรคและเงื่อนไขต่างๆ ของมนุษย์ รวมทั้งเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาล (Sciarra et al.2007) การกระตุ้นของซิสเทอีนโปรตีเอสเฉพาะแอสพาเทตหรือที่เรียกว่าแคสเปสเป็นเหตุการณ์ทางชีวเคมีที่สำคัญในการตายของเซลล์ (Fadeel and Orrenius 2005) ดังแสดงในรูปที่ 5A กลุ่มที่ได้รับ CSE แสดงการแสดงออกของโปรตีนที่ลดลงของ procaspase-3 และ PARP-1 (ซับสเตรตภายในของแคสเปส-3)ที่เปรียบเทียบกับกลุ่มที่เหนี่ยวนำโดยเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาล

เหตุการณ์อะพอพโทติกถูกควบคุมอย่างเข้มงวดโดยสมาชิกของตระกูลโปรตีน Bcl-2 (Cory and Adams 2002) เพื่อตรวจสอบว่า CSE กระตุ้นการตายของเซลล์โดยการเปลี่ยนแปลงการแสดงออกของโปรตีน Bcl-2 และ Bax ในเนื้อเยื่อต่อมลูกหมากของสัตว์ที่เหนี่ยวนำโดยเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาลหรือไม่ ระดับของโปรตีนเหล่านี้ได้รับการตรวจสอบโดยการวิเคราะห์ western blot ดังแสดงในรูปที่ 5B กลุ่มที่ได้รับ CSE แสดงการแสดงออกของโปรตีนที่ลดลงของโปรตีนต้าน apoptotic Bcl-2 และ Bcl-xL แต่การแสดงออกของโปรตีน Bax ที่เป็นโปรอะพอพโทซิสเพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับกลุ่มที่เหนี่ยวนำโดย BPH . ดังนั้น อัตราส่วนของ Bcl-2 ต่อ Bax ลดลงอย่างมีนัยสำคัญหลังการรักษาด้วย CSE ซึ่งบ่งชี้ถึงการมีส่วนร่วมของตระกูลโปรตีน Bcl-2 ในการตายของเซลล์ที่เกิดจาก CSE ระหว่าง BPH(รูปที่ 5C)

การค้นพบนี้ชี้ให้เห็นว่าการตายของเซลล์ที่เกิดจาก CSE มีบทบาทในผลของสารประกอบนี้ต่อเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาล และผลกระทบเหล่านี้ถูกควบคุมโดยการควบคุมการแสดงออกของโปรตีนที่ต่อต้านและโปรอะพอพโทซิส

การอภิปราย

เพลี้ยกระโดดสีน้ำตาลเป็นโรคเรื้อรังที่มีระยะเวลาการพัฒนาและความก้าวหน้าที่ยาวนาน เพลี้ยกระโดดสีน้ำตาลพัฒนาจาก micronodular hyperplasia แบบธรรมดาไปเป็นการขยายปริมาตรด้วยกล้องจุลทรรศน์ซึ่งจะกลายเป็นปัญหาทางคลินิก (Sciarra et al. 2007) แม้ว่าการเกิดโรคของเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาลส่วนใหญ่ยังไม่เป็นที่ทราบแน่ชัด แต่ระดับแอนโดรเจนสูงและอายุที่เพิ่มขึ้นถือเป็นปัจจัยเสี่ยงสองประการที่อาจเกี่ยวข้องกับการพัฒนาเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาล (Botto et al.2005; Gann et al. 1995; Meigs et al.2001) . การศึกษาหลายชิ้นยังชี้ให้เห็นว่าฮอร์โมนเพศชายและ DHT มีบทบาทสำคัญใน BPH (Carson and Rittmaster 2003; Gittelman et al. 2006) มีข้อมูลจำนวนมากที่แสดงให้เห็นว่าฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนถูกแปลงเป็น DHT โดย 5a-reductase type 1 และ type 2 และ DHT นั้นกระตุ้นการเจริญเติบโตของต่อมลูกหมากและมีบทบาทสำคัญในการทำให้เกิดโรคของเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาลพร้อมกับ 5a-reductase type 2 (Bartsch et al. 2002a; Isaacs and Coffey 1989) นอกจากนี้ ผลการศึกษาส่วนใหญ่ในปัจจุบันรายงานว่า 5a-reductase type 2 เป็นไอโซเอนไซม์ที่เด่นในเนื้อเยื่อต่อมลูกหมากและมีหน้าที่รับผิดชอบสองในสามของ DHT ที่ไหลเวียน (Bartsch et al.2002b; Silver และคณะ1994a) อย่างไรก็ตาม บทบาทของ 5o-reductase type 1 และ type 2 ในการพัฒนาเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาลยังคงเป็นที่ถกเถียงกันอยู่ (Berman and Russell 1993; Bonnet et al. 1993; Shirakawa et al.2004; Silver et al.1994b; Thigpen et al.1993 ) และจำเป็นต้องมีการศึกษาทางชีววิทยาและเภสัชวิทยาในแบบจำลองสัตว์ต่างๆ เพื่อแก้ไขปัญหานี้ ในการศึกษานี้ การบำบัดด้วย CSE ยับยั้งการแสดงออกของ mRNA ของ 5a-reductase type 1 และ type 2 เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มที่เกิดจากเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาล ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า CSE สามารถแข่งขันกับ 5a-reductase type 1 และ type 2 และป้องกันไม่ให้ฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนถูกเผาผลาญเป็น DHT

รูปที่ 4 ผลของการบริหารให้สารสกัด Cistanche salsa (CSE) ต่อการแสดงออกของไนตริกออกไซด์ที่เหนี่ยวนำให้เกิดการสังเคราะห์ (iNOS) และไซโคลออกซีเจเนส (COX)-2 ในเนื้อเยื่อต่อมลูกหมากของแบบจำลองหนูที่เหนี่ยวนำให้เกิดต่อมลูกหมากโต (BPH) ที่ไม่เป็นพิษเป็นภัย ระดับการแสดงออกของโปรตีน iNOS และ COX-2 ถูกกำหนดหาโดยเวสเทิร์นบล็อตติงโดยใช้แอนติบอดีจำเพาะ - ใช้แอกตินเป็นตัวควบคุมภายใน วิเคราะห์เดนซิโตเมตริกโดยใช้ซอฟต์แวร์ Bio-rad Quantity One@ ข้อมูลที่แสดงแสดงถึงค่าเฉลี่ย± SlEM ของหนู 6 ตัวต่อกลุ่ม""p<0.01 vs.con=""><><0.01 vs.="" bph="">

เพลี้ยกระโดดสีน้ำตาลมาพร้อมกับการเจริญเติบโตของเนื้อเยื่อที่ไม่สามารถควบคุมได้ และในระหว่างกระบวนการนี้ สภาวะแวดล้อมจุลภาคอักเสบรอบเซลล์ต่อมลูกหมากเป็นผลมาจากการสังเคราะห์ NO และการทำงานของ COX-2 (Nelson et al. 2003) ในเซลล์อักเสบทั้งหมดที่มาถึงต่อมลูกหมาก มี iNOS อยู่ และสามารถกระตุ้นไนโตรเจนปฏิกิริยาที่สามารถทำลายเซลล์ได้ (Baltaci et al.2001) เซลล์อักเสบในเยื่อบุผิวต่อมลูกหมากแสดงเอนไซม์นี้ NO ยังช่วยเพิ่มกิจกรรม COX-2 ซึ่งเป็นตัวกลางในการอักเสบที่สอง ตรวจพบ COX-2 ในเซลล์อักเสบทั้งหมดในเยื่อบุผิวและสิ่งของคั่นระหว่างหน้า

ช่องว่างและเพิ่มขึ้นในแผลอักเสบที่แพร่กระจายโดยสร้าง prostaglandins ที่ทำให้เกิดการอักเสบ (Sciarra et al. 2008) เนื่องจากรายงานเหล่านี้ เราจึงได้ตรวจสอบด้วยว่าการแสดงออกของ iNOS และ COX-2 เพิ่มขึ้นหรือไม่ และ CSE ได้ลดทอนการแสดงออกของโปรตีนเหล่านี้ในแบบจำลองหนูขาวที่มีเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาลหรือไม่ ในการศึกษานี้ CSE ยับยั้งการแสดงออกของ iNOS และ COX-2 อย่างเห็นได้ชัด และข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า CSE อาจเป็นตัวแทนที่มีศักยภาพสำหรับการรักษาเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาลทางเภสัชวิทยาผ่านการควบคุมการแสดงออกของโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับการอักเสบ

รูปที่ 5 ผลของการให้สารสกัด Cistanche salsa (CSE) ต่อการแสดงออกของโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับการตายของเซลล์ในเนื้อเยื่อต่อมลูกหมากของแบบจำลองหนูที่เหนี่ยวนำให้เกิดต่อมลูกหมากโต (A) ระดับการแสดงออกของ PARP-1 และ procaspase{{4 }} โปรตีนถูกกำหนดหาโดยเวสเทิร์บล็อตติงโดยใช้แอนติบอดีจำเพาะ (B) ระดับการแสดงออกของโปรตีนในตระกูล Bcl-2 ถูกกำหนดหาโดยเวสเทิร์บล็อตติงโดยใช้แอนติบอดีจำเพาะ - ใช้แอกตินเป็นตัวควบคุมภายใน (C) การวิเคราะห์ความหนาแน่นสัมพัทธ์ของแถบ Bax และ Bcl-2 ถูกดำเนินการ และข้อมูล (ความหนาแน่นสัมพัทธ์ที่ปรับให้เป็นมาตรฐานกับ -แอคติน) ถูกวางแผนเป็นอัตราส่วน Bcl-2/Bax วิเคราะห์เดนซิโตเมตริกโดยใช้ซอฟต์แวร์ Bio-rad Quantity One@ ข้อมูลที่แสดงแสดงถึงค่าเฉลี่ย±SEM ของหนู 6 ตัวต่อกลุ่ม"p<><><0.001 vs.con="" group;=""><><0.001vs.bph>

ในเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาล เซลล์ต่อมลูกหมากที่แสดง COX-2 มีอัตราการงอกเพิ่มขึ้น และ Bcl ของยีนต่อต้าน apoptotic-2 ได้รับการควบคุม (Wang et al.2004) ทำให้เกิดความสัมพันธ์ระหว่างการอักเสบ การตายของเซลล์ตาย และการเจริญเติบโตของต่อมลูกหมาก ความไม่สมดุล โปรตีนจากตระกูล Bcl-2 เป็นตัวกลางสำคัญของการตอบสนองแบบอะพอพโทติก โปรตีน Bax ซึ่งเป็นสมาชิกของตระกูล Bcl-2 ส่งเสริมการตายของเซลล์โดยการสร้างโฮโมไดเมอร์และปล่อยไซโตโครมซีออกจากไมโตคอนเดรียเพื่อตอบสนองต่อความเครียด (Walensky 2006) ในหลายระบบ สมาชิกของ Bcl{{7} } family modulate apoptosis โดยมีอัตราส่วน Bcl-2/Bax ทำหน้าที่เป็นตัวบ่งชี้ความอ่อนแอของเซลล์ต่อการตายของเซลล์ (Salakou et al. 2007) ในการศึกษานี้ เราพบว่า CSE ลดระดับของ anti-apoptotic Bcl ลงอย่างเห็นได้ชัด -2 การแสดงออกของโปรตีนและระดับการแสดงออกของโปรตีน Bax ที่เพิ่มขึ้นในแบบจำลอง BPH ของหนูแรท ข้อมูลเหล่านี้บ่งชี้ว่าเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาลถูกยับยั้งโดยกลไกการต่อต้านการตายของเซลล์ที่เกี่ยวข้องกับการลดอัตราส่วนของ Bcl-2 ต่อ Bax ในกลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย CSE และแนะนำว่า CSE มีแนวโน้มมากที่สุดที่จะทำให้เกิดการตายของเซลล์ผ่านวิถีทางไมโตคอนเดรีย

ในการศึกษานี้ การบำบัดด้วย CSE ส่งผลให้เกิดการกระตุ้นของแคสเปส-3 และลดการแสดงออกของโปรตีนของซับสเตรต PARP-1 ในกลุ่มที่เหนี่ยวนำโดย BPH เป็นที่ทราบกันดีว่าแคสเปสเป็นแฟมิลีของซิสเทอีนโปรตีเอสที่ตัดแยกโปรตีนเป้าหมายที่สารตกค้างของแอสพาเทตจำเพาะ และพวกมันประกอบเป็นองค์ประกอบสำคัญของวิถีอะพอพโทติก มีการระบุเส้นทางที่แตกต่างกันของกระบวนการอะพอพโทซิสสองทาง: อะพอพโทซิสที่เริ่มต้นจากไมโตคอนเดรีย ซึ่งเกิดขึ้นผ่านแคสเปส-9 และวิถีทางที่รับการตายซึ่งอาศัยแคสเปส-8(Mao et al. 2010) แคสเปส-3เป็นโมเลกุลเอฟเฟกเตอร์หลักในวิถีการตายของเซลล์ที่ขึ้นกับแคสเปสซึ่งแยกโปรตีนในเซลล์จำนวนหนึ่งออก ซึ่งนำไปสู่การเปลี่ยนแปลงแบบอะพอพโทซิส ดังนั้น การกระตุ้นการทำงานของเอนไซม์ของ caspases-3 อาจเป็นกลไกในการเริ่มต้นโปรแกรม apoptotic (Potokar et al.2003) ก่อนหน้านี้ การวิจัยเกี่ยวกับกลไกการออกฤทธิ์ใหม่สำหรับตัวต้าน o-adrenoceptor เป็นผู้บุกเบิกโดย Kyprianou et al (1998) ซึ่งเป็นคนแรกที่รายงานผล pro-apoptotic ของ doxazosin การศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าการรักษาด้วย doxazosin ช่วยเพิ่มกิจกรรม apoptotic ของเซลล์ stromal ได้อย่างมีนัยสำคัญ กลุ่มเดียวกันรายงานว่าผลของปฏิปักษ์ o-adrenoceptor (terazosin และ doxazosin) ต่อการตายของเซลล์ถูกสื่อกลางโดยการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของ TGF- และ caspase 3 (Glassman et al.2001); ข้อมูลนี้ได้รับการยืนยันอีกครั้งโดย Ilio et al (2001) และปรากฏว่าเป็นจริงแม้ในเซลล์มะเร็งต่อมลูกหมาก(Benning and Kyprianou 2002) นอกจากนี้ finasteride ซึ่งเป็นตัวยับยั้ง 5o-reductase ที่เปลี่ยนฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนเป็นไดไฮโดรเทสโทสเตอโรนในเซลล์ต่อมลูกหมากและเซลล์เยื่อบุผิว ลดการควบคุมการแสดงออกของ Bcl-2 และ Bcl-xL ทำให้เซลล์ต่อมลูกหมากไวต่อการตายของเซลล์มากขึ้น (Huynh 2002) ในทำนองเดียวกัน มีการค้นพบการควบคุมที่เพิ่มขึ้นของโปรตีนที่ไม่ดี ซึ่งจับ Bcl-2 และ Bcl-xL เข้าด้วยกัน ทำให้เกิดผลโปรอะพอพโทซิสในที่สุด การศึกษาอื่นรายงานว่าการตายของเซลล์ที่เกิดจาก finasteride นั้นอาศัยการกระตุ้นของ caspase ซึ่งเป็นหลักฐานเพิ่มเติมเกี่ยวกับกลไกระดับโมเลกุลที่ดีของการกระทำของมัน (Bozec et al. 2005) เช่นเดียวกับการศึกษาเหล่านี้ ข้อมูลของเราแนะนำว่าผลต้านการแพร่กระจายของ CSE อาจเกี่ยวข้องกับการปราบปรามการผลิต DHT ในซีรัม แต่ยังรวมถึงการเหนี่ยวนำของการตายของเซลล์ ซึ่งรวมถึงการควบคุมสภาพแวดล้อมจุลภาคอักเสบในเนื้อเยื่อต่อมลูกหมากของหนูที่เกิดจากเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาล

จากการศึกษาในปัจจุบัน CSE มีความสามารถในการลดน้ำหนักต่อมลูกหมากและการผลิต DHT ในซีรัมในหนูที่เกิดจากเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาล ผลกระทบเหล่านี้ของ CSE อาจเกิดจากอัตราส่วน Bcl-2/Bax ที่ตกต่ำและการกระตุ้นของ caspase-3 ซึ่งนำไปสู่การเหนี่ยวนำของการตายของเซลล์โดยการลดการแสดงออกของ iNOS และ COX-2 ผลจากการศึกษานี้ชี้ให้เห็นว่า CSE อาจเป็นสารบำบัดที่มีศักยภาพสำหรับการรักษาเพลี้ยกระโดดสีน้ำตาล