สารสกัดจากเอทานอลของเมล็ด Cucurbita Pepo L. ปรับเปลี่ยนการหยุดชะงักของระบบประสาทในหนูที่เครียดเรื้อรังและการแสดงออกของต่อมหมวกไตของเครื่องหมายการอักเสบและ HSP70

1ภาควิชาวิทยาศาสตร์พื้นฐาน, วิทยาลัยแพทยศาสตร์, มหาวิทยาลัย Princess Nourah Bint Abdulrahman (PNU), ริยาด, ซาอุดีอาระเบีย,

2ภาควิชาจุลกายวิภาคศาสตร์และชีววิทยาเซลล์ คณะแพทยศาสตร์ Mansoura University เมืองมันซูรา ประเทศอียิปต์

3แผนกจุลชีววิทยา คณะแพทยศาสตร์ Menoufia University, Shebin ElKoum, Egypt,

4ภาควิชาวิทยาศาสตร์การแพทย์ขั้นพื้นฐาน, วิทยาลัยแพทยศาสตร์และวิทยาศาสตร์การแพทย์ Unaizah, มหาวิทยาลัย Qassim, Buraydah, ซาอุดีอาระเบีย,

5ภาควิชาชีววิทยา คณะวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัย King Abdulaziz เมืองเจดดาห์ ประเทศซาอุดีอาระเบีย

6ภาควิชาเทคโนโลยีห้องปฏิบัติการทางการแพทย์ คณะวิทยาศาสตร์การแพทย์ประยุกต์ มหาวิทยาลัยตะบูก ตะบูก ซาอุดีอาระเบีย

7ภาควิชาชีวเคมี คณะวิทยาศาสตร์ King Abdulaziz University, Jeddah, Saudi Arabia,

8ภาควิชาจุลชีววิทยาและชีววิทยาเซลล์ คณะแพทยศาสตร์ Assuit University เมือง Asyut ประเทศอียิปต์

9Yousef Abdullatif Jameel ประธานของโปรแกรมการแพทย์พยากรณ์ (YAJCPMA), คณะแพทยศาสตร์, มหาวิทยาลัย King Abdulaziz, เจดดาห์, ซาอุดีอาระเบีย,

10ภาควิชาโลหิตวิทยา/มะเร็งในเด็ก, โรงพยาบาลมหาวิทยาลัย King Abdulaziz (KAUH), คณะแพทยศาสตร์, มหาวิทยาลัย King Abdulaziz, เจดดาห์, ซาอุดีอาระเบีย,

11ภาควิชาจุลการแพทย์ คณะแพทยศาสตร์ Damietta University, Damietta ประเทศอียิปต์

สำหรับข้อมูลเพิ่มเติม: ali.ma@wecistanche.com

พื้นหลัง:ฟักทอง (Cucurbita pepo L. ) ได้รับการอธิบายว่ามีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ ต้านการอักเสบ ต้านความเหนื่อยล้า และมีฤทธิ์เหมือนยากล่อมประสาท ดิต่อมหมวกไตเป็นอวัยวะที่ตอบสนองต่อความเครียดที่สำคัญซึ่งรักษาสภาวะสมดุลระหว่างความเครียด

วัตถุประสงค์:การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อประเมินประสิทธิภาพของการให้ Cucurbitaสารสกัด Pepo L. (CP) ในการบรรเทาการเปลี่ยนแปลงทางพฤติกรรม ชีวเคมี และโครงสร้างในต่อมหมวกไตเกิดจากการสัมผัสกับความเครียดที่ไม่รุนแรงเรื้อรังที่คาดเดาไม่ได้ (CUMS) และการสำรวจกลไกที่อยู่เบื้องหลังผลกระทบนี้ วัสดุและวิธีการ: หนูเผือกเพศผู้สี่สิบตัวถูกแบ่งออกเป็น 4 กลุ่ม (n-10): กลุ่มควบคุม, CUMS, กลุ่มที่ได้รับฟลูออกซิทีน และกลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วยซีพี การเปลี่ยนแปลงพฤติกรรม ระดับคอร์ติโคสเตอโรน โปร-การอักเสบของไซโตไคน์ TNF- และ IL-6 และโปรไฟล์สารออกซิแดนท์/สารต้านอนุมูลอิสระได้รับการประเมินในซีรัมเมื่อสิ้นสุดการทดลองต่อมหมวกไตต่อมได้รับการประมวลผลสำหรับการประเมินทางจุลพยาธิวิทยาและอิมมูโนฮิสโตเคมี การแสดงออกของยีนของแคสเปส-3 และ Ki67 และโปรตีนช็อกความร้อน 70 (HSP70) ถูกประเมินในต่อมหมวกไตโดยใช้ RT-PCR

ผลลัพธ์:สารสกัด CP ลดระดับคอร์ติโคสเตอโรนอย่างมีนัยสำคัญ (p < 0.001),เวลาที่เคลื่อนที่ไม่ได้ (p < 0.001)="" และการเปลี่ยนแปลงการอักเสบและการเกิดออกซิเดชันที่เกี่ยวข้องกับภาวะซึมเศร้าที่เกิดจาก="" cums="" เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มที่ไม่ได้รับการรักษา="" สารสกัด="" cp="" บรรเทา="" cums="">ต่อมหมวกไตการเปลี่ยนแปลงทางจุลพยาธิวิทยาและการตายของเซลล์ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (p < 0.001) และเพิ่มระดับสารต้านอนุมูลอิสระในซีรัมอย่างมีนัยสำคัญ

คำสำคัญ:ฟักทอง, ความเครียด, ซึมเศร้า, แคสเปส-3, ki67, Hsp70, อะพอพโทซิส

คลิกเพื่อดูขนาดยาของ cistanche tubulosa สำหรับต่อมหมวกไต

การแนะนำ

ผู้คนกว่า 264 ล้านคนในทุกช่วงอายุต้องทนทุกข์จากภาวะซึมเศร้าทั่วโลก (WHO, 2020) ผลงานของคนซึมเศร้าโดยทั่วไปจะแย่ที่โรงเรียน ที่ทำงาน และในครอบครัว อาการซึมเศร้าอาจนำไปสู่การฆ่าตัวตาย ดังนั้นจึงถือเป็นสาเหตุการตายอันดับสองใน 15- ถึง 29-ปี (WHO, 2020) สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมสามารถอยู่รอดจากเหตุการณ์ที่ตึงเครียดได้โดยการกระตุ้นการตอบสนองทางสรีรวิทยาที่เหมาะสมต่อเหตุการณ์เหล่านี้ ต่อมหมวกไตเป็นส่วนหนึ่งของแกน hypothalamic-pituitary-adrenocortical (HPA) และแกน sympathy-adrenomedullary ที่รักษาสภาวะสมดุลระหว่างความเครียด (Ulrich-Lai et al., 2006) มีรายงานว่าการสัมผัสกับความเครียดจากความร้อนส่งผลให้มีการแสดงออกอย่างรวดเร็วของ HSP70 ในเยื่อหุ้มสมองต่อมหมวกไต (Huang et al., 2001) โปรตีนเหล่านี้มีส่วนค้าขายภายในเซลล์ การนำเสนอแอนติเจน การตายของเซลล์ และการกระทำอื่น ๆ อีกมากมาย (Khar et al., 2001) มีการอธิบายไว้ว่าฮอร์โมนจากภายนอกหรือการรบกวนฮอร์โมนภายในร่างกาย ในช่วงเวลาสำคัญของการพัฒนา อาจส่งผลถาวรต่อวิถีทางสรีรวิทยาและพฤติกรรมที่ควบคุมโดยวงจรต่อมไร้ท่อไฮโปธาลามิก (Gore and Patisaul, 2010). นอกจากนี้ยังมีการอธิบายการหยุดชะงักของระบบประสาทต่อมไร้ท่อเพื่อขยายแนวความคิดของการหยุดชะงักของต่อมไร้ท่อเพื่อรวมความกว้างเต็มรูปแบบของสรีรวิทยาแบบบูรณาการ ดังนั้นจึงเป็นมากกว่าอารมณ์เสียของฮอร์โมน (Waye and Trudeau, 2011). การเปลี่ยนแปลงในการควบคุม neuroendocrine, เมแทบอลิซึม, และอาหาร/ microbiota ถือเป็นตัวกระตุ้นให้เกิดการอักเสบและความโน้มเอียงที่จะพัฒนาภาวะซึมเศร้า (Huang et al., 2019) มีการตั้งสมมติฐานว่าภาวะซึมเศร้าซึ่งเป็นหนึ่งในความผิดปกติของระบบประสาทและการอักเสบมีความสัมพันธ์แบบสองทาง ในขณะที่ภาวะซึมเศร้าส่งเสริมปฏิกิริยาการอักเสบ การอักเสบส่งเสริมความผิดปกติของระบบประสาทรวมถึงภาวะซึมเศร้า (Bauer และ Teixeira, 2019) Fluoxetine ซึ่งเป็นยากล่อมประสาทคลาสสิกเป็นหนึ่งในยาที่มีจำหน่ายในตลาดสำหรับการรักษาภาวะซึมเศร้า ตอนนี้ถือว่าเป็นสารก่อกวน neuroendocrine ที่เกิดขึ้นใหม่

ผลกระทบของ fluoxetine นี้เป็นผลข้างเคียง มากกว่าเป้าหมายหลักในการรักษาในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม (León-Olea et al., 2014) ดังนั้นจึงมีความจำเป็นสำหรับยากล่อมประสาทที่ปลอดภัยกว่าโดยไม่มีผลข้างเคียงต่อสถานะ neuroendocrine ฟักทอง (Cucurbita pepo L.) เป็นสายพันธุ์ที่มีความสำคัญทางเศรษฐกิจที่ปลูกทั่วโลก มีประโยชน์ทางโภชนาการและสุขภาพเนื่องจากอุดมไปด้วยฟีนอลิก ฟลาโวนอยด์ กรดอะมิโน คาร์โบไฮเดรต และวิตามิน (Wang et al., 2002) ผลการศึกษาวิจัยหลายชิ้นเปิดเผยว่าฟักทองมีฤทธิ์ทางชีวภาพอย่างกว้างขวาง เช่น ต้านเบาหวาน ต้านมะเร็ง สารต้านอนุมูลอิสระ ต้านการอักเสบ ต้านความเหนื่อยล้า และฤทธิ์คล้ายยากล่อมประสาท (Wang et al., 2012; Zhang et al., 2012; Nawirska-Olszańska et คณะ, 2013; Kim Nr et al., 2016). ยาแผนโบราณซึ่งส่วนใหญ่เป็นระบบอายุรเวทและยาจีนใช้ส่วนต่างๆ ของฟักทอง รวมทั้งเนื้อของผลไม้และเมล็ดพืช (Perez Gutierrez, 2016) ประสิทธิภาพของยากล่อมประสาทของ Sweetme Sweet Pumpkin (SSP) และ Cucurbita moschata Duch ได้รับการทดสอบก่อนหน้านี้ในการศึกษาในร่างกายโดยใช้แบบจำลองภาวะซึมเศร้าในสัตว์ทดลองที่เกิดจากการทดสอบการว่ายน้ำแบบบังคับ (FST) และเปรียบเทียบกับ fluoxetine (Kim Nr et al., 2016) . หนึ่งในบทวิจารณ์ล่าสุดสรุปว่าอาหารยากล่อมประสาท เช่น เมล็ดฟักทอง ได้รับการอธิบายว่ามีคะแนนอาหารยากล่อมประสาทที่ 47 เปอร์เซ็นต์ ซึ่งให้ผลเหมือนยากล่อมประสาท (Lachance and Ramsey, 2018) เมื่อเร็ว ๆ นี้ Dotto และ Chacha รับรองการดำเนินการศึกษาวิจัยในสัตว์และทางคลินิกเพิ่มเติมเพื่อยืนยันผลการเยียวยาของเมล็ดฟักทองต่อภาวะซึมเศร้า (Dotto and Chacha, 2020) รายงานเหล่านี้สนับสนุนให้ทดสอบประสิทธิภาพของฟักทองในการบรรเทาผลกระทบของความเครียดเรื้อรังต่อต่อมหมวกไต ดังนั้น การศึกษานี้จึงได้ดำเนินการเพื่อประเมินผลของการบริหารช่องปากของสารสกัด Cucurbita pepo L. (CP) ต่อการบรรเทาความเครียดที่ไม่รุนแรงเรื้อรังที่คาดเดาไม่ได้ (CUMS) ที่เกิดจากโครงสร้างทางพฤติกรรม ทางชีวเคมี และต่อมหมวกไต และเพื่อสำรวจกลไกเบื้องหลังผลกระทบนี้ .

วัสดุและวิธีการ

การสกัดและปริมาณฟักทอง

Cucurbita pepo L. (ตัวอย่างคูปอง: AQJ_95) ซื้อมาจากตลาดท้องถิ่นในเมืองเจดดาห์ ประเทศซาอุดีอาระเบีย พวกเขาถูกระบุในสมุนไพรของมหาวิทยาลัย King Abdulaziz โดยใช้ตัวอย่างของสมุนไพรและพืชของ KSA (Chaudhary, 2001) ตัวอย่างบัตรกำนัลถูกฝากไว้ในสมุนไพร CP ถูกระบุโดยผู้เขียนและได้รับการยืนยันโดยนักพฤกษศาสตร์จากคณะวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัย King Abdulaziz การสกัด CP ทำได้ตามการศึกษาก่อนหน้านี้ (Wang et al., 2012) ผลไม้ดิบที่มีเปลือกถูกตัดโดยใช้เครื่องสไลด์และทำให้แห้งโดยใช้เครื่องไลโอฟิไลเซอร์ (FD5508; ilShinBioBase Co., Ltd. ประเทศเกาหลี) จากนั้นบดโดยใช้เครื่องบดไฟฟ้า ผงถูกส่งผ่านตะแกรงตาข่าย40-เพื่อให้ได้ผงละเอียดและเก็บไว้ในภาชนะที่ปิดสนิท ผงแห้ง (50 กรัม) ผสมกับเอทานอล 80 เปอร์เซ็นต์ 450 มล. และทิ้งไว้ 1 วันที่ 37 องศาเซลเซียสในเชคเกอร์ (JSSI-100T; JS Research Inc., Compact Shaking Incubator., Korea) และ แล้วกรองด้วยผ้าฝ้ายและกระดาษกรองในวันที่สอง กระบวนการสกัดนี้ทำซ้ำสองครั้งที่ 37 องศาเพื่อให้ได้สารสกัดเอทานอล

การระบุองค์ประกอบของ CP

องค์ประกอบทางเคมีของ PE ถูกวิเคราะห์โดยใช้แก๊สโครมาโตกราฟีแบบติดตาม GC-TSQ Evo 8000 แมสสเปกโตรมิเตอร์ (Thermo Scientific, Austin, TX, United States) ด้วยคอลัมน์เส้นเลือดฝอยโดยตรง TG–5MS ( 30 ม. × 0.25 มม. × 0.25 ไมโครเมตร ความหนาของฟิล์ม) ตั้งอุณหภูมิเตาอบคอลัมน์ไว้ที่ 50 องศา และจากนั้นเพิ่มขึ้น 5 องศาเซลเซียส/นาที เป็น 250 องศาเซลเซียส และค้างไว้ 2 นาที จากนั้นจึงเพิ่มอุณหภูมิสุดท้ายเป็น 300 องศา 25 องศา/นาที และค้างไว้ 2 นาที อุณหภูมิหัวฉีดและสายถ่ายโอน MS ถูกเก็บไว้ที่ 270 และ 260 องศาเซลเซียสตามลำดับ ฮีเลียมถูกใช้เป็นก๊าซพาหะที่อัตราการไหลคงที่ 1 มล./นาที ความล่าช้าของตัวทำละลายคือ 4 นาที และตัวอย่างที่เจือจาง 3 ไมโครลิตรถูกฉีดโดยอัตโนมัติโดยใช้เครื่องเก็บตัวอย่างอัตโนมัติ AS1300 ควบคู่กับ GC ในโหมดแยกส่วนในหัวฉีด PTV EI มวลสเปกตรัมถูกรวบรวมที่แรงดันไฟฟ้าไอออไนซ์ 70 eV ในช่วง m/z 50–650 ในโหมดการสแกนแบบเต็ม อุณหภูมิแหล่งกำเนิดไอออนตั้งไว้ที่ 250 องศา ส่วนประกอบถูกระบุโดยการเปรียบเทียบมวลของพวกมันกับฐานข้อมูลมวลสาร WILEY 09 และ NIST 14 ที่ใช้ในการระบุและศึกษาองค์ประกอบทางเคมีของส่วนประกอบที่ไม่รู้จักในสารสกัดใดๆ (Wiley, 2006; Mikaia et al., 2014) การวิเคราะห์ดำเนินการในลักษณะเชิงคุณภาพโดยใช้ซอฟต์แวร์ Thermo Scientifific™ Xcalibur™ 2.2 และค่าทั้งหมดถูกรายงานเป็นเปอร์เซ็นต์สัมพัทธ์ (Abd El-Kareem et al., 2016)

การออกแบบทดลอง

การศึกษานี้ได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการจริยธรรมการวิจัยทางชีวการแพทย์ที่คณะแพทยศาสตร์ มหาวิทยาลัย King Abdulaziz, Jeddah, KSA (หมายเลขอ้างอิง {{0}}) ในการศึกษานี้ หนูเผือกเพศผู้สี่สิบตัวที่มีน้ำหนัก 150–200 กรัมและอายุ 2-3 เดือนได้รับจากศูนย์วิจัยการแพทย์ King Fahd (KFMRC) ก่อนเริ่มการทดลอง ปล่อยให้หนูปรับตัวให้ชินกับสภาพห้องปฏิบัติการเป็นเวลา 1 สัปดาห์ หนูสิบตัวได้รับมอบหมายให้เป็นกลุ่มควบคุมซึ่งถูกปล่อยทิ้งไว้โดยไม่ได้สัมผัสกับ CUMS หนูอีก 30 ตัวได้รับการผ่าตัด CUMS เป็นเวลา 4 สัปดาห์ ซึ่งรวมถึงตัวสร้างความเครียดประเภทต่างๆ ในช่วงเวลาต่างๆ ระหว่างวัน เพื่อป้องกันไม่ให้เกิดความเครียด ขั้นตอน CUMS ได้รับการอธิบายไว้อย่างครบถ้วนในผลงานก่อนหน้านี้ (Ayuob et al., 2016; Ali et al., 2017) และแสดงในตารางที่ 1 หนูที่สัมผัสกับ CUMS แบ่งออกเป็น 3 กลุ่ม (n 10) กลุ่มที่ไม่บำบัด (CUMS) ได้รับกระสายยา 0.03 เปอร์เซ็นต์คาร์บอกซีเมทิลเซลลูโลส (CMC-Na) โดยทางสายน้ำเป็นเวลา 2 สัปดาห์ กลุ่มที่ได้รับ FLU ได้รับ FLU (Dar Al Dawa Pharmaceuticals Co., Ltd., Amman, Jordan) ซึ่งเป็นยากล่อมประสาทที่ใช้สำหรับการตรวจสอบทางเภสัชวิทยา ละลายใน CMC-Na 0.03 เปอร์เซ็นต์ในขนาด 20 มก./กก. โดยวิธีตรวจกระเพาะอาหาร (Li และคณะ, 2014). กลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย CP ได้รับสารสกัด CP ที่ละลายในน้ำกลั่นในขนาด 100 มก./กก. โดยทางสายน้ำ เป็นเวลา 2 สัปดาห์ตามข้อมูลของ Wang et al (2012).

การประเมินการเปลี่ยนแปลงพฤติกรรม

FST ดำเนินการหลังจาก 4 สัปดาห์เพื่อยืนยันผลของ CUMS ต่อหนู (Ali et al., 2017) ในระหว่างการทดสอบ หนูแต่ละตัวถูกวางในภาชนะทรงกระบอกแก้ว (สูง 20 ซม. เส้นผ่านศูนย์กลาง 14 ซม.) ที่มีน้ำ 15 ซม. ที่อุณหภูมิ 25 ± 2 องศาเซลเซียส หนูถูกบันทึกวิดีโอเป็นเวลา 6 นาทีโดยใช้ซอฟต์แวร์แสดงพฤติกรรม (Noldus Information Technology, EthoVision XT®) และเวลาทั้งหมดที่ใช้ในการเคลื่อนที่ไม่ได้ในระหว่าง 6 นาทีนั้นวัดโดยช่างเทคนิคที่มองไม่เห็นกลุ่มทดลอง เวลาทั้งหมดเป็นวินาทีที่หนูใช้โดยไม่มีการเคลื่อนไหวของแขนขา ยกเว้นการเคลื่อนไหวเล็กน้อยที่จำเป็นเพื่อให้เมาส์ลอย "เวลาที่ไม่สามารถเคลื่อนที่ได้" ระหว่าง 6 นาทีจะถูกกำหนด

เทคนิคทางชีวเคมี

ยี่สิบสี่ชั่วโมงหลังจากเสร็จสิ้นการทดสอบพฤติกรรม ตัวอย่างเลือดถูกนำมาจากไซนัสในวงโคจรของหนูหลังจากได้รับยาสลบด้วยไอโซฟลูเรน 4 เปอร์เซ็นต์ (SEDICO Pharmaceuticals Company, Cairo, Egypt) ในออกซิเจน 100 เปอร์เซ็นต์ หลังจากนั้นหนูก็ถูกทำการุณยฆาตโดยปากมดลูกคลาดเคลื่อน ตัวอย่างเลือดถูกหมุนเหวี่ยงที่ 3,{5}} รอบต่อนาที เป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส เพื่อให้ได้ซีรัมและถูกเก็บไว้ที่ −18 องศาเซลเซียสสำหรับการประเมินทางชีวเคมี ระดับของคอร์ติโคสเตอโรน (ALPCO Diagnostics, Orangeburg, NY, United States) ได้รับการประเมินโดยใช้ชุดทดสอบอิมมูโนดูดซับที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ตามคำแนะนำของผู้ผลิต TNF- และ IL-6 (ระบบ Quantakin R&D, USA Kit) ได้รับการประเมินโดยใช้การทดสอบอิมมูโนดูดซับที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ ความหนาแน่นเชิงแสงของแต่ละตัวอย่างถูกกำหนดหาซ้ำกันด้วยเครื่องอ่าน ELISA แบบไมโครเพลทที่ตั้งค่าไว้ที่ 450 นาโนเมตร ชุดทดสอบสารทำปฏิกิริยากรด thiobarbituric (TBARS) (Biodiagnostic; Egypt) ถูกใช้เพื่อวัดระดับของ malondialdehyde (MDA) spectrophotometrically ที่ 535 nm (Gamal et al., 2018) ระดับของ superoxide dismutase (SOD) ถูกวัดโดยใช้ชุดทดสอบ SOD (Biodiagnostic; Egypt) (Packer, 2002) การประเมินระดับกลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส (GPX) ดำเนินการโดยใช้ชุดเครื่องมือ GPX (Randox Labs, Crumlin, สหราชอาณาจักร) ในการหาปริมาณกิจกรรมของ catalase (CAT) กราฟการสอบเทียบถูกสร้างขึ้นสำหรับการทดสอบและตัวอย่างทั้งหมด โดยใช้ชุดทดสอบ (Biodiagnostic; Egypt) วิธีการนี้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Gamal et al., 2018)

PCR แบบเรียลไทม์เชิงปริมาณ

การสกัดอาร์เอ็นเอจากตัวอย่างเนื้อเยื่อทำได้โดยใช้รีเอเจนต์ TriFast™ (PeqLab, Germany, Cat No.: {{0}}) ตามที่อธิบายไว้ในโปรโตคอลของผู้ผลิต ความเข้มข้นของ RNA ที่บริสุทธิ์ประเมินโดยใช้สเปกโตรโฟโตมิเตอร์ NanoDrop 2000c (Thermo Scientific สหรัฐอเมริกา) RNA ที่สกัดจากแต่ละตัวอย่างถูกคัดลอกย้อนกลับโดยใช้ชุดการสังเคราะห์ SensiFAST™ cDNA สำหรับ RT-qPCR (Bioline USA Inc., United States, Cat No.: BIO-65053) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต cDNA ที่สังเคราะห์ขึ้นถูกเก็บไว้ที่ -80 องศาจนกระทั่งนำไปใช้สำหรับ qRT-PCR ปฏิกิริยา qRT-PCR ดำเนินการโดยใช้ชุดอุปกรณ์ SensiFAST™ SYBR Lo-ROX (Bioline USA Inc., United States, Cat No.: BIO-94002) ​​บนระบบตรวจจับ PCR แบบเรียลไทม์ Applied Biosystems 7500 (เทคโนโลยีชีวิต , สหรัฐ). ไพรเมอร์เฉพาะยีนสำหรับหนูที่ใช้ในการศึกษานี้ ออกแบบโดยซอฟต์แวร์ Primer3 (v.0.4.0) และตรวจสอบความจำเพาะโดยใช้โปรแกรม NCBI/Primer-BLAST จากนั้นจึงซื้อไพรเมอร์จาก Willowfort™ (สหราชอาณาจักร) ไพรเมอร์คือ GAPDH (5′-TGCACCACCAACTGCTTAGC-3′, 5′-GGC ATGGACTGTGGTCATGAG-3′), caspase-3 (ไปข้างหน้า 5- TGT ATGCTTACTCTACCGCACCCG-3, ย้อนกลับ 5-GCGCAAAGT GACTGGATGAACC-3), HSP70 (5′-ACGAGGGTCAAGG GCAAG-3′, 5′-CTCTTTCTCAGCCAGCGTGTTAG-3′) Ki67 (ไปข้างหน้า 5-AGAAGAGCCCACAGCACAGAGAA-3 ย้อนกลับ 5-AGAAGAGCCCACAGCACACAGAGA 3) ของผสม PCR ถูกเตรียมดังนี้: 10 ไมโครลิตรผสม SensiFASTTM SYBR Lo-ROX, 0.8 ไมโครลิตรฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์, 0.8 ไมโครลิตรรีเวิร์สไพรเมอร์, 2 ไมโครลิตรแม่แบบ cDNA และ 6.4 ไมโครลิตรน้ำปราศจากนิวคลีเอส ส่วนผสมของปฏิกิริยาถูกถ่ายโอนไปยังวงจรความร้อนซึ่งถูกตั้งโปรแกรมไว้ก่อนหน้านี้ให้คงไว้ที่ 95 องศาเป็นเวลา 2 นาที ตามด้วย 40 รอบที่ 95 องศาเป็นเวลา 15 วินาที และจากนั้น 60 องศาเป็นเวลา 30 วินาที ปฏิกิริยากลุ่มควบคุมเชิงลบที่ไม่มีแม่แบบถูกเรียกใช้ในการทดสอบแต่ละครั้ง การวิเคราะห์เส้นโค้งหลอมเหลวได้ดำเนินการเพื่อพิสูจน์ความจำเพาะของผลิตภัณฑ์ PCR และได้ค่า Ct สำหรับแต่ละปฏิกิริยาจากแผนภาพการขยาย การหาปริมาณสัมพัทธ์สำหรับการแสดงออกของยีนแต่ละตัวในตัวอย่างเนื้อเยื่อคำนวณโดยใช้วิธีเกณฑ์เปรียบเทียบ (ΔΔCt) โดยมี GAPDH เป็นยีนควบคุมภายใน สำหรับการเปลี่ยนแปลงการพับโดยรวม คำนวณและทำเป็นเส้นตรงโดยสูตรเลขคณิต 2−ΔΔCt

เทคนิคทางเนื้อเยื่อ

เมื่อสิ้นสุดการทดลองและหลังจากที่หนูได้รับยาสลบแล้ว ช่องท้องก็เปิดออกและผ่าต่อมหมวกไตด้านขวาออก เพื่อให้ได้บล็อกพาราฟิน การตรึงต่อมหมวกไตในฟอร์มาลินที่บัฟเฟอร์เป็นกลาง 10 เปอร์เซ็นต์และกระบวนการเพิ่มเติมถูกดำเนินการ ส่วนของพาราฟินที่มีความหนา 4-μm ถูกเตรียมและย้อมด้วย hematoxylin และ eosin (H&E) นอกจากนี้ ส่วนพาราฟินอื่นๆ ถูกย้อมด้วยอิมมูโนฮิสโตเคมีโดยใช้เทคนิคสเตรปทาวิดิน-ไบโอติน-เปอร์ออกซิเดส สไลด์ถูกบ่มข้ามคืนที่ 4 องศา และจากนั้นพวกมันถูกบ่มด้วยโมโนโคลนัลแอนติ-Ki67 (ดาโก ไซโตเมชั่น สหรัฐอเมริกา ที่การเจือจาง 1:1,000) ​​สำหรับการสาธิตการเพิ่มจำนวนเซลล์ นอกจากนี้ แอนติบอดีโพลีโคลนัลแอนติ-caspase-3 (เทคโนโลยีชีวภาพซานตาครูซ สหรัฐอเมริกา ที่การเจือจาง 1:1,000) ถูกใช้สำหรับการตรวจหาอะพอพโทซิส โพลีโคลนัลแอนติบอดีต้านโปรตีนช็อตด้วยความร้อน-70 (HSP70) (ดาโก, คาร์พินเทเรีย, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา, ที่การเจือจาง 1:1,000) ยังถูกใช้อีกด้วย ใช้แอนติบอดีทุติยภูมิคอนจูเกตที่คอนจูเกตด้วยไบโอตินที่เกี่ยวข้องจากระบบการย้อมสีดาโก สไลด์ที่ย้อมด้วยแอนติบอดีทุติยภูมิถูกใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบเท่านั้น นิวเคลียสถูกย้อมด้วย hematoxylin การย้อมสีไซโตพลาสซึมสีน้ำตาลถือเป็นปฏิกิริยาเชิงบวก ส่วนที่เปื้อนถูกตรวจสอบและถ่ายภาพโดยใช้กล้องจุลทรรศน์โอลิมปัส BX-51 (Olympus) ที่เชื่อมต่อกับกล้องดิจิตอลและคอมพิวเตอร์ การวิเคราะห์เชิงกึ่งปริมาณของอิมมูโนรีแอคทีฟต่อภูมิคุ้มกันทำได้โดยซอฟต์แวร์วิเคราะห์ภาพ Pro Plus พื้นที่ร้อยละของปฏิกิริยาภูมิคุ้มกันได้รับการประเมินใน 30 สนามที่กำลังขยาย × 400 เซลล์บวกถูกนับต่อพื้นที่ 1.0 mm2 ตามที่อธิบายโดย Zhou et al (2016). มีการตรวจสอบอย่างน้อยห้าฟิลด์จากแต่ละสไลด์และคำนวณค่าเฉลี่ยสำหรับสัตว์แต่ละตัว สำหรับการวิเคราะห์ทางสัณฐานวิทยา มีการตรวจสอบสี่ส่วนในสัตว์แต่ละตัว (กำลังขยาย ×100) ความหนาของโซนต่าง ๆ ของต่อมหมวกไตวัดเป็นไมโครเมตร ความหนาของต่อมหมวกไตได้มาจากการวัดระยะห่างระหว่างไขกระดูกและแคปซูลต่อมหมวกไตในแนวเส้นตรง การวัดหนึ่งครั้งจะทำในแต่ละด้านของเยื่อหุ้มสมองต่อมหมวกไต

การวิเคราะห์ทางสถิติ

ผลลัพธ์

ผลพฤติกรรม

ผลการวิเคราะห์สารสกัด CP โดยใช้ GC-MS

การประเมินทางชีวเคมี

ระดับคอร์ติโคสเตอโรนในเซรั่ม

ระดับคอร์ติโคสเตอโรนเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (p < {{0}}.001) ในหนูที่ไม่ได้รับการรักษาที่สัมผัสกับ CUMS เมื่อเทียบกับหนูที่ได้รับการควบคุม ในขณะที่หนูที่ได้รับการรักษาด้วย FLU และ CP มีการลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (p < 0.001) ในระดับคอร์ติโคสเตอโรนในซีรัม

ระดับ TNF- และ IL-6 ในเซรั่ม

ระดับ MDA, SOD, GPX และ CAT ในเซรั่ม

การแสดงออกของยีน Ki67, Caspase-3 และ HSP70

RT-PCR เผยให้เห็นการแสดงออกของยีน Ki67 ที่สูงอย่างไม่มีนัยสำคัญในต่อมหมวกไตของกลุ่ม CUMS เมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม ในขณะที่กลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย FLU และ CP มีการแสดงออกที่สูงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่มที่สัมผัส CUMS (รูปที่ 3E ) . เกี่ยวกับ caspase-3 การแสดงออกของยีนเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (p < 0.001)="" ในต่อมหมวกไตของกลุ่ม="" cums="" เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุม="" ในขณะที่="" flu-="" และ="" กลุ่มที่ได้รับ="" cp="" แสดงให้เห็นการลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับกลุ่มที่ได้รับ="" cums="" (รูปที่="" 3f="" เมื่อพูดถึงการแสดงออกของยีน="" hsp70="" พบว่ามีระดับต่อมหมวกไตในกลุ่ม="" cums="" ที่สูงกว่าอย่างมีนัยสำคัญ="" (p="">< 0.001)="" กลุ่มควบคุม="" ในขณะที่กลุ่มที่ได้รับการรักษาด้วย="" flu="" และ="" cp="" มีการลดลงเล็กน้อยเมื่อเทียบกับกลุ่มที่สัมผัส="" cums="" (รูปที่="">

การประเมินทางจุลพยาธิวิทยา

อภิปรายผล

เห็นได้ชัดว่าสังคมสมัยใหม่เต็มไปด้วยความเครียดที่อาจเกิดขึ้นจากปัญหาในชีวิตประจำวัน การดูแลสุขภาพ และปัญหาที่เกี่ยวข้องกับงาน แรงกดดันเหล่านี้อาจทำให้เกิดความผิดปกติที่เรียกว่าความเครียดได้ (Clayton and Mccance, 2014). ในการศึกษานี้ สารสกัดเอธานอลจากเนื้อและเปลือกของ Cucurbita pepo L. ถูกใช้เพื่อตรวจสอบศักยภาพในการบรรเทาพฤติกรรมซึมเศร้าที่เกิดจาก CUMS และผลกระทบต่อต่อมหมวกไต สิ่งนี้ได้รับการพิสูจน์โดย a

ระดับคอร์ติโคสเตอโรนในซีรัมเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ และตรวจสอบโดยระยะเวลาที่ไม่สามารถเคลื่อนไหวได้เป็นเวลานานในช่วง FST การค้นพบนี้สอดคล้องกับรายงานก่อนหน้านี้ (Tang et al., 2015) มีรายงานว่าทั้ง TNF- และ IL-6 เกี่ยวข้องกับการเกิดโรคของภาวะซึมเศร้า (Taraz et al., 2015; Pedraz-Petrozzi et al., 2020) มีรายงานว่าหนูที่ขาด IL-6 หรือตัวรับ TNF นั้นดื้อต่อพฤติกรรมซึมเศร้า (Viana et al., 2010) ดังนั้น พวกเขาจึงได้รับการประเมินในการศึกษานี้ และพบว่าทั้ง TNF- และ IL-6 เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในซีรัมของหนูที่สัมผัสกับ CUMS เป็นเวลา 4 สัปดาห์ ซึ่งบ่งชี้ว่ามีอาการซึมเศร้า การค้นพบนี้ได้รับการสนับสนุนโดย Numakawa et al (2014) ในหนูที่มีพฤติกรรมสิ้นหวังและโดย Taraz et al. (2015) ในผู้ป่วยโรคซึมเศร้า. ในการศึกษานี้ การบริหารสารสกัดจากฟักทองมีความสัมพันธ์กับการเยียวยาพฤติกรรมซึมเศร้า โดยเห็นได้จากการลดเวลาที่ไม่สามารถเคลื่อนที่ได้ของ FST อย่างมีนัยสำคัญ และได้รับการยืนยันโดยการลดอย่างมีนัยสำคัญของคอร์ติโคสเตอโรนและไซโตไคน์ที่ทำให้เกิดการอักเสบ TNF- และ IL-6 ใน ซีรั่ม การค้นพบนี้ได้รับการสนับสนุนโดย Kim Nr et al (2016) ผู้รายงานว่า SSP เป็นเวลา 28 วันลดระดับของ cytokines ที่ทำให้เกิดการอักเสบในหนูที่เป็นโรคซึมเศร้า

ฤทธิ์ต้านการอักเสบของฟักทองอาจเนื่องมาจากสารออกฤทธิ์ของฟักทอง เช่น กรดโอเลอิกและปาลมิติก และเอสตราไดออล การปรับลดกรดโอเลอิก กรดปาลมิติก และกรดลิโนเลอิกถูกอธิบายไว้ในภาวะซึมเศร้า (Conklin et al., 2010; Martín et al., 2010) มีรายงานว่าการป้องกันระบบประสาทที่อาศัยกรดโอเลอิกเชื่อมโยงกับฤทธิ์ต้านการอักเสบโดยอาศัยการกระตุ้นด้วยแกมมา (PPAR- ) ที่กระตุ้นด้วยเปอร์รอกซิโซม proliferator (Song et al., 2019) นอกจากนี้ ยังมีรายงานว่ากรดปาลมิติกยับยั้งฟอสโฟไลเปส A(2) ดังนั้นจึงถือว่าเป็นสารต้านการอักเสบ (Aparna et al., 2012) Estradiol เป็นหนึ่งในสารประกอบของฟักทองที่ตรวจพบในการศึกษานี้ มีรายงานว่า Estradiol กระตุ้นฤทธิ์ต้านการอักเสบและบรรเทาพฤติกรรมซึมเศร้าในเวลาต่อมา (Xu et al., 2015) กลไกอีกประการหนึ่งที่ estradiol สามารถกระตุ้นผลยากล่อมประสาทคือการควบคุมการแสดงออกของปัจจัย neurotrophic ที่ได้รับจากสมอง (BDNF) และ ERK phosphorylation โดยการกระตุ้น ER- ในสมอง (Yang et al., 2010) ในการศึกษานี้ ระดับซีรั่มของ MDA เพิ่มขึ้น ในขณะที่ระดับ SOD, GPX และ CAT ลดลงในหนูที่ได้รับ CUMS การเปลี่ยนแปลงที่คล้ายคลึงกันได้รับการบันทึกไว้หลังจากการสัมผัสกับ CUMS ในการศึกษาก่อนหน้านี้ และพวกเขาเสริมว่าการเปลี่ยนแปลงทางชีวเคมีเหล่านี้ส่งผลให้เกิดความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชันและการด้อยค่าของ HPA (Nabavi et al., 2015) Liu T. และคณะ (2015) ยังรายงานด้วยว่าการพัฒนาของภาวะซึมเศร้าอาจเนื่องมาจากสารต้านอนุมูลอิสระในร่างกายมีปริมาณต่ำ

มีการรายงานคุณสมบัติต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดจากผลฟักทองบ่อยครั้ง (Bahramsoltani et al., 2017) นอกจากนี้ ยังมีรายงานว่าเนื้อและเปลือกของ Cucurbita pepo L. มีฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระที่สูงกว่าส่วนอื่นๆ เช่น เมล็ดพืช (Oyeleke et al., 2019) ในการศึกษาก่อนหน้านี้หลายครั้ง การบริหารสารสกัดจากฟักทองทำให้ระดับ SOD และ GPX เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ และลด MDA ในซีรัมของหนู (Guo-Hua et al., 2000; Dang, 2004) และผลกระทบนี้ได้รับการบันทึกไว้ในการศึกษานี้ด้วย ดังนั้นฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของฟักทองจึงอาจอยู่เบื้องหลังผลยากล่อมประสาทในการศึกษานี้ ซึ่งสอดคล้องกับข้อสังเกตของ Kim Nr et al (2016). มีรายงานว่าผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติที่มีฤทธิ์ต้านการอักเสบ สารต้านอนุมูลอิสระ และต่อต้านความเหนื่อยล้าก็มีผลคล้ายยากล่อมประสาท (Jeong et al., 2015) กิจกรรมก่อนหน้านี้ทั้งหมดได้รับการพิสูจน์ในฟักทอง การเพิ่มขึ้นของ cytoplasmic vacuolation ของเซลล์เยื่อหุ้มสมองต่อมหมวกไตที่สังเกตได้ในกลุ่ม CUMS ในการศึกษานี้อาจเนื่องมาจากความต้องการลิปิดที่เพิ่มขึ้น ซึ่งเป็นรากฐานที่สำคัญสำหรับการสังเคราะห์คอร์ติซอล Cigankova และคณะ (2005) สังเกตว่าไฮเปอร์ไดนามิกในการทดลองที่ยาวนานส่งผลให้เกิดการรวมตัวของหยดลิปิดไซโตพลาสซึมหลายหยดของเซลล์คอร์เทกซ์ หยดไขมันเหล่านี้มีคอเลสเตอรอลซึ่งเป็นสารตั้งต้นหลักในการสังเคราะห์ฮอร์โมนสเตียรอยด์

อย่างไรก็ตาม Koldysheva และ Lushnikova (2008) รายงานว่าความเครียดส่งผลให้หยดไขมันในเซลล์ของต่อมหมวกไตลดลงอย่างมีนัยสำคัญ โดยเฉพาะ ZF (Koldysheva and Lushnikova, 2008) มีการอธิบายว่าเมื่อสัมผัสกับความเครียดทางกายภาพ สิ่งกระตุ้นความเจ็บปวดจะถูกส่งไปยังไฮโปทาลามัส ส่งผลให้มีการหลั่ง CRH เข้าสู่ระบบพอร์ทัล hypophyseal ซึ่งเพิ่มการหลั่ง ACTH และกระตุ้นตัวรับใน ZF และ ZR เพื่อเพิ่มการหลั่งคอร์ติซอล (Patti et al. , 2018). ก่อนหน้านี้มีรายงานแคปซูลต่อมหมวกไตหนาและ trabeculae ที่พบในหนูที่สัมผัส CUMS (El-Desouki et al., 2011; Altayeb และ Salem, 2017) อันเป็นผลมาจากการสังเคราะห์คอลลาเจนที่เพิ่มขึ้นโดยไฟโบรบลาสต์เมื่อสัมผัสกับความเครียดจากการตรึง เซลล์จำนวนมากในต่อมหมวกไตของหนูทดลองที่สัมผัส CUMS แสดงนิวเคลียสที่มีคราบฝังลึก ซึ่งบ่งชี้ว่าพวกเขาได้รับการตายของเซลล์ซึ่งได้รับการยืนยันโดย caspase-3 การย้อมสีอิมมูโนฮิสโตเคมี Altayeb และ Salem, (2017) รายงานข้อสังเกตที่คล้ายกัน ขณะที่พวกเขากำลังศึกษาผลกระทบของความเครียดจากการตรึงที่ต่อมหมวกไตของหนู Liu Q. และคณะ (2015) รายงานว่าความเครียดออกซิเดชันที่มากเกินไป ซึ่งเห็นได้ชัดหลังจากสัมผัสกับ CUMS ในการศึกษานี้ ปรับเปลี่ยนระดับการแสดงออกของ "ยีนที่เกี่ยวข้องกับการตายของเซลล์" และกระตุ้นการตายของเซลล์และการเสื่อมสภาพผ่านเส้นทางการส่งสัญญาณของ Bcl-2, Bax และ caspase -3. กลไกนี้ได้รับการยืนยันในการศึกษานี้โดย RT-PCR ซึ่งเผยให้เห็นการควบคุมการแสดงออกของยีน caspase-3 ที่เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ

ในการทบทวนวรรณกรรม ไม่มีผลโดยตรงของ Cucurbita pepo ต่อ caspase-3–mediated apoptosis ในเนื้อเยื่อต่างๆ ดูเหมือนว่าการลดลงของแคสเปส-3–เซลล์ apoptotic บวกที่ตรวจพบในต่อมหมวกไตมีสาเหตุมาจากฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ Cucurbita pepo ที่บันทึกไว้ในการศึกษานี้ สิ่งนี้ได้รับการสนับสนุนโดยการศึกษาก่อนหน้านี้จำนวนมากที่ดำเนินการเกี่ยวกับพืชและสมุนไพรอื่นๆ ที่มีกิจกรรมต้านอนุมูลอิสระที่สำคัญ (Banagozar Mohammadi et al., 2019; Ghazizadeh et al., 2020) การศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าการสัมผัสกับ CUMS ช่วยเพิ่ม Ki67- เซลล์บวกในเยื่อหุ้มสมองต่อมหมวกไตซึ่งเห็นได้ชัดเจนใน ZF ซึ่งบ่งชี้ว่ามีการเพิ่มจำนวนเซลล์ที่เพิ่มขึ้น และเป็นผลให้ความหนาของชั้นนี้เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ ในทางกลับกัน จำนวนเซลล์ Ki67-การงอกขยายที่เป็นบวกลดลงอย่างไม่มีนัยสำคัญในไขกระดูกเพื่อตอบสนองต่อ CUMS การสังเกตเหล่านี้สอดคล้องกับการสังเกตของ Ulrich-Lai et al (2006) ซึ่งรายงานการเพิ่มขึ้นของ Ki67-นิวเคลียสของเซลล์ที่เป็นบวกเฉพาะใน ZF ด้านนอกหลังจากได้รับความเครียดจากตัวแปรเรื้อรังเท่านั้น ในขณะที่ไขกระดูกแสดงการเจริญเติบโตมากเกินไปของเซลล์และไม่ใช่การเกิด hyperplasia นอกจากนี้ Laborie et al., (2003) รายงานว่าการทำงานของไขกระดูกเพิ่มขึ้นโดยทั่วไปหลังจากได้รับความเครียดเรื้อรัง

บ่งบอกว่าความเครียดเรื้อรังอาจนำไปสู่การเจริญเติบโตมากเกินไปของไขกระดูก ในการศึกษานี้ การบริหารสารสกัดจากฟักทองช่วยเพิ่มการงอกขยายของเซลล์อย่างเห็นได้ชัด โดยการเพิ่มการควบคุมของยีน Ki67 และการแสดงออกทางภูมิคุ้มกันในเกือบทุกโซนและไขกระดูกของต่อมหมวกไตเมื่อเทียบกับ CUMS สิ่งนี้อธิบายความหนาที่เพิ่มขึ้นของโซนต่อมที่บันทึกไว้ในการศึกษานี้ นอกจากนี้ยังอาจชดเชยผล apoptotic ที่เกิดจากการสัมผัสกับ CUMS การค้นพบนี้ได้รับการสนับสนุนโดย Kim Hy et al (2016) ซึ่งรายงานการปรับขึ้นอย่างมีนัยสำคัญของการแสดงออกของ mRNA ของ Ki67 และการเพิ่มจำนวนของเซลล์ม้ามที่แยกได้จากม้ามของหนู BALB/c ที่ได้รับการรักษาด้วย SSP, สตรีม และ Cucurbita moschata Duch และองค์ประกอบหลักคือ -carotene ในการศึกษานี้ การสัมผัสกับ CUMS ช่วยเพิ่มการแสดงออกของยีนและการแสดงภูมิคุ้มกันของ HSP70 ในทุกโซนของต่อมหมวกไต เพื่อให้สอดคล้องกับสิ่งนั้น Zheng และคณะ (2008) ยังพิสูจน์ด้วยว่าการแสดงออกของ HSP70 ที่เพิ่มขึ้นหลังจากการสัมผัสกับสภาวะที่ตึงเครียดจะปรับการตอบสนองการอักเสบโดยการยับยั้งการกระตุ้นปัจจัยการถอดรหัสการอักเสบซึ่งเป็นปัจจัยนิวเคลียร์ - คัปปา B (NF-kappaB) นอกจากนี้ HSP70 อาจรบกวนการตายของเซลล์และเนื้อร้ายโดยตรง (Yenari et al., 2005) ล่าสุด Li et al. (2019) รายงานการเพิ่มขึ้นของการแสดงออกของ HSP70 ในเนื้อเยื่อต่อมหมวกไตของสุกรหลังจากได้รับความเครียดจากความร้อน ซึ่งบ่งชี้ถึงบทบาทของ HSP70 ในการบาดเจ็บของต่อมหมวกไตและเน้นความเกี่ยวข้องกับการตอบสนองการอักเสบ

การเหนี่ยวนำอย่างรวดเร็วของ HSP70 เพื่อตอบสนองต่อความเครียดถือเป็นสิ่งสำคัญต่อกระบวนการปกป้องเซลล์ ในการศึกษาของเรา การรักษาหนูที่สัมผัสกับ CUMS ด้วยฟักทองนั้นสัมพันธ์กับการลดการแสดงออกของ HSP70 ที่ไม่มีนัยสำคัญซึ่งเกี่ยวข้องกับการตายของเซลล์ที่ลดลงและการตอบสนองต่อการอักเสบ สิ่งนี้อาจชี้ให้เห็นถึงผลประโยชน์ของระดับ HSP70 ที่ค่อนข้างสูงซึ่งเหนี่ยวนำโดยทั้ง FLU และ CP เนื่องจากส่งผลให้มีการลดลงของแคสเปส-3 – การตายของเซลล์และการปล่อยไซโตไคน์ที่ทำให้เกิดการอักเสบ ถึงแม้ว่าผลของฟักทองต่อกลุ่มโปรตีนช็อตจากความร้อนจะไม่ได้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ แต่กรดโอเลอิกซึ่งเป็นองค์ประกอบหลักของฟักทองที่ใช้ในการศึกษานี้ ได้รับการอธิบายเพื่อลดการแสดงออกของ HSP60 ในเซลล์ T lymphocyte ของมนุษย์ (Martins De Lima et al., 2004) ซึ่งสนับสนุนการค้นพบการศึกษาของเรา กลไกการออกฤทธิ์ของ Cucurbita pepo ที่เสนอในฐานะสารคล้ายยากล่อมประสาท สรุปไว้ในรูปที่ 7 ท่ามกลางข้อจำกัดของการศึกษาครั้งนี้คือการไม่สามารถตรวจสอบกลไกเชิงลึกของผลของยากล่อมประสาทของ CP เพิ่มเติมได้ ดังนั้นการศึกษาเพิ่มเติมคือ ส่งเสริมให้ทำเช่นนั้น โดยสรุป การศึกษานี้ให้หลักฐานทางวิทยาศาสตร์เป็นพื้นฐานเกี่ยวกับประสิทธิภาพของสารสกัด Cucurbita pepo L. ในการบรรเทาการเปลี่ยนแปลงทางพฤติกรรมและชีวเคมีที่เกิดจาก CUMS รวมทั้งผลกระทบทางจุลพยาธิวิทยาต่อต่อมหมวกไต ผลกระทบเหล่านี้เห็นได้ชัดจากการปรับลดการตายของเซลล์อะพอพโทซิสและการแสดงออกของ HSP70 และดูเหมือนว่าจะเป็นสื่อกลางผ่านฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระและฤทธิ์ต้านการอักเสบของสารสกัด Cucurbita pepo L. แม้ว่าการศึกษานี้และการศึกษาเมื่อเร็วๆ นี้บางส่วนได้บันทึกถึงผลคล้ายยากล่อมประสาทของ Cucurbita pepo และสำรวจกลไกของมันแล้ว แต่จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมรวมถึงการศึกษาทางคลินิกเพื่อยืนยันผลกระทบนี้ในมนุษย์

นี่คือผลิตภัณฑ์ป้องกันความเมื่อยล้าของเรา! คลิกที่ภาพเพื่อดูข้อมูลเพิ่มเติม!

ข้อมูลอ้างอิง

Abd-El-Kareem, MSMA, Rabbih, MAEF, Selim, ETM, Elsherbiny, EAE-M. และ El-Khateeb, AY (2016) การประยุกต์ใช้ GC/EIMS ร่วมกับการคำนวณกึ่งเชิงประจักษ์เพื่อระบุและตรวจสอบส่วนประกอบที่ระเหยง่ายบางชนิดในน้ำมันหอมระเหยโหระพา

Altayeb, Z. และ Salem, M. (2017). การศึกษาด้วยกล้องจุลทรรศน์แสงและอิเล็กตรอนต่อผลของความเครียดจากการตรึงต่อเยื่อหุ้มสมองต่อมหมวกไตของหนูที่โตเต็มวัยและบทบาทการแก้ไขที่เป็นไปได้ของวิตามิน EJ Med มิญชวิทยา 1, 44–56.

Aparna, V. , Dileep, KV, Mandal, PK, Karthe, P. , Sadasivan, C. , และ Haridas, M. (2012) คุณสมบัติต้านการอักเสบของกรด N-Hexadecanoic: หลักฐานโครงสร้างและการประเมินจลนศาสตร์ เคมี. ไบโอล. ยาเดส 80, 434–439.

Bahramsoltani, R. , Farzaei, MH, Abdolghaffari, AH, Rahimi, R. , Samadi, N. , Heidari, M. , et al. (2017). การประเมินฤทธิ์ไฟโตเคมิคอล สารต้านอนุมูลอิสระ และการรักษาบาดแผลของเปลือกผลไม้ Cucurbita Moschata Duchesne อิหร่าน J. Basic Med วิทย์. 20, 798–805. ดอย:10.22038/ IJBMS.2017.9015

Banagozar Mohammadi, A., Torbati, M., Farajdokht, F., Sadigh-Eteghad, S., Fazljou, SMB, Vatandoust, SM, et al. (2019). Sericin บรรเทาความเครียดที่เกิดจากความยับยั้งชั่งใจ - พฤติกรรมคล้ายอาการซึมเศร้าและวิตกกังวลผ่านการปรับความเครียดจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน การอักเสบของเส้นประสาท และการตายของเซลล์ในเยื่อหุ้มสมองส่วนหน้าและสมองส่วนฮิบโปแคมปัส

Bauer, ME และ Teixeira, AL (2019) การอักเสบในความผิดปกติทางจิตเวช: อะไรมาก่อน? แอน. เอ็น.วาย. วิทย์. 1437, 57–67.

เชาดารี, เอส. (2001). พืชแห่งราชอาณาจักรซาอุดิอาระเบีย: ภาพประกอบริยาด: กระทรวงเกษตรและน้ำ, สมุนไพรแห่งชาติ, ศูนย์วิจัยการเกษตรและน้ำแห่งชาติ, 2. ริยาด: กายวิภาคศาสตร์และสัณฐานวิทยา.

Cigankova, V. , Zibrin, M. , Bod A, K. และ Holovska, K. (2005) ผลของการทดลองไฮโปไดนามิกระยะยาวต่อต่อมหมวกไตของนกกระทาญี่ปุ่น: และการศึกษาโครงสร้างพื้นฐาน สถาบันสัตวแพทยศาสตร์ PULAWY 49, 449.

Clayton, M. , และ Mccance, K. (2014) "ความเครียดและโรค" ในวิชาพยาธิสรีรวิทยา พื้นฐานทางชีววิทยาสำหรับโรคในผู้ใหญ่และเด็ก บรรณาธิการ K. Mccance, S. Huether, V. Brashers และ N. Rote ฉบับที่ 7 (สหรัฐอเมริกา: แคนาดา เอลส์เวียร์).

Conklin, SM, Runyan, CA, Leonard, S., Reddy, RD, Muldoon, MF และ Yao, JK (2010) การเปลี่ยนแปลงที่เกี่ยวข้องกับอายุของกรดไขมันไม่อิ่มตัวเชิงซ้อน N-3 และ N-6 ในคอร์เทกซ์ Cingulate ล่วงหน้าของบุคคลที่มีโรคซึมเศร้า พรอสตาแกลนดิน ลิวค็อต. เอสเซนท์ กรดไขมัน 82, 111–119.

Doron, R. , Lotan, D. , Versano, Z. , Benatav, L. , Franko, M. , Armoza, S. , et al. (2014). การรักษาด้วยยา Escitalopram หรือส่วนผสมของสมุนไพรแบบใหม่ในระหว่างหรือหลังการสัมผัสกับความเครียด ช่วยลดพฤติกรรมที่คล้ายกับความวิตกกังวลผ่านการปรับเปลี่ยน Corticosterone และ BDNF

Dotto, JM และ Chacha, JS (2020) ศักยภาพของเมล็ดฟักทองในฐานะส่วนผสมของอาหารที่มีประโยชน์: บทวิจารณ์ วิทยาศาสตร์ Afr. 10, e00575.

Duke, JA (1992). คู่มือองค์ประกอบพฤกษเคมีของสมุนไพร GRAS และพืชเศรษฐกิจอื่น ๆ [ออนไลน์]. โบกา เรตัน: FL: CRC Press.

El-Desouki, N. , El-Refaiy, A. , Abdel-Azeem, H. , และ El-Baely, M. (2011) การศึกษาทางเนื้อเยื่อวิทยาและโครงสร้างพื้นฐานของผลกระทบของการตรึง

ความเครียดต่อ Adrenal Cortex ของ Albino Rat และบทบาทการเยียวยาของ Diazepam เจ. อียิปต์. เกอร์ ซ. ซูล 62, 25–45. Gamal, M. , Moawad, J. , Rashed, L. , Morcos, MA และ Sharawy, N. (2018)

การมีส่วนร่วมที่เป็นไปได้ของ Tetrahydrobiopterin ในการรบกวนของ Redox Homeostasis ใน Sepsis - ความผิดปกติของสมองที่เกิดจากการกระตุ้น ความละเอียดของสมอง 1685, 19–28.

Gore, AC และ Patisaul, HB (2010) Neuroendocrine Disruption: รากเหง้าทางประวัติศาสตร์ ความก้าวหน้าในปัจจุบัน คำถามสำหรับอนาคต ด้านหน้า. นิวโรเอนโดครินอล 31, 395–399.

Guo-Hua, X. , Zhi-Hong, H. และ Yong-Fangl, W. (2000) การศึกษาฤทธิ์ต้านเนื้องอกที่เป็นไปได้และภาวะภูมิคุ้มกันบกพร่องของฟักทองโพลีแซ็กคาไรด์ เจ. หวู่ฮั่น ศ. คอล. 28, 1-4.

Hema, R. , Kumaravel, S. และ Alagusundaram, K. (2011) การกำหนด GC/MS ของส่วนประกอบออกฤทธิ์ทางชีวภาพของ Murraya Koenigii แยม. วิทย์. 7, 80–83. Huang, L. , Mivechi, NF และ Moskophidis, D. (2001). ข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับกฎระเบียบและหน้าที่ของโมเลกุล Hsp70 ที่กระตุ้นความเครียดที่สำคัญ

พี่เลี้ยงใน Vivo: การวิเคราะห์หนูที่มีการรบกวนยีนเป้าหมายของยีน hsp70.1 หรือ hsp70.3 มล. เซล, ไบโอล. 21, 8575–8591.

Huang, Q. , Liu, H. , Suzuki, K. , Ma, S. และ Liu, C. (2019) เชื่อมโยงสิ่งที่เรากินเข้ากับอารมณ์ของเรา: การทบทวนอาหาร สารต้านอนุมูลอิสระในอาหาร และภาวะซึมเศร้า สารต้านอนุมูลอิสระ 8, 376. ดอย:10.3390/antiox8090376

Jeong, HJ, Kim, JH, Kim, NR, Yoou, MS, Nam, SY, Kim, KY, et al. (2015). ผลยากล่อมประสาทของสติลเลน โค้ง. เภสัช. ความละเอียด 38, 1223–1231.

Jonnalagadda, SC, Suman, P. , Morgan, DC และ Seay, JN (2017) "บทที่ 2 - การพัฒนาล่าสุดเกี่ยวกับการสังเคราะห์และการประยุกต์ใช้อนุพันธ์เบทูลินและอนุพันธ์ของกรดเบทูลินิกในฐานะตัวแทนการรักษา" ในการศึกษาเคมีผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติ บรรณาธิการ R. Atta Ur (Elsevier) Khar, A., Ali, AM, Pardhasaradhi, BY, Varalakshmi, CH, Anjum, R. และ Kumari, AL (2001) การเหนี่ยวนำการตอบสนองต่อความเครียดทำให้เซลล์เนื้องอกของมนุษย์

เส้นที่ทนต่อการตายของเซลล์เคอร์คูมิน: บทบาทของตัวกลางออกซิเจนปฏิกิริยา พี่เลี้ยงความเครียดของเซลล์ 6, 368–376 ดอย:10.1379/1466-1268(2001) 006<0368:iosrrh>2.0.co;2 Kikuchi, T., Ando, ​​H., Maekawa, KI, Arie, H., Yamada, T., และ Tanaka, R. (2015) Diterpene Glycosides ชนิด Ent-kaurane ใหม่ 2 ชนิดจากเมล็ดบวบ (Cucurbita Pepo L.) Fitoterapia 107, 69–76. ดอย:10.1016/j.fifitote.2015.09.019 Kim, HY, Nam, SY, Yang, SY, Kim, HM, and Jeong, HJ (2016a). แตงกวา

มอสชาตา ดัชช์. และส่วนประกอบที่ใช้งาน - แคโรทีนส่งเสริมการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันอย่างมีประสิทธิภาพผ่านการกระตุ้นเซลล์ม้ามและมาโครฟาจ อิมมูโนฟาร์มาคอล อิมมูโนท็อกซิคอล 38, 319–326.

Koldysheva, EV และ Lushnikova, EL (2008) การปรับโครงสร้างโครงสร้างย่อยของต่อมหมวกไตคอร์เทกซ์ของหนูหลังภาวะตัวร้อนเกินในร่างกาย วัว. ประสบการณ์ ไบโอล. เมดิ. 145, 650–655.

Glucocorticoid Depletion ที่เกิดจาก Metyrapone ปรับการแสดงออกของยีน Tyrosine Hydroxylase และ Phenylethanolamine N-methyltransferase ในต่อมหมวกไตของหนูโดยการเปิดใช้งาน Noncholinergic Transsynaptic เจ. นิวโรเอนโดครินอล. 15, 15–23.

Lachance, LR และ Ramsey, D. (2018) อาหารต้านอาการซึมเศร้า: ระบบการจัดทำโปรไฟล์สารอาหารตามหลักฐานสำหรับอาการซึมเศร้า โลกเจ. จิตเวชศาสตร์ 8, 97–104.