อนุพันธ์ของ Anastatin บรรเทาการบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจขาดเลือด - Reperfusion ด้วยคุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระ

ติดต่อสอบถามเพิ่มเติมได้ที่tina.xiang@wecistanche.com

เชิงนามธรรม:(±)-Anastatins A และ B เป็น flavonoids ที่แยกได้จาก Anastatica hierochuntica ในการศึกษาก่อนหน้านี้ ได้มีการออกแบบอนุพันธ์ใหม่ di-and tri-substitutiond ยี่สิบสี่ตัวของ anastatins และประเมินฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระเบื้องต้นของพวกมัน ในการศึกษานี้ ได้ทำการศึกษาผลการป้องกันของกล้ามเนื้อหัวใจขาดเลือด-reperfusion (I/R) และความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระอย่างเป็นระบบของอนุพันธ์ 24 ชนิด สารประกอบ 13 มีศักยภาพมากที่สุดในบรรดาสารประกอบทั้งหมดที่ศึกษา ซึ่งเพิ่มความอยู่รอดของเซลล์ H9c2 เป็น 80.82 เปอร์เซ็นต์ ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของสารประกอบ 13 ถูกประเมินในพลังงานสารต้านอนุมูลอิสระรีดิวซ์รีดิวซ์ 2,2'-azino-bis (3-เอทิลเบนโซไทอะโซลีน-6-กรดซัลโฟนิก) การกำจัดอนุมูลอิสระ และ 2,2-ไดฟีนิล{ {20}}การตรวจพิคริลไฮดราซิล สังเกตพบว่าสารประกอบ 13 ลดบริเวณที่เกิดกล้ามเนื้อหัวใจตายลงอย่างมีนัยสำคัญ และปรับปรุงการเปลี่ยนแปลงทางจุลพยาธิวิทยาและคลื่นไฟฟ้าหัวใจในหนูที่มีอาการบาดเจ็บกล้ามเนื้อหัวใจตายด้วย I/R นอกจากนี้ สารประกอบ 13 ยังลดอัตราการรั่วไหลของซีรั่ม lactate dehydrogenase, creatine kinase และ malonyl dialdehyde จากเนื้อเยื่อกล้ามเนื้อหัวใจของหนู และเพิ่มระดับของกิจกรรมกลูตาไธโอนและซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเตสตามการบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจ I/Rในหนู เมื่อนำมารวมกัน เราสรุปได้ว่าสารประกอบ 13 มีผลป้องกันโรคหัวใจและหลอดเลือดต่อการบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจตายด้วย I/R ทั้ง ในหลอดทดลอง และในร่างกาย อันเนื่องมาจากกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระที่กว้างขวาง

คีย์เวิร์ด: อนุพันธ์ฟลาโวนอยด์; เซลล์ H9c2; ขาดออกซิเจน / ออกซิเจน; ผลกระทบต่อหัวใจ

คลิกที่นี่เพื่อรับข้อมูลผลิตภัณฑ์เพิ่มเติม

1. บทนำ

โรคหัวใจขาดเลือด (IHD) เป็นสาเหตุสำคัญของการเสียชีวิตทั่วโลก [1] การฟื้นฟูการไหลเวียนของเลือดอย่างทันท่วงทีสามารถปรับปรุงผลลัพธ์ทางคลินิกของโรคได้อย่างมีประสิทธิภาพ อย่างไรก็ตามการกลับเป็นซ้ำไม่ได้โดยไม่มีความเสี่ยงเนื่องจากขอบเขตของความเสียหายของเซลล์ที่เกิดจากการกลับคืนมาเอง ดังนั้นจึงเป็นสิ่งสำคัญอย่างยิ่งที่จะต้องพัฒนากลยุทธ์การรักษาที่มีประสิทธิภาพต่อการบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจขาดเลือด-กลับ (I/R) [2] กลไกของการบาดเจ็บ I/R ของกล้ามเนื้อหัวใจนั้นซับซ้อนมาก มันรวมถึงการตายของเซลล์ ความเครียดออกซิเดชัน [3] แคลเซียมเกิน [4] และการอักเสบ [5]ความเครียดออกซิเดชันอาจนำไปสู่การตายแบบอะพอพโทซิสผ่านวิถีการถ่ายทอดสัญญาณต่างๆ รวมถึงไคเนสที่ควบคุมด้วยสัญญาณ (ERK), ไคเนสที่ปลายอะมิโน c-Jun (JNK), การกระตุ้น p53 (โปรตีนเนื้องอก p53) และตัวแปร p66shc นอกจากนี้ การผลิตออกซิเจนชนิดปฏิกิริยา (ROS) ที่มากเกินไปอาจทำให้เกิดความเสียหายต่อเยื่อหุ้มเซลล์และโมเลกุลของเซลล์อย่างถาวร เช่น DNA, กรดนิวคลีอิก, โปรตีน, ลิปิด และปฏิกิริยาลูกโซ่เริ่มต้น ทำลายเนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อหัวใจตายเพิ่มเติม ความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน [6] ซึ่งเกิดจากความไม่สมดุลระหว่างการก่อตัวของอนุมูลอิสระและการขับ ROS มีบทบาทสำคัญในการเกิดโรคของการบาดเจ็บที่ I/R I ดังนั้น กลยุทธ์ในการปกป้องกล้ามเนื้อหัวใจจากความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันจึงได้รับการพิจารณาอย่างสูงในการจัดการ ของการบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจ I/R ดังนั้น ด้วยศักยภาพในการกำจัดอนุมูลอิสระ กลยุทธ์ที่ใช้สารต้านอนุมูลอิสระจึงเป็นประโยชน์ในการจัดการอาการบาดเจ็บของ I/R

ในการศึกษาทางคลินิก สารต้านอนุมูลอิสระที่ใช้ในการลดการบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจ I/Rส่วนใหญ่แบ่งออกเป็นสองประเภท: เอ็นไซม์และไม่ใช่เอ็นไซม์ เอนไซม์เช่น catalase และ glutathione peroxidase ลดความเข้มข้นของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์เพื่อป้องกันความเสียหายของเซลล์ สารต้านอนุมูลอิสระที่ไม่ใช่เอนไซม์ เช่น วิตามินอี วิตามินซี -แคโรทีน เป็นต้น ทำให้การตอบสนองความเครียดออกซิเดชันของเนื้อเยื่ออ่อนแอลง เพื่อลดความเสียหายของเนื้อเยื่อและส่งเสริมการซ่อมแซมการทำงาน อย่างไรก็ตาม แอปพลิเคชันของทั้งสองในปัจจุบันมีข้อจำกัดบางประการ มวลโมเลกุลขนาดใหญ่ของการเตรียมเอนไซม์ไม่เอื้อต่อการดูดซึม [8] นอกจากนี้ยังมีปัญหาบางอย่างเกี่ยวกับความคงตัวของสารที่ไม่ใช่เอนไซม์ ซึ่งทำให้ยามีความเสถียรต่ำ ดังนั้นจึงออกซิไดซ์ได้ง่าย [9]สารฟลาโวนอยด์ในฐานะที่เป็นสารต้านอนุมูลอิสระที่ไม่ใช่เอนไซม์ ได้รับรายงานว่ามีคุณสมบัติที่มีศักยภาพที่หลากหลาย รวมทั้งสารต้านอนุมูลอิสระ ต้านมะเร็ง ต้านมะเร็ง และป้องกันโรคหัวใจและหลอดเลือด [10] พวกมันป้องกันการก่อตัวของออกไซด์ที่มีปฏิกิริยาสูงและยับยั้งปฏิกิริยาออกซิเดชันโดยการกำจัด ROS เช่น อนุมูลไฮโดรเจนและเปอร์ออกซีไนไตรต์ Anastatins A และ B [11] เป็นฟลาโวนอยด์ที่มีฤทธิ์ป้องกันตับ Anastasius A และ B เป็นส่วนประกอบที่ใช้งานอยู่ใน Anastatica hierochuntica(ชนิดย่อย Anastatica, ตระกูล Brassicaceae) ปัจจุบัน มีรายงานน้อยมากเกี่ยวกับการสังเคราะห์ทางเคมีและการปรับเปลี่ยนโครงสร้างของแอนาสแตติน A และ B. ในปี 2546 สารประกอบออกฤทธิ์จาก Anastatica hierochuntica ถูกแยกออกและพบว่ามีผลในการป้องกันตับต่อความเป็นพิษต่อเซลล์ที่เกิดจาก D-galactosamine ในเซลล์ตับของหนูเมาส์ที่เพาะเลี้ยงขั้นต้น Nakashima และ Eman ยังได้แสดงให้เห็นว่าสารประกอบนี้มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระและต้านมะเร็งในหลอดทดลอง อย่างไรก็ตาม ผลกระทบทางเภสัชวิทยาของแอนาสแตติน A และ B และอนุพันธ์ของแอนาสแตติน A และ B รวมถึงขั้นตอนในการสังเคราะห์ยังคงไม่ชัดเจน ดังนั้นเราจึงมุ่งที่จะสังเคราะห์แอนาสแตติน A และ B และอนุพันธ์ของแอนาสแตติน A และ B และอนุพันธ์ของแอนาสแตตินบางส่วน และประเมินพวกมันสำหรับกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระในภาวะขาดออกซิเจน/การเติมออกซิเจน(H/R) model ซึ่งมีประสิทธิภาพในการศึกษาการบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจตายด้วย I/R [12]

ในการศึกษาก่อนหน้านี้ เราสังเคราะห์แอนาสแตติน A และ B และสารอะนาล็อกของพวกมัน และประเมินความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของพวกมันโดยใช้แบบจำลองการเพาะเลี้ยงเซลล์ของความเสียหายที่เกิดจากออกซิเดชันของ H2O2 (ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์)13 ผลลัพธ์ก่อนหน้านี้ของเราแสดงให้เห็นว่า anastatins A และ B มีกิจกรรมป้องกันตับที่มีศักยภาพซึ่งดูเหมือนจะเกี่ยวข้องกับความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของพวกมัน

ในการศึกษานี้ แอนาสแตติน A และ B และอนุพันธ์ 24 ชนิดได้รับการสังเคราะห์และประเมินความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระโดยใช้กำลังรีดิวซ์และการทดสอบการขจัดอนุมูลอิสระ นอกจากนี้ แบบจำลองเซลล์ H9c2 อย่างง่ายของ H/R และแบบจำลองหนูของการบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจตายยังถูกใช้เพื่อประเมินผลการป้องกันหัวใจของสารประกอบ

2. ผลลัพธ์

การสร้างแบบจำลอง 2.1.H/R

ความเข้มข้นของการบำบัด Na2S, O4 ถูกประเมินดังแสดงในรูปที่ 1A และอัตราการรอดชีวิตของเซลล์ H9c2 ลดลงด้วยความเข้มข้นของ Na2S2O4 ที่เพิ่มขึ้น ภายใต้ 4 mM ของ Na, S, Oa ความมีชีวิตของเซลล์ลดลงเหลือน้อยกว่า 50 เปอร์เซ็นต์ (13.7,25 และ 43.4 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับที่เวลาการเกิดออกซิเจน 2,1 และ 0 ชั่วโมง) และระดับความอยู่รอดของเซลล์ลดลง ดังนั้น ความเข้มข้น 4 มิลลิโมลาร์ของ Na2S2O4 จึงถูกใช้เพื่อเลียนแบบการบำบัดที่ขาดออกซิเจน รูปที่ 1B แสดงว่า 4 มิลลิโมลาร์ของการบำบัดด้วย Na2S2O4 เป็นเวลา 2 ชั่วโมงโดยไม่มีการเกิดออกซิเจนใหม่ (0 ชั่วโมง) ทำให้ความสามารถในการมีชีวิตของเซลล์ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ และยังคงที่ ภายใต้สภาวะความเข้มข้น 4 mM ของ NazS2O4 เป็นเวลา 2 ชั่วโมงของการเลียนแบบภาวะขาดออกซิเจน 2 ชั่วโมงของการเกิดออกซิเจนใหม่จะลดอัตราการรอดชีวิตของเซลล์ลงเหลือ 17.37 เปอร์เซ็นต์ (รูปที่ 1C) ดังที่แสดงไว้อย่างชัดเจนในรูปที่ 1D, 10 μM ของ resveratrol ย้อนกลับความมีชีวิตของเซลล์ที่ลดลงซึ่งเกิดจาก H/R ซึ่งมีศักยภาพมากกว่าความเข้มข้นของกรดแกลลิกที่เท่ากัน (74.34 เทียบกับ 60.44 เปอร์เซ็นต์สำหรับกรดแกลลิก)

เป็นผลให้แบบจำลองการขาดออกซิเจน/ออกซิเจนถูกสร้างขึ้นโดยใช้ Na2S, O4 ที่ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 4 mM เป็นเวลา 2 ชั่วโมงของการเลียนแบบการขาดออกซิเจนตามด้วยวัฒนธรรมใน DMEM ปกติ (การปรับเปลี่ยนอาหารของนกอินทรีของ Dulbecco) / กลูโคสสูงเพื่อเลียนแบบการบาดเจ็บของออกซิเจน . เรสเวอราทรอลที่ความเข้มข้นสุดท้าย 10 ไมโครโมลาร์ถูกใช้เป็นกลุ่มควบคุมเชิงบวก

2.2. Anastatins และ Derioatioes ของพวกมันปรับปรุงความมีชีวิตของเซลล์ H9c2 ภายใต้การบำบัด H/R

ขั้นแรก เราตรวจสอบผลกระทบของแอนาสแตติน A และ B (รูปที่ 2A, B) และอนุพันธ์ของพวกมันต่อความมีชีวิตของเซลล์ H9c2 ใน MTT(3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1){{ 10}},5-di-phenytetrazoliumromide) การหาปริมาณ [13] สารประกอบ 20a,21a,22a,20b,22b, 20c,20c',21c,22c, 10 และ 11 ไม่มีพิษต่อเซลล์อย่างมีนัยสำคัญต่อเซลล์ H9c2 (รูปที่ 3A,B, ตาราง S2) Anastatins A และ B, อนุพันธ์ของพวกมัน และ resveratrol (กลุ่มควบคุมเชิงบวก) ย้อนกลับความเสียหายของเซลล์ที่เกิดจากการขาดออกซิเจน (รูปที่ 4) ในกลุ่มแบบจำลอง ความมีชีวิตของเซลล์ลดลงเหลือ 20.31 เปอร์เซ็นต์ ซึ่งเพิ่มขึ้นเป็น 82.68 เปอร์เซ็นต์โดย resveratrol และแอนาสแตติน A และสารประกอบ 22b, 22c, 24b, 24c,13 และ 14 เพิ่มอัตราการรอดชีวิตของเซลล์เป็นมากกว่า 70 เปอร์เซ็นต์ ( 71.49,71.00,76.50, 73.24,77.57, 80.82 และ 77.13 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ) ดังนั้น สารประกอบ 13(รูปที่ 2C) มีผลในการป้องกันที่แรงที่สุดในบรรดาอนุพันธ์ของแอนาสแตตินจากการบาดเจ็บของ H/R และถูกใช้ในการทดลองที่ตามมา

2.3. สารประกอบ 13 บรรเทาความเสียหายของเซลล์ที่เหนี่ยวนำโดย H/R และความเครียดที่เกิดจากออกซิเดชัน

เพื่อสำรวจความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของสารประกอบสามความเครียดออกซิเดชันตัวบ่งชี้ LDH (แลคเตทดีไฮโดรจีเนส), GSH (L-กลูตาไธโอน) และ SOD (ซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเตส) ได้รับการคัดเลือกเพื่อประเมินความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของสารประกอบ LDเป็นเอ็นไซม์ไซโตพลาสมิกที่เสถียรในเซลล์กล้ามเนื้อหัวใจ ซึ่งถูกปลดปล่อยอย่างรวดเร็วจากเซลล์สู่อาหารเลี้ยงเซลล์เมื่อได้รับบาดเจ็บที่เยื่อหุ้มเซลล์ของกล้ามเนื้อหัวใจ ยิ่งอาการบาดเจ็บรุนแรงมาก ระดับ LDH ในอาหารเลี้ยงเชื้อก็จะยิ่งสูงขึ้น รูปที่ 5A แสดงให้เห็นว่า 2 ชั่วโมงของการขาดออกซิเจนตามด้วย reoxygenation 2 ชั่วโมงเพิ่มการปลดปล่อย LDH อย่างมีนัยสำคัญ (478.98 U/L เทียบกับ 55.84 U/Lin ในกลุ่มว่าง,p<0.001), which="" was="" inhibited="" by="" resveratrol="" (284.07="" u/l="" vs.="" the="" model="" group=""><0.01) and="" compound="" 13(276.61="" u/l="" vs.the="" model="" group,=""><0.001).gsh can="" act="" as="" a="" hydrogen="" donor="" for="" glutathione="" catalase="" (cat),="" eliminating="" o2-="" and="" its="" derivatives="" in="" the="" organism,="" thereby="" cells="" are="" protected="" from="" oxidant="" damage.="" additionally,="" sod="" can="" catalyze="" the="" disproportionation="" of="" superoxide="" anions="" and="" protect="" cells="" from="" damage.="" as="" shown="" in="" figure="" 5b,="" c,="" compound="" 13="" significantly="" increased="" gsh="" release="" and="" sod="" activity=""><0.01）. it="" increased="" gsh="" level="" to="" 39.93="" μmol/gprot="" which="" was="" higher="" than="" the="" level="" in="" the="" model="" group="" （18.2="" μmol/gprot）="" but="" slightly="" lower="" than="" that="" in="" the="" resveratrol="" group.="" additionally,="" it="" reversed="" h/r-induced="" reduction="" in="" sod="" activity="" by="" increasing="" sodlevel="" from="" 12.00="" u/mgprot="" to="" 22.98="" u/mgprot.="" these="" findings="" demonstrate="" that="" compound="" 13="" has="" a="" protective="" effect="" on="" h9c2="" cells="" subjected="" to="" h/r="">

2.4.ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของสารประกอบ 13

Vitamin C(Vc) was used as an antioxidant control in order to evaluate the antioxidant effects of resveratrol and compound 13 intuitively. FRAP assay was used to evaluate the reducing power of the compound that can transfer ions from Fe3+ into Fe2+ to determine the antioxidant capacity of compounds. The results of the experiment showed that the reducing power of compound 13 was 354.80 mg/mmol, significantly stronger than the values obtained for the positive control Vc (127.47 mg/mmol) and resveratrol (261.91 mg/mmol) (Figure 6A).ABTS (2'-Azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)and DPPH (2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) are stable free radicals insolvent, but when a radical scavenger is added to the solvent, the result is a reduction in the number of free radicals and the degree of reduction in the number of free radicals is directly proportional to the antioxidant capacity. Figure 6B, C show the ABTS and DPPH radical scavenging abilities of compound 13. The results indicate that compound 13 had the strongest scavenging activity on ABTS and DPPH with EC50 values of 1.38 and 0.07 mM, respectively. The antioxidant capacities of the compounds tested in all three antioxidant assays followed the same trend: compound 13>เรสเวอราทรอล ดังนั้นความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของสารประกอบ 13 อาจสูงกว่าสารต้านอนุมูลอิสระทั่วไปอื่นๆ

2.5. ผลของอนุพันธ์ Anastatin 13 ต่อการบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจตายในหนูแรท

2.5.1.ผลของสารประกอบ 13 ต่อความเครียดออกซิเดชันและกิจกรรมของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระ

ระดับของการบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจได้รับการประเมินโดยการตรวจหาเครื่องหมายความเครียดออกซิเดชันและกิจกรรมของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระ ประเมินผลของสารประกอบ 13 ต่อการทำงานของ MDA (มาลอนไดอัลดีไฮด์) ในเนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อหัวใจ เช่นเดียวกับระดับของ LDH, CK(Creatine Kinase), GSH และ SODin เซรั่ม ดังแสดงในรูปที่ 7 การบาดเจ็บของ I/R ส่งผลให้ระดับของ LDH (รูปที่ 7A) และ CK (รูปที่ B) เพิ่มขึ้นและการลดลงอย่างมีนัยสำคัญในกิจกรรม GSH (รูปที่ 7C) และ SOD (รูปที่ 7D) (p<0.001). the="" level="" of="" mda(figure="" 7e)increases="" after="" i/r="" injury,="" which="" is="" a="" critical="" diagnostic="" marker="" of="" i/r="" injury.="" however,="" pretreatment="" with="" a="" positive="" control="" drug="" and="" different="" concentrations="" of="" compound="" 13="" significantly="" alleviated="" these="" injuries.="" ldh="" activity="" obtained="" for="" the="" i/r="" model="" group="" was="" 771.37="" u/ml,="" which="" was="" remarkably="" decreased="" to="" 416.129="" u/ml="" under="" resveratrol="" treatment.="" in="" the="" high-and="" low-dose="" 13="" groups,="" ldh="" activity="" decreased="" to="" 408.05="" and="" 462.81="" u/ml,="" respectively="" similar="" trends="" were="" observed="" for="" other="" myocardial="" injury="" markers,="" including="" the="" level="" of="" ck,="" gsh,="" sod,="" and="" mda="" release.="" these="" results="" indicated="" that="" compound="" 13="" exerted="" protective="" effects="" against="" oxidative="" stress-induced="" i/r="" injury="" in="" a="" dose-dependent="">

2.5.2. ผลของสารประกอบ 13 ต่อการเปลี่ยนแปลงคลื่นไฟฟ้าหัวใจ (ECG) และอัตราการเต้นของหัวใจ

การเปลี่ยนแปลงคลื่นไฟฟ้าหัวใจทั่วไป (คลื่นไฟฟ้าหัวใจ) ที่เกิดจากการบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจตายโดย I/R แสดงไว้ในรูปที่ 8 เมื่อเปรียบเทียบกับ ECG ปกติ (รูปที่ 8A) การบาดเจ็บของ I/R ของกล้ามเนื้อหัวใจอาจทำให้ ORS (ส่วนหนึ่งของคลื่นไฟฟ้าหัวใจ) แอมพลิจูดเพิ่มขึ้น (รูปที่ 8B); ฟิวชั่นคลื่น QRS และคลื่น ST (รูปที่ 8C); ส่วน ST(ช่วงเวลาระหว่างคลื่น S และคลื่น T) ระดับความสูง (รูปที่ 8D); และการผกผันของส่วน ST (รูปที่ 8E) หลังจาก 15 นาทีของ LAD ligation แอมพลิจูด QRS เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญจากประมาณ 0.5 mV เป็น 1.2 mV ในกลุ่มแบบจำลอง (รูปที่ 9A) ในขณะที่การเพิ่มขึ้นของ QRS amplitude ที่ต่ำกว่านั้นพบได้ในทุกกลุ่มการรักษา (จาก ประมาณ 0.4 mV ถึง 1,0.8 และ 0.6 mV สำหรับ resveratrol ปริมาณต่ำ 13 และกลุ่มขนาดยาสูง 13 ตามลำดับ) (รูปที่ 9B-D ). นอกจากนี้ สังเกตแนวโน้มที่คล้ายกันที่ ligation 30 นาที ในระหว่างการเกิดซ้ำ แอมพลิจูด QRS เริ่มลดลง อย่างไรก็ตาม คลื่น QRS ในกลุ่มโมเดลยังคงสูงที่สุดในรอบระยะเวลา หลังจากการเกิดซ้ำ 20 นาที แอมพลิจูด QRS ในกลุ่มแบบจำลองลดลงเหลือประมาณ {{30}}.8 mV ค่าในกลุ่มบำบัดประมาณ 0.6,0.5, 0.5 mV สำหรับ resveratrol ปริมาณต่ำ 13 และกลุ่มขนาดสูง 13 ตามลำดับ โดยรวมแล้ว การรักษา resveratrol ในขนาดต่ำ 13 และขนาดสูง 13 ทั้งหมดลดความกว้างของ QRS ทางพยาธิวิทยาเมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มแบบจำลองในระหว่างทั้งภาวะขาดเลือดขาดเลือดและกระบวนการกำเริบในช่วงต้น ซึ่งอาจเกิดจากกิจกรรมการป้องกันกล้ามเนื้อหัวใจตาย

นอกจากการตรวจ ECG แล้ว ยังตรวจพบการเปลี่ยนแปลงของอัตราการเต้นของหัวใจอย่างใกล้ชิด ตามที่แสดงในตาราง S3 การทำ ligation 30 นาทีช่วยลดอัตราการเต้นของหัวใจได้อย่างมากในทุกกลุ่ม ในขณะที่ไม่พบความแตกต่างที่มีนัยสำคัญระหว่างกลุ่มการรักษาและกลุ่มแบบจำลองใดๆ หลังจากผ่านไป 2 ชั่วโมงอัตราการเต้นของหัวใจเพิ่มขึ้น แต่ไม่พบการเปลี่ยนแปลงที่สำคัญในกลุ่มใด ๆ

2.5.3. ผลของสารประกอบ 13 ต่อบริเวณที่เกิดการอักเสบและการเปลี่ยนแปลงทางจุลพยาธิวิทยา

ในการประเมินระดับของการบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจ เนื้อเยื่อหัวใจถูกย้อมโดย TTC (2,35-Triphenyltetrazolium chloride) และตรวจพบการเปลี่ยนแปลงทางจุลพยาธิวิทยา ดังที่แสดงไว้ในรูปที่ 10 ในกลุ่มหลอก ไม่พบการเปลี่ยนแปลงในกล้ามเนื้อหัวใจหลังการย้อมสี TTC ในขณะที่สังเกตระดับประมาณ 30 เปอร์เซ็นต์ของบริเวณที่เป็นเนื้อร้ายสีขาวในกลุ่ม I/R ในกลุ่มที่ใช้ยา resveratrol และกลุ่มที่ได้รับยาขนาดต่ำ 13 กลุ่ม บริเวณที่เป็นโรคหลอดเลือดหัวใจตีบลดลงอย่างมีนัยสำคัญเหลือประมาณ 10 เปอร์เซ็นต์ และพื้นที่ที่เสียชีวิตในกลุ่มที่ได้รับยาขนาดสูง 13 กลุ่มลดลงเหลือประมาณ 5 เปอร์เซ็นต์ รูปที่ 10 แสดงผลของการตรวจสอบการย้อมสี HE (ฮีมาทอกซิลิน-อีโอซิน): การขยายตัวของเซลล์หัวใจ เยื่อหุ้มและนิวเคลียสที่ละลายบางส่วน และการแทรกซึมของเซลล์อักเสบถูกสังเกตพบในส่วนเนื้อเยื่อจากกลุ่มแบบจำลอง อย่างไรก็ตาม การปรับสภาพด้วยสารประกอบ 13 ช่วยลดการเปลี่ยนแปลงทางจุลพยาธิวิทยาได้อย่างมีนัยสำคัญ ผลลัพธ์ของการย้อมสี TTC และการย้อมสี HE บ่งชี้ว่าสารประกอบ 13 สามารถลดภาวะกล้ามเนื้อหัวใจตายที่เหนี่ยวนำโดย I/R ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา

3. อภิปราย

ห้องปฏิบัติการของเราได้สังเคราะห์อนุพันธ์ของแอนาสแตติน 24 ชนิดโดยมุ่งไปที่ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระที่อาจเกิดขึ้นได้ของแอนาสแตติน A และ B และทำการวิเคราะห์เบื้องต้นเกี่ยวกับความเป็นพิษต่อเซลล์ของสารต่อ PC-12 และกิจกรรมการป้องกันเซลล์ใน H2O ที่ก่อให้เกิดความเสียหายจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน [13] . ในการศึกษานี้ เราทำการประเมินเชิงลึกทางชีววิทยาของอนุพันธ์ 13 ชนิดจาก 24 ชนิดที่มีกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระที่แรงที่สุดเป็นส่วนใหญ่

ในการศึกษานี้ การบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจตายโดย I/R เกิดขึ้นในเซลล์ H9c2 ผ่านการเหนี่ยวนำด้วยการรักษาด้วย H/R ผลการศึกษาพบว่า anastatins A และ B และอนุพันธ์ที่ศึกษาของพวกมันปรับปรุงความมีชีวิตของเซลล์ H9c2 หลังการรักษาด้วย H/R สารประกอบ 13 ถูกพบว่ามีศักยภาพมากที่สุดในบรรดาสารประกอบ 26 ตัวที่ศึกษาและด้วยเหตุนี้จึงถูกเลือกสำหรับการประเมินเพิ่มเติม กิจกรรมของ LDH (เครื่องหมายของการบาดเจ็บของเซลล์), SOD และ GSH (ตัวทำเครื่องหมายความเครียดออกซิเดชัน) ถูกตรวจพบใน supernatants ของเซลล์ H9c2 หลังการบำบัดด้วย H/R เราพบว่าการปรับสภาพด้วยสารประกอบทดสอบลดระดับ LDH ลงอย่างมีนัยสำคัญ และเพิ่มระดับ SOD และ GSH ในเซลล์ ดังนั้นเราจึงตั้งสมมติฐานว่าอนุพันธ์ของแอนาสแตตินมีฤทธิ์ป้องกันโรคหัวใจซึ่งอาจเนื่องมาจากความสามารถในการปราบปรามความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน การสอบวิเคราะห์ DPPH และ ABTS ใช้เพื่อประเมินกำลังการขจัดอนุมูลอิสระของสารประกอบ [14] ผลที่ได้คือ สารประกอบ 13 มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระสูงและกำจัด ABTS และ DPPH ที่ค่า EC50 ต่ำ ซึ่งแสดงถึงการปราบปรามของความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน LAD ligation เป็นวิธีการทั่วไปที่ใช้ในการสร้างแบบจำลอง I/R ของกล้ามเนื้อหัวใจ โดยการประเมินแอมพลิจูดของ QRS complex ก่อน ischemia หลัง ischemia และหลัง reperfusion เราพบว่าการปรับสภาพด้วยสารประกอบ 13 สามารถบรรเทา ventricular arrhythmia ได้อย่างมีนัยสำคัญระหว่าง ischemia และ reperfusion ในระยะแรก นอกจากนี้ สารประกอบ 13 ยังส่งผลต่อบริเวณกล้ามเนื้อหัวใจตายและการเปลี่ยนแปลงทางจุลพยาธิวิทยาของกล้ามเนื้อหัวใจตายด้วย ผลลัพธ์เหล่านี้ พร้อมด้วยการค้นพบว่าสารประกอบ 13 ยับยั้งความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน และเพิ่มระดับของเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระในซีรัมของหนูในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยา แสดงให้เห็นว่าสารประกอบ 13 มีผลต่อการบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจ

โดยสรุป อนุพันธ์ของแอนาสแตตินมีศักยภาพในการต้านอนุมูลอิสระ โดยสารประกอบ 13 แสดงฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระสูงสุดในบรรดาสารประกอบที่ทดสอบ ยังคงต้องมีการอภิปรายถึงกลไกที่รับผิดชอบต่อผลกระทบของอนุพันธ์แอนาสแตตินต่อเส้นทางการส่งสัญญาณที่เกี่ยวข้องกับความเครียดออกซิเดชัน แอสตาแซนธิน (ชนิดย่อยของแคโรทีนอยด์) สามารถกำจัด ROS และบรรเทาภาวะขาดเลือดขาดเลือด/อาการบาดเจ็บที่เลือดซ้ำได้อีก [15] ยาที่มีศักยภาพในการป้องกันการเกิด ROS อาจมีแนวโน้มในโรคที่เกี่ยวข้องกับความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน [4] เช่น เซลล์บำบัดและโรคหลอดเลือดหัวใจ นอกจากนี้ ROS ยังยับยั้งการแสดงออกของยีนเป้าหมายปัจจัยที่ก่อให้เกิดภาวะขาดออกซิเจน-1 (HF-1) ที่ขาดออกซิเจน ซึ่งรายงานว่ามีผลต่อการป้องกันโรคหัวใจและหลอดเลือดต่อการบาดเจ็บของการขาดเลือดขาดเลือด-การกลับเป็นซ้ำ [16] เราตั้งสมมติฐานว่าโปรตีนควบคุม ROS และ HIF-1 อาจมีบทบาทสำคัญในการป้องกันโรคหัวใจของสารประกอบ 13 กรดทัวร์เนโฟลิก B (TAB) ซึ่งได้มาจากยาสมุนไพรจีน ช่วยป้องกันการบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจตายด้วย I/R [17 ]. การศึกษาเผยให้เห็นบทบาทที่สำคัญของ TAB ในเอนโดพลาสมิกเรติคิวลัม (ER) ความเครียด การตายของเซลล์ และเส้นทาง PI3K (phosphatidylinositol 3 kinase)/AKT (โปรตีนไคเนส B) ในการจัดการการบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจตายด้วย I/R วิถีทางอื่นๆ เช่น วิถีการส่งสัญญาณของโปรตีนไคเนสที่กระตุ้นด้วยไมโตเจน (MAPK) [18] และเส้นทางการส่งสัญญาณ AMPK (อะดีโนซีน 5'-โปรตีนไคเนสที่กระตุ้นด้วยโมโนฟอสเฟต) [19] อาจเกี่ยวข้องกับการบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจตายด้วย I/R ดังนั้น ขั้นตอนต่อไปคือการเริ่มต้นด้วยโปรตีนควบคุม ROS และ HIF-1 และใช้วิถีทางที่อาศัย TAB เพื่อสำรวจกลไกที่ 13 ออกฤทธิ์ในการต้านอนุมูลอิสระและปกป้อง I/R ของกล้ามเนื้อหัวใจ นอกจากนี้ ควรทำการทดลองในระดับเซลล์ในการศึกษานี้ในสายเซลล์ของมนุษย์ด้วย

4. วัสดุและวิธีการ

4.1.วัฒนธรรมเซลล์

สายเซลล์ cardiomyocyte H9c2 ของหนูถูกซื้อจากบริษัท Nanjing Kebai Biotechnology (หนานจิง ประเทศจีน) เพาะเลี้ยงเซลล์ใน DMEM/กลูโคสสูง (Hyclone, USA) และเสริมด้วย FBS 10 เปอร์เซ็นต์ (Lanzhou Minhai Biological Engineering co.LTD, Lanzhou, China) และ 1 เปอร์เซ็นต์ penicillin/streptomycin (Hyclone, Marlborough, MA, USA) ในความชื้น ตู้ฟักไข่ที่ 37 องศา มีคาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์

4.2. การทดสอบความมีชีวิตของเซลล์

ความอยู่รอดของเซลล์ถูกวัดโดยใช้การสอบวิเคราะห์ MTT เซลล์ H9c2 ถูกเพาะในจาน 96-หลุมที่ 1 × 10* เซลล์/หลุมเป็นเวลา 24 ชั่วโมง หลังจากนั้น เซลล์ถูกบำบัดด้วย Anastatins A และ B และอนุพันธ์ของพวกมันเป็นเวลา 48 ชั่วโมงหรือถูกบำบัดด้วย Anastatins A และ B และอนุพันธ์ของพวกมันตามด้วยการบำบัด H/R จากนั้นจึงเติม MTT (20 ไมโครลิตร/หลุม) และเพาะเลี้ยงที่ 37 องศาเป็นเวลา 4 ชั่วโมง วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 578 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านไมโครเพลท (Tecan, Infinite 50) ความมีชีวิตของเซลล์ในกลุ่มว่างถูกพิจารณา 100 เปอร์เซ็นต์

4.3. แบบจำลองภาวะขาดออกซิเจน/ออกซิเจน (H/R) และการบริหารยา

รุ่น 4.3.1.H/R

NazS, O4 ใช้เพื่อเลียนแบบสภาวะขาดออกซิเจน ซึ่งทำปฏิกิริยากับออกซิเจน [20] และลดความตึงเครียดของออกซิเจน ความเข้มข้นเจ็ดอย่างที่หลากหลายของ 0.5, 1, 2, 3, 4, 5 หรือ 6 มิลลิโมลาร์ถูกดำเนินการเพื่อกำหนดหาความเข้มข้นที่เหมาะสมที่สุดของ Na2S, O4 ในการเลือกเวลาขาดออกซิเจนที่เหมาะสม วัฒนธรรมของ 0.5, 1,2, 3 หรือ 4 ชั่วโมงถูกดำเนินการหลังการบำบัดด้วยสารละลาย Na2S2O4 ทำการเพาะเลี้ยงภายใต้ DMEM ปกติ/ตัวกลางที่มีกลูโคสสูงเป็นเวลา 0, 1, 2, 3 หรือ 4 ชั่วโมง เพื่อเลียนแบบเวลาในการเติมออกซิเจน [21]

4.3.2. องค์การยา

สำหรับการบริหารยา แอนาสแตติน A และ B และอนุพันธ์ของแอนาสแตติน (โครงสร้างทางเคมีในตารางที่ S1) ถูกแยกออกเป็นสองกลุ่ม: แอนาสแตติน A และอนุพันธ์ของแอนาสแตติน บี และอนุพันธ์ของแอนาสแตติน เรสเวอราทรอลซึ่งได้รับรายงานว่ามีฤทธิ์ป้องกันหัวใจผ่านฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ ถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวก เพื่อตรวจสอบความเข้มข้นของสารควบคุมเชิงบวก เรสเวอราทรอลและสารประกอบต้านอนุมูลอิสระอื่น กรดแกลลิก (3-100 ไมโครโมลาร์) ได้รับการประเมินโดยใช้การทดสอบ MTT ซึ่งเซลล์ได้รับการรักษาเป็นเวลา 48 ชั่วโมง 【 22】 โดยทั่วไป เซลล์ H9c2 ถูกปรับสภาพด้วยแอนาสแตติน A และ B และอนุพันธ์ของพวกมัน (10 uM ของความเข้มข้นสุดท้าย) รวมทั้ง resveratrol 10 uM เป็นเวลา 30 นาทีก่อนการบำบัดด้วย H/R

4.4.การประเมินความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระ

4.4.1. การทดสอบพลังสารต้านอนุมูลอิสระลดเฟอริก (FRAP)

การทดสอบ FRAP ดำเนินการตามวิธีของ Oivuan 【23】 รวม 25 ไมโครลิตรของโพแทสเซียมเฟอริไซยาไนด์ 1 เปอร์เซ็นต์ K3Fe (CN) 6 ถูกปิเปตและ 10 ไมโครลิตรของสารประกอบ 13, วิตามินซี (กรดแอสคอร์บิก, Vc) และเรสเวอราทรอล (0.{{8} } mM) บวก 1 × PBS (pH=6.6) ถูกเพิ่มเข้าไป ของผสมถูกเก็บไว้ในอ่างน้ำ 50 องศาเป็นเวลา 20 นาที ตามด้วยการทำให้เย็นลงอย่างรวดเร็ว จากนั้น 25 ไมโครลิตรของกรดไตรคลอโรอะซิติก 10 เปอร์เซ็นต์ （TCA）, เฟอริก คลอไรด์ 0.1 เปอร์เซ็นต์ （FeCl） และน้ำกลั่นถูกเติมตามลำดับ ของผสมถูกถ่ายโอนไปในจานหลุม 96-หลุมและการดูดกลืนแสงถูกวิเคราะห์ที่ 650 นาโนเมตร สารละลาย Vc (20-200 ug/mL) ถูกใช้เพื่อสร้างเส้นโค้งมาตรฐาน ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระคำนวณจากกราฟการปรับเทียบเชิงเส้นและแสดงเป็น Vc เทียบเท่า

4.4.2.วิธี ABTS

กิจกรรมกวาดล้าง ABTS [24] ดำเนินการตาม Sugahara et al. และ Re et al. สารละลาย ABTS ถูกเจือจางเพื่อปรับค่าการดูดกลืนแสงที่ 650 ของ 0.70±002 นาโนเมตร และกิจกรรมการกำจัด ABTS ถูกวัดตาม สูตรต่อไปนี้ E=((Acontrol-Ablank)-(A2 -A1)/(A control-Ablank))× 10 โดยที่ Control คือค่าการดูดกลืนแสงของปฏิกิริยากลุ่มควบคุมที่มี 130 μL ABTS · บวกสารละลายการทำงานและสารเจือจางตัวอย่าง 5.5 ไมโครลิตร (DMSO) และ Ablank คือค่าการดูดกลืนแสงของบัฟเฟอร์โซเดียมอะซิเตต 130μL และ DMSO 5.5 ไมโครลิตร A คือค่าการดูดกลืนแสงของ 130 ไมโครลิตรของ ABTS บวกกับสารละลายทำงาน (บัฟเฟอร์โซเดียมอะซิเตท) และ 5.5 ไมโครลิตรของสารประกอบ 13(0.02-20 มิลลิโมลาร์) และ Az คือค่าการดูดกลืนแสงของบัฟเฟอร์โซเดียมอะซิเตท 130μL และ 5.5 ไมโครลิตรของสารประกอบ 13 （ 0.02-20 มิลลิโมลาร์) ของผสมทั้งหมดถูกวอร์เท็กซ์เป็นเวลา 30 วินาทีและบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาที ตามด้วยการวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 650 นาโนเมตร ECs0 คำนวณโดยใช้ความสัมพันธ์เชิงเส้นตรงระหว่างความเข้มข้นของสารประกอบและความน่าจะเป็นของเปอร์เซ็นต์ของการยับยั้ง ABTS

4.5. Ischemia-Reperfusion Model

4.5.1.การดูแลสัตว์

หนู Sprague Dawley (SD) ได้มาจาก PLA Military Academy of Medical Sciences Laboratory Animal Center (ปักกิ่ง ประเทศจีน) หนู SD เพศผู้ 50 ตัวที่ชั่งน้ำหนักจาก {{0}} ก. ถูกปรับให้ชินกับสภาพแวดล้อมเป็นเวลาหนึ่งสัปดาห์ภายใต้อุณหภูมิห้องที่ 23 ± 1 องศาโดยมีวัฏจักรแสง/มืด 12 ชั่วโมง และให้อาหารและน้ำ หนูถูกแบ่งออกเป็นห้ากลุ่ม: กลุ่มว่าง (หนูไม่ได้รับการรักษายกเว้นการผ่าตัดหลอก), กลุ่มแบบจำลอง (หนูได้รับการรักษาด้วยกระสายยาและการผ่าตัด MI/R), กลุ่ม resveratrol (หนูได้รับสารเรสเวอราทรอล 200 มก./กก. และ MI/R การผ่าตัด), กลุ่มที่มีขนาดยาต่ำ 13 (หนูแรทได้รับการดำเนินการของสารประกอบ 13 และ MI/R 100 มก./กก.) และกลุ่มที่มีปริมาณยาสูง 13 กลุ่ม (หนูที่ได้รับการบำบัดด้วยสารประกอบ 13 และ MI/R 200 มก./กก.) สารประกอบถูกทำสูตรผสมในโซเดียมคาร์บอกซีเมทิลเซลลูโลส 0.5 เปอร์เซ็นต์และให้ยาเป็นสารแขวนลอยที่ 1 มล./กก. ทางปากวันละครั้งเป็นเวลาเจ็ดวัน การทดลองกับสัตว์ทั้งหมดได้ดำเนินการตามคำแนะนำของสถาบันสุขภาพแห่งชาติสำหรับการดูแลและการใช้สัตว์ทดลอง และได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการวิชาการของมหาวิทยาลัยวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีเทียนจิน

4.5.2. โปรโตคอลทดลอง

หนูแรท Sprague Dawley ได้รับการดมยาสลบด้วยยูรีเทน 20 เปอร์เซ็นต์ (0.8 มล./100 ก.) จากนั้นเราทำการผ่าตัดหัวใจขาดเลือดโดยการทำ ligation ทางซ้ายด้านหน้า (LAD) หัวใจถูกเปิดออกทางแผลที่ทรวงอกด้านซ้ายและวางบนไหมเย็บ 4-0 เพื่อทำการผ่าตัดขาดเลือดในระดับภูมิภาคเป็นเวลา 30 นาทีของภาวะขาดเลือดขาดเลือด ตามด้วยการให้เลือดกลับคืนสู่สภาพเดิม 2 ชั่วโมง หลักฐานของภาวะกล้ามเนื้อหัวใจขาดเลือดได้รับการยืนยันโดยความสูงของส่วน ST และการเพิ่มขึ้นของความกว้างของ QRS ในระหว่างการทดลอง หนูถูกเลี้ยงด้วยเครื่องช่วยหายใจ DW3000 (Beijing Zhishu Duobao Biological Technology Co. Ltd, Beijing, China) อัตราการเต้นของหัวใจและ ECG ได้รับการตรวจสอบผ่านระบบการรับสัญญาณทางชีวภาพ MD3000 (Beijing Zhishu Duobao Biological Technology Co. Ltd, Beijing, China) หลังจากเฝ้าติดตามกระบวนการขาดเลือด/การกลับเป็นเลือด หนูก็ถูกสังเวยและนำตัวอย่างเลือดและโฮโมจีเนตของหัวใจไปใช้ในการตรวจหาอาการบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจโดยใช้ชุดอุปกรณ์นักสืบเชิงพาณิชย์

4.5.3. TTC Staining และ HE Staining

ขอบเขตของพื้นที่ขาดเลือดถูกหาปริมาณโดยการย้อมสีไตรฟีนิล เตตราโซเลียม คลอไรด์ (TTC) ตัวอย่างหัวใจถูกแช่แข็งทันทีที่ {0}} องศา เป็นเวลา 10 นาที และทำชิ้นบาง 1 ถึง 2 มม. จำนวน 5 ชิ้น จากนั้น วางชิ้นใน 1 เปอร์เซ็นต์ TTCphosphate buffer(pH=7.0) และย้อมที่ 37 องศา เป็นเวลา 20 นาที และถูกตรึงในฟอร์มาลิน ได้ภาพโดยใช้กล้องดิจิตอล และวัดเปอร์เซ็นต์ของพื้นที่ infarcted (TTC-negative) และพื้นที่เสี่ยง (TTC-positive) โดยใช้ซอฟต์แวร์ ImageJ [25] สำหรับการย้อมสี HE บริเวณที่เกิดแผลพุพองถูกตัดออกและตรึงด้วยฟอร์มาลดีไฮด์ 10 เปอร์เซ็นต์แล้วฝังในพาราฟิน หลังจากนั้น เนื้อเยื่อถูกย้อมด้วย HE(ฮีมาทอกซิลิน-อีโอซิน) และตรวจดูด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง ส่วนฝังตัวแห้งและส่วนการปิดผนึกได้รับมอบหมายจาก Tianjin YiSheng Yuan Biotechnology Company (Tianjin, China)

4.6. Spectrophotometric Commercial Kits

ชุดเครื่องมือเชิงพาณิชย์ที่ใช้ในการวิจัยนี้ซื้อจาก Beijing Solarbio Science & Technology Co. Ltd. (ปักกิ่ง ประเทศจีน) และบริษัท Nanjing Jiancheng Bioengineering (หนานจิง ประเทศจีน) ในซีรัมของหนูและ supernatant ของเซลล์ เครื่องหมายการบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจ lactate dehydrogenase (LDH) ประเมินกิจกรรม creatine kinase(CK), glutathione(GSH) และ superoxide dismutase (SOD) กิจกรรม Malondialdehyde (MDA) ถูกวัดโดยใช้ rat heart homogenate ชุดอุปกรณ์เชิงพาณิชย์ทั้งหมดดำเนินการตามคำแนะนำของผู้ผลิต

4.7.กระบวนการทางสถิติ

การทดลองทั้งหมดทำซ้ำอย่างน้อยสามครั้ง ข้อมูลการทดลองประมวลผลโดยใช้ซอฟต์แวร์ GraphPad Prism7 และผลการทดลองของแต่ละกลุ่มแสดงเป็นค่าเฉลี่ย±ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน (x± s) การทดสอบ t-test ใช้เพื่อเปรียบเทียบนัยสำคัญทางสถิติระหว่างกลุ่มต่างๆ พี<0.05 was="" recorded="" as="" statistically="">

อ้างอิง

1. อุซเดนสกี้ AB; Demyanenko, S. Histone acetylation และ deacetylation ในโรคหลอดเลือดสมองตีบ เซลล์ประสาท. ความละเอียด 2564, 16, 1529–1530. [CrossRef] [PubMed]

2. หลี่เอช.; หยิน, A.; เฉิง Z.; ฮ, ม.; จางเอช.; ซู, เจ.; วัง, เอฟ.; Qian, L. การลดทอนสัญญาณการขยายสัญญาณ Na/K-ATPase/Src/ROS ด้วย pNaktide ช่วยฟื้นฟูอาการบาดเจ็บของกล้ามเนื้อหัวใจขาดเลือด อินเตอร์ เจ. ไบโอล. แมคโครโมล 2018, 118, 1142–1148. [CrossRef] [PubMed]

3. เลวิน อาร์เอ็ม; เซีย, L.; เหว่ย W.; ชูเลอร์ ซี.; เลกเก็ตต์, RE; Lin, ADY ผลของสปอร์ที่แตกเปลือกของเห็ดหลินจือต่อความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันของกระเพาะปัสสาวะกระต่ายโดยใช้แบบจำลองในร่างกายของการขาดเลือด/การกลับเป็นซ้ำ มล. เซลล์. ไบโอเคมี. 2017, 435, 25–35. [CrossRef] [PubMed]

4. ตาล Z.; หลิวเอช.; เพลง X.; หลิง ย.; เขาเอส.; ยัน, วาย.; ยาน เจ.; วังเอส.; วัง X .; Chen, A. Honokiol หลังการรักษาช่วยฟื้นฟูกล้ามเนื้อหัวใจขาดเลือด/อาการบาดเจ็บที่การกลับเป็นซ้ำโดยเพิ่มการไหลออกของ autophagic และลดการผลิต ROS ภายในเซลล์ เคมี. ไบโอล. มีปฏิสัมพันธ์. 2019, 307, 82–90. [CrossRef] [PubMed]

5. เฮาเซนลอย ดีเจ; Yellon, DM Myocardial ischemia-reperfusion trauma: เป้าหมายการรักษาที่ถูกละเลย เจ. คลิน. สำรวจ 2013, 123, 92–100. [ข้ามอ้างอิง]

6. Yu, C.; หลี่, ดี.; หลี่ซี.; ยู, D.; Zhai, G. ผลของ sacubitril/valsartan ต่อการอักเสบและความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันในแบบจำลองภาวะหัวใจล้มเหลวที่เกิดจาก doxorubicin ในกระต่าย แอคตา ฟาร์มาซูต. 2564, 71, 473–484. [ข้ามอ้างอิง]

7. วัง Y.; เช เจ.; จ้าว H.; ถังเจ.; Shi, G. Platycodin D ยับยั้งความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและการตายของเซลล์ในเซลล์คาร์ดิโอไมโอไซต์ H9c2 หลังจากได้รับบาดเจ็บจากการขาดออกซิเจน/ออกซิเจน ไบโอเคมี. ชีวฟิสิกส์ ความละเอียด คอมมูนิตี้ 2018, 503, 3219–3224. [ข้ามอ้างอิง]

8. Pavlovic, M.; BNáfrádi Rouster, P. นาโนคอมโพสิตเลียนแบบเอนไซม์ที่มีความเสถียรสูงในกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระ เจ. คอลลอยด์อินเทอร์เฟซวิทย์. 2019, 543, 174–182. [ข้ามอ้างอิง]

9. ฉี HZ; วังกี WZ; เขา JY ระบบต้านอนุมูลอิสระของ Deinococcus radiodurans ความละเอียด ไมโครไบโอล 2019, 171, 822–831. [ข้ามอ้างอิง]

10. Shao, L.; Shao, วาย.; Yuan, Y. Pinocembrin flavanone ยับยั้งการมีชีวิตของเซลล์ใน PC-3 มะเร็งต่อมลูกหมากของมนุษย์โดยการกระตุ้นการตายของเซลล์ การผลิต ROS และการหยุดวงจรของเซลล์ แอคตา ฟาร์มาซูต. 2564, 71, 669–678. [ข้ามอ้างอิง]